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质谱电荷量
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质谱电荷量相关的方案
利用全自动毛细管等电聚焦 — 质谱联用技术鉴定单克隆抗体的电荷异构体
本应用展示了在 7100 毛细管电泳仪和 TOF/Q-TOF 质谱仪上进行的全自动在线 CIEF-MS 方法。使用电动泵送鞘流溶液纳米喷雾 CE/MS 联用技术实现该 CIEF-MS 工作流程。碱性蛋白和单克隆抗体的 CZE-MS 结果以及达雷木单抗电荷异构体分析的 CIEF-MS 结果表明,EMASS-II CE/MS 离子源在安捷伦系统上具有出色的性能。还提供了 CEIF-MS 方法的详细信息,包括毛细管性能验证和系统性能检查。在此 Agilent-CMP CIEF-MS工作流程中,对于通过毛细管等电聚焦分离得到的完整 mAb 电荷异构体,可以直接进行质谱鉴定。
C07-颗粒电荷的理解和有效利用
在微细的分散体系中,带有相同电荷的颗粒间的静电排斥力决定了体系抗凝聚和凝结的稳定性,表征带电颗粒界面的特性是必须的。当颗粒通过端基离子功能化后,总电荷和电荷密度都是需要了解的重要参数。电荷的测量是通过某种方式产生电动学信号。根据实验的设置,结果通常有电泳法,电声法和声阻法zeta 电位,以及Stabino○R 中的流动电势。这些名字是电荷参数中最常被提及的,由作用于粒子界面的双离子层的剪切力而引起的(见下图1)。所有这些测试都和位于剪切面的颗粒界面电位(PIP,也被称为zeta 电位)成正比。为了生成界面电势,需要在电泳或者电声法中生成电场,或者在流动电势和声阻法实验中生成机械应力。通过这种方式,可以带走溶液中外层的松散结合的离子,使界面电荷“敞开”可测量。
iCIEF-HRMS在线直连技术用于蛋白质药物电荷异质性分析
在整个制药行业中,重组单克隆抗体 (mAb) 为生物治疗产品在销售额和临床份额的快速增长起到了重要作用。最近,因为独特的治疗效果,复杂的蛋白质包括抗体-药物偶联物 (ADC)、双特异性抗体和融合蛋白等重新获得了科学家们的特别关注。在蛋白质药物的关键质量属性(critical quality attribute, CQA)评估过程中,电荷异质性需要对蛋白分子进行深入的结构表征,以确保其安全性、有效性和效力。此外,对电荷变异体的监测也是蛋白质药物质量控制(QC)中必要的步骤。目前,主要有两种检测蛋白质药物电荷变异体的方法:离子交换(IEX) 色谱和成像毛细管等电聚焦(iCIEF) 或 CIEF,两者传统上都使用 紫外(UV) 作为检测器。UV检测虽然具有良好的稳定性和灵敏度,但受限于其定性能力,无法对分离后的电荷变异体进行更深入的鉴定。为了分析电荷异构体的成因,必须进行准确的定性分析。高分辨率质谱(HRMS)是定性蛋白质分析的有力手段之一。然而,由于所用溶液体系的限制,传统上IEX 和 iCIEF 不能直接与质谱连接。鉴于iCIEF在蛋白质电荷变异体分析中具有分辨率高、通量高等优点,已经逐渐成为生物制药行业生产与质量控制阶段的金标准。因此,科学家们也在尝试各种将iCIEF与高分辨质谱直接连接的技术。其中一种方法是基于芯片的直连技术,然而该方法是使用化学试剂形成pH梯度,稳定性有所欠缺,且分辨率会下降;其他的直连方法在通量、稳定性以及与质谱离子源连接的便利性等方面均有不足。