黄曲霉毒素光化学衍生器

柱后衍生的福音——黄曲霉毒素光化学衍生器黄曲霉毒素（AFT）B1和G1显示天然荧光性，因此B1和G1在检测之前必须进行衍生。传统的电化学衍生费时费力，应用的化学药品不仅会腐蚀色谱仪而且对操作人员有毒副作用，黄曲霉毒素光化学衍生器（Pribolab® MDU）是一款新型的柱后衍生器，尤其适用于当前较为流行的UPLC。该方法结果与电化学方法一致但其不使用任何腐蚀性试剂，HPLC的使用寿命将会增加，且不需要额外的清理工作，更加省时省力省心。黄曲霉毒素光化学衍生器实现了对黄曲霉毒素在线衍生和检测，有效提高检测效率，准确性，检测灵敏度以及重复性，此方法已被AOAC认可。

黄曲霉毒素光化学器柱後衍生法的B1及G1会因为紫外线254nm照射而结构改变

各位大神，我单位拟采购一台光化学衍生器用于测定黄曲霉毒素，现看了两家的产品，LC-TECH和ROMER，很难抉择，请各位大神给点意见，哪个品牌的哪个型号好，感激不尽！

PriboFast®KRC 光化学柱后衍生反应器广泛应用于液相色谱检测分析, 使用时置于色谱柱和检测器之间，进行柱后连续光化学衍生反应提高荧光、紫外、电化学检测和化学发光检测器的灵敏度和响应的选择性。技术特点：1. 在线对黄曲霉毒素B1、G1进行衍生，重现性好；不需要任何化学衍生试剂，减少了液相系统的清洗工作，延长了其使用寿命。2．黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的最低检测限在0.5ppb以下。可以同时进样，对黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2，M1, M2同时进行检测。3．安装、操作简单（5分钟即可投入使用），使用寿命长。4．符合AOAC 2005.08, AOAC 2008.02,AOCS Aa 11-05，中国台湾标准（食字第0981800370 号公告）和欧盟药典 2.8.18标准分析方法5．型号： PriboFast® KRC, 厂家：新加坡 Pribolab Pte. Ltd.【较传统的电化学衍生相比具有如下优点】 无需使用化学物质（省钱的同时，也避免操作人员接触有毒化学物质）； 增加 HPLC 仪器的寿命（没有腐蚀性酸流经毛细管）； 无需冲洗步骤； 结果与电化学方法（溴衍生）一致。光化学柱后衍生光化学反应装置除应用于黄曲霉毒素检测外, 还可以应用于大量的巴比妥酸盐、氨基酸、多肽、黄曲霉毒素、维生素及磺胺类药物等分析。HPLC 法检测磺胺类药物时, 还能够增强磺胺类药物的荧光强度：磺胺嘧啶（Sulfadiazine），磺胺吡啶（Sulfapyridine），磺胺甲基嘧啶（Sulfamerazine），磺胺二甲嘧啶（Sulfamethazine），磺胺对甲氧嘧（Sulfamethoxydiazine），磺胺喹噁啉（Sulfaquinoxaline），灵敏度达到10ppb 左右

柱后衍生的福音——黄曲霉毒素光化学衍生器黄曲霉毒素（AFT）B1和G1显示天然荧光性，因此B1和G1在检测之前必须进行衍生。传统的电化学衍生费时费力，应用的化学药品不仅会腐蚀色谱仪而且对操作人员有毒副作用，黄曲霉毒素光化学衍生器（Pribolab® MDU）是一款新型的柱后衍生器，尤其适用于当前较为流行的UPLC。该方法结果与电化学方法一致但其不使用任何腐蚀性试剂，HPLC的使用寿命将会增加，且不需要额外的清理工作，更加省时省力省心。黄曲霉毒素光化学衍生器实现了对黄曲霉毒素在线衍生和检测，有效提高检测效率，准确性，检测灵敏度以及重复性，此方法已被AOAC认可。

