请问紫外分光光度计坏了,可以使用酶标仪扫全波长吗?数值需要换算还是直接用就可以?
根据酶标仪国家检定规程中,有一项是测酶标仪波长准确度的,请问酶标仪能测波长吗?
1 酶标仪 要求全波长 国外品牌优先2 荧光定量 带HRM,4通道 ,国外品牌优先方便的话请联系我 邮箱 bioslu@163.com
在用酶联免疫法测定抗原或抗体时,不论是定量试验还是定性试验都要求使用酶标仪进行测定。一般的酶标仪在测定中均有单波长和双波长的模式,并且采用的都是垂直光路。但在日常工作中有时会不太重视单波长和双波长的选择,对使用单、双波长给测定结果带来的较大差异也不很了解,并且实际工作中也出现了使用单波长检测导致抗HCV部分弱阳性的漏检。因此,本人就酶标仪在选择单、双波长使用方面谈谈个人的体会,供同道参考。一 材料和方法1.材料 由上海科华公司提供的乙肝表面抗原测定试剂盒;eppendorf 20-20ul的[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/9p][color=#3333ff][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/9p][color=#3333ff]移液器[/color][/url][/color][/url]。2.仪器 上海科华公司的ST-360酶标仪和BIO-RAD 550酶标仪。3.方法 底物液配制:底物液A、B各5ml混合,加入微量酶标记物,再加入5ml终止液,呈微黄色,混匀待用;利用上海科华公司提供的乙肝表面抗原试剂盒的酶标板,用94孔中准确加入150ul配制好的上述底物液,另2孔中加入150ul已终止的空白底物液作空白。在BIO-RAD 550酶标仪上分别进行450nm单波长和450nm及655nm(无630nm)的双波长检测,在ST-360上分别进行450nm单波长和450nm及630nm的双波长检测吸光度各两次。二 结果 1.分别对所得结果进行统计,发现单、双波长测定结果有较大的差异,双波长测定结果的CV值远小于单波长测定,结果见表1。2.对ST-360两次重复测定结果进行分析,结果基本一致,见表2。表1酶标板吸光度在两台酶标仪上的测定统计结果酶标仪 BIO-RAD550 ST-360 波长 450nm 450nm+655nm 450nm 450nm+630nm 最小值 0.125 0.126 0.130 0.131 最大值 0.154 0.139 0.153 0.141 均值 0.1356 0.1329 0.1399 0.1361 标准差 0.00671 0.00267 0.00467 0.00247 CV(%) 4.94 2.01 3.34 1.82 最大值/最小值 1.232 1.103 1.177 1.076 表2 ST-360酶标仪两次吸光度测定统计结果波长 450mnm 450nm+630nm 1 2 1 2 最小值 0.130 0.129 0.131 0.131 最大值 0.153 0.152 0.141 0.141 均值 0.1399 0.1391 0.1361 0.13711 标准差 0.00467 0.00495 0.00247 0.00229 CV(%) 3.34 3.56 1.82 1.67 三 讨论 1.酶标仪与分光光度计、自动生化分析仪等的吸光度测定有所不同,一般分光光度计是水平光路,而酶标仪则是垂直光路,但测定原理相同,都是使用朗伯-比耳定律,测定的都是样本的吸光度。垂直光的特点是标本吸光度受液体浓缩或稀释的影响小,不足之处是受被测样本液面是否水平、酶标板透光性、孔底是否平整等的影响较大。2.酶标仪在用单波长测定吸光度时,除受到测定干扰(样本的浊度、干扰色等)和电路干扰(包括噪音、漂移、电压等)等因素外,受液体表面张力的影响也很大。在检测过程中,由于液体表面张力的作用,液体的表面不是一个平面,而是形成一个凹面,从侧面看似凹透镜,这样不可避免会影响光路的正常通过。由于凹液面的影响,光线在通过液体时,除正常被液体吸收一部分外,尚有部分被折射和反射(如光线通过凹透镜那样),影响吸光度的检测。而酶标仪使用的又是通过光导纤维传播的点光源,如果每次能在同一部位检测,吸光度的重复性将得到保证,但由于机械运动等造成的误差,不可能保证每孔都在相同部位被检测,因此造成了孔与孔之间有一定的差异。结果见表1,整块板单波长检测的CV在3%以上,吸光度最高值和最低值的相对误差达17%以上。3.在双波长测定中,减少了测定干扰和电路干扰,因此测定结果明显好转,结果见表1,整块板样本的CV在2%以下。ST-360在进行稳定性观察中,如表2所示,两次检测结果基本一致,这表明ST-360的稳定性较好。同时,从表1也可以看到,科华公司生产的ST-360与BIO-RAD 550的检测结果一致,两者的检测性能基本相同。4.由于液体表面张力的不同,导致单波长测定时的误差较大。并且用不同的洗涤剂会影响到最后加入底物和终止液后的液面情况,用加入表面活性剂的洗涤液清洗后,形成的液面更凹,对单波长检测的影响更大,并且与表面活性剂的浓度成正比。而且中性蒸馏水洗涤后,单、双波长检测的结果基本一致。5.在酶联免疫法测定抗原抗体中,由于所使用的底物不论是邻苯二胺(OPD)-H2O2,还是四甲基联苯胺(TMB)-H2O2,显色终止后,在630nm和655nm处的吸光度值都只有吸收峰处(492nm/450nm)吸光度值的1%以下,因此,利用双波长检测,不会影响检测灵敏度。建立在进行酶联免疫检测时,酶标仪比色应该首选双波长。这样可以提高临界值处标本的分析正确度,减少实验误差。
酶标仪使用时为什么要用双波长?而检定时又要用单波长?
各大虾,目前小生想买一台能做荧光,化学发光,还有光吸收的多功能酶标仪,这种仪器总体上有两大类:一是采用滤光片的,另一类是连续波长(采用单色仪),我现在拿不定,请各大虾帮我分析一下这两类的各自的优点.谢谢!
问专家几个关于酶标仪的问题:1。微孔板式紫外可见连续波长酶标仪和连续光谱荧光仪,全自动多功能酶标仪 ,光栅式酶标仪 ,连续光谱扫描式酶标仪,化学发光酶标仪 ,它们有哪些具体不同,应用上有些什么不同2。什么叫终点法检测,动力学法检测3。振板功能作用是什么4。什么叫OD值,测核酸,蛋白质OD值是多少?5,什么是线形回归,多顶式回归,阀值吸光率,多点吸光率2。
Spectramax M2酶标仪安装的6.5软件,怎么使用比色皿测全波长吸收值?设置怎么去除空白值?求大神支教。。
我们准备买一台带荧光连续光谱的酶标仪,请问各位大侠哪个牌子的好。我以前用过美国Molecular Devices的酶标仪,荧光部分重现性不好。
因检测通量较大,最终老板决定买一台全波长的酶标仪缓解分光光度计的压力。前几天设备终于来了是MD的190全波长酶标仪,来了时候就开始测试。因设备自带pathcheck功能可将结果转化成1cm光径OD,但是使用以来发现问题来了:1在利用全波长酶标仪测定磷含量的的时候(波长700nm)测定的结果和紫外分光光度计比较(标曲浓度0.2、0.4、0.6...1.4mg/L)后面几个点数据基本没问题,但是0.2、0.4浓度的点两边数据差别较大,在低浓度下酶标仪检测OD值较分光光度计检测ABS值明显低了很多。然后用酶标仪测定植物酶活(两组实验,分别设置灭活组和非灭活组测定两者吸光值只差),波长为540nm,结果发现用紫外测定时灭活组和非灭活组数据有明显差异且两组数据正常,但是用酶标仪的话灭活组和非灭活组数据差别不大,数据都偏小。所以不敢使用酶标仪检测,还是使用分光光度计检测。等弄清楚问题在用酶标仪,群里有人对这一块熟悉么?