本文中所使用的CEInfinite (Advanced Electrophoresis Solution Ltd., AES) iCIEF平台,与该公司的专利卡柱和两性电解质配合使用,对mAb、ADC等分子的电荷变异体均可实现高分辨率分离,且兼具良好的稳定性。更为重要的是,所用溶液体系中无甲基纤维素、尿素等,两性电解质也与质谱兼容,这使得iCIEF与高分辨质谱在线直连测量电荷变异体完整蛋白分子量成为可能。该平台与质谱离子源部分连接简单,无需额外接口(图1),不同工作模式切换简便。
重组蛋白表征——电荷异构体分析
在生产和纯化过程中,蛋白质能表现出多种电荷异质性改变。这些变化不仅影响 稳药物的定性,也影响活性,而且还可能导致有害的免疫反应。所以,开发和生产过程中蛋白药物的电荷异构体分析非常关键。电荷变异体的表征通常是用等电聚焦或离子交换色谱进行的。等电聚焦 (IEF) 通过等电点 (PI) 进行蛋白质的分离,常规用于重组蛋白电荷异构体的指纹图分析。与传统的平板凝胶等电聚焦电泳相比,毛细管等电聚焦电泳 (cIEF) 具有更高的分离度、分析速度,定量能力和自动化性能。
TSKgel STAT阳离子交换色谱柱快速分析单克隆抗体电荷异质性
本应用中,使用了东曹的两款强、弱阳离子交换色谱柱TSKgel SP-STAT和TSKgel CM-STAT,对单克隆抗体IgG的电荷异质性进行快速分析,并考察了流动相pH值对其分离情况的影响。实验结果表明,TSKgel SP-STAT和CM-STAT这两款阳离子交换色谱柱,给蛋白质电荷异质性分析提供了不同的选择。在方法开发时,为了将酸性和碱性异构体从主峰上更好地分离出来,应在不同pH值流动相条件下评估两种色谱柱的分离性能。
重负离子复合物在软电荷界面形成独特的水结构
采用由立陶宛Ekspla公司的PL2231型高功率皮秒激光器和光学参量发生器等设备构成的振动和频光谱测量系统,对重负离子复合物在软电荷界面形成独特的水结构的现象进行了实验研究。
使用BioResolve SCX mAb色谱柱开发单克隆抗体电荷异构体分析方法
盐梯度下阳离子交换色谱的方法开发参数。 由于蛋白质治疗药物(包括单克隆抗体(mAb))的电荷异质性可能会影响生物治疗药物的生物活性、安全性和稳定性,所以需要对这种电荷异质性进行表征和监测1。离子交换色谱(IEX)一直被广泛应用于蛋白质电荷异构体的纯化、表征和常规监测分析。由于mAb的等电点(pI)相对较高,与阴离子交换色谱分离相比,阳离子交换色谱(CEX)更适合用于mAb电荷异构体的表征分析。本应用纪要介绍了开发CEX固定pH盐梯度方法时需要考虑的因素。其它与使用pH梯度有关的信息请参阅单独的沃特世应用纪要2。借助沃特世高分离度强阳离子交换色谱柱(即BioResolve SCX mAb)和 Waters AutoBlend Plus技术,可以高效实现盐梯度方法开发,得到可重现、稳定的分离。
IgG4单抗的电荷异质体分离在BioCoreWCX上的分离
BioCore WCX色谱柱创新性的微球技术保证了色谱柱的高柱效、耐压性、耐热性、化学稳定性以及有机溶剂的兼容性。先进的键合技术有效地阻绝生物大分子与疏水性基球的接触、最大限度地降低了生物大分子与固定相间不利的相互作用、确保单抗电荷异质体分离所需的选择性。对IgG4单抗中的电荷异质体具有优良的分离度,并在该缓冲体系中都显示出很好的选择性。
生物兼容液相在单抗样品电荷异质性分析中的应用
