电穿孔系统

[url=http://www.f-lab.cn/electroporation/pipectrode.html][b]克隆枪电穿孔室[/b][/url]是[b]电穿孔仪[/b]器的一项重大的技术进步，具有最高转化效率,有效降低[b]电穿孔过程[/b]中样品的低毒性，温度控制，及[b]电穿孔[/b]后样品的迅速恢复。[img=克隆枪电穿孔室]http://www.f-lab.cn/Upload/CG-PP-1.jpg[/img][url=http://www.f-lab.cn/electroporation/pipectrode.html]克隆枪电穿孔室[/url]在电穿孔过程中，由水冰温度稳定剂支持的薄外科不锈钢电极为细胞的提供优越环境。我们利用水融合的潜热（融化1克冰或加热1克水到80℃，需要相同的热量！），保持样本的低温是非常重要的，这样可以避免电弧。由于Pipectrode是一个试管，可以喷射出您的样品并立即放入回收缓冲区。更多电穿孔系统请浏览官网：[url]http://www.f-lab.cn/electroporation.html[/url]

1、什么是活体电穿孔活体电穿孔法(in vivo electroporation) 是将外源基因通过电场作用，导入动物目标组织或器官。由于这种方法能有效导入外源基因，可在多种组织器官上应用，并且效率较高。活体电穿孔法的原理很简单，在直流电场作用的瞬间，细胞膜表面产生疏水或亲水的微小通道105～115μm ，这种通道能维持几毫秒到几秒，然后自行恢复。在此期间生物大分子如DNA 可通过这种微小的通道进入细胞。近年来活体电穿孔法用于转基因研究的报道不断增多，在基因治疗方面的优势也日趋显著，是一种很好的活体基因导入方法。活体电穿孔法可用于检测瞬时表达系统中载体的表达状况。大量的研究表明活体电穿孔法在基因治疗方面有非常好的应用前景。因此目前国内外对活体电穿孔法介导外源基因转移的研究越来越多。2、活体电穿孔的法的特点 活体电穿孔法基因导入和表达效率较高，它的特点主要在以下几个方面:首先，靶器官的选择面广，理论上任何组织和器官都可以作为活体电穿孔的靶器官。 在用于基因治疗方面，要考虑到靶器官组织生理特性。如果所选择的局部组织细胞不能把所转移基因的表达产物分泌到外周血液循环中，则在某种意义上说已失去了基因导入的价值，这在基因治疗中是关键性的问题。当使用组织特异性表达载体时，研究人员应根据所构建的表达载体来选择基因转移和表达的靶器官组织。例如鱼精蛋白21 启动子可指导外源基因在精母细胞中特异性表达，以小鼠的睾丸作为靶器官将含有鱼精蛋白21启动子的表达载体导入，获得外源基因的表达量远远高于该基因在肝脏和骨骼肌中的表达。其次，对导入的外源基因片段的大小没有限制，从几KB 或十几KB 的表达载体， 到100～200KB 的YAC、BAC基因组 ，都有成功导入并获得表达的报道。此外活体电穿孔法操作简单快速，电穿孔的时间只有几秒钟，而且DNA片段不需要特殊的纯化操作。但电穿孔法也存在一些的缺点:首先，外源基因表达持续的时间很短，虽然外源基因导入后最快可在215 小时有表达，但大多1～2 月后表达量降至很低。外源基因表达的时间主要由于所构建的表达载体和基因导入的靶细胞组织器官不同而存在巨大差异。由于应用不同的表达载体，Muramatsu 在小鼠肝脏进行电穿孔7天后则检测不到外源基因的表达，而Heller 21 天后还可以检测到外源基因的表达。如果选择代谢和酶活动旺盛的组织器官如肝脏，则表达持续时间会较短，表达时间在1 个月以内，但以骨骼肌为靶组织，表达可持续15个月。3、 活体电穿孔法与其他活体基因导入方法的比较 到目前为止，非病毒载体的活体基因导入方法有直接注射法、脂质体法、基因枪法、电穿孔法等。每一种方法都有其各自的特殊性，因此很难将这几种方法进行简单的比较。直接注射法：可将外源基因直接注射到靶位点或血管中，但此种方法不适合以肌肉作为靶器官，它的外源基因表达效率极低，仅为电穿孔法的百分之一。脂质体法：活体基因转移法中脂质体法更适宜较大面积组织的基因导入，但无法避免DNA浓度变低，在出血的情况下会使本来不高的DNA浓度更加降低，往往造成基因导入效率低。基因枪法：适合于DNA较易接触到的质地较坚韧的组织如皮肤，而视网膜、胚胎和禽类的胚盘等组织会由于机械刺激和出血造成器质性损伤或发育停滞，因而不能用基因枪法完成。DNA包裹的金属颗粒从基因枪发出到达组织表面大多只几百微米的距离，较深层的组织不易操作， 表达效率也较低。Muramatsu报道在材料一致的情况下，电穿孔法的基因导入和表达效率明显高于其它方法，而且电穿孔法适合多种组织的操作 。4 、活体电穿孔法施加条件的研究 波型的选择在电穿孔过程中方波较指数衰减波更能获得较高的基因表达。同时方波只要要求控制电压和时间，十分直观，而指数衰减波需要控制的电压、电容、电阻等参数，这样的条件摸索过程中，方波较指数衰减波更易得到高表达。

