双光子显微镜

[size=2]求助各位同行： 在报告、讲座中经常看到各位专家、厂家用比较漂亮的双光子显微系统的原理示意图，直观上可以形象地区分激光扫描共聚焦显微镜与双光子显微镜的异同，请教大家是否有这方面的图片？ 多谢各位！！！[/size]

大家讨论一下双光子显微镜吧

[b]摘要[/b]在神经科学和神经外科中对活体大脑组织中神经元的成像能力是一项基本要求。尤其是需求一种具有测微计尺分辨率的大脑形态学的非侵入探针的开发，因为它可以在临床诊断上提供一种非侵入式光学活体组织检查的手段。在这一领域，双光子激光扫描显微镜(2PLSM)是一个强大工具，并已成为活体生物样品最小侵入性损害的高分辨率成像的标准方法。但是，(2PLSM)基于光学方法提供足够分辨率的同时，对荧光染料的需求妨碍了图像对比度的提高。本文中，我们提供了一种活体大脑组织以细胞分辨率的高对比度成像方法，无需荧光探针，使用光学三次谐波发生进行成像。我们利用细胞水平的特殊几何学和大脑组织的液体内容物来获取THG的部分相匹配，提供了一种荧光对比度机制的替代方法。我们发现THG大脑图像允许快速、无侵入性标记的神经元、白质结构、血管同时成像。而且，我们利用THG成像来引导微吸管指向活体组织中指定的神经元。这个工作是一个无标记活体大脑成像的主要步骤，并开启了活体大脑中激光引导的微注射技术发展的可能性。[b]材料与方法[/b]THG成像对于THG成像实验，我们使用了一台商业化双光子激光扫描显微镜([color=#ff0000]TrimScope, Lavision BioTec[/color])。光源是一个光学参量震荡器（Mira-OPO，APE），810nm泵浦光来自一个Ti：Sa锁模激光器(Coherent Chameleon Ultra II)。使用一个20X，0.95N.A水浸物镜(Olympus XLUMPFL-IR)将光聚焦到样品上。使用epidetection几何学描述THG实验。使用分光镜(Chroma T800lpxrxt)将背景散射THG光子从入射激光束中分离出来，用一个THG波段的带通滤波器(Chroma HQ390-70X)过滤。检测器是GaAsP高灵敏度光电倍增管(Hamamatsu H7422-40)，400nm处量子效率为25%。最高分辨率成像(1024×1024像素)的典型获取时间为1.6s，我们用于目标定向实验的512 X 512像素成像时间为0.6s。 为与前向端口比较，使用了一个定制的投射端口。这个端口使用了一个1.4N.A油浸物镜，一个长波分光镜（UQG optics)和一个400nm的相干窄带滤波器。对于THG与SR-101联合实验我们用1200nm的OPO来同时产生两种信号。使用一个594nm带通和561nm隔断的分光镜将SR-101荧光从THG信号中分离。SR-101信号使用一个PMT检测(Hamamatsu H6780-20)。Nile Red和THG成像也是由1200nm的OPO同步激发。在这个案例中THG信号由投射端口测量，Nile Red荧光通过一个593∕40 nm的带宽滤波器检测。对于THG和GFP联合成像，用来泵浦OPO的Ti：Sa激光被调谐到970nm并耦合到显微镜中。组织块的GFP和THG信号使用同一个检测器连续测量。但使用一个不同的(561∕40 nm)带通滤波器检测GFP。使用显微镜软件(Imspector Pro)获取图像并以16bit 的tiff格式存储，图像分析使用Image J(MacBioPhotonics)进行。[b]主要结果[/b] [img=,575,768]http://qd-china.com/uploads/bio-product/21.jpg[/img]Fig. 1.无标记活体大脑的三次谐波显微成像(A)脑组织THG成像的epidetection几何学图示。插图：THG原理。注意基质中没有光学激发发生。(B) 树突处的聚焦激光束。通过将激光聚焦体积设定到树突直径的几倍大小，可以获得部分相匹配，显著的THG信号将会产生。(C)细胞体内的聚焦激光束。由于不好的结构相匹配状态，没有THG信号产生。(D) 小鼠大脑组织的活神经元成像。体细胞以暗影存在。 [img=,466,500]http://qd-china.com/uploads/bio-product/22.jpg[/img]Fig. 2.活体大脑组织的THG成像(A)小鼠皮质的THG图像 (B) 与A同位置的Nile Red染色的双光子荧光图像 (C) 大鼠凹陷的脑回THG图像（水平切面） (D)小鼠脑胼胝体THG图像，轴突纤维束被清晰得分辨。Movie S1是这个结构的一个3D投影 (E)小鼠大脑纹状体的THG图像（冠状面）。白质和神经元细胞清晰可见。明亮的粒状结构是垂直穿行图像平面的轴突纤维。Movie S2是这个区域的3D投影。(F)麻醉活小鼠的脑皮质上层的血管THG图像（z栈平均投影密度是50um） [img=,510,767]http://qd-china.com/uploads/bio-product/23.jpg[/img]Fig. 3. THG与双光子成像的叠加 (A)小鼠额前叶脑皮质的THG图像 (B)SR-101标记的星细胞双光子图像 (C) A、B的叠加提供了神经网络中星细胞的分布信息 (D) 小鼠额前叶皮质的THG图像 (E) GFP标记的生长抑素神经元的双光子荧光图像 (F)D、E的叠加显示了生长抑素神经元在脑前叶皮质结构中的分布 [img=,461,768]http://qd-china.com/uploads/bio-product/24.jpg[/img]Fig. 4.THG成像深度与自动化细胞检测 (A-C) 小鼠额前叶皮质的THG图像，成像深度分别为100, 200, and 300 μm 。