大家工作中作黄曲霉毒素B1时，测定用的衍生装置是哪种的：柱后衍生泵？光化学衍生装置？还是电化学衍生装置？它们的哪种衍生方式性价比更高？

黄曲霉毒素（AFT）B1和G1显示天然荧光性，因此B1和G1在检测之前必须进行衍生。以前用我们实验室用的电化学衍生。费时费力，应用的化学药还腐蚀色谱仪而且对我们这些操作人员有毒副作用，现在我们实验室用的黄曲霉毒素光化学衍生器（Pribolab® MDU）是一款新型的柱后衍生器，换适用于当前较为流行的UPLC。我们这个方法得出的结果与电化学方法一致但其不使用任何腐蚀性试剂，HPLC的使用寿命将会增加，且不需要额外的清理工作，更加省时省力省心。 黄曲霉毒素光化学衍生器实现了对黄曲霉毒素在线衍生和检测，有效提高检测效率，准确性，检测灵敏度以及重复性，此方法已被AOAC认可。1.衍生时间缩短(大致5分钟即可完成)2.无需使用化学物质3.增加HPLC仪器的寿命4.无需冲洗步骤。5.结果与电化学方法（溴衍生）一致6.适用于超高效液相色谱仪(UPLC)

光化学柱后衍生器可以在254nm下用光化学的方法对黄曲霉毒素B1和G1进行衍生,与...具体的又有什么区别谁能钙素我希杰,2015新增药典也加了这个光化学柱后衍生,...我们也是了解了这个好处之后，用了普瑞邦这个仪器，效果确实和这个一样，光化学柱后衍生器具有以下特点:1、无需使用化学物质(省钱的同时，也避免操作人员接触有毒化学物质);2、增加 HPLC 仪器的寿命(没有腐蚀性酸流经毛细管);3、无需冲洗步骤;4、结果与电化学方法(澳衍生)一致。5、黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的最低检测限均小于0.5 PPB。6、符合湾O湾C 2005.08，湾O湾C2008.02，湾O湾C 湾a 11-05，中国台湾标准(食宇0981800370号公告)和欧盟药典2.8.18 标准分析方法。符合中国国家标准和进出口检验标准听说普瑞邦出了新型的光化学后衍生器MDU，不知道跟这个有什么区别，有什么特殊的功能吗？谁知道吗？

请问液相上加个光化学衍生器测黄曲霉毒素的话，还符合国家标准吗？

安捷伦1260，荧光检测器，光化学衍生，检测黄曲霉毒素B1，响应值太低，进样量2ppb 20微升？

光化学衍生器可有效放大黄曲霉毒素B1、G1的信号，具有不用试剂，使用方便无害，不需额外装置，灵敏度高，重现性好等诸多优点，是HPLC方法检测样品中黄曲霉毒素B1&G1的好搭档。目前市场上也有不少厂家在做此产品，诸位使用者对光化学衍生器的参数具体要求是怎样的呢？有没有招标参数数据支持？http://simg.instrument.com.cn/bbs/images/default/em09511.gif

由于黄曲霉毒素B1和G1只显示天然荧光性，因此需要将其进行衍生，提高其荧光强度后才能准确测定含量，光化学柱后衍生器可以取代传统的电化学衍生法，在线对黄曲霉毒素B1、G1进行衍生，不需要任何化学试剂，无需清洗仪器，减少对色谱仪的腐蚀，同时更好的保护操作人员，用于液相色谱荧光法检测黄曲霉毒素，有效提高检测的灵敏度。符合AOAC 2005.08，AOAC2008.02，AOAC Aa 11-05，中国台湾标准（食字0981800370号公告）和欧盟药典2.8.18标准分析方法。用液相色谱荧光检测法进行测定时先将黄曲霉毒素从相应的基质中提取，经免疫亲和柱（净化后进行紫外光照射，黄曲霉毒素B1和G1被羟基化，从而产生稳定可测量的荧光性。其它的黄曲霉毒素（B2，G2，M1，M2）的化学及测量相关特性在此步中不变，然后进行检测即可。本衍生器还可应用于巴比妥酸盐、氨基酸、多肽、烟酸/烟酰胺、维生素及磺胺类药物的分析。

2015版药典中药中黄曲霉毒素的检测有两种方法，不知大家是采用的哪种方法呢？液质？还是液相色谱-光化学衍生+荧光呢？

最近在检测黄曲霉毒素时，为何要衍生，好多文献只是提到水可以猝灭，但是对于原因却不清楚，所以产生了疑问，B1、G1为何在水中会猝灭，衍生的机理是什么，请教下各位老师，有没有相关的文献或者出处。