正在研究包括电穿孔/电融合有关技术方面的课题，这方面资料太少，回看高效基因导入-电穿孔在生命科学研究中的应用还这么不方便，本网站视乎互动方面不是很亲民的，也可能是个人活动太少无经验吧

欲购买电穿孔仪做酵母菌,上海有谁卖?国产不要,可联系ljhcyy@163.com

http://img3.17img.cn/bbs/upfile/images/20100518/201005181701392921.gif高效基因导入-电穿孔在生命科学研究中的应用 讲座时间：2014年7月8日 14：00 主讲人：张 旭 生物科学硕士，毕业于美国普度大学，拥有丰富分子生物仪器技术经验，现任美国哈佛仪器大中华区上海代表处渠道经理。http://img3.17img.cn/bbs/upfile/images/20100518/201005181701392921.gif【简介】 电穿孔技术是利用电场作用使细胞膜的脂双层膜结构进行重新排列，形成许多微小的孔径，从而是外源分子可以通过细胞膜进入细胞的一种重要分子生物学技术。如今被广泛应用于生物医药领域，实现基因和药物导入特定的细胞、siRNA基因沉默和基因疗法、细胞融合和单克隆抗体制备以及核转移和动物克隆。与其他化学和生物导入方式相比，电穿孔有着得天独厚的优势，对导入的外源分子大小没有限制、无细胞毒性、具有很高的实验可重复性并且操作简单快捷。配合专业设计的多样性电极，电穿孔技术的应用对象也拓展至体外悬浮细胞、活体动物、离体组织、子宫内胚胎、卵内胚胎和贴壁细胞，并且可以进行大规模96孔高通量应用，从而使得电穿孔技术的应用领域得到了无限扩展，新的应用技术不断涌现......本期摘要：电穿孔/电融合技术介绍电穿孔技术原理影响电穿孔效率的关键因素电融合技术特点介绍-------------------------------------------------------------------------------1、报名条件：只要您是仪器网注册用户均可报名参加。2、报名并参会用户有机会获得100元京东卡一张哦~3、报名截止时间：2014年7月8 日 13:30 4、报名参会：http://simg.instrument.com.cn/meeting/images/20100414/baoming.jpg

纳米隧道电穿孔仪重磅出击红方块科博会在中国科学仪器博览会（简称：红方块科博会）召开之际，美国俄亥俄州立大学科学家开发出一种名为“纳米隧道电穿孔”的新技术，或称为NEP，将同期在红方块科博会上展出。 在红方块科博会中获悉长期以来，在进行基因治疗时，人们对插入细胞的药剂数量无法控制，因为人体绝大部分细胞都太小，最小的针头也无能为力。而NEP让我们能研究药剂和其他生物分子是怎样影响了细胞的生物和基因路径的，现有其他技术都无法达到这么细微的水平。展会中该校化学与生物分子工程教授詹姆斯·李说。科学家们用这种方法，将定量的抗癌基因成功插入到白血病细胞中并杀死了它们。 在红方块科博会中了解到，研究人员用聚合物压制成一种电子设备样机，用DNA(脱氧核糖核酸)单链作为模板来构建纳米隧道。詹姆斯·李发明了一种使DNA链解旋的技术，并使其按照需要形成精确结构。他们给DNA链涂上一层金涂层并加以拉伸，使之连接两个容器，然后将DNA蚀去，在设备内部留下一条连通两个容器的尺寸精确的纳米隧道。 隧道中的电极将整个设备变成一个微电路，几百伏特的电脉冲从一个装药剂的容器经纳米隧道到达另一个装细胞的容器，在隧道出口处形成了强大的电场，与细胞自身的电荷相互作用，迫使细胞膜打开一个小孔，足够投放药物而不会杀死细胞。调整脉冲时间和隧道宽度，就能控制药物剂量。利用纳米隧道电穿孔仪给细胞注射基因治疗药剂时，不用针头，而是用电脉冲通过微小的纳米隧道，几毫秒内就能把精确剂量的治疗用生物分子“注射”到单个活细胞内。 在红方块科博会期间科学家们指出，希望NEP能最终用于早期癌症检测与治疗，比如在干细胞或免疫细胞中插入精确剂量的基因或蛋白质，引导它们分化改变，不必担心过量注射带来的安全问题，然后把这些细胞放回体内作为一种细胞基础疗法。并且希望这种方法能用于白血病、肺癌及其他肿瘤。