要测胆汁酸含量,我的样品量比较少,想用酶标仪测,但是不知道具体用哪个波长,打算用紫外-可见分光光度计做全波长扫描,请问在酶标仪上可以直接用紫外-可见分光光度仪全扫描的最大吸收波长吗?
我是黑龙江省药品检验所的一名药师。2004年我所买了一台雷勃酶标仪(labsystems Multiskan Ascent),所长签字购买的(他从未咨询我们使用者的意见,就直接购买了,这也是事业单位的一个缺陷:购买者与使用者没有充足的沟通与交流。如果咨询我们的意见,我们也不会买这样一台仪器。不过,还是不提这些吧)。从此,我的痛苦经历就开始了。 这种酶标仪使用滤光片,而不是全波长测定。随机只配4个固定波长滤光片,如果没有实验所需的,只能另外购买。我做的一个检品,需要的是550nm的滤光片,询问雷勃中国总代理,回答没有此波长之滤光片,最接近的只有540nm。没办法,只能对付着用吧。总不能没有合适的滤光片,一买来就报废吧。 使用时,又出现问题了。酶标仪现在由计算机来操控,我在操作时遇到些困难,反复询问雷勃公司的工程师,结果,他也没有跟我说明清楚,我于是就自己按说明书研究起来,结果,由于我的误操作,电路板烧掉了。询问厂家,他说,只能返厂维修。那就填单子维修吧,今年5月中旬(具体日期记不清了)寄到厂家,他说换上电路板就可以了,结果,到6月份上旬才修好。修好以后,说维修费加配件费共3000元。我们所财务科说可以,但你们应该先把发票寄回来,我们才能把款汇过去;维修方呢,说只有你们把款汇过来,我们才能把发票寄过去。财务科说,事业单位的财务政策就是见发票才能汇款,维修方又说,公司的政策是只有先汇款才能寄发票,又举例说沈药有一台酶标仪,维修后也是遇到这种情况,结果维修方就这么坚持,最后沈药妥协了,而那时沈药那台酶标仪已经在维修方那躺半年了。最后双方又扯了一个月的皮,终于,我们妥协了----没办法,谁让仪器在他们手里呢?先把款汇过去,结果又等了一段时间,直到八月初才回到我们手里。这时,距离我们发出仪器已经三个多月了。 仪器回来后,我试了一下仪器,运行起来一切正常,就是,操作时,总是出一个对话框,说什么背景信号太高,不进行检验操作。就这个问题,我又询问了厂家,维护工程师说,他从未遇到过这种问题,若想解决问题,只能返厂维修。我说这又不是什么大问题,你们上门应该就可以解决;再说,刚维修完,又要返厂维修,是不是你们维修不彻底造成的。他说维修后都是经过试验合格后才能出厂的,另外,雷勃公司从来没有上门维修这一项服务,若想解决问题,只能返厂维修。我又问,如果路上出现问题怎么办,他回答说,这就是你们的问题了。 [em16] 我们所买了很多仪器,有安捷伦、迪马、岛津、沃特斯、伊利特、梅特勒等国内外许多厂家的仪器,每个厂家的售后服务都是可圈可点,还有定期回访等等个性化服务。但我从来没见见过这么牛叉的厂家,从未为客户着想,售后又如此得一塌糊涂。建议大家以后不要卖他们家的仪器了。
要用酶标仪测全波长扫描,要用什么酶标板啊?普通的酶标板好像不行啊,在紫外区没法测啊
[font='宋体'][size=21px][color=#000000]【仪器心得】[/color][/size][/font][font='宋体'][size=21px][color=#222222]Multiskan SkyHigh 全波长酶标仪[/color][/size][/font][font='宋体'][size=21px]使用心得[/size][/font]1. [font='宋体'][size=18px]背景[/size][/font][font='宋体'][size=13px][color=#222222]Multiskan SkyHigh 全波长酶标仪是一种紫外/可见光微孔板分光光度计,可轻松胜任几乎所有光度测量,尤其是 DNA、RNA 和蛋白质分析以及浊度测量。Multiskan SkyHigh 系统提供各种配置,可灵活满足多种需求。带触屏的配置既可独立使用仪器又可与 Thermo Scientific SkanIt PC 软件配合使用[/color][/size][/font][font='宋体'][size=13px][color=#222222]。[/color][/size][/font][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/11/202211301001551950_4555_2256877_3.png[/img]2. [font='宋体'][size=18px]技术参数[/size][/font][font='宋体'][size=13px][color=#000000]2[/color][/size][/font][font='宋体'][size=13px][color=#000000].1 波长范围:200-1000nm,1nm步进[/color][/size][/font][font='宋体'][size=13px][color=#000000]2[/color][/size][/font][font='宋体'][size=13px][color=#000000].2 [/color][/size][/font][font='宋体'][size=13px][color=#000000]测试速度:96孔/6秒,384孔/10秒[/color][/size][/font][font='宋体'][size=13px][color=#000000]2[/color][/size][/font][font='宋体'][size=13px][color=#000000].3 线性@450nm:0-2.5Abs,2%[/color][/size][/font][font='宋体'][size=13px][color=#000000]2[/color][/size][/font][font='宋体'][size=13px][color=#000000].4 正确性@450nm:1% + 0.003Abs[/color][/size][/font][font='宋体'][size=13px][color=#000000]2[/color][/size][/font][font='宋体'][size=13px][color=#000000].5 再现性@450nm:SD≤0.003Abs or CV≤1.0%[/color][/size][/font][font='宋体'][size=18px]3.该设备的优势[/size][/font][align=left][font='宋体'][size=13px][color=#222222]3.1该设备硬件操作简便,[/color][/size][/font][font='宋体'][size=13px][color=#222222]设备[/color][/size][/font][font='宋体'][size=13px][color=#222222]的[/color][/size][/font][url=http://www.bio-equip.com/tz.asp?link=https://www.thermofisher.com/order/catalog/product/N12391M2&source=product&id=4767619][font='宋体'][size=13px][color=#222222]μDrop Duo检测板[/color][/size][/font][/url][font='宋体'][size=13px][color=#222222]专为快速检测小体积样品[/color][/size][/font][font='宋体'][size=13px][color=#222222],[/color][/size][/font][font='宋体'][size=13px][color=#222222]同时[/color][/size][/font][font='宋体'][size=13px][color=#222222]可[/color][/size][/font][font='宋体'][size=13px][color=#222222]分析32个样品。