食用油中黄曲霉毒素B1的柱前衍生法怎么也做不好，回收只有20%，找不到原因，有做过的吗？具体方法：称取油样5g，加入84+16乙腈-水20毫升浸泡过夜，次日超声20min，离心5min，取上清液过黄曲霉专用柱，取净化液2毫升，氮吹，吹干后，加入正己烷0.6毫升，三氟乙酸0.3毫升，混匀，40度烘箱衍生15min，取出氮吹，吹干后1毫升15+85乙腈+水定容，上机测定。

食品中黄曲霉毒素的测定，主要有TLC、ELISA、HPLC 等方法，TLC法灵敏度和重现性较差；ELISA法重现性差，易受样品基质干扰假阳性率高，仅能作为筛选方法。近年来，由于HPLC法具有灵敏度和准确度高、方法重现性好等优点，现已成为黄曲霉毒素分析的主要手段。HPLC法测定黄曲霉毒素，一般使用灵敏度和选择性较好的荧光检测器。但由于黄曲霉毒素的荧光强度会受溶剂影响，正相色谱中，B1和B2的荧光强度仅稍低一点，不需衍生化；而在常用的反相色谱中，B1和G1两种异构体荧光强度很弱，需进行衍生化，提高其荧光强度，灵敏度才能满足一般食品法规的限量。衍生化的方法一般有柱前和柱后两类， 柱前衍生一般使用三氟乙酸，柱后衍生有碘液、过溴化吡啶溴以及电化学和光化学等方法。近年来，很多标准方法利用免疫亲合柱净化，HPLC柱后衍生对花生和玉米等农产品和食品中黄曲霉的含量进行了分析，方法检出限能够达到1 μg/kg以下。Q1。免疫亲和柱的填料是什么，它是怎样工作的，为什么要用它？ 免疫亲合柱对于欧们学化学的好像陌生了一点，不过你把它当成一种层析柱就行了。它的所谓填料就是固定了抗体的凝胶（黄曲霉毒素的柱子一般是单克隆抗体），基于抗原抗体反应进行工作，专一性很强，再加上另一种原理（反相或正相液相色谱）的分离，即使你把它当作确证方法也能说的过去。其实免疫亲和柱净化后的样品已经非常干净，直接加溴水也可在荧光分光光度计上进行测定，也是AOAC 991。31正式方法。现在还有一种普通霉菌毒素净化柱（不是免疫柱）要便宜一些，能做的霉菌毒素品种也多，但是专一性就差些。Q2。Kobra cell可以在线产生溴，这对分析有什么作用？是可以提高灵敏度吗？如果是，溴是如何与黄曲霉素反应的？络合？氧化？还是别的什么？ 由欧以上的论述，应该说是提高反相HPLC分析中黄曲霉毒素B1、G1的灵敏度。反应原理欧还真的没研究，可能和柱后衍生类似（氧化？），考虑到进入精益求精的要求还是不乱猜了吧。Q3。看到书上说黄曲霉素的毒性是KCN的10倍，是砒霜的68倍。晕啊。。。操作时有没有特别的个人防护措施？这个阿胖讲得差不多了，方法也就是用次氯酸钠溶液泡器皿，当然最好不要自己称固体标样，那东东有静电，很容易飞出来，买溶液就行了。要补充的1、就是没阿胖讲的那么可怕，对欧盟出口花生及制品的检测实验室都使用免疫亲和柱净化-HPLC—RF法确证，每年可能要做上万个样品。2、HPLC法的干扰比酶免方法不知道要小多少，有的HPLC筛选方法，提取后不净化就直接进样了，也很少有干扰。采用哪种方法主要是和要求有关，如果让洋人拿着鞭子在后面抽着干，肯定是要用HPLC法；如果就骗骗中国的官僚和老百姓，那就像啊胖说的，酶免法又省钱有省事，嘿嘿。。。。3、GB/T 5009的TLC法，净化方法很差，UV灯下看上去是一条亮带，满足国标20PPB的限量都很勉强，这一点你可看看旧贴http://www.sepu.net/dvbbs/dispbbs.asp?BoardID=5&replyID=47615&id=18220&skin=0欧论述的也差不多了。1、AOAC方法简述25g均匀样品，加入氯化钠5 g和125 mL甲醇：水（7+3），均质2min，过滤。取15 mL滤液加30 mL水，再次过滤后，取10 mL过免疫亲和柱，2×10 mL水洗柱，最后用1 mL甲醇洗脱黄曲霉毒素，用水定容至2 mL，供HPLC测定。HPLC条件：色谱柱：4.6×250 mm, 5 μm，C18；流动相：甲醇-乙腈-水（1+1+3）；流速：1.0 mL/min； 柱后衍生试剂：100 mg碘溶于2 mL甲醇，加水至200 mL。流速0.3 mL/min；衍生化温度：70 ℃；衍生化时间：55 s；激发波长：360 nm；发射波长： 420 nm；进样量：50 μL。3. 方法技术指标：免疫亲和柱净化，HPLC柱后衍生化的方法回收率(1) 2000年AOAC协同试验结果B1: 82- 109 %(添加水平：1.0- 5.0 ng/g)B2: 77- 123 %(添加水平：0.2- 0.8 ng/g)G1: 58- 93 %(添加水平：1.0- 5.0 ng/g)G2: 62- 105 %(添加水平：0.2- 0.8 ng/g)(2) 1991年AOAC协同试验结果B1: 77- 90 %(添加水平：5.8- 17.5 ng/g)B2: 55- 70 %(添加水平：0.83- 2.5 ng/g)G1: 76- 98 %(添加水平：2.5- 7.5 ng/g)G2: 36- 55 %(添加水平：0.83- 2.5 ng/g)碘衍生化方法的反应温度要70 ℃，需要单独的柱温箱，还要一个打衍生剂的泵。故可以采用以下两种方法来代替碘溶液作柱后衍生（1）过溴化吡啶溴（PBPB）衍生色谱柱：4.6×250 mm, 5 μm，C18；流动相：水-乙腈-甲醇（6+2+3）；流速：1.00 mL/min；衍生化溶液：25 mg PBPB (CAS: 39516-58-3)溶于500 mL水，室温下避光可保存5天；衍生化溶液流速：0.30 mL/min；衍生化反应管：55 cm × 0.5 mm id. 衍生化反应温度：室温。（2）电化学反应池衍生色谱柱：4.6×250 mm, 5 μm，C18；流动相：水-乙腈-甲醇（6+2+3），每升加350 μL HNO3 (5 mol/L)，同时溶解120 mg KBr；衍生化反应池：Kobra cell Rhone Diagnostics Technologies Ltd.，衍生化操作电流：100 μA。