每幅图像都是3个以2微米深度间隔独立图像的最大密度投影(D) 110 μm深度处神经元细胞的自动检测THG图像。细胞检测的运算法则定义为以红色显示的神经元 (E)红色标记：来自A-C的图像栈的细胞可见性对比。黑色标记：作为一个深度功能的平均检测到的THG密度。 [img=,531,768]http://qd-china.com/uploads/bio-product/25.jpg[/img]Fig. 5. 无标记目标定向和细胞活性(A)小鼠新大脑皮层的THG图像 (B) 在对一个神经元进行THG引导膜片钳之后同一位置的THG图像 (C)一个200um深处钳住神经元的大视野THG图像（5幅深度间隔2um的图像平均） (D)记录以100pA电流脉冲刺激B中被钳住的神经元的动力势训练 (E) 测量在THG扫描期间静止膜电位的改变。即使以最高的能量，也只观察到4%的电压变化，保持了完全的可逆性。0.8秒的周期相应于图像扫描时间。(F)最大观察到的静止膜电位Vs扫描时的激光能量。没有非线性效应出现。

[b]摘要[/b]从首次感染部位向邻近基质的转移入侵是肿瘤发展过程中的关键步骤，研究成果较少。肿瘤入侵的原理以各种体外模型给出了实验性的表述；但是，体内的关键性步骤和机制仍然不清楚。这里，我们通过落射荧光成像和多光子显微镜建立了一个修正的皮肤折叠室模型来阐述关于HT-1080纤维肉瘤细胞的原位移植，生长和入侵。这种策略允许对作为独立细胞或者集体粘丝或者细胞团沿着富含胶原的细胞外基质和增补宿主组织包括纹状肌肉丝和淋巴管的肿瘤生长、肿瘤诱导血管形成和入侵进行重复成像。这个修正的窗口模型将适用于阐述肿瘤转移和入侵的机制，以及相关的实验性治疗。[b]材料与方法[/b]HT-1080双色纤维肉瘤细胞表达细胞质DsRed2和核组蛋白2B（H2B）-EGFP -EGFP (Yamamoto et al. 2004)培养在改良的鹰培养基(PAN Biotech GmbH, Aidenbach, Germany)中，补充10%的胎牛血清(Aurion, Wageningen, The Netherlands)，盘尼西林和链霉素（都100ug/ml PAN)和潮霉素B（0.2mg/ml；Invitrogen, Carlsbad, CA, USA)在37%湿润的5%CO2的培养环境中。小鼠被用异氟烷麻醉并被稳定固定在37℃的温控平台上。使用一个落射多光子显微镜[color=red]（[/color][color=red]TriM Scope, LaVision BioTec[/color][color=red]）[/color]，并配备了OPO装置(OPO APE, Berlin, Germany)用于1100nm波段的双光子激发，以及红外修正的20X/0.95N.A(Olympus)物镜。如果没有特定声明，EGFP，DsRed2和SHG的获取都是使用的832nm的激发光。由带通滤波器确定的检测光波段为400/40(蓝），535/50（绿），605/70（红），和710/75（红外）。以5um的步长对深达250um的成像深度进行顺序3D堆栈。通过向尾静脉注射4mg荧光葡聚糖对血管显影。在注射了淋巴归巢环肽LyP-1（100ug）之后活化的淋巴管被检测到。(Laakkonen et al. 2002)图像被使用ImageJ 1.40 g (W. Rasband, NIH), ImSpector 3.4 (LaVision Bio- Tec GmbH), and Photoshop CS 8.0.1 (Adobe Systems Inc.)重构和分析。以宽的平方X长Xπ/6计算肿瘤体积。有丝分裂和细胞凋亡的比例通过H2B-EGFP模式从每区域30到100个细胞中确定。[b]主要结果 [/b][img=,593,498]http://qd-china.com/uploads/bio-product/51.jpg[/img]Fig.1 在背侧皮肤褶皱室中HT-1080纤维肉瘤细胞的滴落和注射方法比较.6（c）、7（d）天后通过明场和落射荧光显微镜观察的细胞应用，生长位置（a，b）和宏观肿瘤形态。在建立的模型中，允许细胞悬浮液或者细胞球粘附到外科手术准备好的真皮组织表面上，获得了在真皮层与盖玻片（a.c）间的3D肿瘤生长。使用细针将细胞球注射进真皮中阻止盖玻片和真皮内产量增加间的反应（b,d)。标尺1mm（概图）和250um（细节）。 [img=,604,379]http://qd-china.com/uploads/bio-product/52.jpg[/img]Fig 2. 肿瘤生长阶段。 a 由落射荧光显微镜监测的移植瘤生长和入侵的时间进程。新生血管的插入，不存在（3天）和存在（7天）。标尺1mm。b 通过以day 1的体积进行归一化的肿瘤体积。mean+-SD（n=9）。c HT-1080移植肿瘤在6天的时候的肿瘤形态，血管化，分生和凋亡。使用多光子显微镜以激发波长1100nm（左）和832nm（右）获取的一个中央中流区域的3D重构。核形态包括了有丝分裂（白色箭头）和凋亡图（黑色箭头）。标尺50um。插图显示了前相（P）、中相（M）和后相（LA）以及凋亡图（A）。d 对时间依赖的分生和凋亡定量化。数据显示3个非依赖性肿瘤的10-25个独立区域的Mean±SEM。 [img=,617,642]http://qd-china.com/uploads/bio-product/53.jpg[/img]Fig 3. 近红外多光子显微镜显示环绕HT-1080双色肿瘤的肿瘤诱导产生血管及其结构。