[/color][/size][/font][font='宋体'][size=13px][color=#222222]测完样品后可方便[/color][/size][/font][font='宋体'][size=13px][color=#222222]清除已测样品以进行连续测量[/color][/size][/font][font='宋体'][size=13px][color=#222222];[/color][/size][/font][url=http://www.bio-equip.com/tz.asp?link=https://www.thermofisher.com/order/catalog/product/N12391M2&source=product&id=4767619][font='宋体'][size=13px][color=#222222]μDrop Duo检测板[/color][/size][/font][/url][font='宋体'][size=13px][color=#222222]还具有专用的卧式比色皿测量槽。[/color][/size][/font][font='宋体'][size=13px][color=#222222]这样的设计满足实验室快速处理样品的需求。[/color][/size][/font][font='宋体'][size=13px][color=#222222] [/color][/size][/font][/align][align=left][font='宋体'][size=13px][color=#222222]3.2软件操作也简单,可在几分钟内完成实验设置,[/color][/size][/font][url=http://www.bio-equip.com/tz.asp?link=https://www.thermofisher.com/order/catalog/product/5187149&source=product&id=4767619][font='宋体'][size=13px][color=#222222]SkanIt 软件[/color][/size][/font][/url][font='宋体'][size=13px][color=#222222]具有可视化的工作流程、简单的数据分析和导出功能,[/color][/size][/font][font='宋体'][size=13px][color=#222222]个人认为是符合个性化实验的设计。软件界面如下:[/color][/size][/font][/align][align=left][/align][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/11/202211301001554551_2838_2256877_3.jpeg[/img][font='宋体'][size=18px]4[/size][/font][font='宋体'][size=18px].[/size][/font][font='宋体'][size=18px]使用过程中易报错问题点及解决方法[/size][/font][font='宋体'][size=13px][color=#000000]为了保证仪器持续的稳定性和准确性,应避免干扰光学系统的任何部件。[/color][/size][/font][font='宋体'][size=13px][color=#000000]下面就使用过程中容易出现问题点进行整理:[/color][/size][/font][font='宋体'][size=13px][color=#000000]4.1异常现象:滤光片盘出错[/color][/size][/font][font='宋体'][size=13px][color=#000000] 原因分析:滤光片盘定位出错[/color][/size][/font][font='宋体'][size=13px][color=#000000] 解决方法:检查盘上是否有异物阻碍盘转动,或者检查电机是否正常。[/color][/size][/font][font='宋体'][size=13px][color=#000000]4.2 异常现象:[/color][/size][/font][font='宋体'][size=13px]样品盘出错[/size][/font][font='宋体'][size=13px][color=#000000] 原因分析:[/color][/size][/font][font='宋体'][size=13px]酶标板[/size][/font][font='宋体'][size=13px]上有异物[/size][/font][font='宋体'][size=13px][color=#000000]解决方法:[/color][/size][/font][font='宋体'][size=13px][color=#000000]4.2.1[/color][/size][/font][font='宋体'][size=13px]检查酶标板是否装平在板架上[/size][/font][font='宋体'][size=13px],[/size][/font][font='宋体'][size=13px]4.2.2判断[/size][/font][font='宋体'][size=13px]是否有异物阻碍板架[/size][/font][font='宋体'][size=13px];[/size][/font][font='宋体'][size=13px]4.2.3[/size][/font][font='宋体'][size=13px]导轨是否干净,有无弯曲,齿型带是否破损[/size][/font][font='宋体'][size=13px][color=#000000]4.3异常现象:无灯现象[/color][/size][/font][font='宋体'][size=13px][color=#000000] 原因分析:灯泡故障[/color][/size][/font][font='宋体'][size=13px][color=#000000] 解决方法:更换灯泡。[/color][/size][/font][font='宋体'][size=13px][color=#000000]4.4异常现象:滤光片出错[/color][/size][/font][font='宋体'][size=13px][color=#000000] 原因分析:滤光片能量低[/color][/size][/font][font='宋体'][size=13px][color=#000000] 解决方法:更换新的滤光片。[/color][/size][/font][font='宋体'][size=18px][color=#000000]5.总结[/color][/size][/font][font='宋体'][size=13px][color=#000000]合理正确使用设备是对设备最好的保养,使用设备一定要理解设备工作原理;做到发现问题,分析问题,再解决问题。同一个异常现象,不一定是同一个原因造成。针对酶标仪[/color][/size][/font][font='宋体'][size=13px][color=#000000]确保正常功能和结果的准确,应避免任何液体流入仪器内部,并防尘、防止其他外源性物质[/color][/size][/font][font='宋体'][size=13px][color=#000000]。[/color][/size][/font][font='宋体'][size=13px][color=#000000]不要用手指摸透镜表面、滤光镜、光电检测器。[/color][/size][/font]
