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生物质量热仪

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生物质量热仪相关的论坛

  • 微生物质量控制

    大家好!微生物质量控制定量、定性检测怎么做?哪种方法好,求告知,谢谢!有证标准物质/标准样品(如菌落总数标准物质、大肠菌群标准物质等)进行监控,或使用质控样品开展内部质量控制活动。针对微生物定性检测项目,应定期使用标准物质/标准样品、质控样品或用标准菌种人工污染的样品开展内部质量控制。

  • 微生物质量控制

    各位亲,请问微生物质量控制定性、定量怎么做?用什么方法好?求告知,谢谢!标准物质/标准样品(如菌落总数标准物质、大肠菌群标准物质等)进行监控,或使用质控样品开展内部质量控制活动。针对微生物定性检测项目,应定期使用标准物质/标准样品、质控样品或用标准菌种人工污染的样品开展内部质量控制。

  • 【讨论】微生物质量控制如何开展

    各位老师同仁,有谁比较清楚微生物质量控制方式,结果评价等操作内容,请一起讨论分享。目前理化项目的质量监控结果评价比较好做,但是微生物的比较困难,一般的实验室可能自行难开展或开展少,只是参加一下能了验证活动,如果我们自行开展微生物质量控制可以采取实验室间比对,人员间比较,但是结果如何评价?请指教

  • GC-4100气相色谱仪测热解生物质的热解气

    要用GC-4100[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp][color=#3333ff]气相色谱仪[/color][/url]测热解生物质的热解气,标气怎么配?配置依据是什么?谢谢各位大牛!小白真心求教。

  • 【资料】REACH法规下再生物质承担的义务

    再生流程中,从哪个阶段起REACH法规开始适用?再生过程一般由多个步骤组成,只有最后一步得到不再属于废物,而属于再生物质的产品。因此,不产生“不再属于废物的材料”的所有的再生过程都不受REACH法规的制约,而应受到废物立法的管理。因此,再生物质应当被理解为“曾经作为废物的组成部分,已不再属于废物的物质”。1. 注册当满足以下条件时,再生物质不需要进行注册:(i) 再生物质与已注册的物质相同;(ii) 其可以得到已注册物质根据第31条、32条要求的信息;需要注意的是,该条豁免不要求已有注册必须属于同一供应链。2. 预注册再生物质通常因为已有对同种物质的注册而得到豁免,当物质被注册后,再生物质多数不需要进行注册,但企业却不能确定在预注册期限过后,物质是否会得到注册。因此,建议所有的再生企业,先对再生物质进行预注册,并在他人完成注册后,根据法规2(7)(d)得到注册豁免。3. 信息要求与常规物质一样,需要承担提供SDS的义务。4. 其他义务再生物质通常未被豁免许可、限制和C&L通报中的义务。应当根据相应的指南文件进行分析。

  • 【分享】生物质量 六六六和滴滴涕的测定 气相色谱法

    生物质量 六六六和滴滴涕的测定 [url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]法 Organisms quality—Determination of BHC and DDT---Gas chromatography ( GB/T 14551-93 1994-01-15实施) 本标准适用于生物(动物:如禽、畜、鱼、蚯蚓;植物:如粮食、水果、蔬菜、茶、藕)中六六六和滴滴涕的分析。最低检测浓度为0.0004~0.00487mg/kg。 [img]http://www.instrument.com.cn/bbs/images/affix.gif[/img][url=http://www.instrument.com.cn/bbs/download.asp?ID=145254]生物质量 六六六和滴滴涕的测定 [url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]法[/url]

  • 微波消解煤和生物质的热解焦

    煤和生物质(蓝藻)慢速热解,在惰性气氛中,热解终温1200℃。第一次,0.1g样品,3.5mlHNO3+1.0mlH2O2+1.0mlHF,微波消解终温210℃,时间25min,结果,哎,,全是黑色的,基本上就没消解。。。。。第二次,0.1g样品,先配置成逆王水(HNO3:HCl=3:1),再加逆王水4.5ml+2.0mlHF,一样的消解条件,结果也是一样的,全是黑色的,煤消解掉。。。。。。。但是单纯的煤焦用方法2就消解掉了,,方法1也是不能消解的。。。。。为什么啊,,混合的焦不能消解掉啊。。。。。。。。。。。。。。

  • 【原创大赛】浅谈“人机料法环”几种途径实现饮料生产中的微生物质量控制

    [align=center][color=#444444]浅谈“人机料法环”几种途径实现饮料生产中的微生物质量控制[/color][/align][color=#444444]摘要:对[/color][color=#444444]饮料[/color][color=#444444]生产和[/color][color=#444444]加工[/color][color=#444444]的工厂而言,通过控制[/color][color=#444444]病原体所需的营养成分来控制病原体[/color][color=#444444]是[/color][color=#444444]难以达到目的,因为除特别情形之外大多数饮料[/color][color=#444444]本身就[/color][color=#444444]为病原体生长提供了充足的营养。[/color][color=#444444]而[/color][color=#444444]作为饮料生产企业的[/color][color=#444444]质量[/color][color=#444444]命脉,[/color][color=#444444]各种可能涉及到的微生物污染[/color][color=#444444]对饮料的最终质量,尤其是微生物方面的指标,具有决定性作用。[/color][color=#444444]微生物[/color][color=#444444]对[/color][url=http://www.so.com/s?q=%E4%BA%BA%E7%B1%BB&ie=utf-8&src=internal_wenda_recommend_textn][color=#444444]人类[/color][/url][color=#444444]最重要的影响之一是导致[/color][url=http://www.so.com/s?q=%E4%BC%A0%E6%9F%93%E7%97%85&ie=utf-8&src=internal_wenda_recommend_textn][color=#444444]传染病[/color][/url][color=#444444]的流行[/color][color=#444444],也[/color][color=#444444]能够造成食品、[/color][color=#444444]饮料、[/color][color=#444444]布匹、皮革等发霉腐烂[/color][color=#444444]。美国[/color][color=#444444]FDA给出的食品中危害因子的安全重要性排序,微生物类稳居第一。所以我们进行饮料加工,最重要的质量因素就是微生物的指标,对饮料加工中对于微生物的管控具有重要意义。[/color][color=#444444]在此之前我们应首先了解饮料生产的加工工艺,所有的水、果葡糖浆、浓缩果汁及原浆、维生素矿物质以及其他各类食品添加剂在确定好用量后,要逐一进入调配桶进行调配,然后通过杀菌机进行杀菌,然后进行灌装。[/color][color=#444444]饮料加工[/color][color=#444444]控制微生物方面的质量控制可以由人机料法环等几个方面进行:[/color][color=#444444]第一,[/color][color=#444444]人员微生物管控:[/color][color=#444444]我们要对参与调配、灌装的人员进行管理、约束,制定相应的标准,人员的身体状况每年要进行监控,定期进行体检,取得健康证才能进行授权作业,在每次进入调配或者灌装室的人员都要进行手部擦拭和洁净服的擦拭,确保不带入。[/color][color=#444444]第二,[/color][color=#444444]设备的微生物管控:[/color][color=#444444]我们应对调配桶、灌装机等仪器设备定期进行杀菌清洗,在每一个生产周期至少应该有一次以上的杀菌操作,日常使用的小仪器也应该进行管控,重要的管道也应该定期进行清洗和消毒。[/color][color=#444444]第三,[/color][color=#444444]原料及耗材的微生物管控[/color][color=#444444]在原料和耗材到货后,我们应该对其进行检测,比如原料、调配液、瓶体和瓶盖都应该进行检测,瓶体和瓶盖在进行灌装操作前应进行清洗消毒,并且对其进行微生物的检测。而且重要的是水,所有适用于调配液、灌装的用水都应该进行杀菌消毒并且进行微生物检测,从源头上杜绝微生物的生长和繁殖。[/color][color=#444444]第四,[/color][color=#444444]消毒杀菌方法的微生物管控:[/color][color=#444444]我们在进行消毒杀菌之后,要对其进行微生物的检测,最好是做对比试验,通过检测杀菌前杀菌后的微生物检测判断我们的消毒和杀菌方法是否可行,是否需要进行改进。[/color][color=#444444]第五,[/color][color=#444444]环境的微生物管控:[/color][color=#444444]洁净室的管理,我们在每个生产周期都应该对洁净室进行杀菌消毒,并且对其做沉降菌或者浮游菌的检测,保证环境的可靠。[/color][color=#444444]综上,只有从人机料法环这几步操作中做好切实做好微生物的管控才能够真正的保证我们饮料产品的质量。[/color][color=#444444][/color]

