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外周血细胞因子检测

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  • 重组细胞因子分类及应用概述

    一、细胞因子的概念细胞因子(cytokine)是由机体多种细胞分泌的小分子蛋白质,通过结合细胞表面的相应受体发挥以调节免疫应答为主的生物学作用。细胞因子具有 非常广泛的生物学活性,包括促进靶细胞的增殖和分化,增强抗感染和细胞杀伤效应,促进或抑制其它细胞因子和膜表面分子的表达,促进炎症过程,影响细胞代谢 等。二、细胞因子的命名细胞因子按其来源可分为:由单个核吞噬细胞产生的细胞因子称为单核因子(monokine);由淋巴细胞产生的细胞因子称为淋巴因子 (lymphokine)等。按其作用可分为干扰素、集落刺激因子、肿瘤坏死因子、生长因子和趋化因子等。部分由不同细胞分泌的细胞因子,其基因及编码蛋 白与结构清楚者,在免疫调节、造血和炎症中发挥重要作用,又称为白细胞介素(interleukin,IL)。也可以依据结构或者其受体结构分类,我们的 趋化因子目前没有受体产品。三、细胞因子的特征1、低分子量;一般为<60kD的多肽或糖蛋白。多以单体形式存在,少数为二聚体,三聚体。2、天然细胞因子由抗原、丝裂原或其他刺激物活化的细胞所分泌,通过旁分泌(paracrine)、自分泌(autocrine)或内分泌(endocrine)方式在局部发挥短暂作用。3、一种细胞因子可由多种细胞产生,同一种细胞可产生多种细胞因子。4、需通过与靶细胞表面相应受体结合后发挥其生物学效应。5、具有高效性、多效性、叠性、拮抗性、协同性和网络性。四、细胞因子的分类1、白细胞介素(interleukin,IL-s)最初是指由白细胞产生又在白细胞间发挥作用的细胞因子。2、干扰素(interferon,IFN)最早发现的细胞因子,有干扰病毒感染和复制的能力。分α、β和g三种类型。3、肿瘤坏死因子超家族(tumor necrosis factor,TNF)1975年发现的一种能使肿瘤发生出血坏死的物质。4、集落刺激因子(colony-stimulating factor,CSF)指能够刺激多能造血干细胞和不同造血祖细胞增殖分化,在半固体培养基中形成相应细胞集落的细胞因子。包括G-CSF(粒细胞)、M-CSF(巨噬细胞)、 GM-CSF(粒细胞、巨噬细胞)、Multi-CSF(多重)(IL-3)、红细胞生成素(EPO)、干细胞生长因子(SCF)、血小板生成素 (TPO)等。5、趋化因子(chemokine)主要功能是招募血液中的单核细胞、中性粒细胞、淋巴细胞等进入特定的淋巴器官和组织以及感染发生的部位。根据趋化因子近N端半胱氨酸(Cys)的位置、排列方式和数量,可分为CC、CXC、C、CX3C四个亚家族。6生长因子(growth factor,GF)生长因子(GF)是具有刺激细胞生长作用的细胞因子。五、细胞因子的生物学活性1.介导自然免疫、参与抗肿瘤和抗感染2.调节T、B细胞活化、生长和分化,介导细胞免疫和体液免疫3.刺激造血生成、刺激骨髓祖细胞生长和分化为各种成熟血细胞4.在炎症、感染和内毒素血症中的作用5.在超敏反应和自身免疫病中的作用6.细胞因子通过激活其相应受体(CKR),导致细胞的增殖与分化或分泌某种蛋白质。六、四种蛋白表达体系比较表达细胞优点缺点原核E. coli繁殖快、成本低、产量高遗传背景及基因表达调控机制清楚易于大规模培养,成本低廉蛋白常为包涵体,纯化困难无糖基化(分泌蛋白,细胞膜上蛋白不可用),生物活性不定无翻译后修饰,内毒素含量高酵母Pichia使用简单,表达量高,His-tag便于纯化,一定的翻译后加工可进行糖基化修饰,操作简单,适合大规模生产可诱导表达,也可分泌表达,产物便于纯化有时会出现蛋白切割问题糖基化不能满足要求昆虫High-5产量高 ,翻译后加工与哺乳动物相似对于部分有毒性或较难表达蛋白有优势无内毒素污染蛋白活性不如哺乳动物适合表达激酶等定位于细胞内的真核蛋白哺乳CHO HEK293完善的翻译后加工,活性接近天然蛋白周期长、技术要求高表达产量低

  • 细胞因子及其受体的分类有哪些?

    [font=宋体]细胞因子一般是通过与细胞表面相应的细胞因子受体结合而发挥生物学作用。细胞因子与其受体结合后,会启动复杂的细胞内分子相互作用,最终引起细胞基因转录的变化。[/font][font=宋体]已知的细胞因子受体绝大多数是[url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/transmembrane-proteins][b]跨膜蛋白[/b][/url],由胞外、跨膜和胞质区组成。胞外膜区是识别结合细胞因子的部位,胞质区在受体激活后启动信号转导。下面为大家介绍下细胞因子及其受体的分类有哪些?[/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]一、细胞因子的分类[/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]([/font][font=宋体]一[/font][font=Calibri])[/font][font=宋体]根据细胞种类不同分类[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]1[/font][font=宋体])淋巴因子[/font][font=Calibri](lymphokine) [/font][font=宋体]主要由淋巴细胞产生,包括[/font][font=Calibri]T[/font][font=宋体]淋巴细胞、[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]淋巴细胞和[/font][font=Calibri]NK[/font][font=宋体]细胞等。重要的淋巴因子有[/font][font=Calibri]IL-2[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]IL-3[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]IL-4[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]IL-5[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]IL-6[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]IL-9[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]IL-10[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]IL-12[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]IL-13[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]IL-14[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]IFN-[/font][font=宋体]γ、[/font][font=Calibri]TNF-[/font][font=宋体]β、[/font][font=Calibri]GM-CSF[/font][font=宋体]和神经白细胞素等。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]2[/font][font=宋体])单核因子[/font][font=Calibri](monokine) [/font][font=宋体]主要由单核细胞或巨噬细胞产生,如[/font][font=Calibri]IL-1[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]IL-6[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]IL-8[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]TNF-[/font][font=宋体]α、[/font][font=Calibri]G-CSF[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]M-CSF[/font][font=宋体]等。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]3[/font][font=宋体])非淋巴细胞、非单核[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]巨噬细胞产生的细胞因子 主要由骨髓和胸腺中的基质细胞、血管内皮细胞、成纤维细胞等细胞产生,如[/font][font=Calibri]EPO[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]IL-7[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]IL-11[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]SCF[/font][font=宋体]、内皮细胞源性[/font][font=Calibri]IL-8[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]IFN-[/font][font=宋体]β等。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]([/font][font=宋体]二[/font][font=Calibri])[/font][font=宋体]根据主要功能的不同分类[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]1[/font][font=宋体])白细胞介素[/font][font=Calibri](interleukin, IL) 1979[/font][font=宋体]年开始命名。由淋巴细胞、单核细胞或其它非单个核细胞产生的细胞因子,在细胞间相互作用、免疫调节、造血以及炎症过程中起重要调节作用,凡命名的白细胞介素的[/font][font=Calibri]cDNA[/font][font=宋体]基因克隆和表达均已成功,已报道有三十余种[/font][font=Calibri](IL-1[/font][font=宋体]―[/font][font=Calibri]IL-38)[/font][font=宋体]。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]2[/font][font=宋体])集落刺激因子[/font][font=Calibri](colony stimulating factor, CSF) [/font][font=宋体]根据不同细胞因子刺激造血干细胞或分化不同阶段的造血细胞在半固体培养基中形成不同的细胞集落,分别命名为[/font][font=Calibri]G([/font][font=宋体]粒细胞[/font][font=Calibri])-CSF[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]M([/font][font=宋体]巨噬细胞[/font][font=Calibri])-CSF[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]GM([/font][font=宋体]粒细胞、巨噬细胞[/font][font=Calibri])-CSF[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]Multi([/font][font=宋体]多重[/font][font=Calibri])-CSF(IL-3)[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]SCF[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]EPO[/font][font=宋体]等。不同[/font][font=Calibri]CSF[/font][font=宋体]不仅可刺激不同发育阶段的造血干细胞和祖细胞增殖的分化,还可促进成熟细胞的功能。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]3[/font][font=宋体])干扰素[/font][font=Calibri](interferon, IFN) 1957[/font][font=宋体]年发现的细胞因子,最初发现某一种病毒感染的细胞能产生一种物质可干扰另一种病毒的感染和复制,因此而得名。根据干扰素产生的来源和结构不同,可分为[/font][font=Calibri]IFN-[/font][font=宋体]α、[/font][font=Calibri]IFN-[/font][font=宋体]β和[/font][font=Calibri]IFN-[/font][font=宋体]γ,他们分别由白细胞、成纤维细胞和活化[/font][font=Calibri]T[/font][font=宋体]细胞所产生。各种不同的[/font][font=Calibri]IFN[/font][font=宋体]生物学活性基本相同,具有抗病毒、抗肿瘤和免疫调节等作用。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]4[/font][font=宋体])肿瘤坏死因子[/font][font=Calibri](tumor necrosis factor, TNF) [/font][font=宋体]最初发现这种物质能造成肿瘤组织坏死而得名。根据其产生来源和结构不同,可分为[/font][font=Calibri]TNF-[/font][font=宋体]α和[/font][font=Calibri]TNF-[/font][font=宋体]β两类,前者由单核[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]巨噬细胞产生,后者由活化[/font][font=Calibri]T[/font][font=宋体]细胞产生,又名淋巴毒素[/font][font=Calibri](lymphotoxin, LT)[/font][font=宋体]。两类[/font][font=Calibri]TNF[/font][font=宋体]基本的生物学活性相似,除具有杀伤肿瘤细胞外,还有免疫调节、参与发热和炎症的发生。大剂量[/font][font=Calibri]TNF-[/font][font=宋体]α可引起恶[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]液质[/color][/url],因而[/font][font=Calibri]TNF-[/font][font=宋体]α又称恶[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]液质[/color][/url]素[/font][font=Calibri](cachectin)[/font][font=宋体]。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]5[/font][font=宋体])转化生长因子[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]β家族[/font][font=Calibri](transforming growth factor-[/font][font=宋体]β [/font][font=Calibri]family, TGF-[/font][font=宋体]β [/font][font=Calibri]family) [/font][font=宋体]由多种细胞产生,主要包括[/font][font=Calibri]TGF-[/font][font=宋体]β[/font][font=Calibri]1[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]TGF-[/font][font=宋体]β[/font][font=Calibri]2[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]TGF-[/font][font=宋体]β[/font][font=Calibri]3[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]TGF[/font][font=宋体]β[/font][font=Calibri]1[/font][font=宋体]β[/font][font=Calibri]2[/font][font=宋体]以及骨形成蛋白[/font][font=Calibri](BMP)[/font][font=宋体]等。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]6[/font][font=宋体])生长因子[/font][font=Calibri](growth factor,GF)[/font][font=宋体]如表皮生长因子[/font][font=Calibri](EGF)[/font][font=宋体]、血小板衍生的生长因子[/font][font=Calibri](PDGF)[/font][font=宋体]、成纤维细胞生长因子[/font][font=Calibri](FGF)[/font][font=宋体]、肝细胞生长因子[/font][font=Calibri](HGF)[/font][font=宋体]、胰岛素样生长因子[/font][font=Calibri]-I(IGF-1)[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]IGF-[/font][font=宋体]Ⅱ、白血病抑制因子[/font][font=Calibri](LIF)[/font][font=宋体]、神经生长因子[/font][font=Calibri](NGF)[/font][font=宋体]、抑瘤素[/font][font=Calibri]M(OSM)[/font][font=宋体]、血小板衍生的内皮细胞生长因子[/font][font=Calibri](PDECGF)[/font][font=宋体]、转化生长因子[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]α[/font][font=Calibri](TGF-[/font][font=宋体]α[/font][font=Calibri])[/font][font=宋体]、血管内皮细胞生长因子[/font][font=Calibri](VEGF)[/font][font=宋体]等。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]7[/font][font=宋体])趋化因子家族[/font][font=Calibri](chemokinefamily) [/font][font=宋体]包括四个亚族[/font][font=Calibri]:(1)C-X-C/[/font][font=宋体]α亚族,主要趋化中性粒细胞,主要的成员有[/font][font=Calibri]IL-8[/font][font=宋体]、黑素瘤细胞生长刺激活性[/font][font=Calibri](GRO/MGSA)[/font][font=宋体]、血小板因子[/font][font=Calibri]-4(PF-4)[/font][font=宋体]、血小板碱性蛋白、蛋白水解来源的产物[/font][font=Calibri]CTAP-[/font][font=宋体]Ⅲ和β[/font][font=Calibri]-thromboglobulin[/font][font=宋体]、炎症蛋白[/font][font=Calibri]10(IP-10)[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]ENA-78 (2)C-C/[/font][font=宋体]β亚族,主要趋化单核细胞,这个亚族的成员包括巨噬细胞炎症蛋白[/font][font=Calibri]1[/font][font=宋体]α[/font][font=Calibri](MIP-1[/font][font=宋体]α[/font][font=Calibri])[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]MIP-1[/font][font=宋体]β、[/font][font=Calibri]RANTES[/font][font=宋体]、单核细胞趋化蛋白[/font][font=Calibri]-1(MCP-1/MCAF)[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]MCP-2[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]MCP-3[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]I-309[/font][font=宋体]。[/font][font=Calibri](3)C[/font][font=宋体]型亚家族的代表有淋巴细胞趋化蛋白。[/font][font=Calibri](4)CX3C[/font][font=宋体]亚家族,[/font][font=Calibri]Fractalkine[/font][font=宋体]是[/font][font=Calibri]CX3C[/font][font=宋体]型趋化因子,对单核[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]巨噬细胞、[/font][font=Calibri]T[/font][font=宋体]细胞及[/font][font=Calibri]NK[/font][font=宋体]细胞有趋化作用。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]细胞因子检测是判断机体免疫功能的一个重要指标!已被广泛用于疾病的诊断、病程观察、疗效判断及细胞因子治疗监测等。[/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体] [/font][/b][font=宋体]二、[/font][b][font=宋体]细胞因子受体分类[/font][font=宋体] [/font][/b][font=宋体][font=宋体]根据细胞因子受体的结构,可分为不同的家族或超家族,包括免疫球蛋白([/font][font=Calibri]Ig[/font][font=宋体])超家族、[/font][font=Calibri]I[/font][font=宋体]型细胞因子受体、[/font][font=Calibri]II[/font][font=宋体]型细胞因子受体、肿瘤坏死因子受体[/font][font=Calibri](TNFR)[/font][font=宋体]超家族和趋化因子受体。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]①免疫球蛋白([/font][font=Calibri]Ig[/font][font=宋体])超家族[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]免疫球蛋白超家族([/font][font=Calibri]IgSF[/font][font=宋体])是指分子结构中具有与免疫球蛋白相似域的分子超家族。[/font][font=Calibri]IgSF[/font][font=宋体]的所有成员都含有[/font][font=Calibri]1[/font][font=宋体]~[/font][font=Calibri]7[/font][font=宋体]个[/font][font=Calibri]Ig[/font][font=宋体]样结构域,每个[/font][font=Calibri]Ig[/font][font=宋体]样结构域含有约[/font][font=Calibri]70[/font][font=宋体]~[/font][font=Calibri]110[/font][font=宋体]个氨基酸残基。它的二级结构是由两条反平行β[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]折叠状链形成的反平行β[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]片状平面,每条反平行β[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]片状链含有[/font][font=Calibri]3[/font][font=宋体]~[/font][font=Calibri]5[/font][font=宋体]个反平行β[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]折叠。每条反平行β片链由[/font][font=Calibri]5[/font][font=宋体]~[/font][font=Calibri]10[/font][font=宋体]个氨基酸残基组成。β片内侧的疏水氨基酸可稳定[/font][font=Calibri]Ig[/font][font=宋体]的折叠。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]大多数[/font][font=Calibri]Ig[/font][font=宋体]域有一个二硫键垂直连接两个β片,构成二硫键的两个半胱氨酸约含[/font][font=Calibri]55[/font][font=宋体]~[/font][font=Calibri]75[/font][font=宋体]个氨基酸。少数[/font][font=Calibri]Ig[/font][font=宋体]域,如[/font][font=Calibri]CD2[/font][font=宋体]的第一域、[/font][font=Calibri]LFA-3[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]PDGFR[/font][font=宋体]的第四域、[/font][font=Calibri]CD4[/font][font=宋体]的第三域等,均缺乏二硫键。这种多肽链的球形结构的折叠称为免疫球蛋白折叠([/font][font=Calibri]Ig fold[/font][font=宋体])。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]②[/font][font=Calibri]I[/font][font=宋体]型细胞因子受体[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]I[/font][font=宋体]型细胞因子受体又称造血素受体,是表达在细胞表面的跨膜受体,能识别细胞因子并对其作出反应,具有[/font][font=Calibri]4[/font][font=宋体]条α[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]螺旋链。这些受体具有某些保守的胞外域,缺乏内在的蛋白酪氨酸激酶活性。[/font][/font][font=宋体][font=宋体]保守的胞外域有大约[/font][font=Calibri]200[/font][font=宋体]个氨基酸的长度,其中在氨基末端区域含有四个位置保守的半胱氨酸残基和一个位于跨膜域近端的保守氨基酸基团([/font][font=Calibri]WSXWS[/font][font=宋体])。这四个半胱氨酸是维持受体结构和功能完整性的关键。[/font][font=Calibri]WSXWS[/font][font=宋体]共识序列是细胞因子受体功能性蛋白与蛋白相互作用的识别位点。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]③[/font][font=Calibri]II[/font][font=宋体]型细胞因子受体[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]II[/font][font=宋体]型细胞因子受体又称[/font][font=Calibri]IFN[/font][font=宋体]受体,是表达在某些细胞表面的跨膜蛋白,它与一组选定的细胞因子结合并作出反应。通常Ⅱ型细胞因子受体是具有高亲和力和低亲和力成分的异二聚体或多聚体。这些受体一般由两条肽链组成,胞外区由[/font][font=Calibri]200[/font][font=宋体]个氨基酸残基组成,并含有[/font][font=Calibri]4[/font][font=宋体]个不连续的半胱氨酸。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]④[/font][font=Calibri]TNFR[/font][font=宋体]超级家族[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]肿瘤坏死因子受体([/font][font=Calibri]TNFR[/font][font=宋体])超家族成员是细胞因子受体的一个蛋白质超家族,共享一个半胱氨酸丰富域([/font][font=Calibri]CRD[/font][font=宋体]),由三个二硫键围绕[/font][font=Calibri]CXXCXXC[/font][font=宋体]的核心基团形成一个拉长的分子。目前[/font][font=Calibri]TNFR[/font][font=宋体]家族有[/font][font=Calibri]12[/font][font=宋体]个成员,包括[/font][font=Calibri]55kDa[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]75kDa[/font][font=宋体]的[/font][font=Calibri]TNFR[/font][font=宋体],低亲和力的[/font][font=Calibri]NGFR[/font][font=宋体],人[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞抗原([/font][font=Calibri]CD40[/font][font=宋体])和[/font][font=Calibri]Fas[/font][font=宋体]抗原。该家族的共同特点是其胞外区有[/font][font=Calibri]Cys[/font][font=宋体]([/font][font=Calibri]4-6[/font][font=宋体])丰富的假重复基团,每个基团含有[/font][font=Calibri]40[/font][font=宋体]个氨基酸残基。细胞内域较短,由[/font][font=Calibri]44[/font][font=宋体]~[/font][font=Calibri]221[/font][font=宋体]个氨基酸残基组成,无同源序列。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]⑤趋化因子受体[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]趋化因子受体是在某些细胞表面发现并与趋化因子相互作用的细胞因子受体。人类已发现[/font][font=Calibri]20[/font][font=宋体]种不同趋化因子受体,为[/font][font=Calibri]7[/font][font=宋体]次跨膜的[/font][font=Calibri]G[/font][font=宋体]蛋白偶联受体,并在细胞内与[/font][font=Calibri]G[/font][font=宋体]蛋白偶联进行信号转导,是[/font][font=Calibri]G[/font][font=宋体]蛋白偶联受体家族成员之一。趋化因子受体与相应的配体结合后,引发细胞内钙([/font][font=Calibri]Ca2+[/font][font=宋体])离子通量(钙信号传导)。既而引起细胞反应,包括趋化作用过程开始,将细胞运送到生物体内的理想位置。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]更多细胞因子详情可以查看义翘神州[url=https://cn.sinobiological.com/category/cytokine-protein][b]细胞因子蛋白[/b][/url]:[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/category/cytokine-protein[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=宋体]义翘神州:蛋白与抗体的专业引领者,欢迎通过百度搜索[/font][font=宋体]“义翘神州”与我们取得联系。[/font][/font][/b][font=宋体] [/font]

