高速逆流色谱仪 高速逆流色谱仪(HSCCC) 逆流色谱技术是一种应用在化学分离分析领域中的技术,其原理是用充满两相溶剂的螺旋管作为分离单元在离心力场中按一定规律运动,当被分离的混合物通过分离单元时,由于不同物质在两相溶剂中具有不同的分配特性将会产生物质的分离排列。 一般逆流色谱仪中,分离单元不仅围绕公转中心做公转运动,同时也做自转运动,呈行星式运动状态,分离柱数与流通管内径参数为固定不易改变,无法调节分离柱容积和更换分离柱,分离量受到严格限制。 北京艾美林科技有限公司生产的高速逆流色谱仪(EMC-500A)为张天佑教授的最新专利,该产品优于以往高速逆流色谱仪,无中间轴提高了贝塔值,提升了分离效率。 以往的多分离柱高速逆流色谱仪 (ZL00207386.2)为一种三分离柱的逆流色谱仪,该仪器各分离柱之间的流通管通过管道连接器串联,溶剂需流经每一分离柱的流通管,实验时间过长,且分离柱的更换过于专业,易予损坏。由于单柱、双柱、三柱、多柱的逆流色谱仪均带有中间轴,无法使分离柱的β值达到最大值(分离柱自转半径r同公转半径R的比值r/R)因此不能实现高效率的分配分离。 艾美林EMC-500A高速逆流色谱仪是一种螺旋管分离单元,不仅围绕公转中心运转也做自转运动地体积小,重量轻,多分离柱串并联的可拆卸组装的多功能大β值高效逆流色谱仪。 EMC-500A高速逆流色谱仪取消了传统的贯通中心的中间轴。而在自转轴上装设的螺旋管分离柱组件的β值即分离柱自转半径r与公转半径R的比值r/R可以从0.1到1之间选取,本产品β值≥0.85。加之可通过齿轮传动比的变化实现不同转速,由此实现高效率的分配分离。 EMC-500A高速逆流色谱仪有四个容积相同的螺旋管分离柱分别安装在两个旋转柱上,每个旋转柱由两个容积相同的螺旋管分离柱单元组合而成,分离柱同引入、引出的流通管的接口都是可拆卸的活动接头。两个螺旋管分离柱通过接头和引入、引出管,引至仪器外部的接点,可以用短管将多个分离柱单元串连或并连起来,形成不同的柱容积和柱长度的连接,以实现一机多用
请问有没有和TBE-300高速逆流色谱仪配套用的空气压缩机?请大家推荐一下,谢谢!
各位大侠,近期小弟不小心将空气抽进高速逆流色谱仪的恒流泵中,该恒流泵是GE公司的,不知道应该如何处理,请不吝赐教啊
高速逆流色谱高速逆流色谱仪(High-speed Countercurrent Chromatography,简称HSCCC),于1982年由美国国立卫生院Ito博士研制开发的一种新型的、连续高效的液液分配色谱技术.
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如题,想买高速逆流色谱,不知道国产高速逆流色谱的易用性耐用性怎么样?各位高手有什么好的建议?比如TBE-1000A制备色谱仪,TBE-20A分析型高速逆流色谱仪大概多少钱?
在节前的时候我使用的高速逆流色谱仪已经漏过一次了,打开主机箱检查后发现是盘管外的一根管子的喇叭口断裂导致的,之后重新做了喇叭口接入就好了。 节后回来第一次上机重复原来的实验,在泵入固定相的时候还没有问题,但开启转速泵入流动相的时候,我发现固定相的保留率非常小,远远小于我原来实验的结果。打开主机箱检查后发现漏液了,但这次我无法发现具体是什么地方漏液,而且漏液的直接结果是机器接上电源也无法启动了。 想请教下版内高手,我该怎么排查仪器问题?谢谢!
请问有人知道GS10A高速逆流色谱仪的线圈材料是PTEE吗?线圈的内径是多少?