本文利用岛津生物兼容液相色谱系统(Nexera Bio)和弱阳离子交换技术(WCX),建立了单抗样品的电荷异质性分析方法。贝伐珠单抗、曲妥珠单抗以及帕妥珠单抗酸性和碱性变异体与主峰分离度良好,方法简单、稳定、可靠,供相关行业参考。
利妥昔单抗创新药物和生物仿制药的电荷异构体及聚集体分析
单克隆抗体是用于治疗各种疾病的一类重要的生物分子。生物仿制药是创新药物分子的复制品,需要详细表征其关键质量属性 (CQA),例如聚集体和电荷异构体。与创新药物相比,这些属性必须处于一定范围内才可获得监管机构批准。本研究采用基于 Agilent 1260 Infinity II 生物惰性液相色谱和 Agilent AdvancedBio 色谱柱的两种分析工作流程,对不同制造商生产的两种利妥昔单抗生物仿制药与创新药物的聚集体和电荷异构体图谱进行了比较。结果显示了创新药物与生物仿制药在聚集体和电荷异构体图谱方面的相似性或差异性。生物仿制药 1 与创新药物在聚集体和电荷异构体方面的相似性高于生物仿制药 2。方法表现出优异的日内和日间重现性。Agilent OpenLab CDS 软件的 Peak Explorer 功能使数据审查一目了然。本研究是一系列利妥昔单抗生物相似性研究的一部分。
IgG2单抗的电荷异质体在BioCoreWCX上的分离
BioCore WCX色谱柱对IgG2 单抗中的电荷异质体具有优良的分离度,并在MES缓冲体系中显示出很好的选择性。
使用光谱和寿命共焦光致发光映射在 VACNT 钙钛矿太阳能电池中成像电荷提取
由于钙钛矿具有高载流子迁移率、大的吸收系数、可调带隙和长载流子扩散长度等特性,卤化物钙钛矿太阳能电池成为目前研究热点。如何有效地将电荷载流子从器件中提取出来是太阳能电池设计中的挑战之一。为了帮助提取电荷,通常会将电子和空穴提取层合并到器件中。垂直排列的碳纳米管 (VACNTs)是目前研究较多的太阳能材料,常被用于空穴提取层。VACNTs空穴提取层的太阳能电池如图 1 所示。VACNTs 在 ITO 电极顶部以网格状图案生长,以实现改进的电荷提取,同时保持ITO/VACNTs 具备较高的光传输功能。光致发光 (PL)强度与钙钛矿中电荷载流子的数量成正比,因此对电荷转移到相邻层中很敏感。这使得基于 PL 的技术对于研究新提取层的性能非常宝贵。在本文中,空穴转移到基于 VACNT 的空穴提取层是通过使用爱丁堡仪器 RMS1000 共焦显微拉曼成像获取到的。
IgG1单抗的电荷异质体在BioCore WCX上的分离
大部分mAb的等电点pI在6-10范围内,其电荷异质体的分离主要由阳离子交换(CEX)来实现。BioCore WCX创新性的微球技术保证了色谱柱的高柱效、耐压性、耐热性、化学稳定性以及有机溶剂的兼容性。先进的键合技术有效地阻绝生物大分子与疏水性基球的接触、最大限度地降低了生物大分子与固定相间不利的相互作用、确保单抗电荷异质体分离所需的选择性。
岛津ICP-MS元素间校正(IEC)评估水样锶双电荷对钙的影响
使用岛津ICPMS-2030工作站LabSolutions ICPMS元素间校正(IEC)功能评估了水样中锶(Sr)双电荷对钙(Ca)测定的影响。使用IEC校正能有效消除常规水样中锶双电荷的影响。
Capel系列毛细管电泳法测定促红细胞生成素中的电荷异质体-LUMEX
传统电荷异质体的分析手段主要依靠平板等电聚焦电泳(IEF),通过等电点差异对电荷异质体进行分离,唾液酸化程度较高的组分相对等电点较低。然而这种方法只能对不同组分进行定性分析,难以对各个组分的相对百分含量进行分析,使用范围十分局限。随着蛋白分析手段的不断进步和发展,基于毛细管电泳分析技术的毛细管区带电泳(CZE)以其快速、高效、准确的分析特点逐步被应用于蛋白的电荷异质体分析。