随着检验医学的发展,酶标仪在临床检验中得到了越来越广泛的应用。那么,什么样的酶标仪最受临床检验人员欢迎,又应当怎样选择酶标仪呢? 首先,酶标仪体积不宜太大。检验室空间有限,仪器体积太大会占据很多空间,给其他工作带来不便。这也是小巧玲珑、外形美观的机型受人青睐的原因。此外,在检验过程中,经常会有样品液体外溅,所以酶标仪外壳要易于消毒、清洁。 第二,可容纳更多的信息。随着医保制度改期的进行和《医疗事故处理条例》的颁布实施,在处理日趋增多的医疗纠纷过程中,医院事故技术鉴定材料的重要性不言而喻。而检验结果准确与束往往会引起争仪,因此检验中的原始记录即成为判定的依据。在临床检验中,酶标仪比色后的打印记录是最原始的记录之一,如果这份打印记录能显示足够的信息量,将为法律评判提供极大的便利。 第三,仪器操作要简便,国产的酶标仪,菜单应该用中文来显示。尽管目前检验人员的素质有限大幅度提高,懂英语的人也为数不少,但看中文毕竟比看英文方便、明确。有些国内厂商在仿造进口酶标仪时,连显示器上的文字一同“进口”,这种做法值得商榷。 第四,厂商能配置易损部件。酶标仪在临床上使用频率较高,一些部件的损坏率也较高,如放酶标仪的卡夹、滑槽等。厂商能及时地配置易置易损部件,对保证酶标仪正常运行和延长期寿命是非常重要的。第五,对比色和打印的要求。有些医院标本量比较大,酶反应终止后,如果不能及时比色,将会影响检测结果。而一台好的酷标仪能够快捷地进行比色和打印,不仅为检测人员节省了大量的时间,而且确保了检验结婚的准确性。酶标仪的自检和校准从上述所获的酶标仪性能的有关信息资料,基本上可以说是间接的,有了目标以后,如果还想获得对某一酶标仪的感性认识,可以对其进行自检,主要有下述几个方面。(一)外观酶标仪上应有仪器名称,型号,编号,生产厂家,出厂日期和电源电压;各调节旋钮,按键和开关均能正常工作,外表面无明显机械损伤;显示文字应清楚完整。(二)酶标仪的稳定性(漂移) 选用492nm波长,在吸光度o.0A处,测定标称值为1.0A的光谱中性滤光片(测定操作按仪器说明进行),记录仪器示值或均值,10min后再次记录仪器示值或均值,前后两次测定值之差不应超过±0.005A。(三)吸光度测定的准确度选用405,492和620 nm波长,以空气为参比,分别测定标称值为0.5和1.0A的光谱中性玻璃滤光片,用专用测试板代替酶标板,按仪器说明连续测定3次,按下式计算准确度:AA=1/3(A、+A。+A3)—A:(A:为标准值)。(四)吸光度测定的重复性波长选择同(3),在酶标板第一排加注空白溶液,第二排加入浓度为200rig/ml的重铬酸钾溶液,重复测定5次。记录每次测定的第二排吸光度值,取第二排任一孔吸光度值与各次对应孔吸光度值。 (五)酶标仪的线性选用540nm波长,将标称值o.5,1.0A中性滤光片分别放入专用测试板样本位置中,以空气为参比,各重复测定3次;然后将以上两片中性滤光片叠加后置于专用测试板的同一孔位中,重复测定3次。 (五)测定速度的检定 .选用492nm波长,放人96孔酶标板进行测定,用秒表计测仪器打印出全部数据的时间。酶标仪除了在选购时,应尽可能自检外,在使用中也应定期检定,以保证酶标仪测定的有效性。
公司想近期买一款酶标仪可能买低端的(滤波片的)也可能买全波长的(具紫外的)但是,听说有些酶标仪在紫外下检测OD值不准?本来想考虑Thermo来着但是看帖子都说thermo产地上海,质量烂,有点怕怕Biotek的人说他们品牌是最好的,可上来一看,他们的市场占有率也非常有限么Biorad好像还挺贵,比上面两款都贵大家都说MD的好,MD的是不是价格上要贵些,还有我在南方,它售后怎么样究竟买哪个牌子的呢苦死了
酶标仪的选择、自检和校准 一、酶标仪的选择 面对类型如此众多的酶标仪,实验室在选择时往往有难以适从的感觉。一般来说,用于酶免疫测定比色的酶标仪可分为普通酶标仪,多功能全自动酶标仪和全自动酶免疫分析系统等,普通酶标仪的功能基本上相当于一个微孑L板比色计,而多功能全自动酶标仪除了有微孔板比色功能外,还有酶标动力学,紫外乃至凝集等多种检测功能;全自动酶免疫分析系统则有试剂“开放”和“限定”之分,所谓试剂“开放”是指不同品牌的ELISA试剂均可用于该仪器,而试剂“限定”则必须使用仪器专用的酶免测定试剂。实验室在选择酶标仪时,一般应遵循这样几条原则: 1.根据工作需要去选择。切忌刻意去求功能多,因为一则如果仪器功能过多,易出故障,二则有些功能如酶标动力学或凝集等,可能根本就用不上;如果拟购置的酶标仪主要是用于定性测定,则不必要求完美的定量所需的软件系统。至于全自动酶免疫分析系统则对工作量比较大的血站或大型医院较为适用,对于日常工作量不太大的实验室,就无必要。 2.根据酶标仪的性能去选择。反应酶标仪性能的指标主要有测定波长范围,滤光片配置,检测速度,吸光度范围,线性范围,分辨率,准确度,精密度等。 3.根据自己实验室的财力去选择。酶标仪品种类型多,由于性能不一,价格自然也就相差较大,实验室可根据自己的财力去选择性能/价格比较为合适的酶标仪。 4.根据售后服务去选择。实验室仪器买了以后,就跟我们家里使用的家用电器一样,在使用过程中及使用一段时间之后,很可能就会有保修或维修方面的问题,因此一定要选择售后服务好的公司的酶标仪。 5.根据实验室人员的外语水平去选择。进口酶标仪现有不少已使用中文人机对话,对于英语上有困难的实验室,应尽可能选用此类酶标仪。 确定了选择原则以后,就是怎样去选择了。选择的步骤首先是要获取有关酶标仪的信息资料,一般有这样几条途径: ①向已购不同酶标仪的多家实验室同行咨询访问,获取最直接的使用效果的信息; ②酶标仪销售商的信息广告及介绍; ③权威机构的仪器评估报告。 获取了尽可能多的酶标仪信息资料后,就是对不同类型的酶标仪的性能指标进行比较,选择较为适合本实验室的一种或二,三种再向销售商作进一步的详细咨询了解,以决定选择哪一种进行自检。二、酶标仪的自检和校准从上述所获的酶标仪性能的有关信息资料,基本上可以说是间接的,有了目标以后,如果还想获得对某一酶标仪的感性认识,可以对其进行自检,主要有下述几个方面。 (一)外观 酶标仪上应有仪器名称,型号,编号,生产厂家,出厂日期和电源电压;各调节旋钮,按键和开关均能正常工作,外表面无明显机械损伤;显示文字应清楚完整。 (二)酶标仪的稳定性(漂移) 选用492nm波长,在吸光度o.0A处,测定标称值为1.0A的光谱中性滤光片(测定操作按仪器说明进行),记录仪器示值或均值,10min后再次记录仪器示值或均值,前后两次测定值之差不应超过±0.005A。 (三)吸光度测定的准确度 选用405,492和620 nm波长,以空气为参比,分别测定标称值为0.5和1.0A的光谱中性玻璃滤光片,用专用测试板代替酶标板,按仪器说明连续测定3次,按下式计算准确度:AA=1/3(A、+A。+A3)—A:(A:为标准值)。 (四)吸光度测定的重复性 波长选择同(3),在酶标板第一排加注空白溶液,第二排加入浓度为200rig/ml的重铬酸钾溶液,重复测定5次。记录每次测定的第二排吸光度值,取第二排任一孔吸光度值与各次对应孔吸光度值。按下式计算重复性: (五)酶标仪的线性选用540nm波长,将标称值o.5,1.0A中性滤光片分别放入专用测试板样本位置中,以空气为参比,各重复测定3次;然后将以上两片中性滤光片叠加后置于专用测试板的同一孔位中,重复测定3次。线性误差: 式中A1为第一片中性滤光片吸光度均值,A:为第二片中性滤光片吸光度均值,A1,2为两片中性滤光片叠加后的吸光度均值。 (六)测定速度的检定 . 选用492nm波长,放人96孔酶标板进行测定,用秒表计测仪器打印出全部数据的时间。 酶标仪除了在选购时,应尽可能自检外,在使用中也应定期检定,以保证酶标仪测定的有效性。 附:200ttg/ml重铬酸钾溶液的配制 将重铬酸钾固体试剂放人称量瓶中(去盖)置于烘箱中,在105±5℃下烘2h后,置于干燥器内冷却30min,在分析天平上准确称取o.2829g,置于100ml烧杯中,用o.05mol/L稀硫酸溶解后,移入500ml容量瓶中,以少量o.05mol/L稀硫酸洗烧杯3次,洗液并入容量瓶中,用0.05mol/L稀硫酸稀释至刻度线,摇匀。
我们实验室二年前买了一台tecan infinite 200酶标仪,近来做实验需要用到荧光全波长扫描,但一直报错,而吸光和荧光检测还可以做。荧光全波长扫描此功能以前从未用过,而现在发现不能用,工程师说是光栅坏了,需要更换或维修,但价格非常不菲,请问各位高手光栅坏了还能做吸光和荧光检测吗? 另外,全波长扫描此功能我们以前从未用过,因此我怀疑该仪器出厂时就有问题,我如何证明该仪器出厂就有问题呢?