最近才知道高速逆流色谱这种技术,查了不少资料才知道我们国家在这项技术上还占据世界前沿.从各种资料上都看到的是该技术的正面优点介绍,但作为一项并不算新的技术(我国1978年就有第一台逆流色谱仪器应用在中检所抗生素室,1988年就提出了HSCCC技术),多年来没有象HPLC那样普及,应该还是有些原因的.请了解HSCCC技术的朋友们来讨论一下该技术的优势和劣势,以及应用范围究竟是哪些.
我研究所最近了解到了高速逆流色谱,不知道这种色谱仪器用起来怎么样?不知大家有没有用过这种色谱仪器,用起来怎样?[em09]
[em01] 书 名 高速逆流色谱分离技术及应用 定 价 48元 作 者 曹学丽 开 本 16开 出 版 社 化工出版社 总 页 数 I S B N 7-5025-6518-3 加入日期 2005-4-28 高速逆流色谱(HSCCC)技术正在发展成为一种备受关注的新型分离纯化技术,已经广泛应用于生物医药、天然产物、食品和化妆品等领域。本书详细介绍了HSCCC的理论、技术与应用,全书共分15章,第1~4章着重阐述逆流色谱(CCC)基础知识以及HSCCC分离机理、工作方法及溶剂选择策略;第5~8章主要介绍近年来HSCCC发展过程中形成的新技术、新方法,包括分析型高速逆流色谱、双向逆流色谱、pH区带精制逆流色谱、正交轴逆流色谱;第9~15章对逆流色谱技术(主要是HSCCC技术)在各个领域的应用研究成果进行了报道,包括HSCCC在天然植物有效成分、海洋生物活性成分、抗生素的分离中的应用,双水相逆流色谱、离心沉淀色谱在蛋白质等分离中的应用,逆流色谱在手性分离和天然药物工业中的应用。 可供天然产物、中药、药品、食品、化妆品及生物工程等领域的研发人员、技术(分析、分离等)人员使用,也可供高等院校相关专业师生参考。" "第1章逆流色谱基础 11逆流色谱的概念 12逆流色谱的发展 121逆流分溶法 122液滴逆流色谱 123离心分配色谱和螺旋管式逆流色谱 124高速逆流色谱和正交轴逆流色谱 125pH区带精制逆流色谱 126离心沉淀色谱 127螺线形圆盘柱式高速逆流色谱 128逆流色谱的发展趋势 13现代逆流色谱仪器体系 131流体静力学平衡体系 132流体动力学平衡体系 133两种体系的逆流色谱仪的比较 14逆流色谱的基本色谱理论 141溶质的保留 142保留因子和选择性 143分离度 15逆流色谱和液相色谱的比较 151理论塔板数的工作范围 152逆流色谱的制备性分离 153逆流色谱和液相色谱的互补性 参考文献 第2章高速逆流色谱分离机理 21重力场中旋转螺旋管内流体动力分布 22不用旋转密封接头的流通式离心分离仪 23同步行星式运动旋转螺旋管内流体动力分布 24高速逆流色谱的单向流体动力平衡机理 25高速逆流色谱仪器系统 26相分布图 27影响相分布的物理参数 271β值的影响 272溶剂体系的物理特性和分层时间 273温度对分层时间的影响 参考文献 第3章高速逆流色谱工作方法 31溶剂体系的准备 311溶剂体系的选择原则 312几种常用的溶剂体系选择方法 313溶剂体系的平衡 314温度的影响 32柱系统的准备 33样品溶液的准备和进样 34洗脱方式 341梯度洗脱 342双向洗脱 343清空柱子 35检测 351紫外可见光检测器 352蒸发光散射检测器 353傅里叶红外光谱检测器 354薄层色谱检测器 