  • 细胞因子和重组蛋白溶解必读(一)

    我们知道,PeproTech的所有细胞因子和蛋白均为冻干粉,这使得运输非常便捷,只要常温即可。而且,细胞因子和蛋白冻干粉非常稳定,在-20℃或-80℃条件下可保存数年。冻干粉在使用前需进行溶解,然后以液体形式加到培养体系或注射入动物体内。溶解步骤非常关键,因溶解不好会导致细胞因子或蛋白的失活,这也是很多用户在实际使用中经常遇到的问题。 那么,应该如何进行正确的溶解呢? 下面我们以Recombinant Human IL-4 (重组人IL-4,产品编号:200-04)的说明书为例,对细胞因子或蛋白的溶解方法进行详细的阐述。 拿到重组人IL-4的说明书后,您会发现有一段关于Reconstitution(重悬)的叙述,这段内容含有溶解相关的所有信息。 1. Centrifuge the vial prior to opening.第1步:开盖前离心试剂管 PeproTech的细胞因子或蛋白冻干粉装盛在塑料管中,为无菌包装。冻干粉在运输过程中可能会因颠簸而漂散并粘贴于管壁或管盖上,所以在打开塑料瓶盖前,需将冻干粉通过离心收集到管底,以便用很小体积的液体即可将冻干粉完全溶解。 有很多用户会问一个问题,即应该用多少转速、多长时间离心试剂管,才能达到良好的收集效果?答:有些小型高速离心机(多为进口品牌)的面板上有一个Spin键,按了此键后,离心机会自动快速上升到其最大速度(10000rpm或12000rpm),上升到最高点后速度即刻下降,直至停止旋转,整个过程大约30s。这个Spin键足以很好的将细胞因子或蛋白收集到管底。 但有些实验室没有这样的高速离心机,只有最高转速为4000-4500rpm的离心机。这种情况下,需3000-3500rpm离心5min,也能达到类似的效果。 2. Reconstitute in water to a concentration of 0.1-1.0 mg/ml. Do not vortex.第2步:用无菌水重悬至0.1-1.0 mg/ml,不可振荡。 这个步骤即为溶解步骤,非常重要。 1) 一定要用推荐的溶液重悬(或溶解)冻干粉 用于溶解细胞因子或蛋白的溶液千差万别。此例中的重组人IL-4需用水溶解,而重组人IL-2 (产品编号:200-02)则需用100mM Acetic Acid (醋酸)溶解,重组人TGF-beta1 (产品编号:100-21)需用10mMCitric Acid (柠檬酸),pH3.0溶解,重组人FGF-basic(产品编号:100-18B)需用5mMTris,pH7.6溶解,重组人FGF-10(产品编号:100-26)需用5mMSodium Phosphate(磷酸钠),pH7.4溶解,重组IL-13(产品编号:200-13)需用20mMMHCl溶解。(注:即使同一重组细胞因子或蛋白,不同批次的溶解方法也可能有所不同,因此上面的叙述仅供参考。具体应该如何溶解应以相应批次的官方说明书为准)。后续的文章中将对各种溶解液的配制方法进行详细的阐述,望继续关注。 经常有用户会问,为什么会有这么多种溶解方法?答:我们知道,蛋白的溶解性与很多因素有关,其中比较重要的是pH值和离子强度。PeproTech的细胞因子或重组蛋白在出厂前均经严格测试,说明上所标明的溶解液是能够将该细胞因子或重组蛋白完全溶解的液体。如果您所用的溶解液的pH值和离子强度与说明书中所标明的不符,很多时候会造成细胞因子或重组蛋白不能完全溶解或者根本无法溶解,这样所配得的细胞因子或重组蛋白必然活性不够或丧失。 有不少用户没注意说明书上的描述,而是根据习惯,直接用PBS或培养液(1640或DMEM等)等溶解细胞因子或蛋白的冻干粉。这样做可以吗?答:有时可以,要看具体情况。PeproTech的大多数细胞因子或蛋白冻干粉的溶解液不是PBS,此时千万不能用PBS或培养液直接来溶解,具体原因在上面已经叙述过。而有部分细胞因子,如重组人KGF(产品编号:100-19)和重组人FGF-23(产品编号:100-52)等,说明书上的溶解液即为1x PBS,此时用PBS溶解完全没问题,那么用培养液溶解也是可以的,不过最好还是用先用PBS溶解,然后再用培养液稀释。

  • 重组细胞因子类药物研究的现状与发展前景

    细胞因子(cytokine)是由免疫细胞及相关细胞产生的一类调节细胞功能的高活性、多功能的多肽分子,不包括免疫球蛋白、补体和一般生理性的细胞产物。细胞因子通常由淋巴细胞、单核巨噬细胞、成纤维细胞、内皮细胞等相关细胞产生,按其功能及与免疫学的关系可分为:⑴具有抗病毒活性的细胞因子,如干扰素(interferon,IFN);⑵具有免疫调节活性的细胞因子,包括白细胞介素(interleukin,IL)类的IL 2、IL 4、IL 5、IL 7、IL 9、IL 10和IL 12,以及β型转化生长因子(transforming growth factor β,TGF β);⑶具有炎症介导活性的细胞因子,包括以肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)及IL 1、IL 6和IL 8为代表的结构相似的小分子趋化因子;⑷具有造血生长活性的细胞因子,包括IL 3、IL 11、集落刺激因子(colony-stimulating factor,CSF)、促红细胞生成素(erythropoietin,EPO)、干细胞因子(stem cell factor,SCF)和白血病抑制因子(leukemia inhibitory factor,LIF)等。 重组细胞因子是利用基因工程技术生产的细胞因子产品,作为药物用于治疗肿瘤、感染、造血障碍等,可收到良好的疗效。近十多年来,重组细胞因子类药物的研制有较快发展,相关的新药陆续上市。本文重点介绍各类药物的研究进展、不同表达系统的表达水平和基因来源情况,以及各类重组细胞因子的基本特点和适应症。 国内外研究动态和市场现状 目前国内市场上主要的国产重组细胞因子类药物包括乙肝疫苗、IFN、IL 2、G-CSF、重组链激酶(recombinant streptokinase, rSK)、重组表皮生长因子(recombinant endothelial growth factor,rEGF)等15种基因工程药物。组织溶纤原激活剂(tissue plasminogen activator,T-PA)、IL 3、重组人胰岛素、尿激酶等十几种多肽药物正处于临床Ⅱ期试验阶段,单克隆抗体的研制已从实验阶段进入临床阶段。正在开发研究中的项目包括采用新的高效表达系统生产重组凝乳酶等40多种基因工程新药。 在欧美市场上,对现有重组药物进行分子改造而开发的某些第二代基因药物已经上市,如重组新钠素、胞内多肽等。另外,重组细胞因子融合蛋白、人源单克隆抗体、反义核酸,以及基因治疗、新的抗原制备技术、转基因动物生产等,均取得了实质性的进展。国外生物医药的目前发展动向,主要反映在以下几方面。 与血管发生有关的细胞因子 肿瘤血管生长因子(tumor angiogenesis factors,TAF)包括研究较多的血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、成纤维细胞生长因子(fibroblast growth factor,FGF)、血小板源生长因子(platelet-derived growth factor,PDGF)等,它们促进肿瘤新生微血管的生长。临床研究表明,阻断VEGF受体2(VEGFR 2)和PDGF受体β(PDGFR β)等,可达到通过抗血管生成来治疗肿瘤的目的。1998年,美国科研人员发现两种用于治疗癌症的血管发生抑制因子(即抗血管生长因子)和内皮抑制素,以及一种抗血管生长蛋白,即血管抑制素(vasculostatin),都有较好的疗效。另外,VEGF、FGF和血管生长素(angiopoietin)等能够通过刺激动脉内壁的内皮细胞生长来促进形成新的血管,从而对冠状动脉疾病和局部缺血产生治疗作用。

  • 全自动血细胞分析仪——能依靠它们去计数吗?