Z轴为一个6天大肿瘤的从肿瘤边缘（-50um）到肿瘤内部区域（-80um）（红色细胞质；黄色细胞核）。通过FITC-葡聚糖注射现实的密布血管（绿），先前存在的线形血管（绿色箭头）和不规则形状的新生血管（蓝色箭头）。胶原纤维（黑色箭头）和肌肉丝（白色箭头），通过二次谐波检测（灰度）。标尺50um。 [img=,583,768]http://qd-china.com/uploads/bio-product/54.jpg[/img]Fig 4. HT-1080双色细胞的原位入侵模型。a 注射后6天入侵类型的分类。缺少入侵（上，左）并且散布单个细胞（上，右；白色箭头），散射的或者紧密地丝状整体入侵（下图）。标尺250um。 b 45个连续的非依赖性肿瘤的按中所分入侵模式的频率。11天时，沿着纹状肌肉纤维集体入侵丝的定位。标尺100um。d 单一细胞侵入脂肪组织随后进行分散的，部分整体的入侵。对照-少量圆的脂肪细胞（星号）被HT-1080细胞包围。1100nm的激发光来检测遍布的血管(Alexa Fluor 660-dextran,红色),，肿瘤细胞质（绿色假彩），SHG（灰度）；832nm用于肿瘤细胞核（白色）。标尺100um。[img]http://qd-china.com/uploads/bio-product/55.jpg[/img]Fig 5. HT-1080细胞沿淋巴管的入侵。a 由多光子显微镜对边缘而非肿瘤中心的活化淋巴管产生的单幅图片。用FITC连接的LyP-1缩氨酸来检测。深度已标明在图上（um）。b 3D堆栈投影表明淋巴管内（白色箭头）和外淋巴管入侵（黑色箭头）。标尺100um。

[b]摘要[/b]组织的发生与再生依赖于细胞-细胞间相互作用和指向干细胞的信号以及它们的直接增殖。但是，引导组织适当再生的细胞行为还没有被很好的理解。运用一种新的，非侵入的双光子成像技术，我们研究了活鼠随时间推移的生理性毛囊再生。通过这种方法，我们监测了真皮层干细胞和它们的后代在生理性毛囊再生过程中的行为，并指出了间充质对它们行为的影响。承接早先的研究，干细胞在毛发再生的初始阶段处于静止状态而它们的后代处于更活跃的分生状态。除了细胞分化之外，后代细胞的协调运动也允许毛囊的快速扩张。最后，我们通过切蚀目标细胞的和长时间跟踪活毛囊展示了间充质对毛发再生的要求。因此，我们建立了一种直接原位观察毛囊内生长调控的细胞机制的方法，这使得我们可以精确调查生理性再生过程对毛囊组分的功能性要求。[b]材料与方法[/b]在原位成像中，对3周龄的小鼠通过腹膜内注射克他命和甲苯噻嗪进行麻醉，头部区域的皮肤使用机械剪毛器和脱毛膏剃光。小鼠被放在一个加热平台上，头部和耳朵通过一个自制固定台固定。一个玻璃盖被放在头耳结合部的皮肤上。皮肤的图像栈通过一台装配Chameleon Vision II (Coherent)双光子激光器的[color=#ff0000]TriM II Scope[/color][color=#ff0000]（LaVision Biotech[/color][color=#ff0000]）[/color]显微镜获取。一束激光(at 940 nm for GFP and 1040 nm for RFP, respectively)通过aX20水浸物镜（(N.A. 1.0 Olympus)聚焦并以600Hz的频率扫描0.25到0.5mm2的视野区域。系列光学切片在5分钟内以步长2-3μm成像总深度100μm的组织。从静止阶段向生长阶段转变的几个相（静止相到生长初期相）被分析。在皮肤里使用不同的内在标记以在不同试验中定位到视野的初始区域并观察同一个毛囊。实验过程中通过鼻尖吸入气化异氟醚保持麻醉状态。三维双光子激光切蚀。使用同样的光学设备进行激光切蚀。使用900nm的激光束扫描一个10μm2的区域，以25%的激光能量持续1秒钟即可获得切蚀。根据目标深度(30-80 μm)调整切蚀参数。[b]主要结果[/b] [img=,655,507]http://qd-china.com/uploads/bio-product/11.jpg[/img]Figure 1 | 新的一次生长开始，细胞分化是在毛囊中进行空间调控的。a,静止状态毛囊。参与毛发再生的不同细胞群，包括干细胞，progeny和间充质，存在于定义的毛囊解剖隔层中。 b, 来源于双光子激光扫描显微镜系列光学切片的静止态活毛囊的三维重构。上皮细胞核（绿色）通过角蛋白14启动子(K14H2BGFP)驱动的H2B-GFP融合蛋白显影。 c, 一个progeny 分裂的例子。一个活毛囊的单独光学切片（左侧）和progeny 组分中三个处于有丝分裂期间细胞核的放大图（右侧，插图）。 d, 从几个处于早期生长阶段毛囊(n=17)中定量化细胞分裂的位置和轴 (生长初期 II)。e,垂直（左图）和水平（右图）方向干细胞分裂的两个例子。一个活毛囊的单独的光学切片（左侧插图）和处于有丝分裂中的干细胞隔层（右侧插图）的细胞核放大图。红色箭头，有丝分裂中的亲代核与子代核。图片的时间推移分别为15分钟和45分钟。标尺20 μm. [img=,629,446]http://qd-china.com/uploads/bio-product/12.jpg[/img]Figure 2 |生长过程中处于形态重组的干细胞progeny隔层. a, 毛囊生长中的向下伸展。生长状态的活毛囊三个连续时间点（3小时间隔）的光学切片，展示了progeny组分向下的伸展（左三） 。核间距增加，干细胞和progen隔层(大约生长初期 II to IIIa)中的总细胞数被定量。 (右侧, 数据表示为mean±s.e.m. (n=13-20 asterisk, P 0.0001) b,毛囊内的核重组.