  • 生物质谱技术应用及进展

    生物质谱技术应用及进展   生物质谱因其高灵敏度、高准确度、快速、易于自动化等特点,在生命科学领域的应用和研究日益广泛。本文就其近年来在蛋白质、核酸、糖类、药物代谢以及微生物检验等方面的应用及进展作一综述。 生物质谱;电喷雾;基质辅助激光解吸附;串联质谱 O657.6 A Applications and progress on bio-mass spectrometry YING WAN TAO,QIAN XIAO HONG National Center of Biomedical Analysis, Academy of Military Medical Sciences, Beijing 100850 For its high sensitivity, accuracy, high speed and easy to automate, bio-mass spectrometry develops very fast . This article reviews its applications and latest progress in the field of proteins/peptides, nucleotides, carbohydrates, pharmaceutical metabolism and microbiology in the past years. bio-mass spectrometry; electrospray ionization; matrix-assisted laser desorption ionization; tandem mass spectrometry  1 概述 生命科学的发展总是与分析技术的进步相关联,X射线晶体衍射对DNA双螺旋结构的阐述奠定了现代分子生物学的基础,使人类对微观领域的认识迈出了决定性的一步。原位PCR技术的出现使得生命科学在微观领域的研究不再是可望而不可及。大规模、自动化基因测序技术的问世,使本世纪生命科学领域最宏大的研究项目人类基因组计划的实施比预期一再提前。而后基因组时代,即功能基因组和蛋白质组计划的实施所必需的高通量大规模筛选对分析方法又一次提出了挑战。已发展了一百多年的质谱技术,由于其所具有的高灵敏度,高准确度,易于自动化等特点,毫无疑问地成为解决上述问题的关键手段之一。 自1886年Goldstein发明早期质谱仪器常用的离子源,到1942年第一台单聚焦质谱仪商品化,质谱基本上处于理论发展阶段。随后质谱在电离技术和分析技术上的发展和完善,使之很快应用于地质、空间研究、环境化学、有机化学、制药等多个领域。然而,即使在等离子体解吸(plasma desorption, PD)和快原子轰击(fast atom bombardment, FAB)两项软电离质谱技术出现以后,质谱分析的相对分子质量也只是在几千左右。真正意义上的变革以80年代中期出现的两种新的电离技术:电喷雾电离(electrospray ionization, ESI)和基质辅助激光解吸电离(matrix-assisted laser desorption ionization, MALDI)为代表,这两种技术所具有的高灵敏度和高质量检测范围,使得在fmol (10-15)乃至attomole(10-18)水平检测分子量高达几十万的生物大分子成为可能,从而开拓了质谱学一个崭新的领域棗生物质谱,促使质谱技术在生命科学领域获得广泛应用和发展。 2 生物质谱仪 目前商业化的生物质谱仪,其离子化方式主要是电喷雾电离与基质辅助激光解吸电离,前者常采用四极杆质量分析器,所构成的仪器称为电喷雾(四极杆)质谱仪(ESI-MS),后者常用飞行时间作为质量分析器,所构成的仪器称为基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱仪(MALDI-TOF-MS)。ESI-MS的特点之一是可以和液相色谱、毛细管电泳等现代化的分离手段联用,从而大大扩展了其在生命科学领域的应用范围,包括药物代谢、临床和法医学的应用等;MALDI-TOF-MS的特点是对盐和添加物的耐受能力高,且测样速度快,操作简单。此外可用于生物大分子测定的质谱仪还有离子肼(ion trap, IT)质谱和傅里叶变换离子回旋共振(fourier transform ion cyclotron resonance, FTICR)质谱等。而最近面市最新型的生物质谱仪是液相色谱-电喷雾-四极杆飞行时间串联质谱仪(LC-ESI-MS-MS)与带有串联质谱功能的MALDI-TOF质谱仪,前者是在传统的电喷雾质谱仪的基础上采用飞行时间质量分析器代替四极杆质量分析器,大大提高了仪器的分辨率、灵敏度和质量范围,其商品名有Q-TOF和Q-STAR等;后者是在质谱中加入了源后降解(post-source decay, PSD)模式或碰撞诱导解离(collisionally induced dissociation, CID)模式,从而使生物大分子的测序成为可能。 3 生物质谱的应用 3.1 蛋白质和多肽的分析 3.1.1 分子量测定 分子量是蛋白质、多肽最基本的物理参数之一,是蛋白质、多肽识别与鉴定中首先需要测定的参数,也是基因工程产品报批的重要数据之一。分子量正确与否往往代表着所测定的蛋白质结构正确与否或者意味着一个新蛋白质的发现。生物质谱可测定生物大分子分子量高达400KDa,准确度高达0.1%~0.001%,远远高于目前常规应用的SDS电泳与高效凝胶色谱技术。 3.1.2 肽谱测定 肽谱是基因工程重组蛋白结构确认的重要指标,也是蛋白质组研究中大规模蛋白质识别和新蛋白质发现的重要手段。通过与特异性蛋白酶解相结合,生物质谱可测定肽质量指纹谱(peptide mass fingerprint, PMF),并给出全部肽段的准确分子量,结合蛋白质数据库检索,可实现对蛋白质的快速鉴别和高通量筛选。PMF常和胶上原位酶解相结合,成为蛋白质组研究中必不可少的一种手段。此外根据肽段质量数变化,可对基因产品的插入、缺失、突变进行对比分析。 3.1.3 肽序列测定技术 构成蛋白质的常见氨基酸有20种,一段3个氨基酸的肽段碎片将有8,000种可能的排列方式,4个氨基酸将有160,000种排列方式,即一个特定的4个氨基酸序列的出现概率为1/160,000。因此,即使对于一个相当大的蛋白质组来说,五、六个氨基酸残基的序列片段已具有很高的特异性。串联质谱技术可直接测定肽段的氨基酸序列,从一级质谱产生的肽段中选择母离子,进入二级质谱,经惰性气体碰撞后肽段沿肽链断裂,由所得到的各肽段质量数差值推定肽段序列,用于数据库查寻,称之为肽序列标签技术(peptide sequence tag, PST),目前广泛应用于蛋白质组研究中的大规模筛选。较之传统的Edman降解末端测序技术,生物质谱具有不受末端封闭的限制、灵敏度高、速度快的特点。另外,一种间接的肽序列测定技术即肽阶梯序列技术(peptide ladder sequence),通过末端酶解或化学降解,产生一组相互之间差一个氨基酸残基的多肽系列,经MALDI-TOF-MS鉴定后,由所得到的肽阶梯图中各肽段的分子量差值确定末端的氨基酸序列,从而用于数据库查寻。