    全自动血细胞分析仪——能依靠它们去计数吗?库尔特原理库尔特原理指出:悬浮在电解液中的颗粒随电解液通过小孔管时,在恒电流设计的电路中导致小孔管内外两电极间电阻发生瞬时变化,产生电位脉冲。脉冲信号的大小和次数与颗粒的大小和数目成正比。这主要是根据血细胞与稀释剂相比,血细胞是不良导体的特性而提出的。起初,原始的库尔特计数器只能计算和测量红细胞。后来,随着技术的不断发展和设备的不断改进,临床医生还可以利用它来计算和测量白细胞。到20世纪70年代,技术的进一步发展使技术人员能够分离血小板。全自动细胞计数器的演进传统意义上的血细胞计数器是通过研究外周血涂片,使用血细胞仪和白细胞分类计数而手动完成的(也称为100个细胞涂片分类,手动白细胞分类计数或手动计数器)。根据库尔特原理导致了库尔特计数器的发明,随后又开发出了技术先进的全自动血液细胞分析仪。自此,仪器的技术水平得到不断提高。由于技术的进步,一台仪器可以分析越来越多的参数,从而大大提高了血液检测的效率,减少在多台仪器上分析一个样品的情况。现代的细胞分析仪能够测量白细胞(WBC)、白细胞分类(五分类)、红细胞(RBC)、血红蛋白(HGB)、血小板(PLT)、平均红细胞体积(MCV)、平均血小板体积,并且可以自动计算血细胞比容(HCT)、平均红细胞血红蛋白(MCH)、平均红细胞血红蛋白浓度(MCHC)、红细胞分布宽度,血小板比积和血小板分布宽度。自动分析仪的其他重要因素包括它们运行的速度和每批次可以处理的样本数量(大处理容量可以减少周转时间)。即时检验(POCT)即时检验([/

  • 血细胞分析仪检测原理

    目前血细胞分析仪检测原理包括电学和光学两种,电学包括电阻抗法和射频电导法,光法包括激光散射法和分光光度法。电阻抗法根据Coulter原理及血细胞非传导的性质,以电解质溶液中悬浮的血细胞在通过计数小孔时引起的电阻变化进行检测为基础,进行血细胞计数和体积测定。当有细胞通过小孔时,由于电阻增加,于瞬间引起电压变化及通过脉冲。细胞体积越大,脉冲振幅越高,细胞数量越多,脉冲数量也越多。脉冲信号经过:放大、阈值调节、甄别、整形、计数而得出细胞技术结果。电阻抗法可准确量出细胞(或类似颗粒)的大小,是三分类血液分析仪的主要应用原理,并与光学检测原理组合应用于五分类血液分析仪中。激光散射法应用了流式细胞术检测原理及细胞通过激光束被照射时,产生与细胞特征相应的各种角度的散射光。对经信号检测器接受的散射光信息进行综合分析,即可准确区分正常类型的细胞。激光散射法在区别体积相同而类型不同的细胞特征时,比电阻抗法分群更加准确。故激光散射法已成为现代五分类血液分析仪的主要检测原理之一。射频电导法是用高频电磁探针渗入细胞膜脂质可测定细胞的导电性,提供细胞内部化学成分、细胞核和细胞质、颗粒成分等特征信息。射频电流是每秒变化大于10000次的高频交流电磁波,能够通过细胞壁。分光光度法是所有类型的血细胞分析仪检测血红蛋白的原理,它利用血红蛋白与溶血剂在特定波长下比色,吸光度的变化与液体中血红蛋白含量成比例。

  • T细胞培养的原理及方法:探索细胞因子在免疫反应中的关键作用

    [font=宋体][font=Calibri][url=https://cn.sinobiological.com/research/car-t-therapy/car-t-cell-culture][b]T[/b][/url][/font][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/research/car-t-therapy/car-t-cell-culture][b]细胞培养[/b][/url]是指在体外模拟体内环境,使[/font][font=Calibri]T[/font][font=宋体]细胞能够生存、生长和繁殖的一种技术。在[/font][font=Calibri]T[/font][font=宋体]细胞培养中,细胞被置于无菌、适宜温度、酸碱度和一定营养条件的环境中,以保持其活力和功能。[/font][font=Calibri]T[/font][font=宋体]细胞培养被广泛应用于免疫学、生物医学和药物研发等领域,是研究[/font][font=Calibri]T[/font][font=宋体]细胞功能、探索免疫反应机制的重要手段。通过[/font][font=Calibri]T[/font][font=宋体]细胞培养,科学家可以观察和分析[/font][font=Calibri]T[/font][font=宋体]细胞的增殖、分化、凋亡以及细胞因子分泌等过程,了解其在免疫应答中的作用。同时,[/font][font=Calibri]T[/font][font=宋体]细胞培养也为疾病治疗和预防提供了新的思路和手段,如免疫疗法、疫苗研发和细胞治疗等。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=Calibri]T[/font][font=宋体]细胞培养的原理[/font][/font][/b][font=宋体][font=宋体]是通过复合抗体孵育标记脾脏细胞中除[/font][font=Calibri]T[/font][font=宋体]细胞以外的其他细胞,再用磁珠结合抗体,然后用磁极吸附磁珠,那剩下的就是没有结合磁珠的[/font][font=Calibri]T[/font][font=宋体]细胞了。[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=Calibri]t[/font][font=宋体]细胞培养方法包括以下步骤:[/font][/font][/b][font=宋体][font=宋体]①抗体包被培养板:用无菌[/font][font=Calibri]PBS[/font][font=宋体]制备[/font][font=Calibri]5~10 μg/mL[/font][font=宋体]的[/font][font=Calibri]CD3[/font][font=宋体]抗体,然后在[/font][font=Calibri]96[/font][font=宋体]孔板的条件孔中,每孔加入[/font][font=Calibri]50 μL[/font][font=宋体]抗体溶液。[/font][/font][font=宋体][font=宋体]②接种细胞:在抗体包被的培养板中接种[/font][font=Calibri]T[/font][font=宋体]细胞,然后将培养板置于[/font][font=Calibri]37[/font][font=宋体]℃培养箱中[/font][font=Calibri]2[/font][font=宋体]小时或者提前一天准备培养板,置于[/font][font=Calibri]4[/font][font=宋体]℃过夜。[/font][/font][font=宋体][font=宋体]③洗涤和消化:在接种细胞之前,用[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/9p][color=#3333ff]移液枪[/color][/url]将培养孔中的[/font][font=Calibri]50 μL[/font][font=宋体]抗体吸出,然后用[/font][font=Calibri]200 μL PBS[/font][font=宋体]洗涤培养孔并弃去[/font][font=Calibri]PBS[/font][font=宋体]。重复此步骤以去除所有未交联的抗体。[/font][/font][font=宋体][font=宋体]④细胞消化:将细胞培养瓶竖立放置,吸走培养基,如果培养基中的脱落细胞较多,说明细胞现在很容易脱落,只要加入[/font][font=Calibri]1ml[/font][font=宋体]的[/font][font=Calibri]PBS+EDTA[/font][font=宋体]([/font][font=Calibri]0.02%[/font][font=宋体]),来回轻微晃动培养瓶直到细胞完全脱落,加入[/font][font=Calibri]10mlMEM[/font][font=宋体],混匀,不能吹打,分装[/font][font=Calibri]2[/font][font=宋体]瓶。如果细胞没长满就脱落,则只需加入[/font][font=Calibri]5mlMEM[/font][font=宋体],不分装。如果培养瓶中的细胞贴壁较牢固,培养基上清没有细胞脱落碎片,且细胞长满达到[/font][font=Calibri]80[/font][font=宋体]%以上,吸走培养基,加入[/font][font=Calibri]5ml[/font][font=宋体]的[/font][font=Calibri]PBS+EDTA[/font][font=宋体]([/font][font=Calibri]0.02%[/font][font=宋体]),迅速轻微晃动,竖立培养瓶,吸走,加入[/font][font=Calibri]1ml0.05%[/font][font=宋体]胰酶,[/font][font=Calibri]37[/font][font=宋体]度消化不超过[/font][font=Calibri]3min[/font][font=宋体],细胞完全消化脱壁,取出加入[/font][font=Calibri]10ml[/font][font=宋体]培养基轻微吸打混匀,分装[/font][font=Calibri]2[/font][font=宋体]瓶。[/font][/font][font=宋体][font=宋体]⑤培养:将分装的[/font][font=Calibri]T[/font][font=宋体]细胞接种到新培养瓶中,通常[/font][font=Calibri]T25[/font][font=宋体]加[/font][font=Calibri]10~12ml[/font][font=宋体]培养基培养,[/font][font=Calibri]2~3[/font][font=宋体]天左右换液一次,若培养基变黄及时换液,以维持一个相对稳定的培养条件,有利于细胞活正常生长。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]不管是我们实验室中常规的细胞培养,还是临床上的[/font][font=Calibri]CAR-T[/font][font=宋体]细胞治疗等,提高[/font][font=Calibri]T[/font][font=宋体]细胞的增殖和持久性,以及增强细胞再免疫抑制性[/font][font=Calibri]TME[/font][font=宋体]中的功能,都离不开细胞因子。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]细胞因子是由免疫细胞(如单核、巨噬细胞、[/font][font=Calibri]T[/font][font=宋体]细胞、[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞、[/font][font=Calibri]NK[/font][font=宋体]细胞等)和某些非免疫细胞(内皮细胞、表皮细胞、纤维母细胞等)经刺激而合成、分泌的一类具有广泛生物学活性的小分子蛋白质。具有调节固有免疫和适应性免疫、血细胞生成、细胞生长、[/font][font=Calibri]APSC[/font][font=宋体]多能细胞以及损伤组织修复等多种功能。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]细胞因子可被分为白细胞介素[/font][font=Calibri](IL)[/font][font=宋体]、干扰素[/font][font=Calibri](IFN)[/font][font=宋体]、肿瘤坏死因子[/font][font=Calibri](TNF)[/font][font=宋体]、集落刺激因子[/font][font=Calibri](CSF)[/font][font=宋体]、趋化因子、生长因子[/font][font=Calibri](GF)[/font][font=宋体]等。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]细胞因子[/font][font=宋体]γ链共受体家族包括[/font][font=Calibri]IL-2[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]IL-4[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]IL-7[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]IL-9[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]IL-15[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]IL-21[/font][font=宋体],它们在[/font][font=Calibri]T[/font][font=宋体]细胞分化、增殖和内环境稳定中起着关键作用。他们受体包括共同的γ链(γ[/font][font=Calibri]c[/font][font=宋体])和一个各自单独的受体链,下游信号激活[/font][font=Calibri]STAT[/font][font=宋体]信号通路。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]更多[url=https://cn.sinobiological.com/resource/featured-review/t-cell-culture-cytokines-treatment][b]细胞因子[/b][/url]详情可以关注:[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/featured-review/t-cell-culture-cytokines-treatment[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=宋体]义翘神州:蛋白与抗体的专业引领者,欢迎通过百度搜索[/font][font=宋体]“义翘神州”与我们取得联系。[/font][/font][/b][font=Calibri] [/font]

  • 细胞因子和其它试剂

    我这里有多种细胞因子和诊断试剂,可关注我们的网站:www.leeyond.com也可电话咨询:0592-5093271吴小姐

  • CIK细胞的制备方法

    【背景】CIK是“Cytokine-Induced Killer Cells”的缩写,中文全称为“细胞因子诱导的杀伤细胞”。 CIK是单个核细胞在CD3单抗和多种细胞因子(包括IFN-g, IL-2等)的作用下培养获得的一群以CD3+CD56+细胞为主要效应细胞的异质细胞群, 其既具有T淋巴细胞强大的抗肿瘤活性,又具有NK细胞(自然杀伤细胞)的非MHC(主要组织相容性抗原)限制性肿瘤杀伤能力。CIK细胞具有杀瘤活性高、杀瘤谱广,对正常组织毒性低,体外可高度扩增等特点,是目前临床上广泛使用的过继性免疫治疗细胞。【培养原理】CIK培养用细胞因子和抗体:nCD3激发型单抗:T细胞活化的第一信号来自于T细胞表面的受体,即T细胞抗原受体(T cell antigen receptor, TCR)与APC提呈的抗原的特异性结合,也就是T细胞对抗原的特异性识别。TCR是由2条不同肽链构成的异二聚体,在T细胞表面,其与CD3分子通过非共价键结合,形成TCR/CD3复合体。TCR识别特异性抗原后会引起CD3和T细胞表面的辅助受体CD4或CD8分子的胞浆尾部聚集,进而激活与胞浆尾部相连的酪氨酸激酶(Lck, Fyn和ZAP-70等),促使CD3分子胞浆区的免疫受体酪氨酸活化基序(immunoreceptor tyrosine-based activation motif, ITAM)中的酪氨酸(Y)磷酸化。磷酸化的酪氨酸(pY)进一步磷酸化下游含酪氨酸的蛋白,从而引起激酶活化的级联反应(磷脂酰肌醇途径或MAP激酶途径等),最终通过激活转录因子,使其进入细胞核内,结合于调控T细胞增殖和活化的靶基因(如IL-2和IFN-g等),引起基因的表达和转录,T细胞因而由静止状态转为增殖和活化状态。由上可见,CD3分子在T细胞活化信号的转导中起着极其关键的作用。CD3激发型单抗与T细胞表面CD3分子特异性结合后,可引起CD3分子胞浆区ITAM基序中酪氨酸的磷酸化,进而导致T细胞增殖和活化的下游信号的激活,从而使T细胞增殖和活化。也就是说,CD3激发型单抗能够模拟抗原与TCR/CD3复合物的识别和激活过程,从而引起T细胞的增殖与活化,因此是CIK细胞培养中不可或缺的刺激因素。此外,CD3激发型单抗在选用时一定要注意克隆号。研究表明,仅克隆号为OKT-3的CD3激发型单抗可以刺激所有人的T细胞的增殖,而其它克隆号的CD3激发型单抗仅能刺激一部分人的T细胞。因此,在进行CIK培养时,最好选用OKT-3克隆,以保证每个患者的T细胞均能被激活。nIL-2 (白细胞介素-2)IL-2最初发现时被称为T细胞生长因子(T cell growth factor, TCGF),是引起T细胞增殖最重要的细胞因子。IL-2既是自分泌细胞因子,也是旁分泌细胞因子,其通过与T细胞表面的IL-2受体(IL-2R)的特异性结合而促使T细胞活化,并进入细胞分裂状态。此外,IL-2还可刺激NK细胞的生长并增强其杀伤能力。因此CIK细胞培养中须添加IL-2,以促进T细胞的增殖与活化。nIFN-g (干扰素-g)IFN-g 具有上调外周血淋巴细胞表面IL-2R表达的作用,因此会增强T细胞对IL-2促增殖反应的敏感度和强度。在诱导CIK细胞形成的过程中加入IFN- g ,可降低IL-2的用量。研究发现,IFN-g加入的顺序与CIK的细胞毒活性密切相关。先加入IFN- g,培养24后再加入IL-2,可明显提高CIK的细胞毒活性。nIL-1a(白细胞介素-1a)IL-1a也可以介导外周血淋巴细胞表面上调表达IL-2R。当IL-1a与IFN-g和激发型CD3单抗合用时,可以明显提高CIK 的细胞毒作用。【细胞制备】1.外周血单个核细胞的采集1.1用血细胞分离机采集患者自身的外周血单个核细胞50-100mL;1.2淋巴细胞分离液密度梯度离心法进一步纯化单个核细胞(PBMC);1.3无血清培养液洗涤2次,获得纯度在90%以上的PBMC。2.CIK细胞的培养及鉴定2.1将PBMC按1-2 x 106/ml的浓度悬浮于无血清培养液中,加入1,000 U/ml 的重组人IFN-g,37oC,5%CO2培养箱中培养;2.224h 后加入50ng/ml 的CD3 单克隆抗体和300 U/ml 的重组人IL-2,刺激CIK 细胞的生长和增殖;注:此时也可同时加入100 U/ml的重组人IL-1a。2.3每3天半量换液或扩瓶一次,并补加重组人IL-2 300 U/ml;2.4在培养的第14d,收获CIK细胞。2.5CIK细胞质控:2.9.1台盼蓝染色检测:活细胞应在80%以上;2.9.2流式细胞仪检测细胞表面CD3、CD8、CD56等分子的表达:CD3+CD56+细胞的比例应在20%以上。2.9.3细胞杀伤实验:以CIK细胞为效应细胞,以肿瘤细胞(可为原代肿瘤细胞或肿瘤细胞株)为靶细胞,将效应细胞与靶细胞按10 : 1(数目比) 的比例加入96 孔U 型板中,每孔含靶细胞1 x 104个,终体积为200 ml,设3个复孔。培养4h,然后取培养上清,用乳酸脱氢酶(LDH) 试剂盒检测效应细胞对靶细胞的杀伤率。2.9.4收获细胞前,取少量培养物进行细菌、真菌培养,并检测支原体、衣原体,及内毒素(标准:病原学检测阴性,内毒素5 Eu)。【步骤简图】http://img.dxycdn.com/trademd/upload/userfiles/image/2013/04/B1366873006_small.jpg 【推荐试剂】http://img.dxycdn.com/trademd/upload/userfiles/image/2013/04/B1366873008_small.jpg 注:Animal Free意为无动物成分。无动物成分的重组细胞因子在生产过程中不会有任何动物源性物质,尤其是牛蛋白的混入,使得最终获得的重组人蛋白中不含任何动物成分。这样可避免动物病原体(如疯牛病,克雅氏病等)的污染及外源蛋白引起的机体异种排斥和过敏反应,因此细胞治疗的体外细胞培养过程中最好使用无动物成分的重组细胞因子。【其它相关试剂】 http://img.dxycdn.com/trademd/upload/userfiles/image/2013/04/B1366873009_small.jpg【参考文献】 Li R, Wang C, et al. Autologous cytokine-induced killer cell immunotherapy in lung cancer: a phase II clinical study. Cancer Immunol Immunother. 2012; 61:2125-2133