是电磁波,波长100nm~400nm称为紫外光, 400nm~780nm之间的光可被人眼观察到,大子780nm称为红外光。人们只所以能够看到色彩,是因为光照射到物体上被物体反射回来。绿色植物之所以是绿色,是因为植物吸收了光中的红色光谱。酶标仪测定的原理是在特定波长下,检测被测物的吸光值。 检测单位: 光通过被检测物,前后的能量差异即是被检测物吸收掉的能量,特定波长下,同一种被检测物的浓度与被吸收的能量成定量关系。 检测单位用OD值表示, OD是optical delnsity(光密度)的缩写,表示被检测物吸收掉的光密度, OD=1og(1/trans),其中trans为检测物的透光值。根据Bouger-amberT-beer法则,OD值与光强度成下述关系:E=OD=logΙ0/Ι其中E表示被吸收的光密度, Ι0 为在检测物之前的光强度,Ι为从被检测物出来的光强度。 OD值由下述公式计算: E=OD=C×D×E C为检测物的浓度 D为检测物的厚度 E为摩尔因子 在特定波长下测定每一种物质都有其特定的波长,在此波长下,此物质能够吸收最多的光能量。如果选择其它的波长段,就会造成检测结果的不准确。因此,在测定检测物时,我们选择特定的波长进行检测,称为测量波长。 但是每一种物质对光能量还存在一定的非特异性吸收,为了消除这种非特异性吸收,我们再选取一个参照波长,以消除这个不准确性。在参照波长下,检测物光的吸收最小。检测波长和参照波长的吸光值之差可以消除非特异性吸收。 Anthos 酶标仪检测值计算 仪器中的检测器接收透过被检测物的光能量,转换成二进位数字信号,最大为4095。仪器定义没有光源下的透光值为 0%,没有检测物的透光值为100%。则实际检测中,检测物的透光值均在 0%一100%之间。透光值的计算如下: T=(Meas—Min)/(Max—Min) 其中T为透光值, Meas为检测的二进位数值, Min为在 0%的情况下检测的二进位数值, Max为在100%的情况下检测的二进位数值,举例如下: MaX=3600 Mn=20 Meas=30 T=(30-20)/3600-20)=0.0028 OD=1og(1/T)=1og(1/0.0028)=2.552 Anthos 酶标仪的中心定位 仪器会自动对酶标孔进行中心定位,中心定位是要消除酶标孔底的凸凹引起的厚薄不均带来检测的不准确。在对每一个酶标仪进行检测时,仪器其实要进行35个点的测量,选取最中间的5个点的均值为本孔的OD值。 光源的参照通道 参照通道是用来校准由于电压不稳或灯泡磨损带来的影响。 酶标仪的用途和其它提示 用于ELISA试剂的测定,广泛用于各种实验室,包括临床实验室。 质量控制 质量控制是试剂检测的重要因素。请按照试剂说明书的要求进行质量控制。 空白校正 有一些试剂盒的说阴书将空白孔设置为空气,其它大多数空白孔的设置是用试剂来设置的,请按照试剂盒的 说明书要求进行。 检测结果的解释 由于有相当多的因素会影响检测的结果,如不同的酶标板,检测试剂的体积,都会造成OD值的不同,因此, 只有使用同一酶标板反应的试剂检测结果才能比较和分析。对结果的临床解释请依照试剂盒的说明书进行。
分光光度计和酶标仪区别分光光度计:利用单色仪或特殊光源提供的特定波长的单色光通过标样和被分析样品,比较两者的光强度来分析物质成分的光谱仪器。分光光度法则是通过测定被测物质在特定波长处或一定波长范围内光的吸收度,对该物质进行定性和定量分析。常用的波长范围为:(1)200~400nm的紫外光区,(2)400~760nm的可见光区,(3)2.5~25μm(按波数计为4000cm~400cm)的红外光区。所用仪器为紫外分光光度计、可见光分光光度计(或比色计)、红外分光光度计或(或原子吸收分光光度计)。酶标仪:实际上就是一台变相的专用光电比色计或分光光度计,其基本工作原理与主要结构和光电比色计基本相同。酶标仪按照功能的不同划分,可以分为(1)光吸收酶标仪(可见酶标仪,紫外/可见酶标仪)(2)荧光酶标仪(3)化学发光酶标仪。分光光度计和酶标板存在一些不同之处,具体差别体现在以下几个方面:(1)盛装待测溶液的容器:分光光度计用的是比色皿,酶标仪使用的是塑料微孔板(酶标板)。比色皿只能起到盛装溶液的作用,每个比色皿一次只能盛装一种溶液。酶标板常用透明的聚乙烯材料制成,对抗原抗体有较强的吸附作用,因此用它作为固相载体,酶标板通常为48孔或96孔,每个微孔可以盛装不同的溶液。(2)光路的方向:分光光度计是水平光路,而酶标仪则是垂直光路。由于酶标板盛样本的塑料微孔板是多排多孔的,光线只能垂直穿过,因此酶标仪的光束都是垂直通过待测溶液和微孔板的,光束既可是从上到下,也可以是从下到上穿过比色液。垂直光的特点是标本吸光度受液体浓缩或稀释的影响小,不足之处是受被测样本液面是否水平、酶标板透光性、孔底是否平整等的影响较大。(3)光路的长度:由于光密度(OD值)与吸光系数, 待测组分的浓度以及光路长度成正比关系。分光光度计采用的比色杯的宽度通常是1cm,所以光路长度固定为1cm。因此不同仪器,不同批次测量的数据具有同样的可比性。而酶标仪采用的是垂直光路, 所以光路的长度应该是液体液面的高度。所以测得的值受到样品的体积的影响。[font=宋体
各位大虾好!我前一段时间因为有事没有使用酶标仪,走之前还是好的,回来之后就有问题了:开机输入00000密码后,屏幕上显示:“checkmark validation program”,然后按“start”键,屏幕就显示“405nm 1 of 8”、“405nm 2 of 8”……”、“405nm 8 of 8”、“450nm 1 of 8”、“450nm 2 of 8”、……“450nm 8 of 8”……一直这样,就是不能读板,请问大虾我的酶标仪出什么问题了?会不会是被别人调了选择双波长?