  • 生物质谱仪

    自1886年Goldstein发明早期质谱仪器常用的离子源,到1942年第一台单聚焦质谱仪商品化,质谱基本上处于理论发展阶段。随后质谱在电离技术和分析技术上的发展和完善,使之很快应用于地质、空间研究、环境化学、有机化学、制药等多个领域。然而,即使在等离子体解吸(plasma desorption,PD)和快原子轰击(fast atom bombardment,FAB)两项软电离质谱技术出现以后,质谱分析的相对分子质量也只是在几千左右。真正意义上的变革以80年代中期出现的两种新的电离技术:电喷雾电离(electrospray ionization,ESI)和基质辅助激光解吸电离(matrix-assisted laser desorption ionization,MALDI)为代表,这两种技术所具有的高灵敏度和高质量检测范围,使得在fmol (10-15)乃至amole(10-18)水平检测相对分子质量高达几十万的生物大分子成为可能,从而开拓了质谱学一个崭新的领域——生物质谱,促使质谱技术在生命科学领域获得广泛应用和发展。

  • 生物质谱技术培训 上海 4月底

    ABSCIEX 生物质谱新技术培训4月/25日9:00-9:15am ABSCIEX 介绍9:15-10:15am 复旦杨芃原:生物质谱QTOF的仪器技术10:15-10:30am Break10:30-11:15am 实验室考察: 复杂生物样本的蛋白质鉴定11:15-12:00pm AB SCIEX 专家: 蛋白质鉴定和定量的实验设计--5600 QTOF的应用12:00-1:00pm 午餐1:00-2:30pm ABSCIEX 专家(Wenhai): SWATH 技术的实验设计2:30-3:15pm 实验室考察: 建立SWATH 技术的实验流程3:15-3:30pm Break3:30-5:00pm ABSCIEX 专家:SWATH 技术的数据处理4月/26日9:00-9:45am 复旦刘晓慧/陈晨/张磊:疾病生物标志物的鉴定和确认技术9:45-10:15am AB SCIEX 专家:MIDAS 实验设计10:15-10:30am Break10:30-12:00pm 实验室考察: MIDAS 实验流程的建立和数据处理12:00-1:00pm 午餐1:00-2:30pm ABSCIEX 专家: 应用iTRAQ 技术筛选分子标志物2:30-3:30pm 热电公司专家:待定”生命科学中的化学基础协同创新中心”生物质谱培训和讨论班4月/27日9:00-9:50am 复旦杨芃原: 生物质谱的仪器技术概况10:00-10:50am 复旦金红: 组蛋白修饰分析的质谱技术10:50-11:10am Break11:10-12:00 am 诺华/复旦廖日晶: 组蛋白修饰(甲基化)分析的质谱技术12:00-1:00pm 午餐2:00-2:50pm 复旦陆豪杰:磷酸化蛋白的质谱分析3:00-3:50pm 复旦杨芃原/曹玮倩/刘铭琪: 糖修饰蛋白的质谱分析3:50-4:10pm Break4:10-5:00pm 热电公司张伟:Orbitrap质谱的蛋白质组学方法开发与应用进展5:00-5:50pm康昱盛信息科技有限公司: 非标记定量方法的介绍和前期数据质量控制4月/28日9:00-9:50am 复旦申华莉/刘晓慧:蛋白质组测序的深度覆盖技术10:00-10:50am 北京蛋白质组研究中心应万涛:蛋白质谱分析的绝对定量技术10:50-11:10am Break11:10-12:00 am 康昱盛信息科技有限公司:蛋白质组学的IPA生物通路分析方法12:00-1:00pm 午餐2:00-2:30pm 热电公司讲座(欢迎参加)地址:上海市徐汇区东安路130号 复旦大学上海医学院 生物医学研究院 明道楼2楼

  • 【原创】再生物质中杂质的认可

    物质中的杂质一般是比较容易确定的概念。但对于再生物质而言,杂质的判断却较困难,这是因为,再生所用的原料多种多样,不同原料组成不同,必然导致再生物质中一般含有多种成分。在判断再生物质中的杂质时,需要考虑以下原则:1. 20原则:质量百分比少于20%的物质均属于杂质;2. 如果再生原料是选择含有某种物质的废物,该物质具有确定的功能;即使再生后,该物质含量少于20%,也不应被视作杂质。例如再生PVC中的增塑剂。

  • 【讨论】有没人觉得生物质谱是个很神奇的概念?

    为什么会出现生物质谱这个概念?这是怎样一种分类系统?这个分类系统里除了生物质谱以外还有什么质谱?我知道质谱有三部分:离子源,质量分析器和检测器常见的分类似乎是按照质量分析器分的?包括四级杆/多重四级杆/三电极的离子阱/线性离子阱 quadrupole/quadrupole trap飞行时间质谱仪/多重飞行时间, TOF磁质谱仪 magnetic sector离子回旋共振质谱仪 ICR轨道阱 Orbitrap而以上似乎都可以和生物联系起来,如果是这样的话,那在质谱前面加生物二字又有何意义?还是生物质谱专制上面的某几种?哪几种?纯属个人好奇,欢迎大家各抒己见。。。

  • 【资料】-生物质谱技术原理及其应用与展望

    生命科学被誉为21世纪的最前沿科学之一,随着人类第一张基因序列草图的完成和发展,生命科学的研究也将进入一个崭新的后基因组学,即蛋白质组学时代。正如基因草图的提前绘制得益于大规模全自动毛细管测序技术一样,后基因组研究也将会借助于现代生物质谱技术等得到迅猛发展。本文拟简述生物质谱技术及其在生命科学领域研究中的应用。 1. 质谱技术质谱(Mass SPectrometry)是带电原子、分子或分子碎片按质荷比(或质量)的大小顺序排列的图谱。质谱仪是一类能使物质粒子高化成离子并通过适当的电场、磁场将它们按空间位置、时间先后或者轨道稳定与否实现质荷比分离,并检测强度后进行物质分析的仪器。质谱仪主要由分析系统、电学系统和真空系统组成。质谱分析的基本原理 用于分析的样品分子(或原子)在离子源中离化成具有不同质量的单电行分子离子和碎片离子,这些单电荷离子在加速电场中获得相同的动能并形成一束离子,进入由电场和磁场组成的分析器,离子束中速度较慢的离子通过电场后偏转大,速度快的偏转小;在磁场中离子发生角速度矢量相反的偏转,即速度慢的离子依然偏转大,速度快的偏转小;当两个场的偏转作用彼此补偿时,它们的轨道便相交于一点。与此同时,在磁场中还能发生质量的分离,这样就使具有同一质荷比而速度不同的离子聚焦在同一点上,不同质荷比的离子聚焦在不同的点上,其焦面接近于平面,在此处用检测系统进行检测即可得到不同质荷比的谱线,即质谱。通过质谱分析,我们可以获得分析样品的分子量、分子式、分子中同位素构成和分子结构等多方面的信息。质谱技术的发展 质谱的开发历史要追溯到20世纪初J.J.Thomson创制的抛物线质谱装置,1919年Aston制成了第一台速度聚焦型质谱仪,成为了质谱发展史上的里程碑。最初的质谱仪主要用来测定元素或同位素的原子量,随着离子光学理论的发展,质谱仪不断改进,其应用范围也在不断扩大,到20世纪50年代后期已广泛地应用于无机化合物和有机化合物的测定。现今,质谱分析的足迹已遍布各个学科的技术领域,在固体物理、冶金、电子、航天、原子能、地球和宇宙化学、生物化学及生命科学等领域均有着广阔的应用。质谱技术在生命科学领域的应用,更为质谱的发展注入了新的活力,形成了独特的生物质谱技术。2. 生物质谱技术电喷雾质谱技术和基质辅助激光解吸附质谱技术是诞生于80年代末期的两项轨电离技术。这两项技术的出现使传统的主要用于小分子物质研究的质谱技术发生了革命性的变革。它们具有高灵敏度和高质量检测范围,使得在pmol(10-12)甚至fmol(10-15)的水平上准确地分析分子量高达几万到几十万的生物大分子成为可能,从而使质谱技术真正走入了生命科学的研究领域,并得到迅速的发展。以下主要介绍与生物医学有关的几项质谱技术。电喷雾质谱技术电喷雾质谱技术(Electrospray Ionizsation MassSpectrometry,ESI-MS)是在毛细管的出口处施加一高电压,所产生的高电场使从毛细管流出的液体雾化成细小的带电液滴,随着溶剂蒸发,液滴表面的电荷强度逐渐增大,最后液滴崩解为大量带一个或多个电荷的离子,致使分析物以单电荷或多电荷离子的形式进入[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相[/url]。电喷雾离子化的特点是产生高电荷离子而不是碎片离子,使质量电荷比(m/z)降低到多数质量分析仪器都可以检测的范围,因而大大扩展了分子量的分析范围,离子的真实分子质量也可以根据质荷比及电行数算出。电喷雾质谱的优势就是它可以方便地与多种分离技术联合使用,如液一质联用([url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]LC-MS[/color][/url])是将液相色谱与质谱联合而达到检测大分子物质的目的。基质辅助激光解吸附质谱技术基质辅助激光解吸附质谱技术(MatriX AssistedLaser Desorption/IonizationMALDI)的基本原理是将分析物分散在基质分子中并形成晶体,当用激光照射晶体时,由于基质分子经辐射所吸收的能量,导致能量蓄积并迅速产热,从而使基质晶体升华,致使基质和分析物膨胀并进入[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相[/url]。MALDAI所产生的质谱图多为单电荷离子,因而质谱图中的离子与多肽和蛋白质的质量有一一对应关系。MALDI产生的离子常用飞行时间(Time-of-FlightTOF)检测器来检测,理论上讲,只要飞行管的长度足够,TOF检测器可检测分子的质量数是没有上限的,因此MALDI-TOF质谱很适合对蛋白质、多肽、核酸和多糖等生物大分子的研究。快原子轰击质谱技术快原子轰击质谱技术(Fast Atom Bomebard-ment Mass Spectrometry,FABMS)是一种软电离技术,是用快速惰性原子射击存在于底物中的样品,使样品离子溅出进入分析器,这种软电离技术适于极性强、热不稳定的化合物的分析,更加适用于多肽和蛋白质等的分析研究。FABMS只能提供有关离子的精确质量,从而可以确定样品的元素组成和分子式。而FABMS-MS串联技术的应用可以提供样品较为详细的分子结构信息,从而使其在生物医学分析中迅速发展起来。同位素质谱同位素质谱是一种开发和应用比较早的技术,被广泛地应用于各个领域,但它在医学领域的应用只是近几年的事。由于某些病原菌具有分解特定化合物的能力,该化合物又易于用同位素标示,人们就想到用同位素质谱的方法检测其代谢物中同位素的含量以达到检测该病原菌的目的,同时也为同位素质谱在医学领域的应用开辟了一条思路。