36高速逆流色谱的优点 参考文献 第4章溶剂体系的选择策略 41溶剂体系的物理参数 411Hildebrand溶解度参数 412Snyder吸附溶剂强度参数 413Rohrschneider和Snyder极性参数 414Reichardt极性指数 415HSCCC中应采用的极性指数 42三元溶剂体系 421三元相图 422三元相图的类型 423三元溶剂体系的选择策略 43多元溶剂体系 431Ito方法 432Oka方法 433HBAW方法 434ARIZONA方法 435扩展的“ARIZONA”方法 436乙基乙二醇二甲基醚体系 437丙酮溶剂系列 438Abbott方法 44一种实用性的溶剂选择思路 参考文献
pH-区带精制逆流色谱(pH-Zone-Refining Countercurrent Chromatography)是Ito等1994年在应用HSCCC分离纯化溴乙酰三碘甲腺氨酸(BrAcT3)时发现的,它是在普通的高速逆流色谱仪器的基础上,通过对分离样品所用的溶剂系统的组成的调配,采用化学的手段,使样品组分的色谱分离过程增添了按pH区带聚集的特征,同时,使组分的洗脱过程表现为类似置换(顶替)色谱(Displacement Chromatography)的洗脱过程,因此,它的色谱图不再是高斯分布的色谱峰形系列,而成为按pH值的大小排列的边界陡削的矩形区带系列,其结果是能把相同容积的逆流色谱仪器的分离制备量提高数倍乃至十倍。 pH-区带精制逆流色谱的分离原理,以分离酸性物质为例,在分离柱内,有机相固定相占据上半部分的空间,水溶性流动相占据下半部分空间。基于其非线性等温线的作用,保留酸形成了一个陡峭的缓行边界。该边界在柱中移动的速度比流动相慢,当酸性被分离物出现在流动相中时,由于低的pH值而形成了疏水的质子化形式,随后,它进入了有机相固定相。随着陡峭保留边界的前移,分离物将暴露在一个较高的pH的位置,这时,分离物会失去质子并且转移到水溶性的下相中。在水溶性流动相中,被分离物快速迁移穿过陡峭的保留边界,进而重复上述的循环。因此,被分离物总是被限制在陡峭的保留边界周围的狭窄区域,并且伴随着陡峭的保留酸边界洗脱成一个尖峰。被分离物的流出,按区带的pH值大小密排成顺序,而每一个区带的pH值则是由被分离物的电离常数pKb 值及亲水性所决定,可以表达为以下关系式: pHzone= pKa+log], 式中,Kd为分配率 (反映被分离物的亲水性的强弱);K[
我对农残检测样品前处理不熟悉,但是学习了之后发现,回收率,溶剂和试剂消耗,以及操作的简便性等都是非常重要的影响因素。想与各位前辈们讨论一下,高速逆流色谱仪是否能在样品的前处理中起一定作用呢?高速逆流色谱是一种无固体载体的连续高效液液分配色谱分离技术,采用多层缠绕的螺旋管柱,由柱体的高速行星式运动产生的不对称离心力场实现两相溶剂体系的高效混合、分配及充分保留,形成连续流萃取,从而实现不同溶解分配系数的溶质在两相溶剂中的分离。由于避免了固相载体,从而排除了不可逆吸附等现象,理论上能够实现分离物质的完全回收。而且样品处理量可以大大超过固相萃取。成本低,操作也简单,回收率高。我觉得样品前处理过程中有可以取代固相萃取的。向前辈们请教,这个技术有没有可能用于畜牧产品,水产品,或者蔬菜水果的样品前处理或者精制过程呢?或者哪一位老师有兴趣进行一些创新性的研究?谢谢!