一、酶标仪的选择面对类型如此众多的酶标仪,实验室在选择时往往有难以适从的感觉。一般来说,用于酶免疫测定比色的酶标仪可分为普通酶标仪,多功能全自动酶标仪和全自动酶免疫分析系统等,普通酶标仪的功能基本上相当于一个微孑L板比色计,而多功能全自动酶标仪除了有微孔板比色功能外,还有酶标动力学,紫外乃至凝集等多种检测功能;全自动酶免疫分析系统则有试剂“开放”和“限定”之分,所谓试剂“开放”是指不同品牌的ELISA试剂均可用于该仪器,而试剂“限定”则必须使用仪器专用的酶免测定试剂。实验室在选择酶标仪时,一般应遵循这样几条原则:1.根据工作需要去选择。切忌刻意去求功能多,因为一则如果仪器功能过多,易出故障,二则有些功能如酶标动力学或凝集等,可能根本就用不上;如果拟购置的酶标仪主要是用于定性测定,则不必要求完美的定量所需的软件系统。至于全自动酶免疫分析系统则对工作量比较大的血站或大型医院较为适用,对于日常工作量不太大的实验室,就无必要。2.根据酶标仪的性能去选择。反应酶标仪性能的指标主要有测定波长范围,滤光片配置,检测速度,吸光度范围,线性范围,分辨率,准确度,精密度等。3.根据自己实验室的财力去选择。酶标仪品种类型多,由于性能不一,价格自然也就相差较大,实验室可根据自己的财力去选择性能/价格比较为合适的酶标仪。4.根据售后服务去选择。实验室仪器买了以后,就跟我们家里使用的家用电器一样,在使用过程中及使用一段时间之后,很可能就会有保修或维修方面的问题,因此一定要选择售后服务好的公司的酶标仪。5.根据实验室人员的外语水平去选择。进口酶标仪现有不少已使用中文人机对话,对于英语上有困难的实验室,应尽可能选用此类酶标仪。确定了选择原则以后,就是怎样去选择了。选择的步骤首先是要获取有关酶标仪的信息资料,一般有这样几条途径:①向已购不同酶标仪的多家实验室同行咨询访问,获取最直接的使用效果的信息;②酶标仪销售商的信息广告及介绍;③权威机构的仪器评估报告。获取了尽可能多的酶标仪信息资料后,就是对不同类型的酶标仪的性能指标进行比较,选择较为适合本实验室的一种或二,三种再向销售商作进一步的详细咨询了解,以决定选择哪一种进行自检。二、酶标仪的自检和校准从上述所获的酶标仪性能的有关信息资料,基本上可以说是间接的,有了目标以后,如果还想获得对某一酶标仪的感性认识,可以对其进行自检,主要有下述几个方面。(一)外观酶标仪上应有仪器名称,型号,编号,生产厂家,出厂日期和电源电压;各调节旋钮,按键和开关均能正常工作,外表面无明显机械损伤;显示文字应清楚完整。(二)酶标仪的稳定性(漂移) 选用492nm波长,在吸光度o.0A处,测定标称值为1.0A的光谱中性滤光片(测定操作按仪器说明进行),记录仪器示值或均值,10min后再次记录仪器示值或均值,前后两次测定值之差不应超过±0.005A。(三)吸光度测定的准确度选用405,492和620 nm波长,以空气为参比,分别测定标称值为0.5和1.0A的光谱中性玻璃滤光片,用专用测试板代替酶标板,按仪器说明连续测定3次,按下式计算准确度:AA=1/3(A、+A。+A3)—A:(A:为标准值)。(四)吸光度测定的重复性波长选择同(3),在酶标板第一排加注空白溶液,第二排加入浓度为200rig/ml的重铬酸钾溶液,重复测定5次。记录每次测定的第二排吸光度值,取第二排任一孔吸光度值与各次对应孔吸光度值。按下式计算重复性:(五)酶标仪的线性选用540nm波长,将标称值o.5,1.0A中性滤光片分别放入专用测试板样本位置中,以空气为参比,各重复测定3次;然后将以上两片中性滤光片叠加后置于专用测试板的同一孔位中,重复测定3次。线性误差:式中A1为第一片中性滤光片吸光度均值,A:为第二片中性滤光片吸光度均值,A1,2为两片中性滤光片叠加后的吸光度均值。(六)测定速度的检定 .选用492nm波长,放人96孔酶标板进行测定,用秒表计测仪器打印出全部数据的时间。酶标仪除了在选购时,应尽可能自检外,在使用中也应定期检定,以保证酶标仪测定的有效性。附:200ttg/ml重铬酸钾溶液的配制将重铬酸钾固体试剂放人称量瓶中(去盖)置于烘箱中,在105±5℃下烘2h后,置于干燥器内冷却30min,在分析天平上准确称取o.2829g,置于100ml烧杯中,用o.05mol/L稀硫酸溶解后,移入500ml容量瓶中,以少量o.05mol/L稀硫酸洗烧杯3次,洗液并入容量瓶中,用0.05mol/L稀硫酸稀释至刻度线,摇匀。
公司最近要用ELISA方法测食品中的gliadin,要求波长为414nm,想询问下酶标仪哪些牌子和型号的比较适合。
Infinite M200 PRO 多功能酶标仪,为什么突然不能设置全波长了,只有固定两个波长。[img=,690,517]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2023/12/202312171223125796_7032_6258352_3.png[/img][img=,690,920]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2023/12/202312171223130448_7727_6258352_3.png[/img]
今天使用了一下酶标仪,光知道操作,但是不知道原理,所以从网上查了查,正好和大家分享下^_^ 酶标仪测定的原理是在特定波长下,检测被测物的吸光值。 特定波长下,同一种被检测物的浓度与被吸收的能量成定量关系。 检测单位用OD值表示, OD是optical delnsity(光密度)的缩写,表示被检测物吸收掉的光密度, OD=1og(1/trans),其中trans为检测物的透光值。根据Bouger-amberT-beer法则,OD值与光强度成下述关系: E=OD=logΙ0/Ι其中E表示被吸收的光密度, Ι0 为在检测物之前的光强度,Ι为从被检测物出来的光强度。 OD值由下述公式计算: E=OD=C×D×E C为检测物的浓度 D为检测物的厚度 E为摩尔因子 在特定波长下测定每一种物质都有其特定的波长,在此波长下,此物质能够吸收最多的光能量。如果选择其它的波长段,就会造成检测结果的不准确。因此,在测定检测物时,我们选择特定的波长进行检测,称为测量波长。 但是每一种物质对光能量还存在一定的非特异性吸收,为了消除这种非特异性吸收,我们再选取一个参照波长,以消除这个不准确性。在参照波长下,检测物光的吸收最小。检测波长和参照波长的吸光值之差可以消除非特异性吸收。 Anthos 酶标仪检测值计算 仪器中的检测器接收透过被检测物的光能量,转换成二进位数字信号,最大为4095。仪器定义没有光源下的透光值为 0%,没有检测物的透光值为100%。则实际检测中,检测物的透光值均在 0%一100%之间。