[color=#444444]我们用碘衍生方法，按照药典中样品前处理的方法配制样品溶液，加样做回收率，其中黄曲霉毒素B1、黄曲霉毒素B2、黄曲霉毒素G1的回收率均在70%以上，而黄曲霉毒素G2的回收率总是在40%左右，换了另一个品牌新色谱柱结果一样，想问一下这个跟四种毒素的结构有关系吗，或者跟免疫亲和柱有关吗？[/color][img=,absmiddle]http://muchongimg.xmcimg.com/data/emuch_bbs_images/smilies/rolleyes.gif[/img]

食品中黄曲霉毒素的测定，主要有TLC、ELISA、HPLC 等方法，TLC法灵敏度和重现性较差；ELISA法重现性差，易受样品基质干扰假阳性率高，仅能作为筛选方法。近年来，由于HPLC法具有灵敏度和准确度高、方法重现性好等优点，现已成为黄曲霉毒素分析的主要手段。HPLC法测定黄曲霉毒素，一般使用灵敏度和选择性较好的荧光检测器。但由于黄曲霉毒素的荧光强度会受溶剂影响，正相色谱中，B1和B2的荧光强度仅稍低一点，不需衍生化；而在常用的反相色谱中，B1和G1两种异构体荧光强度很弱，需进行衍生化，提高其荧光强度，灵敏度才能满足一般食品法规的限量。衍生化的方法一般有柱前和柱后两类， 柱前衍生一般使用三氟乙酸，柱后衍生有碘液、过溴化吡啶溴以及电化学和光化学等方法。近年来，很多标准方法利用免疫亲合柱净化，HPLC柱后衍生对花生和玉米等农产品和食品中黄曲霉的含量进行了分析，方法检出限能够达到1 μg/kg以下。Q1。免疫亲和柱的填料是什么，它是怎样工作的，为什么要用它？ 免疫亲合柱对于欧们学化学的好像陌生了一点，不过你把它当成一种层析柱就行了。它的所谓填料就是固定了抗体的凝胶（黄曲霉毒素的柱子一般是单克隆抗体），基于抗原抗体反应进行工作，专一性很强，再加上另一种原理（反相或正相液相色谱）的分离，即使你把它当作确证方法也能说的过去。其实免疫亲和柱净化后的样品已经非常干净，直接加溴水也可在荧光分光光度计上进行测定，也是AOAC 991。31正式方法。现在还有一种普通霉菌毒素净化柱（不是免疫柱）要便宜一些，能做的霉菌毒素品种也多，但是专一性就差些。Q2。Kobra cell可以在线产生溴，这对分析有什么作用？是可以提高灵敏度吗？如果是，溴是如何与黄曲霉素反应的？络合？氧化？还是别的什么？ 由欧以上的论述，应该说是提高反相HPLC分析中黄曲霉毒素B1、G1的灵敏度。反应原理欧还真的没研究，可能和柱后衍生类似（氧化？），考虑到进入精益求精的要求还是不乱猜了吧。Q3。看到书上说黄曲霉素的毒性是KCN的10倍，是砒霜的68倍。晕啊。。。操作时有没有特别的个人防护措施？这个阿胖讲得差不多了，方法也就是用次氯酸钠溶液泡器皿，当然最好不要自己称固体标样，那东东有静电，很容易飞出来，买溶液就行了。要补充的1、就是没阿胖讲的那么可怕，对欧盟出口花生及制品的检测实验室都使用免疫亲和柱净化-HPLC—RF法确证，每年可能要做上万个样品。2、HPLC法的干扰比酶免方法不知道要小多少，有的HPLC筛选方法，提取后不净化就直接进样了，也很少有干扰。