在各种分离技术之中,高速逆流色谱具有其自身的特点和应用价值。它属于现代色谱技术,具有高效、连续、广谱的特征;它是一种液-液分配色谱技术,完全排除了固态相的影响,不存在不可逆吸附、样品组分损失、被沾染、失活等固-液色谱技术中可能出现的问题,具有结果物纯净、制备量大、技术成本低等优点;它是色谱家族中较年轻的成员,其技术机理的研究、应用技术的开发、实用领域的拓展等方面都存在较大的发展空间。关于高速逆流色谱技术的专著不算多。1991年,张天佑教授发表了我国第一部这方面的书《逆流色谱技术》(北京科技出版社出版发行),向国人介绍了这一技术的基本原理和设备机理。那时,国内外对这一较新的分离技术的研究和了解还不多,因此,该书涉及的应用领域和实例还很有限。此后,虽然相关的研究论文渐渐出现,也有一些汇编、手册、专著纳入了这项技术的内容,但是集中的专题论著依然缺乏。自2002年我们在中国北京主持召开第2届国际逆流色谱技术会议,并创导在天然产物领域推广应用此项技术之后,国内外的研究与应用工作出现了长足发展的局面。2005年,曹学丽博士编著了《高速逆流色谱分离技术及应用》一书(化学工业出版社出版发行),对于这项技术的推广应用起到了很好的作用,特别是编入了一些应用实例,提供给读者实际可行的借鉴。现在出版的《高速逆流色谱技术》一书,则是希望进一步总结逆流色谱技术的发展历程和研究成果,进一步阐述这项技术的内涵与特质,在归纳较丰富的应用研究成果的同时,讨论了关于应用技术和使用方法方面的问题,希望能为读者提供较为实用的帮助。国外的相关专著主要有:《High-Speed Countercurrent Chromatography》(John Wiley & Sons, New York, 1996. Volume 132 in The Series of Mono-Graphs on Analytical Chemistry and Its Applications),《Countercurrent Chromatography-The Support-Free Stationary Phase》(Elsevier, Amsterdam, 2002. Volume 38 in Comprehensive Analytical Chemistry)。这些专著反映了各个时期逆流色谱技术的研究与应用的概貌和水平,张天佑教授参与了这些专著的编写工作,读者可以查阅参考。 近年来在逆流色谱应用方面成就显著的是山东省科学院分析测试中心的王晓研究员,在仪器的研发及改进、新型方法的的开发与应用、天然产物的提取及分离等方面成绩卓然,为逆流色谱的发展与应用做出了杰出的贡献。
高速逆流色谱法分离纯化丹参并尝试制订中药指纹图谱顾铭* 欧阳藩 苏志国(中国科学院过程工程研究所生化工程国家重点实验室,北京,100080)摘要 用国产高速逆流色谱(HSCCC)分离纯化中草药——丹参,选用正己烷-乙醇-水体系,固定相保留率达到78.8%。采用分步洗脱,3个产地丹参各分离得到12个洗脱组分,经高效液相色谱仪和紫外光谱仪检测证明3张HSCCC洗脱图谱中对应洗脱峰为同一组分。HSCCC洗脱图谱不包含非共有峰,并且对应洗脱峰保留时间的相对标准偏差RSD3%,符合国家标准关于制订指纹图谱方法学考察资料的技术参数。因此,HSCCC作为制订指纹图谱的方法之一具有可行性。关键词 高速逆流色谱(HSCCC),中药指纹图谱,丹参中图分类号 R917仪器TBE-300半制备型高速逆流色谱仪(深圳同田生化技术有限公司,中国)。聚四氟乙烯管缠绕在3个水平轴上形成螺旋管(管直径2.6mm,分离体积300mL),进样圈20mL。高速逆流色谱配备了柱塞式泵(S系列,北京圣益通技术开发有限责任公司,中国),紫外检测仪(8823A,北京新技术应用研究所,中国),记录仪(3057型,四川记录仪器厂,中国)。
高速逆流色谱法分离纯化丹参并尝试制订中药指纹图谱顾铭* 欧阳藩 苏志国(中国科学院过程工程研究所生化工程国家重点实验室,北京,100080)摘要 用国产高速逆流色谱(HSCCC)分离纯化中草药——丹参,选用正己烷-乙醇-水体系,固定相保留率达到78.8%。采用分步洗脱,3个产地丹参各分离得到12个洗脱组分,经高效液相色谱仪和紫外光谱仪检测证明3张HSCCC洗脱图谱中对应洗脱峰为同一组分。HSCCC洗脱图谱不包含非共有峰,并且对应洗脱峰保留时间的相对标准偏差RSD3%,符合国家标准关于制订指纹图谱方法学考察资料的技术参数。因此,HSCCC作为制订指纹图谱的方法之一具有可行性。关键词 高速逆流色谱(HSCCC),中药指纹图谱,丹参中图分类号 R917仪器TBE-300半制备型高速逆流色谱仪(深圳同田生化技术有限公司,中国)。聚四氟乙烯管缠绕在3个水平轴上形成螺旋管(管直径2.6mm,分离体积300mL),进样圈20mL。高速逆流色谱配备了柱塞式泵(S系列,北京圣益通技术开发有限责任公司,中国),紫外检测仪(8823A,北京新技术应用研究所,中国),记录仪(3057型,四川记录仪器厂,中国)。*通讯作者。Tel: 86-10-82627061;Fax: 86-10-62558174;E-mail: rainbow_gm@sina.com