穿孔法测试甲醛是测试的甲醛总量？没做过穿孔法，哪位大侠了解？干燥器法是测试释放量

穿孔萃取仪用于人造板甲醛含量测定,要求质量好一些的,现有的玻璃太容易碎.

穿孔萃取法是测定人造板材中游离甲醛含量的传统方法，在欧洲提出并为我国采用，其原理是用甲苯通过液—固萃取将试件中甲醛萃取出来，然后通过穿孔器进行甲醛与水的液—液萃取，使甲苯中的甲醛又溶于水，然后在水溶液中进行测定。穿孔萃取法操作简单，测定时间较短，适用于试件的快速测定。穿孔萃取法实际上时测定人造板中所含的全部可能释放出来的甲醛。本文对穿孔萃取法测定人造板中游离甲醛含量影响因素进行探讨，以供参考。　　1 实验　　1.1 材料与仪器　　材料：高密度纤维板，刨花板（江苏玉兰木业有限公司提供）。　　试剂：甲苯，碘化钾，重铬酸钾，硫代硫酸钠，乙酰丙酮，甲醛（35%-40%），乙酸铵（以上均为分析纯）。碘化汞，无水碳酸钠，H2SO4，HCI，NaOH，I2，可溶性淀粉。　　仪器：穿孔萃取仪（上海玻璃仪器厂），0.01g电子天平，0.0001g电子天平，UV1240紫外分光光度计等。　　1.2 测试原理　　GB/T 17657—1999《人造板及饰面人造板理化性能试验方法》。　　1.3 计算　　甲醛释放量按下式计算，精确至0.1mg。　　E=（As-Ab）×f×(100+H)×V /M0　　其中：E—每100g绝干试件释放的甲醛毫克数，mg/hg；　　As—萃取液吸光度；　　Ab—蒸馏水吸光度；　　f—标准曲线的斜率；　　V—容量瓶体积，2000mL；　　H—试件的含水率，%；　　M0—用于萃取试件的质量，g

穿孔法测试板材中甲醛方法中甲苯添加量为何要求为600mL，这个量是怎么来的，为什么不定500mL呢？正好一瓶倒进去多方便呀

请问各位达人啊,做木甲醛的穿孔萃取的时候如何才能控制回流速度达到标准的速度,我做的时候前辈说要在具体的那个位置,但是我觉得不太准确,不晓得大家有什么好的点子给小的支招啊.谢谢大家了啊

谁做过人造板测试用的甲醛穿孔萃取仪的验收试验？乍么来验证这个仪器好不好用？

1、穿孔萃取仪，单独买架子大概要多少钱啊？2、装置的连接不是很会，有没有同行可以指导一下，最好有图片，3、实验需要在怎样的环境中进行啊？目前我们实验室条件比较差，没有恒温恒湿，可以做吗？4、萃取完的甲苯溶液大家都是怎么处理的呢？5、板材 是怎么锯成一小块块，使可以放进圆底烧瓶那样的小口的

使用穿孔萃取法测试人造板甲醛含量，出现了两个问题，实在纠结。1，甲苯蒸汽升上去的时候，只有很少部分进入冷凝管，直接就被冷却，沿着管壁直接被冷却留下来了。实际甲苯根本没有和水进行萃取，就直接又回到烧瓶去了，这结果完全不可信啊。 这难道是因为最近温度低的原因？2，根本没有出现虹吸，只是上层甲苯流了下去，管放得已经是竖直的了，就是慢慢流，加大回流速度也没有用。大家有没有碰到过这些情况，要怎么改进，请大家帮忙想想办法。