  • 生物质谱技术及其应用

    21世纪的最前沿科学之一,随着人类第一张基因序列草图的完成和发展,生命科学的研究也将进入一个崭新的后基因组学,即蛋白质组学时代。正如基因草图的提前绘制得益于大规模全自动毛细管测序技术一样,后基因组研究也将会借助于现代生物质谱技术等得到迅猛发展。本文拟简述生物质谱技术及其在生命科学领域研究中的应用。1 质谱技术质谱( Mass SPectrometry)是带电原子、分子或分子碎片按质荷比(或质量)的大小顺序排列的图谱。质谱仪是一类能使物质粒子高化成离子并通过适当的电场、磁场将它们按空间位置、时间先后或者轨道稳定与否实现质荷比分离,并检测强度后进行物质分析的仪器。质谱仪主要由分析系统、电学系统和真空系统组成。质谱分析的基本原理用于分析的样品分子(或原子)在离子源中离化成具有不同质量的单电行分子离子和碎片离子,这些单电荷离子在加速电场中获得相同的动能并形成一束离子,进入由电场和磁场组成的分析器,离子束中速度较慢的离子通过电场后编转大,速度快的偏转小;在磁场中离子发生角速度矢量相反的偏转,即速度慢的离子依然偏转大,速度快的偏转小;当两个场的偏转作用彼此补偿时,它们的轨道便相交于一点。与此同时,在磁场中还能发生质量的分离,这样就使具有同一质荷比而速度不同的离子聚焦在同一点上,不同质荷比的离子聚焦在不同的点上,其焦面接近于平面,在此处用检测系统进行检测即可得到不同质荷比的谱线,即质谱。通过质谱分析,我们可以获得分析样品的分子量、分子式、分子中同位素构成和分子结构等多方面的信息。质谱技术的发展质谱的开发历史要追溯到20世纪初J.J.Thomson创制的抛物线质谱装置,1919年Aston制成了第一台速度聚焦型质谱仪,成为了质谱发展史上的里程碑。最初的质谱仪主要用来测定元素或同位素的原子量,随着离子光学理论的发展,质谱仪不断改进,其应用范围也在不断扩大,到20世纪50年代后期已广泛地应用于无机化合物和有机化合物的测定。现今,质谱分析的足迹已遍布各个学科的技术领域,在固体物理、冶金、电子、航天、原子能、地球和宇宙化学、生物化学及生命科学等领域均有着广阔的应用。质谱技术在生命科学领域的应用,更为质谱的发展注入了新的活力,形成了独特的生物质谱技术。 2 生物质谱技术电喷雾质谱技术和基质辅助激光解吸附质谱技术是诞生于80年代末期的两项轨电离技术。这两项技术的出现使传统的主要用于小分子物质研究的质谱技术发生了革命性的变革。它们具有高灵敏度和高质量检测范围,使得在pmol(10-12甚至fmol(10-15的水平上准确地分析分子量高达几万到几十万的生物大分子成为可能,从而使质谱技术真正走入了生命科学的研究领域,并得到迅速的发展。以下主要介绍与生物医学有关的几项质谱技术。电喷雾质谱技术电喷雾质谱技术(Electrospray Ionizsation MassSpectrometry,ESI-MS)是在毛细管的出口处施加一高电压,所产生的高电场使从毛细管流出的液体雾化成细小的带电液滴,随着溶剂蒸发,液滴表面的电荷强度逐渐增大,最后液滴崩解为大量带一个或多个电荷的离子,致使分析物以单电荷或多电荷离子的形式进入[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相[/url]。电喷雾离子化的特点是产生高电荷离子而不是碎片离子,使质量电荷比(m/z)降低到多数质量分析仪器都可以检测的范围,因而大大扩展了分子量的分析范围,离子的真实分子质量也可以根据质荷比及电行数算出。电喷雾质谱的优势就是它可以方便地与多种分离技术联合使用,如液一质联用([url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]LC-MS[/color][/url])是将液相色谱与质谱联合而达到检测大分子物质的目的。基质辅助激光解吸附质谱技术基质辅助激光解吸附质谱技术(MatriX AssistedLaser Desorption /Ionization,MALDI)的基本原理是将分析物分散在基质分子中并形成晶体,当用激光照射晶体时,由于基质分子经辐射所吸收的能量,导致能量蓄积并迅速产热,从而使基质晶体升华,致使基质和分析物膨胀并进入[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相[/url]。MALDAI所产生的质谱图多为单电荷离子,因而质谱图中的离子与多肽和蛋白质的质量有—一对应关系。MALDI产生的离子常用飞行时间(Time-of-Flight,TOF)检测器来检测,理论上讲,只要飞行管的长度足够,TOF检测器可检测分子的质量数是没有上限的,因此MALDI-TOF质谱很适合对蛋白质、多肽、核酸和多糖等生物大分子的研究。快原子轰击质谱技术快原子轰击质谱技术是一种软电离技术,是用快速惰性原子射击存在于底物中的样品,使样品离子溅出进入分析器,这种软电离技术适于极性强、热不稳定的化合物的分析,特加适用于多肽和蛋白质等的分析研究。只能提供有关离子的精确质量,从而可以确定样品的元素组成和分子式。而FABMS-MS串联技术的应用可以提供样品较为详细的分子结构信息,从而使其在生物医学分析中迅速发展起来。同位素质谱是一种开发和应用比较早的技术,被广泛地应用于各个领域,但它在医学领域的应用只是近几年的事。由于某些病原菌具有分解特定化合物的能力,该化合物又易于用同位素标示,人们就想到用同位素质谱的方法检测其代谢物中同位素的含量以达到检测该病原菌的目的,同时也为同位素质谱在医学领域的应用开辟了一条思路。3 生物质谱技术的应用随着质谱技术的不断改进和完善,质谱的应用范围已扩展到生命科学研究的许多领域,特别是质谱在蛋白质、医学检测、药物成分分析及核酸等领域的应用,不仅为生命科学研究提供了新方法,同时也促进了质谱技术的发展。质谱与蛋白质分析蛋白质分子量的测定 蛋白质类生物大分子分子量的测定有着十分重要的意义,如对均一蛋白质一级结构的测定,既要测定蛋白质的分子量,又要测定亚基和寡聚体的分子量及水解、酶解碎片的分子量。常规的分子量测定主要有渗透压法、光散射法、超速高心法、凝胶层析及聚丙烯酸胺凝胶电泳等。这些方法存在样品消耗量大,精确度低易受蛋白质的形状影响等缺点。MALI-MS技术以其极高的灵敏度、精确度很快在生物医学领域得到了广泛的应用,特别是在蛋白质分析中的应用,至今已被分析的蛋白质已有数百种之多,不仅可测定各种亲水性、疏水性及糖蛋白等的分子量,还可直接用来测定蛋白质混合物的分子量,也能被用来测定经酶等降解后的混合物,以确定多肽的氨基酸序列。可以认为这是蛋白质分析领域的一项重大突破。蛋白质组研究 蛋白质组是指一个基因组、一个细胞或组织所表达的全部蛋白质成分。蛋白质组的研究是从整体水平上研究细胞或有机体内蛋白质的组成及其活动规律,包括细胞内所有蛋白质的分离、蛋白质表达模式的识别、蛋白质的鉴定、蛋白质翻译后修饰的分析及蛋白质组数据库的构建。质谱技术作为蛋白质组研究的三大支撑技术之一,除了用于多肽、蛋白质的质量测定外,还广泛地应用于肽指纹图谱测定以及氨基酸序列恻定等。肽指纹图谱( PePtide Mass Fingerprinting,PMF)测定是对蛋白酶解或降解后所得多肽混合物进行质谱分析的方法,对质谱分析所得肽片与多肽蛋白数据库中蛋白质的理论肽片进行比较,从而判别所测蛋白是已知还是未知。由于不同的蛋白质具有不同的氨基酸序列,因而不同蛋白质所得肽片具有指纹的特征。采用肽指纹谱的方法已对酵母、大肠杆菌、人心肌等多种蛋白质组进行了研究。对大肠杆菌经PVDF膜转印的蛋白质的研究表明,三个肽片即可达到对蛋白质的正确识别。而采用原位酶解的方法对酵母蛋白质组研究的结果显示,约90%的蛋白质被识别,其中三十多种新蛋白质被发现,而这些蛋白质是酵母基因组研究中未能识别的开放阅读框架。研究显示,肽指纹谱的方法比氨基酸组成分析更为可靠,这是因为MALDI测定肽质量的准确度为99.9%,而氨基酸组成分析的准确度仅为90%。另外MALDI可以耐受少量杂质的存在,对于纯度不是很高的样品也能得到理想的结果。对肽序列的测定往往要通过串联质谱技术才能达到分析目的,它采用不同的质谱技术选择具有特定质荷比的离子,并对其进行碰撞诱导解高,通过推断肽片的断裂,即可导出肽序列。质谱与核酸研究现代质谱技术自诞生以来在多肽及蛋白质的研究中获得了极大的成功,于是人们开始偿试着特质谱技术用于核酸的研究工作,近年来合成寡核苷酸及其类似物作为反义治疗剂在病毒感染和一些癌症的治疗方面有着良好的前景,寡核苷酸作为药物其结构特征必须进行确证。常规的色谱或电泳技术只能对其浓度和纯度进行分析,而对其碱基组成、序列等结构信息却无能为力。ESI和MALDI质谱技术的出现为寡核苷酸及其类似物的结构和序列分析提供了强有力的方法,它是将被测寡核苷酸样品先用外切酶从3’或5’端进行部分降解,在不同时间内分别取样进行质谱分析,获得寡核苷酸部分降解的分子离子峰信号,通过对相邻两个碎片分子质量进行比较,可以计算出被切割的核苷酸单体分子质量,将其与四个脱氧苷酸的标准分子量进行对照,就可以读出寡核苷酸的序列。由于MALDI技术分辨率的问题,使得其更适合于减基数较少的短链核酸的分析。如何获得高分辨率的DNA质谱图一