两个光学切片（左侧）分别跟踪和测量了同一毛囊在0时刻和4h时的（右侧）冠面和切面（xy and xz）（大约生长初期II to IIIa）（底图）。c, 生长中毛囊的向下迁移。单一光学切片表明了单个毛囊在1小时间隔连续时间点的完整的（左侧）和下部局部视图（上侧）。光学切片中的红色箭头和相应的跟踪标记了一个正在向下移动的核，5h内走过了30μm（大约生长初期IIIb）。在0h所展示的绿色核的位置以灰色表示用来比较（右下方图）。标尺20μm. [img=,575,588]http://qd-china.com/uploads/bio-product/13.jpg[/img]Figure 3 | 间充质皮肤乳头的切蚀削弱了毛发再生的启动. a, 实验设计，使用激光诱导皮肤乳头细胞切蚀来测试间充质对毛发再生的要求。b, 切蚀皮肤乳头细胞的活毛囊四个时间点的高放大率光学切片。c,包含少数切蚀皮肤乳头细胞的活毛囊的一群毛囊（黄色箭头）在三个时间点的低放大率光学切片。d,两个progeny被部分切蚀的毛囊在3个时间点的低放大率光学切片。e,切蚀皮肤乳头（上）或部分切蚀progeny隔层（下）的毛囊（作为毛囊的总长度测量）生长与对照完整毛囊的量化比较。数据表示为mean±s.e.m. (n=8-10 asterisk, P 0.0001).标尺50 μm. [img=,566,365]http://qd-china.com/uploads/bio-product/14.jpg[/img]Figure 4 | 毛囊再生的细胞机制。毛发再生的初始阶段，干细胞progeny是启动增殖的第一隔层。虽然分化数量少于干细胞progeny，但是隆突内部也检测到了细胞的分化。子代隔层是沿毛囊生长的轴向分化，而隆突内的分化方向则是随机的。毛囊经历了一个向下的延伸，其中子代内而不是干细胞隔层内的核间距增加。围绕间充质皮肤乳头的上皮细胞核重新排列并围绕间充质压缩。间充质的切蚀导致了毛囊生长的减弱。

①照明源不同。电镜所用的照明源是电子枪发出的电子流，而光镜的照明源是可见光(日光或灯光)，由于电子流的波长远短于光波波长，故电镜的放大及分辨率显著地高于光镜。 　　②透镜不同。电镜中起放大作用的物镜是电磁透镜(能在中央部位产生磁场的环形电磁线圈)，而光镜的物镜则是玻璃磨制而成的光学透镜。电镜中的电磁透镜共有三组，分别与光镜中聚光镜、物镜和目镜的功能相当。 　　③成像原理不同。在电镜中，作用于被检样品的电子束经电磁透镜放大后打到荧光屏上成像或作用于感光胶片成像。其电子浓淡的差别产生的机理是，电子束作用于被检样品时，入射电子与物质的原子发生碰撞产生散射，由于样品不同部位对电子有不同散射度，故样品电子像以浓淡呈现。而光镜中样品的物像以亮度差呈现，它是由被检样品的不同结构吸收光线多少的不同所造成的。 　　④所用标本制备方式不同，电镜观察所用组织细胞标本的制备程序较复杂，技术难度和费用都较高，在取材、固定、脱水和包埋等环节上需要特殊的试剂和操作，最后还需将包埋好的组织块放人超薄切片机切成50～100nm厚的超薄标本片。而光镜观察的标本则一般置于载玻片上，如普通组织切片标本、细胞涂片标本、组织压片标本和细胞滴片标本等。 　　电子显微镜由电子流代替可见光，由磁场代替透镜，让电子的运动代替。光子“数码显微镜”实际上就是在光学显微镜的基础上加了一个数码成像装置，可以将显微镜所成的像，在电脑屏幕上直接显示出来(Intel就推出过一款类似儿童玩具的“数码显微镜”)，其基础还是光学显微镜，和电子显微镜的成像原理是有根本区别的。在这里我们要区别清楚分辨率和放大倍数的问题。细微物体在放大成像时，其最高分辨率取决于所反射的光波的波长，波长越短，分辨率就越高，电子显微镜是利用了波长比普通可见光短得多的X射线成像，当然具备很高的分辨率，而普通“数码显微镜”的放大倍数可以很大，但分辨率是无法提高的。 　　光学显微镜的分辨率与光波的波长有关。对于接近和小于光波波长的物体光学显微镜就无能为力了。电子运动的波长比光波波长短的多，就可以看到更细小的物体。光学显微镜是由一组光学镜头组成的放大成像系统，而电子显微镜由电子流代替可见光，由磁场代替透镜，让电子的运动代替光子，这样就可以看到比光学系统能看到的更小的物体。 　　所谓“数码显微镜”实际上就是在光学显微镜的基础上加了一个数码成像装置，可以将显微镜所成的像，在电脑屏幕上直接显示出来(Intel就推出过一款类似儿童玩具的“数码显微镜”)，其基础还是光学显微镜，和电子显微镜的成像原理是有根本区别的。在这里我们要区别清楚分辨率和放大倍数的问题。细微物体在放大成像时，其最高分辨率取决于所反射的光波的波长，波长越短，分辨率就越高，电子显微镜是利用了波长比普通可见光短得多的X射线成像，当然具备很高的分辨率，而普通“数码显微镜”的放大倍数可以很大，但分辨率是无法提高的。

按细分的原理不同，读数显微镜通常分为直读式、标线移动式和影象移动式3种。1.直读式读数显微镜：线纹尺上的刻度经物镜局部放大后成象于分划板上，如线纹间距为1毫米，放大至与分划板上100个分度的距离相等，通过目镜（放大）即可读出0.01毫米的分度值。2.标线移动式读数显微镜：测量时转动微动手轮，使可动分划板上的双刻线与线纹尺线纹象对准，从读数鼓轮或其他读数机构读出百分位数和千分位数，从可动分划板上读出十分位数。为了避免微动手轮上的精密螺纹（或其他微动机构）磨损，有的显微镜把可动分划板上的双刻线制成双阿基米德螺旋线（图中c）。双阿基米德螺旋线的螺距等于1/10线纹尺线纹间距乘以物镜放大倍数，而在其内圈又刻有100个等分分度，所以在它对准线纹象后，即可从固定分划板上读出十分位数、从可动　　分划板上读出百分位数和千分位数。3.影象移动式读数显微镜：在物镜与分划板之间，加入可动光学元件（例如平面平行玻璃、光楔玻璃或补偿透镜等）。当移动这类光学元件时，线纹尺的线纹象出会移动，在线纹象与固定分划板上的双刻线对准后，即可分别从固定分划板和可动分划板上读出十分位和百分位、千分位的数值。