透光值 的计算如下: T=(Meas―Min)/(Max―Min) 其中T为透光值, Meas为检测的二进位数值, Min为在 0%的情况下检测的二进位数值, Max为在100%的情况下检测的二进位数值,举例如下: MaX=3600 Mn=20 Meas=30 T=(30-20)/3600-20)=0.0028 OD=1og(1/T)=1og(1/0.0028)=2.552 Anthos 酶标仪的中心定位 仪器会自动对酶标孔进行中心定位,中心定位是要消除酶标孔底的凸凹引起的厚薄不均带来检测的不准确。在对每一个酶标仪进行检测时,仪器其实要进行35个点的测量,选取最中间的5个点的均值为本孔的OD值。 光源的参照通道 参照通道是用来校准由于电压不稳或灯泡磨损带来的影响。 酶标仪的用途和其它提示 用于ELISA试剂的测定,广泛用于各种实验室,包括临床实验室。 质量控制 质量控制是试剂检测的重要因素。请按照试剂说明书的要求进行质量控制。 空白校正 有一些试剂盒的说阴书将空白孔设置为空气,其它大多数空白孔的设置是用试剂来设置的,请按照试剂盒的说明书要求进行。 检测结果的解释 由于有相当多的因素会影响检测的结果,如不同的酶标板,检测试剂的体积,都会造成OD值的不,因此,只有使用同一酶标板反应的试剂检测结果才能比较和分析。对结果的临床解释请依照试剂盒的说明书进行。 酶标仪的使用注意事项 1、工作环境 酶标仪是一种精密的光学仪器,因此良好的工作环境不仅能确保其准确性和稳定性,还能够延长其使用寿命。根据DIN VDE 0871条例,仪器应放置在无磁场和干扰电压的位置。依据DIN 45 635 -19条例: 仪器应放置在低于40分贝的环境下。 为延缓光学部件的老化,应避免阳光直射。 操作时环境温度应在15℃-40℃之间,环境湿度在15%-85%之间。 操作电压应保持稳定。 操作环境空气清洁,避免水汽,烟尘。 保持干燥、干净、水平的工作台面,以及足够的操作空间。 2、操作注意事项 酶标仪的功能是用来读取酶联免疫试剂盒的反应结果,因此要得到准确结果,试剂盒的使用必须规范。许多医院在使用酶标仪之前是通过目测判断结果,操作过程随意性较大,在使用酶标仪后如果不能及时纠正操作习惯,会造成较大误差。在酶标仪的操作中应注意以下事项: 使用加液器加液,加液头不能混用。 洗板要洗干净。如果条件允许,使用洗板机洗板,避免交叉污染。 严格按照试剂盒的说明书操作,反应时间准确。 在测量过程中,请勿碰酶标板,以防酶标板传送时挤伤操作人员的手。 请勿将样品或试剂洒到仪器表面或内部,操作完成后请洗手。 如果使用的样品或试剂具有污染性、毒性和生物学危害,请严格按照试 剂盒的操作说明,以防对操作人员造成损害。 如果仪器接触过污染性或传染性物品,请进行清洗和消毒。 不要在测量过程中关闭电源。 对于因试剂盒问题造成的测量结果的偏差,应根据实际情况及时修改参数,以达到最佳效果。 使用后盖好防尘罩。 出现技术故障时应及时与厂家联系,切勿擅自拆卸酶标仪。
作为微孔板比色计的酶标仪,其基本功能为测定波长范围、吸光度范围、光学系统、检测速度、震板功能、温度控制、定性和定量测定软件等功能,当然全自动酶免疫分析系统还具有自动洗板、温育、加样等功能
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1。方法与原理1。1滤光片波长精度检查及其峰值测定 1。1。1方法及其衡量的标准:用高精度紫外可见分光光度计(波长精度±0。3nm)对不同波长的滤光片进行光谱扫描,检测值与标定值之差即为滤光片波长精度,其差值越接近于零且峰值越大表示滤光片的质量越好,波长精度越高。 1。1。2理论基础:酶标仪的滤光片质量好坏,直接影响仪器的灵敏度高低,而滤光片的质量又是以其波长精度及其峰值指标来衡量的,因此滤光片波长精度及峰值是衡量酶标仪的重要参数之一,这在厂家的仪器说明书中虽未曾提及,但在仪器的实际使用过程中,我们发现对滤光片波长精度和峰值进行检查是重要的也是必要的,通过检查可以发现滤光片的波长标定值与实测值的符合程度,可以发现滤光片的质量是否符合要求。 1。2灵敏度和准确度的监测 1。2。1方法: ①灵敏度:精确配制6ug/ml重铬酸钾(干燥)溶液(0。05mo1/L硫酸溶解),加入200ul重铬酸钾溶液于小孔杯中,以0。05mo1/L硫酸溶液作空白,于450nm(参比波长650nm)测定,其吸光度应≥0。01A。 ②准确度:准确配制:1mmo/L对硝基苯酚(提纯品)水溶液,然后以10mmo1/L氢氧化钠溶液25倍稀释之,加入200ul稀释液于小孔杯中,以10mmo1/LNaOH溶液作空白,于405nm(参比波长650nm)检测,其吸光度应在0。4A(0。395~0。408A)左右。 1。2。2说明:仪器的灵敏度和准确度主要受两个因素影响:一是滤光片波长的精度,二是检测器的质量。通常情况下,滤光片原因导致仪器的灵敏度和准确度下降比较容易检查;而检测器上海口腔医院质量区别则不易被发现,因此我们采用上述两种标准物质溶液对仪器检测器的质量进行定期监测,从而保证了仪器检测结果的可靠性。对于仪器准确性的测定,我们采用了文献报道的方法,经过多次在不同型号仪器间进行反复测定,结果发现该标准物溶液在450nm波长处有一较为恒定的测定值,由于酶标仪与其它分光光度计的光学原理不完全相同,故是否可以作为评价酶标仪准确性的参考方法还有待同行进一步研究考证。 1。3通道差与孔间差检测 1。3。1方法及其表达方法: ①通道差检测:取一只酶标板小孔杯(杯底须光滑、透明、无划痕、无污染)以酶标板架作载体,分别加入三种不同浓度的甲基橙溶液200ul先后置于8个通道的对应位置,蒸馏水调零,采用双波长(测定波长490nm,参比波长630或650nm,以下均相同)连续测三次,观察其不同通道之间测量结果的一致性可用极差值来表示其通道差。 ②孔间差的测量:选择同一厂家、同一批号酶标板条(8条共96孔)分别加入200ul甲基橙溶液(吸光度调至0。065~0。070A)先后置于同一通道,蒸馏水调零,采用双波长检测,其误差大小用±1。96s衡量。 1。3。2理论解释:为了提高酶标仪的检测速度,根据96孔酶标板的规格特点,目前大多数厂家的中、高档酶标仪均采用8通道的检测器(部分中、低档酶标仪目前仍采用单通道)。因而它们每个通道的检测能力是不尽相同的,它是仪器内部的固有误差,与所测溶液浓度成正相关(不同检测器对不同浓度溶液的响应能力不同),所以通道差是衡量酶标仪性能良好与否的重要指标之一;其衡量指标用极差表示,这与厂家推荐的指标是一致的;极差值越接近于零,通道差越小,说明同一样品于不同通道检测结果的一致性越好。 由于不同厂家、不同批号酶标板之间的质量区别,导致孔与孔之间的检测结果也不完全一致,这与水平光路光度计的比色皿质量是否符合要求一样,因此我们认为孔间差是仪器外部的固有误差,只有准确测知孔间差,并对结果作出对应的校正,才能使检验结果更符合实际情况、更准确可靠;采用的评价指标(士1。