  • 生物质谱简述

    生物质谱技术正成为蛋白质鉴定分析的主要支撑技术,它通过测定样品离子的质荷比(m/z) 来进行成分和结构分析。双向凝胶电泳分离的蛋白质点数目多、量少,其鉴定方法是利用蛋白质的各种属性参数如相对分子质量、等电点、序列、氨基酸组成、肽质量指纹谱等在蛋白质数据库中检索,寻找与这些参数相符的蛋白质。若在数据库中找不到,有可能是发现了新蛋白质,要进行序列分析,进一步合成DNA 探针来表达、分离和鉴定它

  • 【资料】蛋白质组学研究--生物质谱技术

    蛋白质组学研究--生物质谱技术 对分离的蛋白质进行鉴定是蛋白质组研究的重要内容,蛋白质微量测序、氨基酸组成分析等传统的蛋白质鉴定技术不能满足高通量和高效率的要求,生物质谱技术是蛋白质组学的另一支撑技术。 生物质谱技术在离子化方法上主要有两种软电离技术,即基质辅助激光解吸电离(matrix—assisted laser desorption/ionization,MALDl)和电喷雾电离(electrospray ionization,ESl)。MALDI是在激光脉冲的激发下,使样品从基质晶体中挥发并离子化。ESI使分析物从溶液相中电离,适合与液相分离手段(如液相色谱和毛细管电泳)联用。MALDI适于分析简单的肽混合物,而液相色谱与ESI—MS的联用(LC—MS)适合复杂样品的分析。 软电离技术的出现拓展了质谱的应用空间,而质量分析器的改善也推动了质谱仪技术的发展。生物质谱的质量分析器主要有4种:离子阱(iontrap,IT)、飞行时间(TOF)、四极杆(quadrupole)和傅立叶变换离子回旋共振(Fourier transform ion cyclotron resonance,FTICR)。它们的结构和性能各不相同,每一种都有自己的长处与不足。它们可以单独使用,也可以互相组合形成功能更强大的仪器。 离子阱质谱灵敏度较高,性能稳定,具备多级质谱能力,因此被广泛应用于蛋白质组学研究,不足之处是质量精度较低。与离子阱相似,傅立叶变换离子回旋共振(FTICR)质谱也是一种可以“捕获”离子的仪器,但是其腔体内部为高真空和高磁场环境,具有高灵敏度、宽动态范围、高分辨率和质量精度(质量准确度可很容易地小于1mg/L),这使得它可以在一次分析中对数百个完整蛋白质分子进行质量测定和定量。FTICR—MS的一个重要功能是多元串级质谱,与通常的只能选一个母离子的串级质谱方式不同,FTICR—MS可以同时选择几个母离子进行解离,这无疑可以大大增加蛋白质鉴定工作的通量。但是它的缺点也很明显,操作复杂、肽段断裂效率低、价格昂贵等,这些缺点限制了它在蛋白质组学中的广泛应用。MALDI通常与TOF质量分析器联用分析肽段的精确质量,而ESI常与离子阱或三级四极杆质谱联用,通过碰撞诱导解离(collision—induceddissociation,CID)获取肽段的碎片信息。 1. MALDI—TOF—MS (1)MALDI—TOF—MS的技术特点:①具有分离、鉴定双重功能,可用于混合物的分析;②测量范围宽,相对分子质量可达300 000;③精度高,蛋白质相对分子质量测定精度可达0.01%;④灵敏度高,所需样品量少,可达fmol级;⑤分析时间短,5~10rain可完成一次分析;⑥样品制备简便,操作易自动化;⑦对样品要求低,能忍耐较高浓度的盐、缓冲剂和非挥发性杂质,所以特别适合于鉴定二维凝胶电泳分离的蛋白质。 (2)MALDI—TOF—MS的技术改进:近年来MALDI—TOF—MS又有许多新的技术改进,以提高其检测灵敏性和准确度,增强其蛋白质鉴定的功能。如将MALDI离子源与四极杆—飞行时间—串联质谱对接,实现了同一样品在同一质谱仪上的肽指纹图谱与肽序列标签分析同时进行,提高于蛋白质鉴定的速度和准确性。还有MALDI—TOF—TOF—MS等。但这些技术共同的缺点是仪器非常昂贵。 (3)MALDI—TOF—MS的发展方向:①寻求新的基质(如混合基质、室温离子化液体等)和新的制样方法(如超微量进样,n1级);②将新技术应用在分析中(如酶切技术、毫微升溶剂提取技术等);③对质谱仪进行改进或与其他分析仪器联用,如MALDI与傅立叶转换离子回旋共振质谱(MALDI—FTMS)联用能得到更多的蛋白结构信息;④小型化、智能化、简易化及自动化已成为趋势。 2.ESI (1)ESI的优势:①检测范围宽,生物大分子经电喷雾后质荷比大大下降,因而可测相对分子质量高达十几万甚至更高的生物样品;②分辨率和灵敏度高,可达10-15—10-12mol;③不需要特定基质,避免子基质峰的干扰;④适用于结构分析,可分析生物大分子的构象及非共价相互作用,与串联质谱结合可分析蛋白质、多肽的一级结构和共价修饰位点等;⑤自动化程度高,可与液相色谱、毛细管电泳等高效分离手段在线联用;⑥MALDI是脉冲式离子化技术,而ESI是连续离子化技术,检测所需时间更短;⑦ESI常和四极杆质谱联用,仪器价格相对便宜。 (2)ESI的局限性:①对样品中的盐类耐受性差;②对混合物图谱的解析较复杂;③受溶剂的影响和限制很大。目前ESI主要用于亲水生物大分子的分析,较少用于疏水生物样品的分析。总体来说,MALDI和ESI各有长处,有各自的适用范围,是两种互补的技术。 (3)ESI的技术发展:近年来,ESI也有许多新的技术发展。液相色谱与电喷雾质谱连用(LC—ESI—