  • 90万!中国疾病预防控制中心营养与健康所人多细胞因子(炎症因子)检测试剂盒采购项目

    [font=inherit]一、项目基本情况[/font]项目编号:TC240V00S项目名称:中国疾病预防控制中心营养与健康所人多细胞因子(炎症因子)检测试剂盒采购项目预算金额:90.000000 万元(人民币)采购需求:[table=100%][tr][td][align=center][font=inherit]包号[/font][/align][/td][td][align=center][font=inherit]包名称[/font][/align][/td][td][align=center][font=inherit]数量[/font][/align][/td][td][align=center][font=inherit]最高限价单价(万元)[/font][/align][/td][td][align=center][font=inherit]最高限价总价(万元)[/font][/align][/td][td][align=center][font=inherit]是否允许进口[/font][/align][/td][/tr][tr][td][align=center]1[/align][/td][td][align=center]人多细胞因子(炎症因子)检测试剂盒[/align][/td][td][align=center]50盒(4000人份)[/align][/td][td][align=center]90[/align][/td][td][align=center]90[/align][/td][td][align=center]是[/align][/td][/tr][/table]合同履行期限:交货期:接到采购人通知后60日内交货本项目( 不接受 )联合体投标。[font=inherit]二、申请人的资格要求:[/font]1.满足《中华人民共和国政府采购法》第二十二条规定;2.落实政府采购政策需满足的资格要求:无3.本项目的特定资格要求:1.提供产品属于医疗器械的,根据产品分类应按《医疗器械监督管理条例》,办理医疗器械注册证或者办理备案,供应商须提供医疗器械注册证或备案凭证(复印件加盖供应商单位公章)。2.提供产品属于医疗器械的,中华人民共和国境内制造商应按《医疗器械监督管理条例》办理医疗器械生产许可证或者办理备案。供应商为制造商的须提供医疗器械生产许可证或备案凭证(复印件加盖供应商单位公章),供应商为代理商的须提供医疗器械经营许可证或备案凭证(复印件加盖供应商单位公章)。[font=inherit]三、获取招标文件[/font]时间:2024年01月31日 至 2024年02月07日,每天上午9:00至11:00,下午13:30至17:00。(北京时间,法定节假日除外)地点:http://www.365trade.com.cn方式:支持网上发售售价:¥300.0 元,本公告包含的招标文件售价总和[font=inherit]四、提交投标文件截止时间、开标时间和地点[/font]提交投标文件截止时间:2024年02月21日 10点00分(北京时间)开标时间:2024年02月21日 10点00分(北京时间)地点:中招国际招标有限公司(北京市海淀区学院南路62号中关村资本大厦)会议室[font=inherit]五、公告期限[/font]自本公告发布之日起5个工作日。[font=inherit]六、其他补充事宜[/font][align=left]1.本项目需要落实的政府采购政策[/align][align=left]1.1 中小企业、监狱企业及残疾人福利性单位;[/align][align=left]1.2 政府采购节能产品、环境标志产品;[/align][font=inherit]七、对本次招标提出询问,请按以下方式联系。[/font]1.采购人信息名 称:中国疾病预防控制中心营养与健康所地址:北京市西城区南纬路27号联系方式:于老师:010-662370412.采购代理机构信息名 称:中招国际招标有限公司地 址:北京市海淀区学院南路62号院1号楼6层(601-615室)、9层(903-915室)联系方式:范君、曹武宁、卢燕、梅建伟3.项目联系方式项目联系人:范君、曹武宁、卢燕、梅建伟电 话:  010-62108225

  • 利用血细胞计数板进行细胞计数: 像数1,2,3那样简单

    许多关于细胞利用的一些生物学应用,如微生物学、细胞培养、血液检查等要求我们在实验中确定细胞的浓度。细胞计数非常简单,需要有一个计数板,称为血细胞计数板,或血细胞计数器。19世纪法国解剖学家Louis-Charles Malassez发明了这种血细胞计数板。血细胞计数板是由一片较厚的特制玻片构成,中间有一个垂直线网格。网格的尺寸是给定的,因此每条线覆盖的区域是已知的,这样就可以对一定体积内的溶液中的细胞数量进行计数,为后期的血细胞检测奠定基础。最为常见的血细胞计数板类型的中部有一个“H”形结构,上面有两个像镜子一样抛光的网格表面,并可在上面加上外罩。加载血细胞计数板开始进行计数之前,用擦镜纸拭去灰尘颗粒,确保血细胞计数板及其盖玻片处于洁净状态。安装在血细胞计数板上的盖玻片是特制的,明显厚于传统的显微镜盖玻片,这是因为它必须能够克服液滴的表面张力。确保在加载细胞悬液之前,先将盖玻片放置在计数表面,然后将吸液头和样本放进其中的一个V型孔中,并小心地挤出样本。利用毛细管作用充填盖玻片下部的区域。必须放入足够的液体以便覆盖整个镜片的表面,通常需要大约10ul,但不要溢出表面。您可以在一台血细胞计数板中加载两个样本,每个样本进入两个网格。将加载完的血细胞计数板放置在显微镜台上,然后将计数格在低倍镜焦距中显示。将样本静置几分钟,不要移动盖玻片,以免产生气泡导致计数困难。在血细胞计数板上进行血细胞计数一个血细胞计数板的整个网格包括9个方格,每个方格的面积为1mm2。血细胞计数板的中心区域有25个较大的方格,每个大的方格中又包含16个小方格。当进行计数时,仅对那些位于大方格两侧的各行中的细胞进行计数,以避免重复计数。悬液必须稀释到足够的程度,这样,细胞或其它颗粒才能均匀分布,不会再网格中相互重叠。为了判断细胞的活性,通常采用一种特殊的染色剂(如用台盼蓝稀释样本)。这种染色方法,又称为染色

  • 血细胞分析仪购买中值得思考的几个问题

    目前血细胞分析仪在国内外医院都是进行血常规检查的必备仪器,它不但减轻了工作人员劳动强度,提高了实验结果的准确性,还提供了更多的相关实验指标,对疾病的诊断和鉴别诊断起了重要的作用。1检测系统 按照过去的老观念,添置设备就是买仪器,货比三家按性价比来选购仪器。但是传统的与当今理念显然存在差距,随着对检验管理的完善,政府对检验科开展的每个检验项目提出了更高的要求,卫生部关于印发《医疗机构临床实验室管理办法》的通知(卫医发〔2006〕73号)(下面简称《管理办法》)指出:“医疗机构临床实验室应当保证检测系统的完整性和有效性”。什么叫检测系统?《全国临床检验操作规程》3版明确指出:完成一个检验项目的检测所涉的仪器、试剂、校准品、质控品、消耗品、操作程序、维护保养程序等的组合,称为检测系统,若是人工操作,还必须包括操作人员。2检测系统重要性 检测系统的好坏将直接影响检测结果精密度、准确性和溯源性,但是如果每一个临床实验室对每一检验项目都做检测系统的评价是无法完成的,因此,国外厂商除了提供仪器以外,还将提供配套试剂、配套校准品,也规定了操作程序,形成了可靠的有溯源性的检测系统。上个世纪九十年代美国FDA、欧盟有关部门己经明确规定,在申报产品许可证时,不再是一台仪器的认可,而是要整个检测系统的申报与认可。用户按规定的检测系统(即封闭系统)去检测病人标本,质量是有保证的。现在我国有关部门也十分重视,有一定规模的国产血细胞分析仪厂家除了提供仪器以外,还可提供配套试剂、配套校准品和质控品,以及相应的检测系统评价报告,包括结果的溯源性。长期实践证明,只有形成固定的组合的检测系统才能保证检测结果的准确性和可靠性。选择单一的血细胞分析仪或是具有溯源性评价的检测系统,既是传统与当今理念的区别,笔者认为选择后者才能保证检测质量,保证结果的准确性。

  • 流式细胞术可以检测什么?