采用哪种方法主要是和要求有关，如果让洋人拿着鞭子在后面抽着干，肯定是要用HPLC法；如果就骗骗中国的官僚和老百姓，那就像啊胖说的，酶免法又省钱有省事，嘿嘿。。。。3、GB/T 5009的TLC法，净化方法很差，UV灯下看上去是一条亮带，满足国标20PPB的限量都很勉强，这一点你可看看旧贴http://www.sepu.net/dvbbs/dispbbs.asp?BoardID=5&replyID=47615&id=18220&skin=0欧论述的也差不多了。1、AOAC方法简述25g均匀样品，加入氯化钠5 g和125 mL甲醇：水（7+3），均质2min，过滤。取15 mL滤液加30 mL水，再次过滤后，取10 mL过免疫亲和柱，2×10 mL水洗柱，最后用1 mL甲醇洗脱黄曲霉毒素，用水定容至2 mL，供HPLC测定。HPLC条件：色谱柱：4.6×250 mm, 5 μm，C18；流动相：甲醇-乙腈-水（1+1+3）；流速：1.0 mL/min； 柱后衍生试剂：100 mg碘溶于2 mL甲醇，加水至200 mL。流速0.3 mL/min；衍生化温度：70 ℃；衍生化时间：55 s；激发波长：360 nm；发射波长： 420 nm；进样量：50 μL。3. 方法技术指标：免疫亲和柱净化，HPLC柱后衍生化的方法回收率(1) 2000年AOAC协同试验结果B1: 82- 109 %(添加水平：1.0- 5.0 ng/g)B2: 77- 123 %(添加水平：0.2- 0.8 ng/g)G1: 58- 93 %(添加水平：1.0- 5.0 ng/g)G2: 62- 105 %(添加水平：0.2- 0.8 ng/g)(2) 1991年AOAC协同试验结果B1: 77- 90 %(添加水平：5.8- 17.5 ng/g)B2: 55- 70 %(添加水平：0.83- 2.5 ng/g)G1: 76- 98 %(添加水平：2.5- 7.5 ng/g)G2: 36- 55 %(添加水平：0.83- 2.5 ng/g)碘衍生化方法的反应温度要70 ℃，需要单独的柱温箱，还要一个打衍生剂的泵。故可以采用以下两种方法来代替碘溶液作柱后衍生（1）过溴化吡啶溴（PBPB）衍生色谱柱：4.6×250 mm, 5 μm，C18；流动相：水-乙腈-甲醇（6+2+3）；流速：1.00 mL/min；衍生化溶液：25 mg PBPB (CAS: 39516-58-3)溶于500 mL水，室温下避光可保存5天；衍生化溶液流速：0.30 mL/min；衍生化反应管：55 cm × 0.5 mm id. 衍生化反应温度：室温。（2）电化学反应池衍生色谱柱：4.6×250 mm, 5 μm，C18；流动相：水-乙腈-甲醇（6+2+3），每升加350 μL HNO3 (5 mol/L)，同时溶解120 mg KBr；衍生化反应池：Kobra cell Rhone Diagnostics Technologies Ltd.，衍生化操作电流：100 μA。