从 Agilent 1260 Infinity 生物惰性液相色谱仪到 Agilent 1260 Infinity II 生物惰性液相色谱仪的无缝方法转移——利妥昔单抗创新药物和生物仿制药的电荷异构体分析
监测生物药物的电荷异质性对于生产安全有效的药物至关重要,因为电荷分布的改变可能会引起不良免疫反应。本应用简报展示了对利妥昔单抗创新药物及其生物仿制药的电荷异构体的分析。电荷异构体在峰型模式方面表现出相似性,但是创新药物与生物仿制药的单峰的强度则存在明显差异。从 Agilent 1260 Infinity 生物惰性液相色谱仪转换为 Agilent 1260 Infinity II 生物惰性液相色谱仪,所获得的分析结果相当。结果还表明保留时间具有优异的一致性,最大偏差小于 0.5%。两种系统在保留时间和峰面积方面获得了高精度的结果。
用和频光谱(SFG)可视化观测运行中的OFET器件半导体/绝缘体界面处电荷活动状态
采用立陶宛Ekspla公司PL2230型脉冲皮秒激光器和PG501-DFG1P型皮秒光学参量发生器构成的和频光谱测量系统(SFG)对运行中的OFET器件半导体/绝缘体界面处电荷活动状态进行了可视化测量。
用和频光谱(SFG)方法测量有机场效应晶体管半导体/绝缘体界面累积电荷分布
采用立陶宛Ekspla公司的由PL2231-50型脉冲皮秒激光器,PG501-DFG1P高能光学参量发生器构成的和频光谱测量系统,对有机场效应晶体管半导体/绝缘体界面处累积电荷分布进行了实验测量研究。
通过 Agilent 7100 毛细管电泳系统的毛细管等电聚焦进行单克隆抗体电荷异质性分析
单克隆抗体 (mAb) 作为治疗药物具有重要意义,因此人们对能够表征这种复杂分子的高分离度分析方法的需求正不断增长。mAb 的一个重要特性是它的电荷状态可能会在生产过程期间和之后发生变化。而毛细管等电聚焦 (cIEF) 正是一种非常有效的测量 mAb 电荷异质性的方法。本应用简报中展示了如何利用 Agilent 7100 CE 系统的 cIEF 对 mAb电荷异构体进行高分离度的分析。
高效稳定的离子交换(IEX)方法用于生物治疗性药物电荷变异体分析
通过自动化分析技术提高工作效率,稳健的方法开发为生物治疗性药物电荷变异体的确证和定量带来一致且重现性良好的结果,无需制备额外缓冲液,简化方法开发过程并提高方法重现性
通过配体诱导的电荷转移态在量子点中的近红外至可见光上转换
采用立陶宛Ekspla NT342/C/3/UVE型纳秒可调谐光学参量发生器,对配体诱导的电荷转移态在量子点中的近红外至可见光上转换过程进行了实验研究。
通过离子电荷滴定控制碳纳米管的功能化效率
许多微粒系统取决于颗粒悬浮体系的稳定性和再分散能力,而它的PH范围不能太过局限。一种达到稳定性的方法为通过适当的离子端基修饰改变它的界面。越高的离子电荷密度,单个颗粒间的排斥力就越高,从而可以克服范德华吸引力。离子排斥可以通过静电学的颗粒界面电势(PIP)和总的离子表面电势表征。PH稳定范围和总离子电势,都可以通过Stabino II ® 电位滴定轻松控制。
通过SPM实现金纳米粒子聚集体的光诱导电荷分布的可视化
开尔文探针力显微镜(KPFM)是一种将开尔文法应用于扫描探针显微镜(SPM)的分析方法,不仅可以测量样品的表面形貌,还可以检测其表面电势分布。在本文中,在紫外线照射下进行KPFM测试,实现了固定有AuNP的TiO2复合材料表面的光诱导电荷分布的可视化。