1．透射式荧光显微镜: 激发光源是通过聚光镜穿过标本材料来激发荧光的。常用暗视野集光器，也可用普通集光器，调节反光镜使激发光转射和旁射到标本上．这是比较旧式的荧光显微镜。其优点是低倍镜时荧光强，而缺点是随放大倍数增加其荧光减弱．所以对观察较大的标本材料较好。 2．落射式荧光显微镜这是近代发展起来的新式荧光显微镜，与上不同处是激发光从物镜向下落射到标本表面，即用同一物镜作为照明聚光器和收集荧光的物镜。光路中需加上一个双色束分离器，它与光铀呈45。角，激发光被反射到物镜中，并聚集在样品上，样品所产生的荧光以及由物镜透镜表面、盖玻片表面反射的激发光同时进入物镜，反回到双色束分离器，使激发光和荧光分开，残余激发光再被阻断滤片吸收。如换用不同的激发滤片／双色束分离器／阻断滤片的组合插块，可满足不同荧光反应产物的需要。此种荧光显微镜的优点是视野照明均匀，成像清晰，放大倍数愈大荧光愈强。

1、接触法：接触法是利用金相显微镜的标记对和紧靠测件测量点、线、面的万工显附件-----光学测孔器的测头连在一起的双刻线进行瞄准定位的测量方法。测量时将光学测孔器的测头紧靠件(内、外)表面。当测量孔径时，首先使测头与测件内孔接触，取得最大弦长后，使米字线中间刻线被光学测孔器的双套线套在中间，并在金相显微镜读取一数;然后改变测量方向，使测头在另一侧与测件接触，同样使米字线分划板的中间刻线仍被光学测孔器的双套线套在中间，在金相显微镜上读取另一数。两次读数的差，再加上测头直径的实际值，即为测件的内尺寸，如减去测头直径的实际值，即为测件的外尺寸。2、影像法:影像法是利用金相显微镜的标记，对影像法进行瞄准定位的测量方法。测量时，通常是先用(米字线)分划板上的刻线瞄准测件影像的边缘，并在读数显微镜上读出数值，然后移动工作台以同一条刻线瞄准测件影像的另一边，再作第二次读数。两次读数的差，就是被测件的测量值。3、轴切法：轴切法是利用金相显微镜的标记对通过测件轴心线并利用测量刀上的刻线进行瞄准定位的测量方法。金相显微镜测量刀是万工显的附件。其表面有一刻线，刻线至刃口的尺寸为0.3和0.9毫米两种，测量时，把测量刀放在测量刀垫板上，刻线面通过测件的轴线，并使测刀的刃口和被测面紧紧接触，用相应的米字线去瞄准，测量两把测刀刻线间的距离，就间接测得被测件的测量值。为了避免测量中的计算，在中间垂直米字线的两侧刻有两组共四条对称分布的平行线，每组刻线对中心刻线的距离分别为0.9和2.7毫米，它正好是测刀的刃口到刻线间的距离0.3和0.9毫米的3倍。这样用3倍物镜瞄准时，分划板上的0.9和2.7毫米刻线正好压住测刀上的0.3和0.9毫米刻线，这时测刀上的刃口正好被米字线的中间刻线所瞄准。主要用于螺纹中径测量。

传统的光学[URL=http://yiqi.jixie.com]显微镜[/URL]主要由光学系统及支撑它们的机械结构组成，光学系统包括物镜、目镜和聚光镜，都是由各种光学玻璃做成的复杂化了的放大镜。物镜将标本放大成像，其放大倍率M物由下式决定：M物=Δ∕f’物 ，式中f’物是物镜的焦距，Δ可理解为物镜与目镜间的距离。目镜将物镜所成之像再次放大，成一个虚像在人眼前250mm处供人观察,这是多数人感觉最舒适的观察位置，目镜的倍率M目=250/f’目,f’目是目镜的焦距。显微镜的总放大倍率是物镜与目镜的乘积，即M=M物*M目=Δ*250∕f’目*f 物。可见，减小物镜及目镜焦距将使总放大倍率提高，这是用显微镜可以看到细菌等微生物的关键,也是其与普通放大镜的区别所在。　　那么，是否可以设想无限制地减少f’物f’目，以便提高放大倍率，使我们能看到更加细微的物体呢?回答是否定的！这是因为用以成像的光本质是一种电磁波，因而在传播过程中免不了产生衍射和干涉现象，就像日常所见水面的波纹遇到障碍时能绕行，两列水波相遇时能互相加强或削弱一样。当从一个点状的发光物点发出的光波进入物镜时，物镜的边框阻碍了光的传播，产生衍射和干涉，经物镜后无法再会集于一点，而是形成有一定大小的光斑，外围还有强度微弱并逐渐减弱的一系列光环，我们称中心亮斑为艾里斑，两个发光点靠近到一定距离时两光斑就会重叠，直至无法确认为两个光斑。瑞利提出了一个判定标准，认为当两光斑中心相距等于艾里斑半径时，两光斑是能分辨的，经计算，这时候两个发光点间的距离e=0.61入∕n.sinA=0.61入∕N.A，式中，入为光波波长，人眼可接收的光波波长约为0.4—0.7um，n为发光点所处介质的折射率，如处在空气中，n≈1，处在水中，n≈1.33，而A为发光点对物镜边框张角之半，N.A称为物镜的数值孔径。从上式可见，物镜能分辨的两点间的距离受到了光的波长和数值孔径的限制，由于人眼视觉最敏锐的波长约为0.5um，而A角不可能超过90度，sinA总小于1，对于可用的透光介质最大折射率约为1.5，故 e值始终大于0.2um，这是光学显微镜能分辨的最小极限距离。通过[URL=http://WWW.JXIIE.COM]光学显微镜[/URL]放大成像，若想将能被具有某些N.A值的物镜分辨率的物点间距e放大到足以被人眼分辨，则需M.e≥0.15mm，此处0.15mm为实验得出的人眼能分辨的置于眼前250mm处两微物间的最小距离，故M≥（0.15∕0.61入）N.A≈500N.A ，为使观察不致太费力，M扩大一倍便足够了，即500N.A≤M≤1000N.A，是显微镜总倍率的合理选取范围，再大的总放大倍率是没有意义的，因为[URL=http://yiqi.jixie.com]物镜[/URL]数值孔径已经限制了最小可分辨距离，提高放大倍率已不可能分辨出更小的物体细节了。　　