96s)也是有利于结果校正的。另外,在设计孔间差测量的操作方法上,我们将200ul甲基橙溶液吸光度调至0。065~0。070A,是充分考虑到加样器的误差(上海求精公司,200ul,士2%CV),其目的是使加样误差控制在仪器的分辨率(0。01A)以下,这样也就避免了孔间差结果不因加样误差而导致假性增高。 1。4零点飘移 1。4。1方法:取八只小孔杯,分别置于八个通道的对应位置,均加入200ul蒸馏水并调零,采用双波长或单波长(490nm)每隔30min测定一次,观察8个通道4h内的吸光度变化。其与零点的差值即为零点飘移。 1。4。2测量原理:酶标仪的零点飘移通常是很小的,这是由于仪器在读数之前,先要做8个通道的本底测量(Io)。然后再读取样品板的各孔测定值(I),根据Beer‘slaw光吸收值=1ogl0(Io/I),每次读数经过如此的自动校正,使得读数误差大大降低,如次的测读方法无疑是非常正确的的;另外有的仪器是应用“DRLDYE”检测试条来进行绝对吸光度的校准的,因此在采用单波长测量时,会导致吸光度的假性增高,这种仪器可采取两种方法进行校正,一是选择一合适的参比滤光片进行双波长测定,二是引入修正参数,即在吸光度模式下单波长读取1个空白孔,其测试值和预测值之差值即为修正参数。所以零点飘移是评价仪器在一定时间内零点吸光度的变化趋势,与波长无关,它间接地反映了仪器内部检测系统在单位时间内处于工作状态下的稳定性及仪器的机械性能情况(连续进板、检测、退出),故它是评估仪器内部电路系统、光学系统(检测器)及机械系统良好与否的指标。 1。5精密度评价 1。5。1方法及评价指标:每个通道三只小杯,分别加入200ul高、中、低三种不同浓度的甲基橙溶液,蒸馏水调零,采用双波长作双份平行测定,每日测定两次,连续测定20天。分别计算其批内精密度、日内批间精密度、日间精密度和总精密度及对应的CV值。 1。5。2理论根据:1984年美国临床实验室标准委员会发表了EP5一T文件并于1992年进行了第二次修订:临床化学仪器精密度性能的用户评价。该评价方案在生化详解仪、血细胞计数仪等仪器和试剂的评价中得到了广泛的应用,使评价仪器的方法得到了统一;而该法应用于酶标仪的评价在国内外则尚未见有类似的报道,我们采用该法对酶标仪进行系统评价,结果是比较满意的。各指标的意义为:批内精密度系由20d中每天两批,每批两次之差(即“批内”)经统计学处理后所得的结果;日内批间精密度系由20d中每天两批测定结果均值之差(即“批间”)经统计学处理后所得的结果;日间精密度表示20d中每天所测均值的标准差即标准误,反映了每日均值的离散度;总精密度则是对批内、批间和日间精密度进行加权统计的结果。其中以批内精密度和总精密度的应用最为广泛,与传统的批内精密度的计算方法(即对同一标本在同一天内同时重复测定多次)相比,前者更符合实验室的实际情况,更有代表性,也更加合理;而总精密度则客观地全面地反映了实验室的总体变异情况。 1。6线性测定 1。6。1方法:精确称取甲基橙配制5个系列浓度的溶液,采用双波长平行检测8次求其均值。计算回归方程、相关系数r及标准估计误差Sy,x,并用±1。96Sy,x表示样品的95%测量范围。1。6。2评价指标解释:线性测定也是评价仪器的重要手段之一,因为它是仪器开展定量工作的基础和前提,某些厂家用标准估计误差s来衡量线性,这与实验室通常所采用的相关系数r是一致的,因此在进行线性评估时,我们同时报告r和Sy,x,目的是为了增强用户与厂家之间的可比性。 1。7双波长评价 1。7。1方法:在运用酶标仪检测样品时,由于溶液中的小气泡、杯底的水纹印及划痕、小孔杯之间透明度的区别等等,这些都是仪器测定过程中最常见的干扰因素,而标本中的干扰组份(如溶血、黄道)因洗涤而对测定结果影响则较小,因此我们将文献中的双被长评价方法改为:取同一厂、同一批号酶标板条(每个通道2条共24孔)每孔加入200ul甲基橙溶液(吸光度调至0。065~0。070A)先后于8个通道分别采用单波长(490nm)和双波长(测定波长490nm、参比波长630/650nm)进行检测,计算单波长和双波长测定结果的均值、离散度,比较各组之间是否具有统计学区别以考察双波长清除干扰因素的效果。 1。7。2说明:双波长测定过程中,由于标本中干扰组份的存在以及小孔杯本身质量等原因,常常导致测定结果的假性增高,而酶标仪提供的双波长测定功能则可以消除干扰组份或因素对测定结果的影响。对于标本中干扰组份的清除,在选择参比波长时,我们
酶标仪校正程序1.滤光片波长精度检查:将不同波长的滤光片从酶标仪上卸下,用UV-2201型紫外-可见分光光度计(波长精度±0.3nm)于可见光区对每个滤光片进行扫描,其检测值与标定值之差为滤光片波长精度。2.通道差与孔间差检测:通道差检测是取一只酶标板小孔杯(杯底须光滑,透明,无污染以酶标板架作载体, 将其(内含200ul甲基橙溶液吸光度调至0.500A左右)置于8个通道的相应位置,蒸溜水调零,1于490nm处连续测三次,观察其不同通道的检测器测量结果的一致性,可用极差值来表示。孔间差的测量是选择同一厂家,同一批号酶标2板条(8条共96孔)分别加入200ul甲基橙溶液(吸光度调至0.100A左右)先后置于同一通道,蒸溜水调零,于490nm处检测,其误差大小用±1.96s衡量。n 零点飘移(稳定性观察):取8只小孔杯分别置于8个通道的相应位置,均加入200ul蒸溜水并调零,于490nm处每隔30分钟测一次,观察各个通道4小时内吸光度的变化。附1:酶标仪校正程序3.精密度评价:每个通道3只小杯分别加入200ul高中低3种不同.浓度的甲基橙溶解,蒸溜水调零,于490nm作双份平行测定,每日测二次(上下午各一次),连续测定20天。分别计算其批内精密度,日内批精密度,日间精密度和总精密度及相应的CV值。4.线性测定:用电子天平精确称取甲基橙配制5个系列的溶液,于490nm平行测8次,取其均值。计算其回归方程,相关系数及标准估计误差s,并用±1.96s表示样品测量的误差范围.双波长测定评价:取一分甲基橙溶液,分别加入3种不同浓度的溶血液(测定波长为490nm,校正波长为585nm),先后于8个通道检测,每个通道测3次,51比较各组之间是否具有统计学差异,以考察双波长消除干扰组分的效果。5.一般酶标仪无585nm滤光片,可选用550nm或630nm滤光片。450nm 滤光片的检定选用普鲁兰溶液(校正波长为630nm)
我们学校有个酶标仪,我想测钠离子和钾离子的浓度不知道能用这个仪器测量么,如果能测量怎么去测,测量钠离子和钾离子的原理是否是吸收光的?可吸收的光波长范围是多少啊?仪器的工作波长范围是多少?谢谢了我急用!!!