  • 生物质谱技术及其在RNA 检测中的应用

    引 言在过去的30 年里,质谱技术尤其是测定生物大分子的生物质谱技术有飞速的发展,电喷雾离子化(ESI) 和基质辅助激光解吸电离(MALDI)离子化技术的发现为质谱的生物应用奠定基础;质谱的分辨率、灵敏度、准确度也达到很高的水平,生物质谱在蛋白、多肽领域得到广泛地应用,在核酸研究领域,质谱也逐渐发挥越来越重要的作用。下面分别介绍质谱技术、核酸的质谱检测方法以及质谱在核酸领域的应用。1 质谱技术简介质谱是测定物质分子量的工具,简单地说,质谱的操作部件由软件和硬件两部分组成。硬件主要包括三个核心硬件,分别为样品离子化、质量分析器(M/Z) 和离子检测器;软件部分包括机器的控制和质谱数据的分析处理。样品离子化有多种方法,在过去的20 多年,质谱领域的重大进展之一就是ESI 和MALDI 离子化方法的发现,可以在比较温和的条件下产生离子,这大大促进质谱在生物领域的应用。ESI 和 MALDI 离子化的原理在文献 中已经详细的介绍,这里不再详述。电喷雾离子化的特点是产生多电荷离子,使质量电荷比(m/z)降低到多数质量分析仪器都可以检测的范围,因而大大扩展分子量的分析范围。电喷雾离子化根据喷射源液体流量的大小,可分为纳升、微升、电喷和涡轮离子喷射。 MALDI 是通过气化的带电基质和样品之间发生碰撞,把激光的能量传递给样品,从而导致样品的离子化。它也是一种软电离技术,适用于混合物及生物大分子的测定。质量分析器是质谱的核心,目前质谱的质量分析器有四类:离子阱(Ion Trap)、飞行时间(Time of Flight,TOF)、四极杆(Quadrupole) 和傅立叶变换离子回旋共振。它们在设计和构造上各有不同,因而各有优缺点。质量分析器决定整个机器的分辨率、质量准确性、敏感性和质量检测范围。离子阱质量分析器使用频率分离离子,具有中等的质量准确度,且测量的质量范围有限。傅立叶变换离子回旋质谱使用频率分离离子,具有很高的质量准确度和分辨率,但傅立叶变换离子回旋质谱价格昂贵、仪器操作复杂。飞行时间分析器使用时间和距离分离离子,具有较高的质量准确度和分辨率,测量的质量范围大。四极杆质量分析器使用频率分离离子,具有较低的质量准确度和分辨率,且测量的质量范围有限。这些质量分析器的发明促进质谱的应用。近10 年来,质谱的重要进展体现在两个方面:(1)质谱技术的第一个重要进展就是开发串联质谱,就是对上述质量分析装置进行不同的组合,以达到特异性的目标;(2)质谱另一个重要进展不是在于技术层面上,而是在仪器化方面,商业化的仪器推动质谱在应用领域里的快速发展。各厂家为满足客户的需要,尤其是生命科学领域的需要,组合不同的特殊电离技术以及各种质量检测器,生产出超高分辨率、高灵敏度、宽质量范围的质谱仪;把质谱与气相色谱、高效液相色谱系统联用,大大拓宽质谱应用范围。下面主要介绍一些有代表性的质谱仪。傅立叶变换- 离子回旋共振质谱(Fourier Transform ion Cyclotron Resonance Mass Spectrometer, FT-ICR-MS) 具有超高质谱分辨率、高质量测量准确度、回旋池内现场反应等显著优点。生产傅立叶变换- 离子回旋共振质谱的主要厂家有 Thermo Fisher 和Bruker。Thermo Fisher 的LTQ-FT 是串联线性离子阱 FT-ICR,而Bruker 的APEX-Qe 是三级四极杆和FT-MS 的结合; FT-ICR-MS 质量准确度达1~2ppm, 分辨率超过105。静电场轨道阱(Orbitrap) 质量分析器,是第一个在静电场中进行离子捕获的高性能质量分析器,基于这一分析器,开发LTQ orbitrap 质谱仪。该机器使用线性离子阱实现离子分离、裂解以及多级质谱功能。它在质量准确度、分辨率、动态范围、灵敏度以及多级质谱能力等方面具有明显优势,具有高达30 万的分辨率。它与LTQ FT 线性离子阱回旋共振质谱仪有相近的工作原理,但仪器运行时无需消耗大量制冷剂,能够在降低运行成本的同时得到高分辨率的数据结果。MALDI - TOF 质谱采用一系列的新技术, 如提供二阶无网离子反射器,延长离子在飞行管中的飞行距离, 飞行路径可达3m ;创新的使用LIFTTM 技术来提升能量,可高速完成高质量的MS/MS 质谱数据;采用独有的PANTM 全景宽域聚焦技术,可以在非常宽的质量范围内获得大于25000 的分辨率。MALDI - TOF 质谱可用来分析较为复杂的混合物,在样品含量低于10-12mol 时,分子量的测定仍有相当高的灵敏度和分辨率。近年来发展的MassARRAY ™时间飞行质谱生物芯片系统由美国Sequenom 公司开发,是目前唯一采用质谱法直接检测单核苷酸多态性(SNP)的设备。该系统的突出特点是能以极高的精确度快速进行基因型识别,直接测出带有SNP 或其他突变的目标DNA。MassARRAY ™系统反应体系为非杂交依赖性,不存在潜在的杂交错配干扰,不需要各种标记物,其采用的高密度SpectroCHIP ™点阵芯片分析系统能在4h 之内完成多达3840 个多重性鉴定,每个检测点只需3~5s,结果实现全自动分析。这套系统所提供的大规模、高通量检测SNP 的技术平台,在当前疾病机制研究中发挥重要作用。