成像衬度是[URL=http://WWW.JXIIE.COM]光学显微镜[/URL]的另一个关键问题，所谓衬度，即是像面上相邻部份间的黑白对比度或颜色差，人眼对于0.02以下的亮度差别是很难判定的，对颜色差别则稍微敏感一些。有些[URL=http://WWW.JXIIE.COM]光学显微镜[/URL]观察对象，如生物标本，其细节间亮度差别甚小，加之显微镜光学系统设计制造误差使其成像衬度进一步降低而难于分辨，此时，看不清物体细节，不是总放大倍率过低，也不是物镜数值孔径太小，而是由于像面衬度太低的缘故。[URL=http://yiqi.jixie.com][IMG]http://forum.yidaba.com/attachments/20080818_4bc5ca56d10a099a7184A9ekahrt5sBT.gif[/IMG][/URL]　　多少年来，人们为提高[URL=http://WWW.JXIIE.COM]光学显微镜[/URL]的分辨能力和成像衬度付出了艰辛的劳动，随着计算机技术和工具的不断进步，光学设计的理论和方法也在不断改进，加上原材料性能的提高，工艺和检测手段的不断完善，观察方法的创新，使光学[URL=http://WWW.JXIIE.COM]光学显微镜[/URL]的成像质量已经接近衍射极限的完善程度，人们将用标本染色、暗场、相衬、荧光、干涉、偏光等观察技术，使得光学显微镜已能适应形形色色标本的研究，虽然近年来电子显微镜，超声显微镜等放大成像[URL=http://yiqi.jixie.com]仪器[/URL]先后问世，在某些方面具有优势的性能，但在廉价、方便、直观、特别是适合生物活体的研究等方面仍无法与光学显微镜匹敌，光学显微镜仍然牢固地占据着自己的阵地。另一方面，与激光、计算机、新材料技术、信息技术相结合，古老的[URL=http://WWW.JXIIE.COM]光学显微镜[/URL]正焕发青春，显示了旺盛的生命力，数码显微镜、激光共焦扫描显微镜、近场扫描[URL=http://WWW.JXIIE.COM]显微镜[/URL]、双光子显微镜及具有各种新的功能或能适应各种新的环境条件的[URL=http://yiqi.jixie.com]仪器[/URL]层出不穷，更加扩大了光学显微镜的应用领域，作为最新的例子。从火星探测车上传回的岩层显微图片是多么令人振奋！我们完全可以相信，光学显微镜将会以更新的姿态，造福人类。

摘要：本文将对生物显微镜进行详细介绍，包括其原理、类型、应用领域以及未来发展趋势。生物显微镜是生命科学研究中不可或缺的工具，它让我们能够深入观察生命的微观世界，从而更好地理解生命的奥秘。一、生物显微镜的原理生物显微镜的工作原理基于光学成像技术，通过透镜组合将微小物体放大并呈现出清晰的图像。它主要由光源、物镜、目镜、载物台等部分组成。生物显微镜利用可见光或荧光等光源照射样品，通过物镜将样品放大，再经过目镜进一步放大，最后由观察者或相机捕捉到放大的图像。二、生物显微镜的类型[list=1][*]光学显微镜：利用可见光成像，适用于观察细胞结构、组织切片等样品。[*]荧光显微镜：利用荧光染料标记样品，通过激发荧光观察特定结构或分子。[*]共聚焦显微镜：通过激光扫描样品，实现三维层析成像，适用于观察厚样本。[*]超分辨显微镜：突破光学衍射极限，实现更高分辨率成像，如STED显微镜、PALM/STORM显微镜等。[/list]三、生物显微镜的应用领域[list=1][*]生命科学研究：观察细胞结构、分子定位、生物大分子互作等。[*]医学诊断：病理诊断、细胞学检查、病原微生物检测等。[*]环境科学：观察微生物、污染物等环境样品的形态和结构。[*]材料科学：观察纳米材料、复合材料等微观结构和性能。[/list]四、生物显微镜的未来发展趋势[list=1][*]高分辨率与高速成像：随着技术的不断进步，生物显微镜将实现更高的分辨率和更快的成像速度，为生命科学研究提供更多细节和动态信息。[*]多模态成像：将多种成像技术融合到一台显微镜中，如光学、荧光、拉曼等多种模态，以实现对样品的多角度、多层次观察。[*]智能化与自动化：AI和机器学习等技术的发展将推动生物显微镜的智能化和自动化进程，实现自动样品定位、图像分析等功能，提高研究效率和准确性。[*]非线性光学成像：利用非线性光学效应，如二次谐波生成、多光子激发等，实现无标记、无损伤的深层组织成像，为生物医学研究提供新的观察手段。[*]便携式与便携式显微镜：为了满足野外、临床等场景的实时观测需求，生物显微镜将朝着更小巧、便携的方向发展。[/list]总结：生物显微镜作为揭示生命微观世界的利器，在生命科学、医学、环境科学等领域发挥着重要作用。随着科技的不断进步和创新，生物显微镜的分辨率、成像速度和功能将不断提升，为探索生命奥秘提供更多可能性。在未来，我们有理由相信生物显微镜将继续为科学研究和应用领域带来更多的突破和成就。