高速逆流色谱分离原理
高速逆流色谱在植物有效成分分离中的应用国家自然科学基金资助项目袁黎明(云南师范大学化学系 昆明 650092)傅若农(北京理工大学化工与材料学院 北京 100081)张天佑(北京市新技术应用研究所 北京 100035)高速逆流色谱(High-speed Countercurrent Chromatography,简称HSCCC)是由美国国家医学院Yiochiro Ito博士于1982年首先开始的。到目前为止,此项技术已用于生物化学、生物工程、医学、药学、天然产物化学、有机合成、化工、环境、农业、 食品、材料等领域。开展此项技术研究的科学家遍及美国、日本、中国、俄罗斯、法国、英国、瑞士等地。高速逆流色谱具有两大突出优点:1.聚四氟乙烯管中的固定相不需要载体,因而消除了气液色谱中由于使用载体而带来的吸附现象,特别适用于分离极性物质和具有生物活性的物质2.由于其与一般色谱的分离方式不同,使其特别适用于制备性分离。最近的研究结果表明:一台普通的高速逆流色谱仪一次进样可达几十毫升,一次可分离近10g的样品。因此,在80年代后期被广泛地应用于植物化学成分的分离制备研究,本文就其在这方面的成果作一综述。 HSCCC在天然产物中的分离制备是很成功的。既可分离又可定量,进样量可从毫克级到克级,进样体积可从几毫升到几十毫升;不但适用于非极性化合物,而且适用于极性化合物的分离;它可用于天然产物粗提物的去除杂质,也可用于最后产物的精制,甚至直接从粗提物一步纯化到达纯品;当加快仪器转速如1800r/min,其分离速度可与HPLC媲美,用于天然产物化学成分的分离始于1985年,到1988年、1989年达到一个高潮,发表了大量的文章,目前处于平稳发展阶段。1994年HSCCC创始人Ito又发展了pH-zone-refining CCC,使HSCCC的进样量又大大地前进了一步,能方便地分离克量级的样品,使其更加有利于天然植物的分离制备。因此,我们可以说HSCCC已为天然植物的分离制备开辟了一个十分广阔的新天地。
高速逆流色谱由于结构复杂,维修拆解一般只能返厂进行,维修的成本非常高昂,本文在实验室自行维修的基础上为维修逆流色谱提供了一点参考与经验。如有不当之处敬请批评指正。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/06/201406111125_501730_1034334_3.jpghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/06/201406111125_501731_1034334_3.jpghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/06/201406111125_501732_1034334_3.jpghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/06/201406111125_501733_1034334_3.jpghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/06/201406111126_501734_1034334_3.jpghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/06/201406111126_501735_1034334_3.jpghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/06/201406111126_501736_1034334_3.jpghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/06/201406111126_501737_1034334_3.jpg
高速逆流色谱原理 高速逆流色谱技术(HSCCC)是一种不用任何同态载体的液.液色谱技术,其原理是基于组分在旋转螺旋管内的相对移动而互不混溶的两相溶剂间分布不同而获得分离,其分离效率和速度可以与HPLC相媲美。HSCCC分离效率高,产品纯度高;不存在载体对样品的吸附和污染;制备量大和溶剂消耗少;操作简单,能从极复杂的混合物中分离出特定的组分。 HSCCC应用于天然产物的分离可实现:(1)制备高纯度的药用成分对照品和必需控制的杂质成分;(2)配合活性跟踪与入药部位的设计,逐级分离制备活性部位或活性成分;(3)中药材和中药方剂指纹的建立,提供更丰富的信息和数据;(4)进行中试批量生产和工业生产。如中科院工程研究所探索了利用HSCCC制订中药指纹图谱的方法,以丹参原药材为模式植物,初步建立了丹参的HSCCC指纹图谱。该技术有望成为中药有效成分质量标准研究的一种新方法及中药生产的一种新型分离技术 转自:百度知道
高速逆流的色谱柱在做行星运动时,固定相和流动相都是液体溶剂,为什么固定相可以留在管内,而流动相会流出来?