今天买了一只活鸭子，宰杀后在清洗时发现鸭肫上竟然有三个穿孔，肫壁还有多处异常突起，是否给鸭子喂了什么致突变的饲料导致的？感觉很可怕，只好把鸭肫扔了。http://simg.instrument.com.cn/bbs/images/brow/em09501.gif

求穿孔萃取法测中密度纤维板，刨花板标准曲线，最近头疼，一直做不好，不知道有没有高人能分享一下自己的穿孔萃取法标准曲线？[em0801]

各位高手，请问有谁知道建筑材料人造板穿孔萃取法中的 穿孔萃取仪 的用法， 最好附上照片。 标准是GB/T 17657-1999。 谢谢各位

何处购买质量很好的穿孔萃取仪等玻璃器皿？我们在做GB17657-1999标准的甲醛测试，我们现用的萃取仪萃取效果不佳，玻璃质量比较薄，密封性不好。 同时希望购买到天玻或者北玻的玻璃器皿。

各位同仁好，请问谁有《[b]ISO 2591-1-1988 筛分试验第1部分:用于金属丝编织网及金属穿孔板的筛分试验方法》[/b]的标准文件吗？可否共享一份呢？谢谢了~

有谁知道用GB/T 17657-1999 中穿孔萃取法测试人造板材中的甲醛释放量中的含水率如何测试？试件含水率的尺寸是多少？谢谢

求助“提高铜管挤压穿孔针使用寿命的研究进展”2007年 第36卷 第06期

新手，刚学甲醛释放量穿孔法检测，有以下以地方不明白。这是我做的甲醛释放量标准曲线的数据 我的甲醛标准曲线图：斜率 31.34 甲醛含量 吸光度0.00 0.037 0.75 0.052 1.50 0.094 3.00 0.126 7.50 0.270 15.00 0.515 现在的问题是：很多人说这个斜率值在20-25之间才是正确的！但是我们的甲醛释放量最终的检测结果却和国家质检院检测的一样！前面溶液配制都没问题，甚至各点溶液的颜色都基本一样！可是分光光度计所读出的吸光度就差很多了，斜率更是不一样！但最后的甲醛释放量计算结果却一样！求高手指点！急！2.我用的是721分光光度计，不是数显，这个灵敏度调整档应该在那个档位比较好呢？3.光度计：412纳米处，灵敏度档2 。不知道是不是显色剂的问题，肉眼看起来我们两个企业的溶液颜色差别不大。如果我的光度计有问题得话，问题在哪里呀！另外我看那个企业的15毫克/升甲醛溶液的吸光度数值是1.301，可是我家的这个分光光度计在0.01到1.0之间是可以准确读数的，1-2之间最小刻度是0.2，请问如果真的是我的数据有问题，我这个分光光度计该怎么读取15毫克/升甲醛溶液的吸光度数值呢？我的问题又处在什么地方呢？很困惑，求高手指点！急！！！这是另一个厂家的。甲醛含量 吸光度0.00 0.017 0.75 0.080 1.50 0.149 3.00 0.283 7.50 0.681 15.00 1.301

求助“空调用铜管穿孔失效分析 ”理化检验.物理分册 , Physical Testing and Chemical Analysis Part A Physical Testing, 编辑部邮箱