扫描探针显微镜(SPM)用于生物忆阻器的电荷存储和捕获能力表征
忆阻器是电阻、电容、电感之外的第四种电路基本元件,具有高速、非易失性、高集成度、兼具信息存储与计算功能等特点。本文采用天然蚕丝作为原材料,制备了一种具有低工作电压、高耐久性的丝素纳米纤维(SNFs)基生物忆阻器,并采用岛津扫描探针显微镜SPM-9700HT的动态模式、电流模式以及表面电势模式(KPFM)表征了SNFs薄膜的开关电压以及对注入电荷的捕获和存储行为。
高效稳定的离子交换(IEX)方法用于生物治疗性药物电荷变异体分析
分析生物制药开发过程中的电荷异质性需要稳定的方法,这种方法不仅要能实现自动化,易于操作,还要能快速吻合生物制药行业的快节奏需求。Auto?Blend Plus技术与ACQUITY UPLC H-Class系统的结合体现了一种以UV为基础的UNIFI生物制药平台解决方案,通过使用一组纯组分实现多种缓冲配比检测,从而简化了方法开发的过程。具备上述特性的Auto?Blend Plus再结合流程自动化功能,成为开发稳定方法和提高工作效率的强大工具。
基于电子舌技术与薄荷脑含量测定优化薄荷闪式水提工艺参数
“湖南中医药大学”选用超高效液相色谱—串联三重四级杆质谱法测定薄荷中薄荷脑含量,并以电子舌味觉响应值共同作为评价指标,正交设计试验法优化薄荷闪式水提工艺参数,为工业化大生产提供依据。
采用 Agilent 8800 电感耦合等离子体串联质谱仪对超纯水中的钙进行超痕量检测
在冷等离子体模式下形成的、等离子体衍生的多原子离子NO+,可通过电荷转移反应在反应池中产生少量的 Ar+,在m/z = 40 处干扰 Ca 的测定。Agilent 8800 ICP-MS/MS 在 ICP-MS/MS 特有的 MS/MS 模式下运行,可以阻止等离子体衍生离子进入反应池,防止多余反应的发生。这可以使 Agilent 8800 电感耦合等离子体串联质谱仪在检测UPW 中的 Ca 时实现 41 ppq 的 BEC
锅炉用水中痕量铜、铁、钠、钙、镁含量的测定(ICP-MS)法
试样溶液中待测元素经雾化系统雾化后形成气溶胶,由载气带入等离子体炬焰中,在高温和惰性气体中被充分蒸发、解离、原子化和电离,转化为带正电荷的离子,经离子采集系统进入质谱仪,质谱仪根据离子的质量电荷比(质荷比)进行分离。各待测元素的质谱响应值与其在样品中的浓度成正比,从而对各元素进行定量分析。
降本增效 - 二维液相在线脱盐技术结合单杆质谱去卷积功能定性寡肽合成工艺中的杂质
利用双三元在线除盐技术,在保留原一维不挥发性流动相的基础上,对样品中的主化合物及杂质进行分离,达到较好的分离度,结合二维色谱柱切换技术实现在线脱盐,二维采用质谱兼容性流动相,将收集环中馏分脱盐后转入质谱,通过去卷积软件处理采集数据,可以了解寡肽样品电荷分布范围及其分子量。该方法重现性良好,自动化程度高,值得推广
MALDI-TOF快速鉴定病毒蛋白类疫苗亚基组成
岛津基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱检测疫苗各亚基存在分布与比例,直接得到了样品单电荷离子、二电荷离子的分子量信息,结果与理论一致。分析速度快、仪器维护方便、性能卓越,是蛋白类疫苗亚基分析的有力工具。
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