    [font=宋体]流式细胞术,作为一种先进的生物技术,已经在生物医学研究中占据了举足轻重的地位。这种技术以其高精度、高速度以及多参数同时检测的能力,广泛应用于细胞生物学、免疫学、肿瘤学等多个领域。流式细胞术不仅可以对单个细胞进行多参数定量分析和分选,还能够对细胞内部的蛋白质、核酸、细胞受体以及细胞表面抗原等进行检测。因此,它在疾病诊断、药物筛选、细胞功能研究等方面具有广泛的应用前景。本文将对流式细胞术的检测原理、应用领域以及发展前景进行详细介绍,旨在为读者提供对这一技术全面而深入的了解。流式细胞术可以检测什么?下面是具体检测信息及应用:[/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=Calibri]1.[/font][font=宋体]细胞表型检测[/font][/font][/b][font=宋体]免疫细胞表型是流式细胞术最突出应用。[/font][font=宋体][font=宋体]通过检测免疫细胞群的表面或细胞内标志物,对其进行鉴定和表征。流式细胞术能够精确鉴定和分类免疫细胞群,例如[/font] [font=Calibri]T [/font][font=宋体]细胞、[/font][font=Calibri]B [/font][font=宋体]细胞、[/font][font=Calibri]NK [/font][font=宋体]细胞、树突状细胞、单核细胞、巨噬细胞、血小板和粒细胞等。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]研究人员可以识别和量化异质群体中的各种免疫细胞亚群。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]临床医生可以诊断和监测各种血液系统疾病、进行免疫免疫评估([/font][font=Calibri]8[/font][font=宋体]大类免疫细胞构成与肿瘤预后)。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=Calibri]2.[/font][font=宋体]细胞活力检测[/font][/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体]流式细胞术能够定量测量群体内和体外培养的活细胞和非活细胞。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]通过使用选择性标记活细胞或死细胞的荧光染料,流式细胞术可以提供精确可靠的活力测定,有助于确定细胞活力百分比。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]流式细胞术可以根据特定的标志物或染料区分活细胞、凋亡细胞和坏死细胞,从而更详细地了解细胞的健康和状态。通过将活力染料与细胞表面抗原、细胞内蛋白或功能测定的标记物相结合,研究人员可以在特定细胞类型或实验条件下获得有关细胞活力及其发生机制的全面信息。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]最常用的活性检测染料[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]死细胞:碘化丙啶([/font] [font=Calibri]propidium iodide[/font][font=宋体],[/font][font=Calibri]PI[/font][font=宋体])和[/font][font=Calibri]7-AAD[/font][font=宋体],与[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]结合,但只能进入膜受损的细胞,使死细胞发出荧光。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]凋亡细胞:[/font][font=Calibri]annexin V[/font][font=宋体]:对磷脂酰丝氨酸具有强结合亲和力的蛋白质,在细胞凋亡的早期阶段暴露在质膜的外表面[/font][font=Calibri]annexin V+PI[/font][font=宋体]是常用区分凋亡细胞和坏死细胞的组合。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]活细胞:[/font][font=Calibri]calcein AM[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]CFDA[/font][font=宋体]([/font][font=Calibri]carboxyfluorescein diacetate[/font][font=宋体])、[/font][font=Calibri]FDA [/font][font=宋体]([/font][font=Calibri]fluorescein diacetate[/font][font=宋体]) :进入活细胞,但只有在与细胞内酶相互作用时才会发出荧光[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]细胞体内增殖:[/font][font=Calibri]CFSE(CFDA-SE)[/font][font=宋体]穿透细胞膜,在活细胞内与胞内蛋白共价结合,水解后释放出绿色荧光。在细胞分裂增殖过程中,它的荧光强度会随着细胞的分裂而逐级递减,标记荧光可平均分配至两个子代细胞中,因此其荧光强度是亲代细胞的一半,根据这一特性,它可被用于检测细胞增殖,细胞周期的估算及细胞分裂等方面。[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=Calibri]3.[/font][font=宋体]细胞周期分析[/font][/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体]从流式细胞术的早期开始,细胞周期分析就成为有价值的应用。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]原理是基于荧光和核酸的量之间的关系。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]常用核酸结合染料:碘化丙啶([/font][font=Calibri]PI[/font][font=宋体]),[/font][font=Calibri]Hoechst[/font][font=宋体],[/font][font=Calibri]DAPI[/font][font=宋体],[/font][font=Calibri]7-AAD[/font][font=宋体],溴化乙锭等。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]流式细胞术细胞周期分可以有很多方面的应用,例如,[/font][font=Calibri]DNA/Ki67[/font][font=宋体]测定可以将表型选择与细胞周期分析相结合,用于监测[/font][font=Calibri]p53[/font][font=宋体]细胞周期停滞,评估抗癌活,多药耐药性等。[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=Calibri]4.[/font][font=宋体]离子通道测定[/font][/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]钙作为关键的第二信使,在许多细胞信号通路中起着至关重要的作用。它在免疫细胞活化中尤为重要,包括[/font][font=Calibri]T[/font][font=宋体]细胞、[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞和[/font][font=Calibri]NK[/font][font=宋体]细胞。[/font][/font][font=宋体]此外,钙信号传导还参与肥大细胞脱颗粒、神经元兴奋性、突触传递和神经递质释放至关重要。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]细胞脱颗粒的早期测量值是通过使用钙离子载体[/font][font=Calibri]A23187[/font][font=宋体]的流式细胞术确定的。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]常用荧光染料:[/font][font=Calibri]fluo-3 [/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]indo-1[/font][font=宋体]。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]虽然[/font][font=Calibri]Ca2+[/font][font=宋体]通道测量是最常见的应用之一,但其他离子如镁、钾、钠和氢也可以使用流式细胞术进行监测。[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=Calibri]5.[/font][font=宋体]细胞功能检测[/font][/font][/b][font=宋体]最早的检测是细胞酯酶。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]使用响应氧化态变化的活性染料检测粒细胞的氧化电位。例如,氢乙啶([/font][font=Calibri]hydroethidine[/font][font=宋体])用于中性粒细胞呼吸爆发。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]二乙酸二氯荧光素([/font][font=Calibri]dichlorofluorescein diacetate[/font][font=宋体]),已被用于吞噬细胞功能研究。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]效应细胞杀伤功能,是流式细胞术的另外一个重要应用。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]细胞因子是免疫细胞功能的重要执行分子,对科学研究,免疫细胞治疗,临床诊疗都及其关键。基于流式细胞术开发的多重细胞因子检测,已经有广泛应用。[/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=Calibri]6.[/font][font=宋体]蛋白质工程[/font][/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体]流式细胞术和分选传统上不是蛋白质工程中最常用的技术之一。然而,近年来,在该领域的应用越来越多。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]流式细胞术被用于酶学蛋白质研究,包括细胞色素[/font][font=Calibri]P450[/font][font=宋体]、葡萄糖氧化酶、几丁质酶、纤维素酶、过氧化物酶、酯酶、转移酶、β半乳糖苷酶、硫代内酯酶等。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]蛋白质工程,包括在基因水平上引入突变(随机或特异性),以创建由数千到数百万个单个蛋白质变体组成的文库(如上图),使用流式细胞术[/font] [font=宋体]每天能够分析多达[/font] [font=Calibri]10^8[/font][font=宋体]–[/font][font=Calibri]10^9 [/font][font=宋体]个克隆,并对具有所需特性的克隆进行分类。[/font][/font][b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]7.[/font][font=宋体]哺乳动物细胞和细菌细胞分选[/font][/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体]细胞分选是流式细胞的重要应用之一,哺乳动物细胞相对成熟,不做赘述。细菌细胞方面的应用,也逐渐开始建立。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]与耗时的传统琼脂铺板检测方法相比,流式分选可以快速检测和分选悬浮液中的单个细菌细胞。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]尽管细胞分选仪具有高性能,但它们在微生物学中的应用一直受到限制。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]这主要是由于微生物体积小,因此很难将它们与培养基中的细胞碎片或背景颗粒区分开来。另一个潜在的问题是,通常没有细菌菌株特有的抗体。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]限制细胞分选仪在细菌检测和分选中的适用性的其他因素主要与分选仪硬件功能本身有关,在流式细胞术仪器的早期,数量有限的激光器和检测器,限制一次只能使用一种或两种荧光染料。随着最新仪器的发展,多激光器和检测起的仪器被开发:包括赛默飞世尔的[/font][font=Calibri]Bigfoot[/font][font=宋体]光谱细胞分选仪,[/font][font=Calibri]BD FACSAria III[/font][font=宋体]分选仪,索尼[/font][font=Calibri]MA900[/font][font=宋体]细胞分选仪和贝克曼库尔特的[/font][font=Calibri]MoFlo Astrios EQ[/font][font=宋体]等。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]此外,部分致病性细菌,需要在[/font][font=Calibri]BSL2[/font][font=宋体]以上的实验环境下进行,现在部分流式细胞术带有[/font][font=Calibri]BSL 2 hood[/font][font=宋体]。[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=Calibri]8.[/font][font=宋体]液滴微流体[/font][/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]液滴微流体是一个相对较新的领域,专注于皮升体积中含有细胞或[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]的离散液滴的形成,操作和分析,应用于生物学、化学、材料科学和医学。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]在生物学中,液滴微流体可实现单细胞分析、生物分子的高通量筛选、细胞异质性研究和药物发现。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]流式细胞术分析是研究单细胞的强大技术,可提供有关各种参数的宝贵信息。然而,它的测量仅限于直接连接到细胞的分子,例如表面或细胞内标记物,限制研究由细胞分泌或由[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]分子产生但不物理附的分子。液滴微流体提供了一种克服这一限制的新方法。将细胞或[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]封装在单个液滴中会产生离散的区室,从而能够分析由封装实体释放或产生的化合物。[/font][/font][b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]9.[/font][font=宋体]下一代生物制剂[/font][/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]生物制药已经占据了药物市场的重要份额,包括治疗性蛋白质([/font][font=Calibri]65%[/font][font=宋体]),疫苗([/font][font=Calibri]20%[/font][font=宋体])等。通过测序([/font][font=Calibri]NGS[/font][font=宋体])进行单[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞库分析和克隆扩增鉴定,直接从人类幸存者克隆免疫球蛋白基因,分离出高亲和力中和抗体,加快了单克隆抗体药物的研发,然而,这种方法比较昂贵,且依旧需要后续的功能验证等。新策略可使用流式细胞术、[/font][font=Calibri]MACS[/font][font=宋体]或微流体将单细胞分离与功能筛选相结合,降低开发成本并消除失败的候选药物,是流式细胞术新的应用开发方向。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]义翘神州提供[url=https://cn.sinobiological.com/services/flow-cytometry-service][b]流式细胞检测技术服务[/b][/url],拥有[/font][font=宋体][font=宋体]①具有 [/font][font=Calibri]20,000 [/font][font=宋体]次以上流式抗体筛选鉴定经验及多年流式诊断抗体研发经验,在实验方案设计、样品制备、数据分析等方面确保科学性、准确性和可靠性[/font][font=Calibri] [/font][/font][font=宋体][font=宋体]②拥有 [/font][font=Calibri]1,000 [/font][font=宋体]余株自产精品流式抗体,覆盖细胞膜、胞内、核内及分泌抗原;[/font][/font][font=宋体][font=宋体]③自产 [/font][font=Calibri]Annexin V/7-AAD [/font][font=宋体]凋亡检测试剂盒,并储备多种流式检测常用试剂,大大节约购买试剂的等待时间和实际费用;[/font][/font][font=宋体][font=宋体]④可以提供近 [/font][font=Calibri]200 [/font][font=宋体]种细胞系选择,省去细胞样本寄送过程中的风险,并可以免费提供健康人外周血细胞对照品。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]更多详情可以关注:[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/services/flow-cytometry-service[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=宋体]义翘神州:蛋白与抗体的专业引领者,欢迎通过百度搜索[/font][font=宋体]“义翘神州”与我们取得联系。[/font][/font][/b][font=宋体] [/font][font=Calibri] [/font]

  • 什么是CAR-NK细胞疗法?CAR-NK细胞制备过程详解

    [font=宋体][b][font=宋体]什么是[/font][font=Calibri]CAR-NK[/font][font=宋体]细胞疗法[/font][font=Calibri]?[/font][/b][/font][font=宋体][font=宋体]自然杀伤([/font][font=Calibri]NK[/font][font=宋体])细胞是具有高度细胞毒性的非特异性免疫效应细胞,具有消除肿瘤细胞和感染病毒细胞等异常细胞的能力。[/font][font=Calibri]CAR-NK[/font][font=宋体]细胞疗法在血液瘤和实体瘤中发挥显著的效果,与[/font][font=Calibri]CAR-T[/font][font=宋体]疗法相比,[/font][font=Calibri]CAR-NK[/font][font=宋体]细胞疗法更安全,引起细胞因子释放综合征([/font][font=Calibri]CRS[/font][font=宋体])和移植物抗宿主病([/font][font=Calibri]GVHD[/font][font=宋体])的可能性更低,具有更强的抗肿瘤活性,是一个现货免疫细胞的理想选择。[/font][font=Calibri]CAR-NK[/font][font=宋体]细胞的来源广泛,包括脐带血([/font][font=Calibri]UCB[/font][font=宋体])、外周血([/font][font=Calibri]PB[/font][font=宋体])、人诱导多能干细胞([/font][font=Calibri]hiPSCs[/font][font=宋体])、人胚胎干细胞([/font][font=Calibri]hESC[/font][font=宋体])、造血干细胞([/font][font=Calibri]HSC[/font][font=宋体])和[/font][font=Calibri]NK[/font][font=宋体]细胞系。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b][font=Calibri]CAR-NK[/font][font=宋体]细胞的制备过程:[/font][/b][/font][font=宋体][font=宋体]? 对不同来源的[/font][font=Calibri]NK[/font][font=宋体]细胞进行分离和制备时,可以用[/font][font=Calibri]CAR[/font][font=宋体]表达载体(如慢病毒)进行修饰;[/font][/font][font=宋体][font=宋体]? 在特定的扩增培养基中扩增[/font][font=Calibri]NK[/font][font=宋体]细胞;[/font][/font][font=宋体][font=宋体]? 建立的[/font][font=Calibri]CAR[/font][font=宋体]‐[/font][font=Calibri]NK[/font][font=宋体]细胞通常采用静脉注射,以选择性杀死肿瘤细胞。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b][url=https://cn.sinobiological.com/category/solutions/car-nk-therapy][font=Calibri]CAR-NK[/font][font=宋体]细胞疗法整体解决方案[/font][/url][/b][/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州为制药公司提供综合性的[/font][font=Calibri]CAR-NK[/font][font=宋体]细胞疗法开发解决方案,包括从[/font][font=Calibri]CAR[/font][font=宋体]开发、[/font][font=Calibri]NK[/font][font=宋体]细胞获取和表征、[/font][font=Calibri]NK[/font][font=宋体]细胞活化和扩增、[/font][font=Calibri]NK[/font][font=宋体]细胞纯化、[/font][font=Calibri]CAR-NK[/font][font=宋体]细胞制备到[/font][font=Calibri]CAR-NK[/font][font=宋体]细胞质量控制的每一阶段。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]①[/font][font=Calibri]CAR[/font][font=宋体]开发:[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]CAR[/font][font=宋体]可特异性识别肿瘤细胞表面抗原并与其结合,因此获得高质量[/font][font=Calibri]CAR[/font][font=宋体]是开发中的关键步骤。基于[/font][font=Calibri]15+[/font][font=宋体]年的经验积累和技术沉淀,义翘神州建立了四大抗体开发平台(噬菌体抗体库、杂交瘤、流式单[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞、[/font][font=Calibri]BeaconB[/font][font=宋体]细胞)满足[/font][font=Calibri]scFv[/font][font=宋体]发现的需求。同时我们还提供用于[/font][font=Calibri]scFv[/font][font=宋体]筛选和[/font][font=Calibri]CAR[/font][font=宋体]亲和力检测的多种[/font][font=Calibri]CAR-NK[/font][font=宋体]靶点蛋白和[/font][font=Calibri]SPR/BLI[/font][font=宋体]亲和力检测服务,支持[/font][font=Calibri]CAR-NK[/font][font=宋体]研究。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]②[/font][font=Calibri]NK[/font][font=宋体]细胞获取和表征:[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]NK[/font][font=宋体]细胞源于脐带血([/font][font=Calibri]UCB[/font][font=宋体])、外周血([/font][font=Calibri]PB[/font][font=宋体])、人诱导多能干细胞([/font][font=Calibri]hiPSCs[/font][font=宋体])、人胚胎干细胞([/font][font=Calibri]hESC[/font][font=宋体])、造血干细胞([/font][font=Calibri]HSC[/font][font=宋体])和[/font][font=Calibri]NK[/font][font=宋体]细胞系。由于[/font][font=Calibri]NK[/font][font=宋体]细胞来源广泛,需要对[/font][font=Calibri]NK[/font][font=宋体]细胞进行分离,清除[/font][font=Calibri]T[/font][font=宋体]细胞、[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞或其他污染物。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]NK[/font][font=宋体]细胞被定义为[/font][font=Calibri]CD3-CD16+CD56+[/font][font=宋体]的淋巴细胞。根据[/font][font=Calibri]NK[/font][font=宋体]细胞表面标志物[/font][font=Calibri]CD16[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]CD56[/font][font=宋体]的差异性表达,可将[/font][font=Calibri]NK[/font][font=宋体]细胞划分为两个亚群[/font][font=Calibri]CD56brightCD16dim/[/font][font=宋体]? 和[/font][font=Calibri]CD56dimCD16+[/font][font=宋体]。根据这些不同的表面标志物,利用流式抗体进行检测从而区分[/font][font=Calibri]NK[/font][font=宋体]细胞亚群。义翘神州已开发高质量的[/font][font=Calibri]CD3[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]CD16[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]CD25[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]CD56[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]KIR2DL1[/font][font=宋体]流式抗体,可有效分离和表征[/font][font=Calibri]NK[/font][font=宋体]细胞群或亚群。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]③[/font][font=Calibri]NK[/font][font=宋体]细胞活化和扩增:[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]在外周血白细胞中,只有约[/font][font=Calibri]5%-15%[/font][font=宋体]为[/font][font=Calibri]NK[/font][font=宋体]细胞,如何获得足够的[/font][font=Calibri]NK[/font][font=宋体]细胞仍是患者采用免疫治疗的主要挑战。从[/font][font=Calibri]NK[/font][font=宋体]细胞活化阶段进行高效的[/font][font=Calibri]NK[/font][font=宋体]细胞转导,以诱导细胞增殖。目前[/font][font=Calibri]NK[/font][font=宋体]细胞培养存在多种培养方式,应用最广泛的两种方法为饲养层细胞培养和细胞因子培养。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]GMP[/font][font=宋体]级细胞因子[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]相关法规明确规定,对于细胞治疗药物中原材料的选择,应尽量采用符合药典标准的原材料或批准上市的药品,优先级是:药品级>[/font][font=Calibri]GMP[/font][font=宋体]级>[/font][font=Calibri]RUO[/font][font=宋体]级。[/font][font=Calibri]GMP[/font][font=宋体]级细胞因子对于[/font][font=Calibri]NK[/font][font=宋体]细胞的发育和存活具有重要调节作用,如[/font][font=Calibri]IL-21[/font][font=宋体]能诱导[/font][font=Calibri]NK[/font][font=宋体]细胞的成熟,并增强其细胞毒性。[/font][font=Calibri]GMP[/font][font=宋体]级细胞因子作为重要原料应用到[/font][font=Calibri]CAR-NK[/font][font=宋体]药物开发过程中,可在体外扩增过程中高效激活[/font][font=Calibri]NK[/font][font=宋体]细胞。义翘神州严格遵循[/font][font=Calibri]GMP[/font][font=宋体]质量管理体系,成功开发出高质量、高活性的[/font][font=Calibri]GMP[/font][font=宋体]级细胞因子:[/font][font=Calibri]IL-2[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]IL-7[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]IL-12[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]IL-15[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]IL-21[/font][font=宋体],助力[/font][font=Calibri]CAR-NK[/font][font=宋体]细胞培养。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]④[/font][font=Calibri]CAR-NK[/font][font=宋体]细胞制备:[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]慢病毒包装是[/font][font=Calibri]CAR-NK[/font][font=宋体]细胞制备的关键环节。影响慢病毒包装是否成功的因素包括载体系统、转染试剂和慢病毒滴度等。义翘神州提供高品质的无血清[/font][font=Calibri]HEK293[/font][font=宋体]培养基、[/font][font=Calibri]Sinofection[/font][font=宋体]转染试剂和超级核酸酶,用于慢病毒载体的高效转染。同时我们还提供细胞库检测服务和核酸酶残留检测试剂盒,满足[/font][font=Calibri]CAR-NK[/font][font=宋体]细胞制备需求。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]⑤[/font][font=Calibri]CAR-NK[/font][font=宋体]细胞质量控制:[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]为确保[/font][font=Calibri]CAR-NK[/font][font=宋体]细胞治疗产品的安全性,需要进行严格的质量控制检测,包括活细胞比例检测、细胞群或亚群检测、[/font][font=Calibri]CAR[/font][font=宋体]阳性率检测和杀伤效力评价等。义翘神州提供高质量的产品和服务,支持[/font][font=Calibri]CAR-NK[/font][font=宋体]细胞质量控制检测。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]更多详情可以参看:[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/category/solutions/car-nk-therapy[/font][/font]