高速逆流色谱技术是现代分离科学领域的一个新颖的技术分支,是一种不用任何固态填料的液-液分配色谱技术,物质的分离依据其在两相中分配系数的不同而实现的,它完全排除了固态载体对样品的不可逆吸附、沾染、失活等影响,具有无耗材、分离效率高、制备量大、回收率高、重现性好等优势,被大量用于天然产物化学成分的分析和制备分离。目前已广泛应用于生物医药、天然产物、食品和化妆品等领域,尤其是在我国生物医药以及中药现代化等领域的应用俞来俞广。
(一)、高速逆流色谱系统的组成高速逆流色谱系统主要由溶剂泵、进样阀、色谱柱、检测器、色谱工作站以及馏分收集器组成。与普通高效液相系统相似,如果把HPLC的色谱柱部分用一台HSCCC螺旋管式离心分离仪替代,就可构成一台高速逆流色谱系统。由于HSCCC的柱系统是由在高速行星式运动的螺旋管内的两相互不相溶的液体构成,其中一相作为固定相,另一相作为流动相,待分离的物质根据其在两相中的分配系数的不同,在通过两相对流平衡体系的过程中实现分离。分离效果与所选择的两相溶剂系统、固定相与流动相的选择、仪器的运转参数(包括转速、转向)、洗脱的速度与洗脱方式、进样量与进样方式等多种因素密切相关。因此,在采用逆流色谱分离时,其操作方法和工作程序等方面都有独特之处。高速逆流色谱系统对所用的输液泵的要求要比HPLC低的多,通常柱系统所产生的压力要小于1MPa,所以一般的恒流泵即可满足要求,如上海同田生物技术公司生产的TBP系列双柱塞恒流泵,北京圣益通技术开发有限公司生产的S系列单柱塞恒流泵,在国产逆流色谱系统中经常使用。HSCCC分离过程可以连接多种检测器,进行在线检测,而最常用的是单波长或多波长的紫外-可见光检测器(UV-VIS)。也可以借用制备型液相的检测器(如二极管阵列检测器(PDA))。在HSCCC分离中,通常会因固定相的流失或气泡,造成色谱曲线出现毛刺。通常可以通过优化体系、控制流动相温度或在检测器的出口加一个细管来产生一定的反压、溶剂体系使用前超声处理,来抑制气泡的形成。 对于没有紫外吸收的样品,可以采用近年来发展起来的蒸发光散射检测器(evaparative light scattering detector, ELSD)进行在线检测。由于ELSD的检测对样品是破坏性的,所以在制备型CCC中要通过分流管进行分流。目前HSCCC-ELSD技术已经应用在皂苷等物质的分离。 质谱是近年来得到迅速发展和广泛应用的分析检测技术,它能够有效提供化合物的分子结构信息。现在已出现了HSCCC与电子电离质谱(EIMS)、化学电离质谱(CIMS)、快速原子轰击质谱
有人做高速逆流色谱吗? 我刚开始做有些疑惑,请教下大家。做溶剂体系筛选的时候,加入样品的时候有的样品会产生乳化现象,那么这种溶剂体系对这种样品可用吗? 比如皂苷类的分离,如果用的正丁醇,下层水相就有很严重的乳化现象。
[em17] http://www.tautobiotech.com/Tech2.htm第一部分: HSCCC 综述 • 高速逆流色谱在天然产物分离中的应用• 逆流色谱技术在抗生素分离纯化中的应用• 高速逆流色谱在选择最佳溶剂体系的黄金规则和缺陷
如题,谁用过高速逆流色谱?哪个厂家有仪器?