  • 生物质谱技术在细胞生物学中的应用

    生物质谱技术在细胞生物学中的应用桑志红 王红霞 综述 概 论 蛋白分离与显色 蛋白质鉴定 数据库查寻 灵敏度 具体示例 展望未来(相关文献)摘 要 基因组计划的飞速发展使我们提早进入"后基因组时代",而质谱技术的重要进展使得通过酶解、质量分析、序列分析及其数据库检索对蛋白质进行高通量快速鉴定的技术方法应运而生,并成为"后基因组时代"的关键核心技术。这种技术的应用范围已经从细胞,组织以及整个有机体中蛋白质的表达到蛋白质翻译后修饰等等方面。本文简要综述生物质谱技术在细胞生物学等学科中的应用。  过去的十年经历并见证了生命科学革命性的变化. 大规模基因组测序技术的问世使人类基因组计划最终目标的实现比预期一再提前。与此同时,近几年间已有10余种模式生物的基因组序列测定告罄,3年内还将有40种左右生物的基因组全序列问世。因此大多数人同意我们现在已经提早进入"后基因组时代"(post-genome era), 目前我们所面临的挑战是如何破解基因组计划已获得的大量序列信息并加以应用。这个问题的关键是基因的生物学功能不能只通过对核酸一级结构(序列)的检测来确定。研判一个未知基因的功能、与其他基因产物及其亚细胞结构之间的功能联系, 最终都必须通过在蛋白水平对基因产物的研究才能确定。蛋白质组这个名词是近几年才提出来的,它用来描述一个细胞的全部蛋白质,而在蛋白水平上进行大规模的研究引出了新的术语蛋白质组学。蛋白质表达图谱是依靠蛋白质显示技术和精确定量技术对细胞或组织中蛋白质表达总况进行比较(2), 这个领域最近已有综述(11)。细胞图谱蛋白质组学是指应用生物质谱技术鉴定蛋白质及其相互作用并确定在亚细胞中的定位。本文的目的是 简要综述生物质谱技术在细胞生物学领域中越来越多的应用,并为该领域正考虑应用这种技术的研究者提供一些的有用的信息。 作为一个新的研究领域,蛋白质组学发展的关键是近年来质谱技术的革新。这种革新极大地促进了质谱技术在生命科学研究中的应用。质谱现在可以作为将各种蛋白质与序列数据库联系起来的桥梁。生物质谱根据质量数和所载电荷数不同的多肽片断在磁场中产生不同轨道而以质荷比(m/z)方式来分离它们。80年代末,随着两种崭新的尤其适合蛋白质研究的软电离方式ESI(电喷雾电离)和MALDI(基质辅助激光解吸附电离)的出现,质谱成为现代蛋白质科学中最重要和不可缺少的组成部分。 生物质谱最强大的应用功能之一是能够鉴定蛋白质复合物的组成成分(19)。细胞中一些最重要的生命过程都是通过多蛋白质复合体来执行和调节的,但由于蛋白质鉴定的困难,大多数上述蛋白复合体都是未知的。生物质谱灵敏度的不断提高显著地促进了对具有生物学功能和治疗潜力的蛋白复合体的鉴定,例如,NF-k B信号通路,CD95(FAS/APO-1)介导的细胞死亡途径,和核受体介导的转录信号传导过程中形成的蛋白复合体。在某些情况下,复合物可通过常规蛋白纯化的方法进行纯化,如剪接体复合(25),酵母纺锤体复合物(29)及VHL肿瘤抑制复合物(18)。然而,更常见的是,复合物中的组成成分通过一步免疫沉淀或免疫亲和步骤后就可纯化,这种方法甚至可以用于鉴定那些用常规蛋白纯化和鉴定技术所不及的一些过渡态或不稳定的复合物。因为生物质谱技术的介入,现在已经不再需要通过抗体进行免疫印迹实验,而是通过生物质谱技术对免疫沉淀获得的蛋白复合体组分直接进行蛋白序列分析。以酵母P24复合物鉴定为例,应用上游表位标签策略有可能不需制备抗目标蛋白的抗体就能对蛋白质复合物进行鉴定(13)。这种方法(36)对于基因组序列已完全清楚和遗传稳定的生物(如芽殖酵母,啤酒酵母)尤为简便, 例如对RENT复合物和促有丝分裂后期复合物(49)。因为这种方法的成功应用,使人们对上游表位标签策略-蛋白纯化-生物质谱分析的方法兴趣倍增。值得一提的是,将能被特殊蛋白酶切除的连接子(接头)掺入表位标签是尤为有利的(如下所述)。 上述方法是通过识别蛋白复合物中相互作用和配对的各组分而达到对蛋白鉴定的目的,另一种策略则是通过对分离纯化的细胞器蛋白组成进行鉴定而在亚细胞水平对蛋白质定位. 用这种方法确定蛋白质位置, 对评价蛋白质潜在的功能将是大有帮助的. 应用这种方法,我们称为细胞器蛋白质组学, 已经发现正常工作状态下的细胞器含有比我们以前所知道的数量多得多的蛋白种类。然而实际上,由于质谱极高的分辨率和灵敏度,纯化后的细胞器组分即使只有微量的混杂,也能被质谱分辨并误认为是细胞器的组成部分。因此,如何充分的纯化以保证至少绝大多数被鉴定的蛋白质都来自同一种细胞器,成为制约上述工作的瓶颈。 蛋白质翻译后修饰也是蛋白鉴定工作中的一个重要方面。根据DNA序列信息并不能可靠预测或推导出蛋白质翻译后的修饰。而质谱技术已经被证明对研究蛋白质翻译后的修饰(例如磷酸化和糖基化)是极为有用的,特别是对序列已知的蛋白的鉴定。例如:Betts等人(1a)用这种方法成功地鉴定了从小鼠大脑中分离的神经纤维蛋白体内磷酸化位点。同样方法, Wong等人(45)确定了钙联蛋白质(calnexin)C未端的磷酸化位点。在糖基化的例子中, Carr等人(5)采用液相色谱与质谱联用技术选择性地鉴定了糖蛋白中N- 和O-联接的寡糖. 稍后, 本文将会通过对E-选择素中糖基化位点的鉴定来进一步说明这种方法.

  • 请教一个比较奇葩的问题,求硝基呋喃四个代谢物的衍生物的精确质量数。

    Hi,各路大侠,跪求AOZ、AMOZ、AHD、SEM分子式以及四个物质衍生物的精确质量数(分子式也行),感激不尽!!!硝基呋喃一般是测定代谢物(AOZ、AMOZ、AHD、SEM)的衍生物,衍生试剂为邻硝基苯甲醛(2-NBA),目前检测也都是用三重四极杆,所以只需要知道母离子和子离子即可。而我现在要用高分辨(70000分辨率)仪器去测定这些化合物,用一级精确质量数(小数点后4位)定量,可是查了很多文献也没有找到衍生后的四个代谢物的精确质量数,甚至没有查到四个代谢物的分子式和精确质量数。请问哪位大侠有啊,或者相关的文献,哪怕是有衍生过程的也行,感激不尽!!!