荧光显微镜的原理 ：荧光显微镜是利用一个高发光效率的点光源，经过滤色系统发出一定波长的光(如紫外光3650入或紫蓝光4200入)作为激发光、激发标本内的荧光物质发射出各种不同颜色的荧光后，再通过物镜和目镜的放大进行观察。这样在强烈的对衬背景下，即使荧光很微弱也易辨认，敏感性高，主要用于细胞结构和功能以及化学成分等的研究。荧光显微镜的基本构造是由普通光学显微镜加上一些附件(如荧光光源 、激发滤片、双色束分离器和阻断滤片等)的基础上组成的。荧光光源——般采用超高压汞灯(50一200W)，它可发出各种波长的光，但每种荧光物质都有一个产生最强荧光的激发光波长 ，所以需加用激发滤片（一般有紫外、紫色、蓝色和绿色激发滤片），仅使一定波长的激发光透过照射到标本上，而将其他光都吸收掉。每种物质被激发光照射后，在极短时间内发射出较照射波长更长的可见荧光。荧光具有专一性，一般都比激发光弱，为能观察到专一的荧光，在物镜后面需加阻断(或压制)滤光片。它的作用有二：一是吸收和阻挡激发光进入目镜、以免于扰荧光和损伤眼睛，二是选择并让特异的荧光透过，表现出专一的荧光色彩。两种[url=http://www.gengxu.cn]滤光片[/url]必须选择配合使用。荧光显微镜就其光路来分有两种：1．透射式荧光显微镜: 激发光源是通过聚光镜穿过标本材料来激发荧光的。常用暗视野集光器，也可用普通集光器，调节反光镜使激发光转射和旁射到标本上．这是比较旧式的荧光显微镜。其优点是低倍镜时荧光强，而缺点是随放大倍数增加其荧光减弱．所以对观察较大的标本材料较好。2．落射式荧光显微镜这是近代发展起来的新式荧光显微镜，与上不同处是激发光从物镜向下落射到标本表面，即用同一物镜作为照明聚光器和收集荧光的物镜。光路中需加上一个双色束分离器，它与光铀呈45。角，激发光被反射到物镜中，并聚集在样品上，样品所产生的荧光以及由物镜透镜表面、盖玻片表面反射的激发光同时进入物镜，反回到双色束分离器，使激发光和荧光分开，残余激发光再被阻断滤片吸收。如换用不同的激发滤片／双色束分离器／阻断滤片的组合插块，可满足不同荧光反应产物的需要。此种荧光显微镜的优点是视野照明均匀，成像清晰，放大倍数愈大荧光愈强。荧光显微镜使用方法．1．打开灯源，超高压汞灯要预热几分钟才能达到最亮点。2．透射式荧光显微镜需在灯源与聚光器之间装上所要求的激发滤片，在物镜的后面装上相应的阻断滤片。落射式荧光显微镜需在光路的插槽中插入所要求的激发滤片／双色束分离器／阻断滤片的插块。3．用低倍镜观察，根据不同型号荧光显微镜的调节装置，调整光源中心，使其位于整个照明光斑的中央。4．放置标本片，调焦后即可观察。 使用中应注意：末装滤光片不要用眼直接观察，以免引起眼的损伤；用油镜观察标本时，必须用无荧光的特殊油镜；高压汞灯关闭后不能立即重新打开，需经5分钟后才能再启动，否则会不稳定，影响汞灯寿命。荧光显微镜的观察在示教台上的荧光显微镜下用蓝紫光滤光片，可见经o．01％的丫啶橙荧光染料染色的细胞，细胞核和细胞质被激发产生两种不同颜色的荧光(暗绿色和橙红色)。

[em56] 高品质偏光显微镜-电脑型偏光显微镜-数码显微镜http://www.68610299.com/polarze.html 高品质偏光显微镜[img]http://www.chfang.com/produce/polarze/img/xp200a-1.gif[/img]电脑型偏光显微镜 XP-200E http://www.68610299.com/produce/polarze/XP-200.html XP-200双目偏光显微镜http://www.68610299.com/produce/polarze/XP-200E.html XP-200E数码偏光显微镜http://www.68610299.com/produce/polarze/XP-203.html XP-203电脑型偏光显微镜http://www.68610299.com/produce/polarze/XP-500.html XP-500高精度偏光显微镜http://www.68610299.com/produce/polarze/XP-600.html XP-600偏振光显微镜http://www.68610299.com/produce/polarze/XP-700.html XP-700电脑型显微镜http://www.68610299.com/produce/polarze/XPV-201.html XPV-201反光显微镜http://www.68610299.com/produce/polarze/XPV-203.html XPV-203透反射偏光显微镜http://www.68610299.com/produce/polarze/XPV-300.html XPV-300矿相显微镜http://www.68610299.com/produce/polarze/XPN-100.html XPN-100偏光显微镜热台http://www.68610299.com/produce/polarze/XPN-203.html XPN-203偏光熔点测定仪http://www.68610299.com/produce/polarze/XPN-300.html XPN-300偏光温度测定仪http://www.68610299.com/produce/polarze/XPSOFT.html 偏光公析软件http://www.shchfang.com/polarze/XPT7.htm XPT-7单目偏光显微镜http://www.shchfang.com/polarze/XP200.htm XP-200双目偏光显微镜http://www.shchfang.com/polarze/XP200e.htm XP-200e数码偏光显微镜http://www.shchfang.com/polarze/XP201.htm XP-201偏光显微镜上海http://www.shchfang.com/polarze/XP500.htm XP-500高精度偏光显微镜http://www.shchfang.com/polarze/XP600.htm