什么是黄曲霉毒素　　黄曲霉毒素（Aflatoxins）是生长在食物及饲料中的黄曲霉和寄生曲霉代谢的一组化学结构类似的产物，特曲霉也能产生黄曲霉毒素，但产量较少，目前已分离鉴定出的黄曲霉毒素有17种，主要是黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2以及由B1和B2在体内经过羟化而衍生成的代谢产物M1、M2等。黄曲霉毒素的基本结构为二呋喃环和香豆素，B1是二氢呋喃氧杂萘邻酮的衍生物，含有一个双呋喃环和一个氧杂萘邻酮（香豆素），前者为基本毒性结构，后者与致癌性有关。B1的毒性（其毒性比氰化钾毒性高）及致癌性极强且耐热（B1的分解温度为268℃左右，一般烹调加工破坏很少），在天然污染的食品中以B1最为多见。　黄曲霉毒素分布　　黄曲霉毒素主要存在于霉变的花生、谷物、果仁和大米等食物中；在水中的溶解范围为10毫克/升~20毫克/升， 可大量溶解于氯仿、甲醇、二甲基亚砜等中等极性的有机溶剂中，不溶于己烷、石油醚和乙醚；易被碱或强氧化剂破坏；进入人体后主要经消化道吸收，大部分分布 在肝脏、肾脏，少部分分布在血液、肌肉、脂肪组织中，其在体内的代谢过程主要为羟基化作用、去甲基作用和环氧化作用。

用PICKERING柱后衍生系统检测黄曲霉毒素，用0.05%碘液（甲醇水2：8），衍生泵压力偏高，超过2000，用甲醇冲洗的时候压力正常1000。想请教下各位大神，衍生泵压力偏高，是否跟碘液的溶剂比例有关，调高甲醇水的甲醇比例是否能够降低衍生泵压力。 在反相液相色谱中，调整溶剂比例是否能够影响系统压力，原理是什么，求各位大神解惑。

1、仪器及方法：黄曲霉毒素检测，waters柱后衍生系统，衍生液为0.05%碘溶液，反应温度70℃，流速0.2ml/min2、现象：衍生液不输液（上机检测过程中，几个小时之后会出现不输液或者是输液量降低，压力为0或者是降低为100psi（正常压力1100psi左右））3、故障排查：将衍生液（0.05%碘溶液)更换为屈臣氏水（超声10min)。 a、滤芯拆掉，做prime，仍然不出液。不是滤芯的问题， b、拆卸4个单向阀，超声，之后做prime，正常输液。、 c、单独断开衍生泵走0.2ml/min的流速，按时间计时，出液量正常。压力稳定950-1000psi d、将屈臣氏水更换为衍生液（0.05%碘溶液)，按照abc三个步骤做。出液量正常。0.2ml/min流速压力正常1000-1150psi e、上机检测黄曲霉毒素，运行20h，正常。正常关机。大约3h之后，断开衍生泵。将衍生液更换为屈臣氏水，做prime，直至出液正常。更换为衍生液（0.05% 碘溶液)，用0.2ml/min流速直至出液正常，压力正常1000-1150psi f、二次上机检测黄曲霉毒素，晚上运行，第二天上班（已经运行15h），经看样品曲线，运行6h之后，基线不稳，可以看出是输液量不正常，压力显示为150psi。做prime不出液。经和waters工程师沟通，可以再超声单向阀。超声之后按照abcd四个步骤操作，更换新开封的碘配置的碘液。0.2ml/min的流速压力2h内从950上升到1150psi。4、[b]疑问[/b]：上机检测前半时间衍生泵还是正常输液，后半段时间输液就不正常，是什么原因导致的？仅仅是单向阀的问题还是有别的地方存在故障。请大神解答。