  • 【分享】生物质谱技术在蛋白质组学中的应用

    一、 前言  基因工程已令人难以置信的扩展了我们关于有机体DNA序列的认识。但是仍有许多新识别的基因的功能还不知道,也不知道基因产物是如何相互作用从而产生活的有机体的。功能基因组试图通过大规模实验方法来回答这些问题。但由于仅从DNA序列尚不能回答某基因的表达时间、表达量、蛋白质翻译后加工和修饰的情况、以及它们的亚细胞分布等等,因此在整体水平上研究蛋白质表达及其功能变得日益显得重要。这些在基因组中不能解决的问题可望在蛋白质组研究中找到答案。蛋白质组研究的数据与基因组数据的整合,将会在后基因组研究中发挥重要作用。  目前蛋白质组研究采用的主要技术是双向凝胶电泳和质谱方法。双向凝胶电泳的基本原理是蛋白质首先根据其等电点,第一向在pH梯度胶内等电聚焦,然后转90度按他们的分子量大小进行第二向的SDS-PAGE分离。质谱在90年代得到了长足的发展,生物质谱当上了主角,蛋白质组学又为生物质谱提供了一个大舞台。他们中首选的是MALDI-TOF,其分析容量大,单电荷为主的测定分子量高达30万,干扰因素少,适合蛋白质组的大规模分析。其次ESI为主的 LC-MS联机适于精细的研究。本文将简介几种常用的生物质谱技术,并着重介绍生物质谱技术在蛋白质组学各领域的应用。  二、 生物质谱技术  1.电喷雾质谱技术(ESI)  电喷雾质谱技术( Electrospray Ionization Mass Spectrometry , ESI - MS) 是在毛细管的出口处施加一高电压,所产生的高电场使从毛细管流出的液体雾化成细小的带电液滴,随着溶剂蒸发,液滴表面的电荷强度逐渐增大,最后液滴崩解为大量带一个或多个电荷的离子,致使分析物以单电荷或多电荷离子的形式进入气相。电喷雾离子化的特点是产生高电荷离子而不是碎片离子, 使质量电荷比(m/ z) 降低到多数质量分析仪器都可以检测的范围,因而大大扩展了分子量的分析范围,离子的真实分子质量也可以根据质荷比及电荷数算出。本帖与http://bbs.instrument.com.cn/shtml/20081130/1613156/重复,故锁帖!请版友在发帖前先搜索一下,以免出现重复贴。谢谢!斑竹您给的重复贴链接有误,并且我写贴前已经搜索了标题。SORRY,请LZ检索一下这个网址,开始那个是弄错了。

  • 【金秋计划】+海洋沉积物质量标准检测的意义?

    海洋沉积物质量标准检测的意义是[font=&][size=15px][color=rgba(0, 0, 0, 0.9)]海洋沉积物作为污染物的载体,会通过一系列化学和生物过程,将吸附的污染物释放出来,污染周边的海水。海洋中的动植物,特别是底栖生物直接生活在沉积物中,会直接或间接将污染物质吸收进体内,进而通过食物链的转移和累积,最终影响到人类自身。[/color][/size][/font]

  • REACH 法规中高关注及限制物质的检测解决方案 大家怎么看/

    1、REACH法规概述1.1 REACH法规简介 REACH 是欧盟法规《化学品注册、评估、许可和限制》(Registration,Evaluation,Authorization and Restriction of Chemicals)的简称,是欧盟于2007年6月1日起实施的化学品监管体系,其目的在于进一步加强对人类健康和环境的保护,保持和提高欧盟化学工业的竞争力。与RoHS指令不同,REACH 涉及的范围要宽得多,它会影响从采矿业到纺织服装、轻工、机电等几乎所有行业的产品及制造工序。REACH要求制造商注册产品中的每一种化学成分,大约共有3万种,并要衡量其对公众健康的潜在危害。 REACH 法规要求任何一种年使用量超过1吨的高度关注物质(SVHC)在商品中的含量不能超过物品总重量的0.1%,否则需要履行注册、通报、授权等一系列繁琐的义务。此外,该法规将原指令集 76/769/EC 并入其附录17,从而对一系列对人体、环境危害较大的化学品的使用情况进行了非常严格的限制。 欧盟境内产品必须履行REACH法规的各项义务,才能合法生产或进口。各国针对REACH法规立法通过了严厉的监管和惩罚措施,欧盟海关可进行REACH符合性审查,若违反REACH法规,将面临产品召回、罚款甚至监禁。1.2 REACH法规相关术语物质(substance):天然或制造而成的化学元素和化合物,如甲醛、纯净水等。 配制品(preparation):两种或两种以上物质构成的混合物或溶液,如油漆、洗发水、 清洁剂等。 物品(article):由一种或多种物质和(或)配制品组成的物体。它在生产过程中被赋予特定形状,它的外观或设计很大程度上比其化学组成更决定其功能。如玩具、服装、电子产品等。 截止2012年12月19日,ECHA(欧洲化学品管理署)已正式发布8批SVHC清单,自此,REACH法规高关注物质清单共有138项SVHC。对于产品出口欧盟的供应商来说,REACH相应的义务有告知和通报: 通报:如果物品中高度关注物质(SVHC)含量大于0.1%(重量百分比)且进入欧盟物品中高度关注物质(SVHC) 的含量大于1吨每年,必须向欧盟化学品管理局通报。 高关注物质:包括CMR 1&2(第1、2类致癌、致诱变、致生殖毒性物质)、PBT(持久性、生物累积性、毒性物质)、vPvB(高持久性、生物累积性物质)和其他对人体或环境产生不可逆影响的物质,如内分泌干扰物质等。1.3 REACH的影响与应对 虽然 REACH 只是一个化学品监管体系,但是它覆盖了几乎所有的物质,不管是物质本身,配制品中的物质,还是物品中的物质。因此,除了管控更加严格的食品、药品等豁免产品外,几乎所有进入欧盟的相关消费品都必须符合REACH法规的要求,并提供符合性证明。 如果违反 REACH,不仅会受到商业上的限制,还要承担罚款或刑事责任。因此出口欧盟的产品中高关注物质(SVHC)及限制物质含量的测定对生产企业来说尤为重要。 天瑞仪器专业从事光谱、色谱、质谱等分析测试仪器及其软件的研发、生产和销售,并一直致力于 REACH 中高关注物质及限制物质检测方法的研发,天瑞仪器可为产品出口欧盟的企业提供优质的检测仪器及全面的检测方案。2、在REACH检测中的应用-有机化合物的测定2.1 气相色谱质谱联用仪GC-MS 68002.1.1仪器介绍http://www.skyray-instrument.com/cn/images/2013/0813/17.jpgGC-MS 6800气相色谱质谱联用仪 气质联用仪是气相色谱与质谱技术的完美结合,可实现复杂有机化合物快速、有效的分离和检测。 GC-MS 6800是天瑞仪器精心打造的一款高性价比气相色谱质谱联用仪,历时五年研发定型。该仪器各项性能指标均达到或优于国家标准,获得多位业内专家的好评,目前已经实现批量生产并投放市场。其核心部件与国际主流产品保持一致,保证了GC-MS 6800具备与国外仪器同样的性能品质;具有完全的自主知识产权,拥有多项专利技术。目前GCMS6800气质联用仪广泛应用于REACH高关注物质和限制物质中有机化合物的检测。2.1.2 GC-MS 6800主要技术参数MS技术指标离子化能量(EI源)5eV—250eV(可调)质量范围1.5—1000amu分辨率(R)单位质量分辨离子源温度100---350℃灯丝发射电流0-350μA气质接口温度最高450℃质量轴稳定性±0.10 amu/48 hrs灵敏度

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