  • 转让血细胞淘洗机

    转让泰尔茂比司特 血细胞淘洗机一台 仪器全新(受市场影响,项目未能开展,安装测试后未投入使用),价格面议。品名货号规格型号单位数量TerumoBCT 血细胞淘洗机91001TerumoBCT COBE 2991 Cell processor台1

  • 流式细胞仪检测细胞周期及正常范围

    [b][font=宋体][font=宋体]细胞周期[/font][font=Calibri]cell cycle [/font][/font][/b][font=宋体]是指从一次细胞分裂形成子细胞开始到下一次细胞分裂形成子细胞为止所经历的过程,它反映了细胞增殖的速度。在临床上,有很多研究证明,细胞周期分析对人肿瘤的诊断预后具有很高的价值。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]一个完整的细胞周期包含间期和分裂期([/font][font=Calibri]M[/font][font=宋体]期)两个阶段,间期又分为[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]合成前期([/font][font=Calibri]G1[/font][font=宋体]期)、[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]合成期([/font][font=Calibri]S[/font][font=宋体]期)和[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]合成后期([/font][font=Calibri]G2[/font][font=宋体]期),处于不同时期的细胞的[/font][font=Calibri]DNA [/font][font=宋体]含量存在差异。一般认为,[/font][font=Calibri]G 1 [/font][font=宋体]期细胞具有增殖活性,参与细胞周期循环,是二倍体细胞;[/font][font=Calibri]S [/font][font=宋体]期细胞,[/font][font=Calibri]DNA [/font][font=宋体]含量逐渐增加,从二倍体变成四倍体,随后进入 [/font][font=Calibri]G 2 [/font][font=宋体]期,最终进入 [/font][font=Calibri]M [/font][font=宋体]期。检测细胞周期常用的方法是检测[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]含量,可以选择能与[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]结合的荧光染料(如[/font][font=Calibri]PI[/font][font=宋体]等),再根据细胞各个时期[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]含量不同从而荧光强度不同的方法,分析各个阶段的细胞比例。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=宋体]流式细胞仪[/font][font=Calibri]PI[/font][font=宋体]染色法检测细胞周期的原理[/font][/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]由于细胞周期各时相的[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]不同[/font][font=Calibri],[/font][font=宋体]通常正常细胞的[/font][font=Calibri]G1/G0[/font][font=宋体]期具有二倍体细胞的[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]含量[/font][font=Calibri](2N),[/font][font=宋体]而[/font][font=Calibri]G2/M[/font][font=宋体]期具有四倍体细胞[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]含量[/font][font=Calibri](4N),[/font][font=宋体]而[/font][font=Calibri]S[/font][font=宋体]期的[/font][font=Calibri]DNA [/font][font=宋体]含量介于二倍体和四倍体之间。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]PI[/font][font=宋体](碘化丙啶)为插入性核酸荧光染料,能选择性嵌入核酸[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]RNA[/font][font=宋体]双螺旋的碱基之间与之结合,结合量与[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]的含量成正比关系,其荧光强度直接能反映细胞内[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]含量。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]因此[/font][font=Calibri],[/font][font=宋体]通过流式细胞仪[/font][font=Calibri]PI[/font][font=宋体]染色法对细胞内[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]含量进行检测时[/font][font=Calibri],[/font][font=宋体]可以将细胞周期各时相区分为[/font][font=Calibri]G1/G0 [/font][font=宋体]期[/font][font=Calibri],S [/font][font=宋体]期和[/font][font=Calibri]G2/M [/font][font=宋体]期[/font][font=Calibri],[/font][font=宋体]获得的流式直方图对应的各细胞周期可通过特殊软件计算各时相的细胞百分率。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]通过定量测定[/font] [font=Calibri]DNA [/font][font=宋体]含量来分析细胞周期是流式细胞术最早的应用之一。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]流式细胞周期([/font][font=Calibri]cell cycle[/font][font=宋体])检测结果分析常用的流式细胞术分析细胞周期的方法是依据细胞[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]含量(横坐标)来分析的:[/font][font=Calibri]G0[/font][font=宋体]期:静止期,有丝分裂完成后,脱离细胞周期暂时停止分裂的一个阶段,胞内[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]含量保持二倍体;[/font][font=Calibri]G1[/font][font=宋体]期:[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]合成前期,从有丝分裂到[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]复制前的一段时期,此期主要合成[/font][font=Calibri]RNA[/font][font=宋体]和核糖体,胞内[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]含量保持二倍体;[/font][font=Calibri]S[/font][font=宋体]期:[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]合成期,在此期,合成[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]及组蛋白,胞内[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]含量介于[/font][font=Calibri]G1[/font][font=宋体]期与[/font][font=Calibri]G2[/font][font=宋体]期之间;[/font][font=Calibri]G2[/font][font=宋体]期:[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]合成后期,是有丝分裂的准备期,合成[/font][font=Calibri]RNA[/font][font=宋体]及蛋白质,[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]合成终止,胞内[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]含量为四倍体;[/font][font=Calibri]M[/font][font=宋体]期:细胞分裂期,胞内[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]含量为四倍体;[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]流式细胞检测正常范围[/font][/b][font=宋体]流式细胞检测的正常范围通常依赖于被检测细胞或生物粒子的类型以及所测参数的性质。一般而言,正常的细胞数量、细胞大小、细胞形态、细胞内物质的浓度和分布等参数都在一定的范围内。这些正常范围通常是通过对比大量健康个体或样本的流式细胞检测结果而得出的。例如,正常血细胞的计数和比例,各种免疫细胞的分布,以及细胞内的荧光强度等,都有相应的正常范围。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州提供[url=https://cn.sinobiological.com/services/flow-cytometry-service][b]流式细胞检测技术服务[/b][/url],同时还提供完善的[url=https://cn.sinobiological.com/services/platform/facs-b-cell-sorting][b]流式单[/b][/url][/font][font=Calibri][url=https://cn.sinobiological.com/services/platform/facs-b-cell-sorting][b]B[/b][/url][/font][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/services/platform/facs-b-cell-sorting][b]细胞分选平台[/b][/url],详情关注:[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/services/flow-cytometry-service[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/services/platform/facs-b-cell-sorting[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=宋体]义翘神州:蛋白与抗体的专业引领者,欢迎通过百度搜索[/font][font=宋体]“义翘神州”与我们取得联系。[/font][/font][/b]