转自色谱网，作者：Mass 食品中黄曲霉毒素的测定，主要有TLC、ELISA、HPLC 等方法，TLC法灵敏度和重现性较差；ELISA法重现性差，易受样品基质干扰假阳性率高，仅能作为筛选方法。近年来，由于HPLC法具有灵敏度和准确度高、方法重现性好等优点，现已成为黄曲霉毒素分析的主要手段。HPLC法测定黄曲霉毒素，一般使用灵敏度和选择性较好的荧光检测器。但由于黄曲霉毒素的荧光强度会受溶剂影响，正相色谱中，B1和B2的荧光强度仅稍低一点，不需衍生化；而在常用的反相色谱中，B1和G1两种异构体荧光强度很弱，需进行衍生化，提高其荧光强度，灵敏度才能满足一般食品法规的限量。衍生化的方法一般有柱前和柱后两类， 柱前衍生一般使用三氟乙酸，柱后衍生有碘液、过溴化吡啶溴以及电化学和光化学等方法。近年来，很多标准方法利用免疫亲合柱净化，HPLC柱后衍生对花生和玉米等农产品和食品中黄曲霉的含量进行了分析，方法检出限能够达到1 μg/kg以下。Q1。免疫亲和柱的填料是什么，它是怎样工作的，为什么要用它？ 免疫亲合柱对于欧们学化学的好像陌生了一点，不过你把它当成一种层析柱就行了。它的所谓填料就是固定了抗体的凝胶（黄曲霉毒素的柱子一般是单克隆抗体），基于抗原抗体反应进行工作，专一性很强，再加上另一种原理（反相或正相液相色谱）的分离，即使你把它当作确证方法也能说的过去。其实免疫亲和柱净化后的样品已经非常干净，直接加溴水也可在荧光分光光度计上进行测定，也是AOAC 991。31正式方法。现在还有一种普通霉菌毒素净化柱（不是免疫柱）要便宜一些，能做的霉菌毒素品种也多，但是专一性就差些。Q2。Kobra cell可以在线产生溴，这对分析有什么作用？是可以提高灵敏度吗？如果是，溴是如何与黄曲霉素反应的？络合？氧化？还是别的什么？ 由欧以上的论述，应该说是提高反相HPLC分析中黄曲霉毒素B1、G1的灵敏度。反应原理欧还真的没研究，可能和柱后衍生类似（氧化？），考虑到进入精益求精的要求还是不乱猜了吧。Q3。看到书上说黄曲霉素的毒性是KCN的10倍，是砒霜的68倍。晕啊。。。操作时有没有特别的个人防护措施？这个阿胖讲得差不多了，方法也就是用次氯酸钠溶液泡器皿，当然最好不要自己称固体标样，那东东有静电，很容易飞出来，买溶液就行了。要补充的1、就是没阿胖讲的那么可怕，对欧盟出口花生及制品的检测实验室都使用免疫亲和柱净化-HPLC—RF法确证，每年可能要做上万个样品。2、HPLC法的干扰比酶免方法不知道要小多少，有的HPLC筛选方法，提取后不净化就直接进样了，也很少有干扰。采用哪种方法主要是和要求有关，如果让洋人拿着鞭子在后面抽着干，肯定是要用HPLC法；如果就骗骗中国的官僚和老百姓，那就像啊胖说的，酶免法又省钱有省事，嘿嘿。。。。3、GB/T 5009的TLC法，净化方法很差，UV灯下看上去是一条亮带，满足国标20PPB的限量都很勉强，这一点你可看看旧贴http://www.sepu.net/dvbbs/dispbbs.asp?BoardID=5&replyID=47615&id=18220&skin=0欧论述的也差不多了。1、AOAC方法简述25g均匀样品，加入氯化钠5 g和125 mL甲醇：水（7+3），均质2min，过滤。取15 mL滤液加30 mL水，再次过滤后，取10 mL过免疫亲和柱，2×10 mL水洗柱，最后用1 mL甲醇洗脱黄曲霉毒素，用水定容至2 mL，供HPLC测定。HPLC条件：色谱柱：4.6×250 mm, 5 μm，C18；流动相：甲醇-乙腈-水（1+1+3）；流速：1.0 mL/min； 柱后衍生试剂：100 mg碘溶于2 mL甲醇，加水至200 mL。流速0.3 mL/min；衍生化温度：70 ℃；衍生化时间：55 s；激发波长：360 nm；发射波长： 420 nm；进样量：50 μL。3. 方法技术指标：免疫亲和柱净化，HPLC柱后衍生化的方法回收率(1) 2000年AOAC协同试验结果B1: 82- 109 %(添加水平：1.0- 5.0 ng/g)B2: 77- 123 %(添加水平：0.2- 0.8 ng/g)G1: 58- 93 %(添加水平：1.0- 5.0 ng/g)G2: 62- 105 %(添加水平：0.2- 0.8 ng/g)(2) 1991年AOAC协同试验结果B1: 77- 90 %(添加水平：5.8- 17.5 ng/g)B2: 55- 70 %(添加水平：0.83- 2.5 ng/g)G1: 76- 98 %(添加水平：2.5- 7.5 ng/g)G2: 36- 55 %(添加水平：0.83- 2.5 ng/g)碘衍生化方法的反应温度要70 ℃，需要单独的柱温箱，还要一个打衍生剂的泵。故可以采用以下两种方法来代替碘溶液作柱后衍生（1）过溴化吡啶溴（PBPB）衍生色谱柱：4.6×250 mm, 5 μm，C18；流动相：水-乙腈-甲醇（6+2+3）；流速：1.00 mL/min；衍生化溶液：25 mg PBPB (CAS: 39516-58-3)溶于500 mL水，室温下避光可保存5天；衍生化溶液流速：0.30 mL/min；衍生化反应管：55 cm × 0.5 mm id. 衍生化反应温度：室温。（2）电化学反应池衍生色谱柱：4.6×250 mm, 5 μm，C18；流动相：水-乙腈-甲醇（6+2+3），每升加350 μL HNO3 (5 mol/L)，同时溶解120 mg KBr；衍生化反应池：Kobra cell Rhone Diagnostics Technologies Ltd.，衍生化操作电流：100 μA。