我有一台09年12月的英国产的高速逆流色谱,有需要的联系.15542547022
如题,大家谈谈对高速逆流色谱的认识。
高速逆流色谱(High-speed Countercurrent Chromatography,简称HSCCC)是由美国国家医学院Yiochiro Ito博士于1982年首先开始的。到目前为止,此项技术已用于生物化学、生物工程、医学、药学、天然产物化学、有机合成、化工、环境、农业、 食品、材料等领域。开展此项技术研究的科学家遍及美国、日本、中国、俄罗斯、法国、英国、瑞士等地。高速逆流色谱具有两大突出优点:1.聚四氟乙烯管中的固定相不需要载体,因而消除了气液色谱中由于使用载体而带来的吸附现象,特别适用于分离极性物质和具有生物活性的物质。2.由于其与一般色谱的分离方式不同,使其特别适用于制备性分离。最近的研究结果表明:一台普通的高速逆流色谱仪一次进样可达几十毫升,一次可分离近10g的样品。因此,在80年代后期被广泛地应用于植物化学成分的分离制备研究,本文就其在这方面的成果作一综述。1 生物碱生物碱是植物中一类重要的化学成分,在植物中分布非常广泛,至少有50多科120属以上的植物中已证明有生物碱存在,已知的生物碱种类也至少在2000种以上。到目前为止,用高速逆流色谱研究天然产物化学成分也以生物碱的研究报道得最多。正丁醇:丙酮:水(8:1:10)曾用于从委内瑞拉的箭毒中分离马枯素和Panarine,样品进样达700mg;正丁醇:氯化钠(0.1mol/L)(1:1)的两相溶剂体系用于从Strychnos usambarensis(马钱科)的树干和树皮(3:7:5:5)在70min内以1800r/min的转速从粉防已干根的提取物中分离了粉防己碱、去甲粉防己碱和轮环藤酚碱;从小蔓长春花植物的叶子中用正己烷:乙醇:水(6:5:5)体系分离长春胺和长春辛;分别用正己烷:乙酸乙脂:乙醇:水(6:3:2:5)和正己烷:乙酸乙酯:甲醇:水(1:1:1:1)从红豆杉的粗提物中分离纯化了紫杉醇、cephalomannine、巴卡亭Ⅲ;以石油醚(bp.40~65℃):乙酸乙脂:甲醇:水(50:70:80:65)为两相体系从紫杉醇的混合物中分离得到了纯的紫杉醇和cephalomannine。有学者对粉防己的粗提物也进行了分离;从苦参总碱中分离了苦参碱和氧化苦参碱,从洋金花总碱中分离了莨菪碱、东莨菪碱及待定成分;从峨眉千里光粗碱中分离了金缘千里光碱、阔叶千里光碱和新阔叶千里光碱;从三尖杉总碱中分离异三尖杉酯碱、高三尖杉酯碱和三尖杉酯碱。氯仿:甲醇:水(5:4:3)体系曾用于感染了枝顶孢属内部寄生菌的睡眠草,分离得到了麦角生物碱。Ito于1994年用新型的pH区带提取CCC技术从Crinum moores的抽取物中进样3g得到了3个纯的生物碱,此技术是HSCCC的一个较大的突破,它使植物的分离提取每次很方便地就达到了克量级。2 黄酮类似物黄酮类似物是一类比较重要的植物化学成分,它包括黄酮、异黄酮、二氢黄酮、花色苷元、儿茶精和属于黄酮异构体的橙酮,以及由它们所衍生的各式各样的衍生物。用氯仿:甲醇:水(4:3:2)体系曾从芫花总黄酮中一次进样100mg分离得到了3'-羟基芫花素、洋芹素、木犀草素;从山楂叶粗提物中分离金丝桃苷、槲皮素、芦丁、牡荆素、异牡荆素;以氯仿:甲醇:水(33:40:27)体系,700r/min转速,在70min内从黄酮混合物中分离出橙皮素,四羟基黄酮和槲皮黄酮,并有效地利用了梯度洗脱技术;Vanhaelen等将HSCCC与HPLC相结合从500mg的Ginkgo biloba(银杏属)的叶子萃取物中一次分离出了7个黄酮苷,其以水为固定相,开始以乙酸乙酯为流动相,然后在流动相中逐渐添加异丁醇,到分离结束时乙酸乙酯与异丁醇之比为(6:4);Oka等以氯仿:甲醇:水(4:3:2)的体系在3500r/min下在8min内从See