  • 小鼠骨髓细胞数检测的仪器

    大神们,帮忙推荐台主要针对小鼠骨髓细胞数检测的仪器,再一个就是能对小鼠血细胞的种类分类,计数。要求不高。。但是这种针对性的仪器还这难找。。

  • 义翘神州CAR-T细胞疗法解决方案

    [font=宋体][font=Calibri][url=https://cn.sinobiological.com/category/car-t-cell-immunotherapy][b]CAR-T[/b][/url][/font][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/category/car-t-cell-immunotherapy][b]细胞疗法[/b][/url]([/font][font=Calibri]Chimeric Antigen Receptor T-Cell Therapy[/font][font=宋体]),全称为嵌合抗原受体[/font][font=Calibri]T[/font][font=宋体]细胞疗法,是近年来发展非常迅速的一种细胞治疗技术。与传统药物不同,[/font][font=Calibri]CAR-T[/font][font=宋体]疗法是一种“活的”、定制的细胞治疗方法,利用患者自身的免疫[/font][font=Calibri]T[/font][font=宋体]细胞来攻击癌细胞。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]CAR-T[/font][font=宋体]疗法的整个流程大致可以分为五步:[/font][/font][font=宋体][font=宋体]①从患者(或同种异体的供体)采集外周血并分离[/font][font=Calibri]T[/font][font=宋体]细胞;[/font][/font][font=宋体][font=宋体]②利用基因工程技术转导[/font][font=Calibri]T[/font][font=宋体]细胞,给[/font][font=Calibri]T[/font][font=宋体]细胞装上一个“[/font][font=Calibri]GPS[/font][font=宋体]导航系统”,即[/font][font=Calibri]CAR[/font][font=宋体],这样[/font][font=Calibri]T[/font][font=宋体]细胞就“变身”为[/font][font=Calibri]CAR-T[/font][font=宋体]细胞;[/font][/font][font=宋体][font=宋体]③将[/font][font=Calibri]CAR-T[/font][font=宋体]细胞进行体外培养和扩增,使其达到符合治疗要求的细胞数量;[/font][/font][font=宋体][font=宋体]④对[/font][font=Calibri]CAR-T[/font][font=宋体]细胞进行质量检测;[/font][/font][font=宋体][font=宋体]⑤把制备好的高质量[/font][font=Calibri]CAR-T[/font][font=宋体]细胞回输到患者体内,靶向杀死癌细胞,同时避免对正常组织的损伤。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]针对[/font][font=Calibri]CAR-T[/font][font=宋体]细胞疗法,义翘神州可提供从[/font][font=Calibri]CAR[/font][font=宋体]开发、[/font][font=Calibri]T[/font][font=宋体]细胞激活、慢病毒包装、[/font][font=Calibri]CAR-T[/font][font=宋体]细胞扩增到[/font][font=Calibri]CAR-T[/font][font=宋体]细胞质量控制的完整解决方案,全面支持药企进行[/font][font=Calibri]CAR-T[/font][font=宋体]研究。[/font][/font][font=宋体][font=宋体]下面是对[/font][font=Calibri]CAR[/font][font=宋体]开发具体介绍:[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]一、[/font][font=Calibri]CAR[/font][font=宋体]开发[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]CAR[/font][font=宋体]是[/font][font=Calibri]CAR-T[/font][font=宋体]的核心部件,如何获得特异性识别肿瘤抗原的[/font][font=Calibri]CAR[/font][font=宋体]是开发的关键。义翘神州拥有噬菌体抗体库、杂交瘤、流式单[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞、[/font][font=Calibri]BeaconB[/font][font=宋体]细胞筛选的四大抗体开发技术平台,同时我们提供多种高品质[/font][font=Calibri]CAR-T[/font][font=宋体]靶点蛋白和专业的[/font][font=Calibri]SPR/BLI[/font][font=宋体]亲和力检测服务满足[/font][font=Calibri]scFv[/font][font=宋体]筛选、[/font][font=Calibri]CAR[/font][font=宋体]亲和力测定及后续步骤的需求,加速研究进程。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]1[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]CAR[/font][font=宋体]候选分子开发:[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州可提供多样化的[/font][font=Calibri]scFv[/font][font=宋体]开发平台,覆盖从抗原设计与制备、动物免疫到获得[/font][font=Calibri]scFv[/font][font=宋体]分子的全部流程,帮助药企客户获得自主知识产权的[/font][font=Calibri]scFv[/font][font=宋体]序列。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]①[/font][url=https://cn.sinobiological.com/services/platform/phage-display][b][font=Calibri]scFv[/font][font=宋体]抗体库构建平台[/font][/b][/url][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]直接获得[/font][font=Calibri]scFv[/font][font=宋体]序列[/font][/font][font=宋体][font=宋体]高通量筛选[/font][font=Calibri]scFv[/font][font=宋体]分子[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]②[/font][url=https://cn.sinobiological.com/services/platform/beacon-b-cell-screening][b][font=Calibri]Beacon[/font][font=宋体]单[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞筛选平台[/font][/b][/url][/font][font=宋体][font=宋体]最快[/font][font=Calibri]35[/font][font=宋体]天获得[/font][font=Calibri]scFv[/font][font=宋体]序列[/font][/font][font=宋体][font=宋体]一次筛选[/font][font=Calibri]10,000[/font][font=宋体]个以上的[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]③流式单[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞筛选平台[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]1[/font][font=宋体]天内完成所有[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞分选[/font][/font][font=宋体][font=宋体]保留天然配对的[/font][font=Calibri]scFv[/font][font=宋体]分子[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体]④杂交瘤技术平台[/font][font=宋体][font=宋体]项目成功率[/font][font=Calibri]90%[/font][/font][font=宋体][font=宋体]成熟技术获得高特异性[/font][font=Calibri]scFv[/font][font=宋体]分子[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]2[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]CAR[/font][font=宋体]候选分子筛选[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]①[/font][url=https://cn.sinobiological.com/services/spr-bli-assay-services][b][font=Calibri]scFv[/font][font=宋体]亲和力检测([/font][font=Calibri]SPR/BLI[/font][font=宋体])[/font][/b][/url][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]scFv[/font][font=宋体]是[/font][font=Calibri]CAR-T[/font][font=宋体]细胞特异性识别肿瘤细胞的关键,其对抗原的亲和力和特异性影响着[/font][font=Calibri]CAR-T[/font][font=宋体]的有效性和安全性。义翘神州[/font][font=Calibri]SPR/BLI[/font][font=宋体]检测平台可高效筛选[/font][font=Calibri]scFv[/font][font=宋体]分子,支持[/font][font=Calibri]CAR-T[/font][font=宋体]药物研发。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]②蛋白表达服务[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]靶抗原的选择决定了[/font][font=Calibri]CAR[/font][font=宋体]的特异性及有效性等。义翘神州可提供定制化抗原制备服务,包括从基因合成、载体构建到蛋白表达、纯化的一站式服务,充分支持[/font][font=Calibri]CAR-T[/font][font=宋体]细胞治疗研发。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]③检测用过表达细胞株构建[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州可提供过表达细胞株构建服务,利用慢病毒载体构建靶抗原过表达稳转株,可以根据客户需要携带多种标记,满足客户流式筛选[/font][font=Calibri]scFv[/font][font=宋体]分子的需求。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]④[url=https://cn.sinobiological.com/category/car-t-cell-therapy-target-protein-elite][b]靶点蛋白[/b][/url][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]scFv[/font][font=宋体]筛选是[/font][font=Calibri]CAR[/font][font=宋体]开发的关键步骤,义翘神州可提供丰富的高质量[/font][font=Calibri]CAR-T[/font][font=宋体]相关热门靶点蛋白产品,全面支持您的[/font][font=Calibri]CAR-T[/font][font=宋体]研究。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]二、[/font][font=Calibri]CAR-T[/font][font=宋体]细胞制备 [/font][font=Calibri]T[/font][font=宋体]细胞激活[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]从患者外周血中收集、分离得到的[/font][font=Calibri]T[/font][font=宋体]细胞用于改造之前需要先进行活化。最常见的用于[/font][font=Calibri]T[/font][font=宋体]细胞体外活化的是[/font][font=Calibri]CD3[/font][font=宋体]抗体和[/font][font=Calibri]CD28[/font][font=宋体]抗体 。义翘神州已开发[/font][font=Calibri]GMP[/font][font=宋体]级别的[/font][font=Calibri]CD3[/font][font=宋体]以及[/font][font=Calibri]CD28[/font][font=宋体]单克隆激活抗体,纯度高,活性高,超低内毒素([/font][font=Calibri]0.5 EU/mg[/font][font=宋体]),经细胞水平验证,可有效激活培养[/font][font=Calibri]T[/font][font=宋体]细胞,更好地助力[/font][font=Calibri]CAR-T[/font][font=宋体]细胞治疗药物开发和生产。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]三、[/font][font=Calibri]CAR-T[/font][font=宋体]细胞制备 慢病毒包装[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]T[/font][font=宋体]细胞分离活化完成后,慢病毒包装是进行[/font][font=Calibri]CAR-T[/font][font=宋体]细胞制备的一个关键环节,慢病毒滴度是决定[/font][font=Calibri]CAR[/font][font=宋体]转染阳性率的关键因素。义翘神州可以提供慢病毒包装的关键原材料如[/font][font=Calibri]Sinofection[/font][font=宋体]转染试剂、无血清[/font][font=Calibri]HEK293[/font][font=宋体]培养基和质粒生产,以及慢病毒纯化工艺过程中用于去除宿主核酸的[/font][font=Calibri]GMP[/font][font=宋体]级核酸酶等。另外,我们也可提供全面的[/font][font=Calibri]HEK293[/font][font=宋体]细胞库检定服务,充分保障[/font][font=Calibri]CAR-T[/font][font=宋体]药物的安全性。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]四、[/font][font=Calibri]CAR-T[/font][font=宋体]细胞扩增[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]CAR-T[/font][font=宋体]细胞可以特异性识别肿瘤抗原来发挥其抗肿瘤活性。相关研究显示联合或单独使用细胞因子,可以增强[/font][font=Calibri]CAR-T[/font][font=宋体]细胞增殖,提高[/font][font=Calibri]CAR-T[/font][font=宋体]细胞抗肿瘤活性。因此,选取不同细胞因子组合或合适的细胞因子来培养[/font][font=Calibri]CAR-T[/font][font=宋体]细胞,可显著增加[/font][font=Calibri]CAR-T[/font][font=宋体]免疫细胞疗效。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]五、[/font][font=Calibri]CAR-T[/font][font=宋体]细胞质量控制[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]CAR-T[/font][font=宋体]细胞可以特异性识别肿瘤抗原来发挥其抗肿瘤活性。相关研究显示联合或单独使用细胞因子,可以增强[/font][font=Calibri]CAR-T[/font][font=宋体]细胞增殖,提高[/font][font=Calibri]CAR-T[/font][font=宋体]细胞抗肿瘤活性。因此,选取不同细胞因子组合或合适的细胞因子来培养[/font][font=Calibri]CAR-T[/font][font=宋体]细胞,可显著增加[/font][font=Calibri]CAR-T[/font][font=宋体]免疫细胞疗效。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]关于[/font][font=Calibri]CAR-T[/font][font=宋体]细胞疗法整体解决方案详情可以参看:[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/category/car-t-cell-immunotherapy[/font][font=宋体],上面有更详细的介绍,[/font][font=Calibri]CAR-T[/font][font=宋体]细胞疗法,助力人类发展。[/font][/font]

  • 小鼠骨髓细胞数检测的仪器

    大神们,帮忙推荐台主要针对小鼠骨髓细胞数检测的仪器,再一个就是能对小鼠血细胞的种类分类,计数。要求不高。。但是这种针对性的仪器还这难找。。

  • 流式细胞分析方案详解:从步骤到流式免疫检测的全面指南

    [font=宋体]流式细胞分析是一种在生物学和医学领域广泛应用的实验技术,它可以实现对细胞群体的快速、准确分析和分类。本文将详细介绍流式细胞分析的步骤和流式免疫检测的应用,帮助读者全面了解这一技术的原理、方法和应用。[/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=宋体]流式细胞分析方案主要分为[/font][font=Calibri]4[/font][font=宋体]个步骤: [/font][/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体]①样品制备:应通过机械分离方法或化学解离技术制备单细胞悬液,如采用酶溶液或钙螯合试剂。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]②封闭:通常采用抗[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]抗体稀释液悬浮细胞,防止一抗非特异性结合。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]③抗体孵育:流式细胞分析的孵育步骤涉及多种组分,包括一抗、二抗、链霉亲和素和荧光染料。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]④流式细胞仪检测:将处理后的细胞通过流式细胞仪进行检测和分析,获取细胞的各项指标数据。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]适当的对照[/b][/font][font=宋体]除了目标细胞之外,每次进行流式细胞实验还应包含以下对照:[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]至少一份未染色样品,与试样同时进行每一步的缓冲液孵育,以优化实验的流速和电压。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]一份适当的阴性对照样品,与试样基本相同,但用在一抗的宿主种属中生产的同型对照替代试样中的一抗。该对照用于非特异性结合二抗。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]如有需要也可准备一份已知表达所有目标抗原的细胞组成的阳性对照,并与试样共同孵育,但仅用单色检测。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]流式免疫检测方法与应用[/b][/font][font=宋体]同其他免疫检测应用一样,流式细胞分析也可通过多种方法利用抗体探测特定的细胞基元。两大常用方法为:直接检测法和间接检测法。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]直接检测法[/font][font=宋体][font=宋体]直接检测法采用一步染色工艺,仅需一抗即能特异性结合目标抗原,无需额外步骤,可直接与支持成像或其他结合状态检测的分子结合。在探测细胞表面抗原时,应避免固定细胞,因为固定可能导致抗体探针无法与目标抗原充分接触。因此,保持细胞活力对于数据采集至关重要。若需查找适用于直接检测法的抗体,推荐使用[/font][font=Calibri]Antibody Explorer[/font][font=宋体]抗体搜索工具,将搜索范围限定为“仅限一抗”,并将应用选择为“流式细胞分析”。这样,您将能够快速找到适合您实验需求的抗体。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]间接检测法[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]间接检测法首先使用纯化抗体与目标抗原进行结合,然后使用荧光染料标记的二抗(能够特异性靶向一抗的宿主同型)与一抗进行特异性结合,形成一抗[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]荧光二抗复合物。通过将纯化的一抗与各种波长(或颜色)的荧光染料标记的二抗(特异性针对产生一抗的宿主同型)进行搭配,可以增强抗体库的模块化程度。这种方法能够提高实验的灵敏度和特异性,同时减少背景干扰和误差。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]义翘神州提供[url=https://cn.sinobiological.com/services/flow-cytometry-service]流式细胞检测技术服务[/url],其优势:[/b][/font][font=宋体][font=宋体]①具有 [/font][font=Calibri]20,000 [/font][font=宋体]次以上流式抗体筛选鉴定经验及多年流式诊断抗体研发经验,在实验方案设计、样品制备、数据分析等方面确保科学性、准确性和可靠性[/font][font=Calibri] [/font][/font][font=宋体][font=宋体]②拥有 [/font][font=Calibri]1,000 [/font][font=宋体]余株自产精品流式抗体,覆盖细胞膜、胞内、核内及分泌抗原;[/font][/font][font=宋体][font=宋体]③自产 [/font][font=Calibri]Annexin V/7-AAD [/font][font=宋体]凋亡检测试剂盒,并储备多种流式检测常用试剂,大大节约购买试剂的等待时间和实际费用;[/font][/font][font=宋体][font=宋体]④可以提供近 [/font][font=Calibri]200 [/font][font=宋体]种细胞系选择,省去细胞样本寄送过程中的风险,并可以免费提供健康人外周血细胞对照品。[/font][/font][font=宋体][font=宋体]详情可以关注[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/services/flow-cytometry-service[/font][/font]

  • 显微镜下的人体---血细胞

    http://www.people.com.cn/mediafile/pic/20110923/86/4594416073619723782.jpg乍一看它们就像是肉桂色糖果,但其实这是人体内数量最多的血细胞类型——红血球(RRCs)。这种双面凹陷的细胞承担着为我们的机体输送氧气的重任,一个健康的成年女性体内每立方毫米血液内含有大约400~500万个红血球,而在成年男性体内,这一数字为500~600万。

  • 【求购】求购用于血细胞质控物生产的仪器!求助

    我们公司明年准备进行全血质控的研发,我负责资料的收集!想问问大家一般全血质控物的生产一般都需要些什么仪器啊?生产过程中需要分离血细胞,出了离心机外还需要添购什么仪器呢?另外弱弱的请教个问题:有没有什么仪器能将不同体积大小的血细胞分别分离呢?例如我分离出红细胞,我想再分离出体积大小为某一范围的红细胞,有这样的仪器吗?这样可行吗?谢谢!谢谢大家![em0706]

  • 用岛津AA-6800石墨炉测血细胞锰含量,干燥阶段出现暴沸现象??

    用岛津AA-6800石墨炉测血细胞锰含量,干燥阶段出现暴沸现象??