接种效果优于电穿孔法 可提高DNA疫苗的有效性2013年01月31日 来源： 中国科技网 作者： 王小龙 中国科技网讯 据麻省理工学院新闻网1月28日报道，该校研究人员日前开发出一种类似于膏药的疫苗，这种疫苗通过高分子薄膜的方式输送药物，可提高DNA疫苗的有效性。相关论文1月27日发表在《自然·材料学》杂志网络版上。 疫苗通常由灭活病毒制成，通过刺激人体免疫系统的方式，帮助免疫系统建立屏障阻止病毒感染。然而，这种方法对于艾滋病等病毒而言过于危险。近年来，为开发出更加有效和安全的疫苗，许多科学家在探索制造DNA疫苗。 大约20年前，科学家发现，一种DNA编码的病毒蛋白能够在啮齿动物中引起强烈的免疫反应，但在人体上一直无法复制。直到不久前，一种被称为电穿孔的方法在DNA疫苗的接种上获得了一些突破。这种方法首先需要在皮下注射DNA，然后再用电极产生电场，促使皮肤细胞膜打开小空隙，允许DNA进入。然而，这个过程较为痛苦，接种结果也存在不确定性。 新研究采用了不同的方法将DNA传递到皮肤当中，这种疫苗由多层被植入DNA的高分子材料组成。高分子薄膜上有若干个微型针头，贴在皮肤上时能够渗入皮肤中大约半毫米，这种深度足以使药物进入表皮细胞，又不会接触到真皮层的神经末梢，因此不会引发疼痛。一旦被贴在皮肤上后，薄膜就会逐渐降解，疫苗的释放过程从数天到数周不等。 研究人员可通过控制高分子薄膜层数的方法控制DNA的投递量，还能够通过控制高分子薄膜遇水分解的速度来控制用药时间。由于这种方法增加了DNA与免疫系统之间的交互时间，因此也提高了疫苗的有效性。在小鼠实验中，研究人员发现新方法接种效果优于电穿孔法。下一步，他们还将在类灵长动物上开展进一步的实验。 研究人员称，这种疫苗贴用于多种疾病的免疫，因为DNA序列可以很容易按照不同疾病的需要进行转化。与蛋白质疫苗相比，其优势在于，每个蛋白质都有其特殊性，在生产和接种效果上都存在不确定性，但DNA的行为始终是相同的，不管它采用怎样的抗原编码。 负责该项研究的麻省理工学院生物工程和材料学教授达雷尔·欧文说，如果这种疫苗能够在人体试验中获得成功，将会让接种疫苗的方式发生巨大改变。由于不再需要注射器并能够在室温下储存，疫苗的使用和运输将更加安全。此外，针对皮肤中丰富的免疫细胞、可生物降解的缓释材料的使用、无痛接种也是这种疫苗接种方式的优势。“这是一种有趣的方法，不但适用于接种基于DNA的病毒抗原，也适用于其他小分子的传输。”欧文说。(记者 王小龙) 《科技日报》（2013-01-31 二版）

ASTM D 3763-1995 用载荷和位移探测器测试硬质塑料的高速穿孔特性的试验,谁哪里可以做？谁有这方面的设备信息？请发送到yeguoqiang_120@163.com.

5、 温度 一般情况下，电转的过程是在室温下进行，但在 电击前后可对细胞进行冰浴处理。电击前冰浴的时间对转染率影响不大，但低温环境能够防止DNA被外源性DNA酶降解，并限制在电击中因Joule作用而产生的不良反应，因此，实验一般选择电击前冰浴5min。电击后冰浴，会影响DNA摄入，因为电击后冰浴可增强细胞收缩，细胞膜上的 电穿孔封闭较慢，延长外源性DNA摄入时间，从而提高其摄入量。在室温环境下，虽然细胞膜上的孔 封闭速度快，但在随后2h，质粒还可通过电内化进入细胞，因此摄人量不一定比4℃环境下低。而且，室温下细胞在5 min内即闭孔，在4℃的环境下穿孔状态可保持4h，穿孔封闭缓慢降低了存活率，同时细胞在低温下更容易受到损伤。因此，综合考虑摄人量和存活率，大部分文献倾向于电击后细胞仍在室温或37℃下保存。

据说足够高的电压能击穿空气，具体得多高的电压啊，有没有人研究过？变压器不让靠近是怕把空气击穿伤人吗？大家讨论讨论吧。

我们实验室刚建立，拟制定一套收费标准，请大侠帮忙，有的就发来分享，没有的就给一些建设性的建议哈！谢谢！主要是下面一些设备：1.安捷伦GC6890N(配FID,TCD检测器)2.Waters2695（配2996DAD，2424ELSD检测器）3.AKTA蛋白纯化系统（explore100，UV检测）4.Imaging－PAM荧光成像系统（有maxi－和mini两种探头可选）5.Li－6400R光合测定仪（有三种叶室，包括透明、荧光、红蓝）6.恒温恒湿箱（德国MMM climacell）7.色差计（美国HunterLab MiniScan XP）8.电穿孔仪（美国Biorad Gene Pulser Xcell）9.高压测序电泳仪（美国Biorad PowerPAC3000）10.冷冻研磨机（美国SPEX CertiPrep 6770）