我用GB/T5009.23-2006《食品中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的测定》试着做了几次，但结果很不理想。有峰的时候同一标准峰高峰面积差别太大，而且有时候很不规则，但更多是根本没峰，做不出来。问了很多人都说柱前衍生很难做，有条件用柱后衍生的好。但是既然连国标都有柱前衍生的方法，就应该有他存在的道理。我做不出来，请各位大大指点下柱前衍生到底怎么做能提高成功率。 柱前衍生化步骤如下（一段）：从多功能净化柱的收集池内转移2ml净化液到棕色具塞小瓶中，在真空吹干机下60摄氏度吹干（或在60摄氏度水浴下氮气吹干，注意不要使液体鼓吹、飞溅）。加入200ul正己烷和100ul三氟乙酸，密闭混匀30s后，在40摄氏度烘干箱中衍生15min。室温真空吹干机吹干（或室温水浴下氮气吹干），以200ul水---乙腈（85+15）溶解，混匀30s，1000r/min离心15min，取上清液至液相色谱仪的样品瓶中，供测定用。还有我想问下做柱后衍生的，柱后衍生化系统，什么型号的，推荐下，可能要买个。。。。。

黄曲霉毒素（AFT）是一类化学结构类似的化合物，均为二氢呋喃香豆素的衍生物。黄曲霉毒素是主要由黄曲霉 (aspergillus flavus) 寄生曲霉 (a.parasiticus) 产生的次生代谢产物，在湿热地区食品和饲料中出现黄曲霉毒素的机率最高。黄曲霉毒素主要有B1,B2 ,G1 ,G2 以及另外两种代谢产物M1 ,M2.其中M1 和M2是从牛奶中分离出来的.B1,B2 ,G1 ,G2 ,M1 和 M2 在分子结构上十分接近.。毒性：远远高于氰化物、砷化物和有机农药的毒性，其中以B1毒性最大。当人摄入量大时，可发生急性中毒，出现急性肝炎、出血性坏死、肝细胞脂肪变性和胆管增生。当微量持续摄人，可造成慢性中毒，生长障碍，引起纤维性病变，致使纤维组织增生。AFT的致癌力也居首位，是目前已知最强致癌物之一。黄曲霉毒素进入机体后，在肝脏中的量较其他组织器官为高，说明肝脏可能受黄曲霉毒素的影响最大。肾脏、脾脏和肾上腺也可检出，肌肉中一般不能检出。黄曲霉毒素如不连续摄入，一般不在体内积蓄。一次摄入后约1周即经呼吸、尿、粪等将大部分排出。

各位大神，我们单位准备开发黄曲霉毒素B1，用的是柱前衍生法，有没有哪位大神做过这个的，标准曲线上样前是否需要衍生，还是直接配置好上机的？还有柱前衍生好做吗？