    如题,谢谢大家! 本人最近用岛津AA-6800石墨炉测血细胞锰含量,血细胞即为空腹抽取10ml全血静置30mim后3000转10mim钟离心后弃血浆后的混匀的血细胞;取40ul血细胞用基体改进剂360ul(0.2mg/l氯化钯+1%硝酸+1%曲拉通)稀释到400ul上样,进样体积20ul,升温程序为 温度 (度) 时间(S)干燥 150 30灰化 250 20灰化 800 10灰化 800 10灰化 800 3原子化 2200 3清洁 2500 21、仪器的操作说明上标明干燥阶段只有1步,个人觉得是不是有问题?!2、现在遇到的问题就是不管是标样还是样本在干燥阶段均出现暴沸及起泡现象,于是做了以下调整:将干燥阶段的150度30秒调整为150度20秒、150度15秒、120度30秒、110度20秒、100度30秒、100度20秒后上样,结果暴沸和起泡现象完全没有改善,此时高密石墨管已经烧了136次,想请教各位大侠,如何改善这种现象??如图所示,有时峰会更高!!有可能是基体改进剂浓度不够的原因么??3、标样:基体改进剂+40ui正常人血细胞+不同体积锰标液配制成的一些列浓度急~~~~~~~~http://simg.instrument.com.cn/bbs/images/default/em09509.gifhttp://simg.instrument.com.cn/bbs/images/default/em09509.gif拜谢大家!附:异常峰形图http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/11/201511081954_572715_2076515_3.png

  • CAR-T细胞疗法:深入了解步骤及优劣势

    [b][font=宋体][font=宋体]什么是[/font][font=Calibri]CAR-T[/font][font=宋体]细胞疗法?[/font][/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]CAR-T[/font][font=宋体],全称是 [/font][font=Calibri]chimeric antigen receptor T-cell immunotherapy[/font][font=宋体],即嵌合抗原受体 [/font][font=Calibri]T [/font][font=宋体]细胞免疫疗法。这是一种治疗肿瘤的新型精准靶向疗法,近几年通过优化改良在临床肿瘤治疗上取得很好的效果,是一种非常有前景的,能够精准、快速、高效,且有可能治愈癌症的新型肿瘤免疫治疗方法。[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=Calibri]CAR-T[/font][font=宋体]细胞疗法具体治疗过程?[/font][/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]CAR-T[/font][font=宋体]细胞疗法大概可以分为以下五个步骤:[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]CAR-T[/font][font=宋体]疗法的整个流程大致可以分为五步:[/font][/font][font=宋体][font=宋体]第一步:从患者(或同种异体的供体)采集外周血并分离[/font][font=Calibri]T[/font][font=宋体]细胞;[/font][/font][font=宋体][font=宋体]第二步:利用基因工程技术转导[/font][font=Calibri]T[/font][font=宋体]细胞,给[/font][font=Calibri]T[/font][font=宋体]细胞装上一个“[/font][font=Calibri]GPS[/font][font=宋体]导航系统”,即[/font][font=Calibri]CAR[/font][font=宋体],这样[/font][font=Calibri]T[/font][font=宋体]细胞就“变身”为[/font][font=Calibri]CAR-T[/font][font=宋体]细胞;[/font][/font][font=宋体][font=宋体]第三步:将[/font][font=Calibri]CAR-T[/font][font=宋体]细胞进行体外培养和扩增,使其达到符合治疗要求的细胞数量;[/font][/font][font=宋体][font=宋体]第四步:对[/font][font=Calibri]CAR-T[/font][font=宋体]细胞进行质量检测;[/font][/font][font=宋体][font=宋体]第五步:把制备好的高质量[/font][font=Calibri]CAR-T[/font][font=宋体]细胞回输到患者体内,靶向杀死癌细胞,同时避免对正常组织的损伤。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=Calibri]CAR-T[/font][font=宋体]细胞疗法有哪些优势?[/font][/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]①治疗更精准。由于[/font][font=Calibri]CAR-T[/font][font=宋体]细胞是应用基因修饰病人自体的[/font][font=Calibri]T[/font][font=宋体]细胞,利用抗原抗体结合的机制,能克服肿瘤细胞通过下调[/font][font=Calibri]MHC[/font][font=宋体]分子表达以及降低抗原递呈等免疫逃逸,让肿瘤细胞无所逃遁;[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]②多靶向更精准。[/font][font=Calibri]CAR-T[/font][font=宋体]既可以利用肿瘤蛋白质抗原,又可利用糖脂类非蛋白质抗原,扩大了肿瘤抗原靶点范围,[/font][font=Calibri]CAR-T[/font][font=宋体]细胞作用过程不受[/font][font=Calibri]MHC[/font][font=宋体]的限制;[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]③杀瘤范围更广。鉴于很多肿瘤细胞表达相同的肿瘤抗原,针对某一种肿瘤抗原的[/font][font=Calibri]CAR[/font][font=宋体]基因构建一旦完成,便可以被广泛利用;[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]④杀瘤效果更持久。新一代[/font][font=Calibri]CAR-T[/font][font=宋体]结构中加入了促进[/font][font=Calibri]T[/font][font=宋体]细胞增殖与活化的基因序列,能保证[/font][font=Calibri]T[/font][font=宋体]细胞进入体内后还可以增殖,[/font][font=Calibri]CAR-T[/font][font=宋体]细胞具有免疫记忆功能,可以长期在体内存活。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=Calibri]CAR-T[/font][font=宋体]细胞疗法可能会存在哪些问题?[/font][/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]前面在介绍[/font][font=Calibri]CAR-T[/font][font=宋体]细胞疗法过程时,最后一步是严密监护病人,尤其是控制前几天身体的剧烈反应。为什么要严密监护呢?就是因为把改造过的[/font][font=Calibri]T[/font][font=宋体]细胞重新输回人体时,会引发我们机体剧烈的反应,那就是细胞因子风暴。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]由于[/font][font=Calibri]CAR-T[/font][font=宋体]细胞的功能很强大,输入体内后会激发人体内大规模的免疫反应,同时会释放细胞因子,细胞因子可以激活更多的免疫细胞来一起对抗这些病原体,被激活的免疫细胞又会释放细胞因子再激活更更更多的免疫细胞,这样一来,被激活的免疫细胞越来越多,细胞因子也越来越多,最后引发了细胞因子风暴。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]细胞因子风暴会令血管壁变得更容易穿透。细胞因子风暴还会引发一氧化氮的大量释放。这种物质也会影响血管张力和血管通透性。所有这些因素综合起来,会在临床上引起血压下降、有些可能会出现低氧。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]当然接受[/font][font=Calibri]CAR-T[/font][font=宋体]细胞疗法后并非人人都会出现这样的情况,有些只是一过性的反应,但是医生仍然会对每位接受[/font][font=Calibri]CAR-T[/font][font=宋体]细胞疗法的患者,做好严密的监护,为细胞因子风暴的到来做好准备。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]如果监测到细胞因子风暴的相关症状的发生,医生会评估并根据病情的严重程度,积极采用对症治疗,和降低细胞因子的药物治疗(如托珠单抗,一种抗人白介素[/font][font=Calibri]6(IL-6)[/font][font=宋体]受体单克隆抗体)进行对因治疗。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]针对[/font][font=Calibri][url=https://cn.sinobiological.com/category/car-t-cell-immunotherapy][b]CAR-T[/b][/url][/font][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/category/car-t-cell-immunotherapy][b]细胞疗法[/b][/url],义翘神州可提供从[/font][font=Calibri]CAR[/font][font=宋体]开发、[/font][font=Calibri]T[/font][font=宋体]细胞激活、慢病毒包装、[/font][font=Calibri]CAR-T[/font][font=宋体]细胞扩增到[/font][font=Calibri][url=https://cn.sinobiological.com/category/solutions/car-nk-quality-control][b]CAR-T[/b][/url][/font][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/category/solutions/car-nk-quality-control][b]细胞质量控制的完整解决方案[/b][/url],全面支持药企进行[/font][font=Calibri]CAR-T[/font][font=宋体]研究。更多详情可以关注:[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/category/car-t-cell-immunotherapy[/font][/font][font=Calibri] [/font]

  • 变异蛋白在血细胞中逐渐积累引发亨廷顿病

    中国科技网伦敦9月20日电 英国科学家在最近一期《临床调查杂志》上刊发论文称,他们利用新的检测技术证明,导致亨廷顿病的有害蛋白是逐渐在血液细胞中积累起来的。他们在论文中对这些有害细胞是如何损害人的大脑进行了详细阐述,而这一新发现不仅有助于监测亨廷顿病的进展情况,也有助于开发抑制有害蛋白的新药。 亨廷顿病是一种致命的遗传神经疾病。患者由于基因突变导致机体细胞错误地制造一种名为“变异亨廷顿蛋白”的有害物质,这些异常蛋白会损坏部分脑细胞,导致患者神经系统逐渐退化,致使身体出现不可控制的抽搐,并能发展成痴呆,最后导致死亡。 发表论文的研究小组由英国伦敦大学学院、伦敦国王学院以及诺华生物医学研究所的研究人员组成。他们使用一种新的超敏测试技术测量亨廷顿病患者发病不同阶段体内变异亨廷顿蛋白的水平。这种测试技术名为时间分辨荧光共振能量转移(TR-FRET),可对变异亨廷顿蛋白进行极为精确的测量。研究人员发现,在亨廷顿病患者表现出相关症状之前,其体内变异亨廷顿蛋白即开始逐渐积累,而正常的亨廷顿蛋白含量则在整个发病过程中保持不变。核磁共振扫描显示,亨廷顿病患者脑萎缩的速度明显高于常人。而令研究人员惊讶的是,变异亨廷顿蛋白在白血细胞中的数量与脑萎缩的速率极为一致。这一发现表明,未来或许可以利用血检来预测神经退行性疾病患者脑萎缩的速度。 “使用TR-FRET技术测量变异蛋白水平,是治疗亨廷顿病的一个十分有用的新手段,”研究小组的领导者,伦敦大学学院的萨拉·塔布利兹教授说,“如今获得患者的血液样本很方便,这使得我们能够准确地研究变异亨廷顿蛋白的毒性。而变异亨廷顿蛋白水平与脑萎缩间的关联,使我们对亨廷顿病患者大脑退化的过程有了更新的了解。” 塔布利兹教授指出,TR-FRET技术对于未来基因沉默药物的临床试验也十分有用。她表示,基因沉默药物可用来抑制大脑中有毒蛋白的产生,十分有前途,但也极有可能产生副作用,因此了解药物降低变异亨廷顿蛋白水平的过程十分重要。而TR-FRET技术则提供了这样的手段,这对于新药的开发十分有利。(记者刘海英) 《科技日报》(2012-09-22 二版)

  • 流式细胞术详解 21.22章节 &参考文献

    95%。目前细胞分选主要用于研究,临床应用较少。血液学应用最多的是造血干细胞的研究,最近随着造血理论的深入研究关于造血干细胞究竟是否都是CD34+细胞出现一些争论,实验研究证明, CD34-造血干细胞较CD34+造血干细胞更具造血潜能,这些实验研究所用的CD34- 和CD34+细胞就是通过细胞分选获得的。小鼠造血干细胞分选一般按lin-c-Kit+CD34+/ lin-c-Kit+CD34-分选,人造血干细胞分选一般按lin-CD34+/ lin-CD34-分选。 为避免某些遗传性血液病如海洋性贫血、异常血红蛋白病的纯合子出生,产前诊断非常重要,这些疾病的主要靶细胞是红细胞,而孕妇血循环中存在着胎儿有核红细胞,只是数量非常少,利用流式细胞仪可从孕妇血液中分选出胎儿有核红细胞(分选条件:CD45-GPA+)进行基因分析,作出产前诊断。利用流式细胞仪分选免疫担当细胞进行细胞免疫学研究也是目前的热门课题。总之,流式细胞仪能够分选出你想得到的任何一亚群细胞,只要你想得到的某一亚群细胞有合适的单克隆抗体标记,流式细胞仪的分选功能将得到越来越多的科学研究和临床应用。二十二. 流式细胞术在血液学中的应用 其他流式细胞仪可能在两方面对骨髓增生异常综合症(MDS)有用,一是测定CD34阳性细胞数,以监测病情,二是测定核蛋白增殖因子(PCNA),有报告PCNA再在生障碍性贫血、骨髓增生异常综合症、白血病三种疾病中表达有明显差异,可辅助鉴别诊断。 此外流式细胞仪也可检耐药蛋白,如肺耐药相关蛋白(LRP)、多药耐药蛋白(MRP)、 P170等。 流式细胞仪也可检测细胞因子,细胞内细胞因子如白介素系列(IL-1—IL-14),肿瘤坏死因子(TNF),干扰素(IFN)等,[/color

  • 用岛津AA-6800石墨炉测血细胞锰含量,干燥阶段出现暴沸现象??

    用岛津AA-6800石墨炉测血细胞锰含量,干燥阶段出现暴沸现象??

    如题,谢谢大家! 本人最近用岛津AA-6800石墨炉测血细胞锰含量,血细胞即为空腹抽取10ml全血静置30mim后3000转10mim钟离心后弃血浆后的混匀的血细胞;取40ul血细胞用基体改进剂360ul(0.2mg/l氯化钯+1%硝酸+1%曲拉通)稀释到400ul上样,进样体积20ul,升温程序为 温度 (度) 时间(S)干燥 150 30 灰化 250 20灰化 800 10灰化 800 10灰化 800 3 原子化 220 3清洁 2500 21、仪器的操作说明上标明干燥阶段只有1步,个人觉得是不是有问题?!2、现在遇到的问题就是在干燥阶段出现暴沸及起泡现象,于是做了以下调整:将干燥阶段的150度30秒调整为150度20秒、150度15秒、120度30秒、110度20秒、100度30秒、100度20秒后上样,结果暴沸和起泡现象完全没有改善,此时高密石墨管已经烧了136次,想请教各位大侠,如何改善这种现象??如图所示,有时峰会更高!!有可能是基体改进剂浓度不够的原因么?? 急~~~~~~~~http://simg.instrument.com.cn/bbs/images/default/em09509.gifhttp://simg.instrument.com.cn/bbs/images/default/em09509.gif拜谢大家!http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/11/201511082109_572723_2098843_3.pnghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/11/201511082109_572724_2098843_3.png

  • 首个哺乳动物单细胞计算器问世

    多功能血细胞计数器是由数字处理芯片、集成电路,以及显示屏、按键组成,与各种显微镜配合使用,由微电脑进行自动分类计数的数字化专用产品,能对骨多功能血细胞计数器髓细胞、外周血细胞、小巨核细胞进行全面的分类计数并自动计算出各项指标,能对细胞化学染色后的积分进行计算,并兼有常用的四则运算。 哺乳动物细胞现在能够执行电子计算机的功能:进行逻辑运算。来自瑞士的研究人员给细胞装配了一个复杂的基因网络使得它不仅仅能完成如1加1的简单任务。相关研究论文发表在6月3日的《自然》(Nature)杂志上。 这项研究由来自瑞士苏黎世联邦理工学院生物系统系生物技术与生物工程学教授Martin Fussenegger领导。在文章中,研究人员构建了一个能够执行逻辑运算的基因网络,并由此启动了特异的代谢步骤。“我们开发出了第一个真正的细胞计算器,”Fussenegger说。 利用生物成分,研究人员开发出了一套不同的元件可在不同的组合中相互连接,并随后执行逻辑运算。这些术语称之为“逻辑门”的电路元件利用了苹果分子根皮(phloretin)和抗生素红霉素作为输入信号。基于布尔逻辑(Boolean logic)进行计算。 通过组合和相互连接几个逻辑门,生物技术人员最终获得了“半加器”( “half-adder)和“半减器”( half-subtractor),这两种计算机技术中的中心电路元件。半加器是一种基本的数字电路可以合计二进制数;另一方面,半减器负责减去它们。这两种元件存在于每个数字计算器中,负责执行大部分的运算。在细胞结构试验中,两个生物计算机元件生成了实质的结果。 其他一些科学家已经在酵母和细菌中实现了不同的电路元件。在新系统中,所有都存在于单个细胞里,基于哺乳动物细胞的复杂性其轻易就超越了酵母和细菌。 相比于改变细菌或酵母细胞,研究人员因此更加接近治疗应用。对于Fussenegger教授而言,可以想象如果有必要,细胞计算器可在遥远的未来和步骤中用于监控患者的新陈代谢。可将这些智能细胞植入到糖尿病患者体内,例如通过开发一个电路识别疾病相关代谢产物,调控具治疗效应物质的释放,例如胰岛素。然而目前研究人员离这样的应用仍相距甚远。

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