buckthourn的果实萃取物中分离得到了5个主成分,其分离速度完全可与HPLC相比较;还有学者也从大黄羟基蒽醌总苷元中分离了大黄酸、芦荟大黄素、大黄素、大黄素甲醚、大黄酚等;用正己烷:乙酸乙酯:甲醇:水(9:1:5:5)在1800r/min转速下在70min内从掌叶大黄的根茎中分离出大黄素甲醚、芦荟大黄酸、大黄酸、大黄酚和大黄素;将Epilobium parviflorum(柳叶菜属)的甲醇萃取物进样2g分离得到了槲皮苷、杨梅苷、异杨梅苷和没食子酸,两相系统为氯仿:甲醇:水(7:13:8)。Chen1992年利用氯仿:甲醇:水(4:3:2)的两相系统对5个黄酮类化合物进行了分离并进行了定量分析;Kapadia 1994年利用正己烷:乙酸乙酯:甲醇:水(1:4:2.5:2.5)从Garcinia Kola(藤黄属)种子中也分离出了多个双黄酮。
色谱CHINESE JOURNAL OF CHROMATOGRAPHY2005 Vol.23 No.1 P.12-17 高速逆流色谱双水相体系分离蛋白质Separation of Proteins in Aqueous Two-Phase Systems with High-Speed Counter-Current Chromatography郅文波 邓秋云 宋江楠 顾铭 欧阳藩 摘 要:利用多分离柱高速逆流色谱仪,研究了聚乙二醇1000(PEG1000)-磷酸盐双水相体系的固定相保留率及该体系对蛋白质混合物和鸡蛋清样品的分离.以14.0%PEG1000-16.0%磷酸盐体系的上相为固定相,在流速0.6mL/min和转速900 r/min的条件下,固定相的保留率达到33.3%.在pH 9.2的PEG1000-磷酸盐双水相体系中,细胞色素C、溶菌酶和血红蛋白的分配系数差异最大,采用该pH值的14.0%PEG1000-16.0%磷酸钾盐双水相体系,在流速1.0 mL/min和转速850 r/min的条件下,成功地分离了这3种蛋白质的混合物.鸡蛋清中的主要蛋白质成分--卵转铁蛋白、卵白蛋白和溶菌酶在pH 9.2的15.0%PEG1000-17.0%磷酸钾盐体系中也具有最大的分配系数差异.采用该体系,在流速1.0 mL/min和转速850 r/min的条件下,成功地分离了鸡蛋清样品,得到的卵白蛋白、溶菌酶和卵转铁蛋白的电泳纯度分别为100%,100%和60%,收率均大于90%.关键词:高速逆流色谱 双水相体系 蛋白质 分离纯化分类号:O658 文献标识码:A文章编号:1000-8713(2005)01-0012-06 作者简介:郅文波,男,博士研究生,E-mail:zhiwenbo@163.com.通讯联系人:欧阳藩,男,教授,Tel:(010)82627061,Fax:(010)62561822,E-mail:fouyang@home.ipe.ac.cn. 作者单位:郅文波(中国科学院过程工程研究所生化工程国家重点实验室,北京,100080) 邓秋云(上海同田生化技术有限公司,上海,200122) 宋江楠(中国科学院过程工程研究所生化工程国家重点实验室,北京,100080) 顾铭(中国科学院过程工程研究所生化工程国家重点实验室,北京,100080) 欧阳藩(中国科学院过程工程研究所生化工程国家重点实验室,北京,100080) [img]http://www.instrument.com.cn/bbs/images/affix.gif[/img][url=http://www.instrument.com.cn/bbs/download.asp?ID=23113]高速逆流色谱双水相体系分离蛋白质[/url]