XP-600偏振光显微镜http://www.shchfang.com/polarze/XP700.htm XP-700电脑型显微镜偏光显微镜http://www.shchfang.com/polarze/XPV201.htm 反光显微镜岩石显微镜http://www.shchfang.com/polarze/XPV203.htm XPV-203透反射偏光显微镜http://www.shchfang.com/polarze/XPN100.htm XPN-100偏光热台http://www.shchfang.com/polarze/XPN203.htm XPN-203偏光熔点测点仪http://www.shchfang.com/polarze/XPN300.htm XPN300偏光温控仪http://www.shchfang.com/polarze/XPSOFT.htm 偏光分析软件http://www.chfang.com.cn/produce/Polarze/XPT7.htm XPT-7单目偏光显微镜http://www.chfang.com.cn/produce/Polarze/XP201.htm XP-201偏光显微镜http://www.chfang.com.cn/produce/Polarze/XP202.htm XP-202双目偏光显微镜http://www.chfang.com.cn/produce/Polarze/XP203E.htm XP-203E数码偏光显微镜http://www.chfang.com.cn/produce/Polarze/XP213E.htm XP-213E矿相显微镜http://www.chfang.com.cn/produce/polarze/XP700Z.htm XP-700Z上海光学仪器厂http://www.chfang.com.cn/produce/Polarze/XPV201.htm XPV-201透反射偏光显微镜http://www.chfang.com.cn/produce/Polarze/XPV203E.htm XPV-203E透反射偏光显微镜http://www.chfang.com.cn/produce/Polarze/XPV213Z.htm XPV-213Z数码透反射偏光显微镜http://www.chfang.com.cn/produce/Polarze/XPM203E.htm XPM203E偏光显微熔点测定仪http://www.chfang.com.cn/produce/Polarze/XPN203E.htm XPN203E偏光显微熔点仪http://www.chfang.com.cn/produce/Polarze/XPsoft.htm 偏光显微镜软件XP-213系列透射矿相显微镜也叫偏光显微镜是地质、矿产、冶金等部门和相关高等院校最常用的专业实验仪器。 [img]http://www.chfang.com.cn/produce/Polarze/XP213E_2.gif[/img]矿相显微镜 XP-212 矿相显微镜 XP-213E 矿相显微镜 XP-213Z 二、仪器特点： 偏光显微镜XP-213，随着光学技术的不断进步，作为光学仪器的偏光显微镜，其应用范围也越来越广阔，许多行业，如化工的化学纤维，半导体工业以及药品检验等等，也广泛地使用偏光显微镜。XP-213透射偏光显微镜就是非常适用的产品，可供广大用户作单偏光观察，正交偏光观察，锥光观察以及显微摄影，配置有石膏λ、云母λ/4试片、石英楔子和移动尺等附件，是一组具有较完备功能和良好品质的新型产品.本仪器的具有可扩展性，可以接计算机和数码相机。对图片进行保存、编辑和打印。 三、技术参数 1、放大范围：40X-400X 2、CF高眼点目镜： 10X/18、10X/18（带十字分划） 3、CF无应力物镜：消色差4X、10X、40X（弹簧）；60X（弹簧、选购） 4、机械筒长：160mm 5、物镜转换器：内定位式，四孔转换机构，转动舒适 6、粗微调机构：粗微动同轴机构，粗调范围为26.5mm，微调0.2mm/转，微动刻度 2um/1格 7、双目观察镜筒：倾斜角45°，可旋转360°，放大率1×，视力调节范围为±5mm，光瞳间距52-75mm 8、旋转载物台：钢丝导轨机构，直径 Φ158mm，圆周360°等分刻度，游标精度6ˊ 9、聚光镜支架：聚光镜上下移动范围23mm，专用偏光分体式聚光镜，数值孔径0.9，可装Φ33mm滤色镜 10、起偏镜：360°可调 11、检偏镜：180°可调，并带有锁紧装置 12、勃氏镜：旋转式切换，焦距可调 13、1×接筒：集检偏镜、补偿器、勃氏镜于一体，结构紧凑，操作方便灵活 14、照明控制：显微镜底座左侧有带调光器的开关 15、照明系统：6V20W卤素灯，预对准中心，不带视场光栏 四、系统简介 偏光显微镜系统是将精锐的光学显微镜技术、先进的光电转换技术、尖端的计算机图像处理技术完美地结合在一起而开发研制成功的一项高科技产品。可以在计算机显示器上很方便地观察偏光图像，从而对偏光图谱进行分析等对图片进行输出、打印。 五、系统组成 电脑型偏光显微镜(XP-213E): 1、偏光显微镜 2、适配镜 3、摄像器(CCD) 4、A/D(图像采集) 5、计算机数码相机型偏光显微镜(XP-213Z):: 1、偏光显微镜 2、适配镜 3、数码相机（NIKON） http://www.lvyoublog.com/user1/chfang112/archives/2007/7212.html 偏光显微镜http://www.coldtea.cn/blog/user2/10089/archives/2007/36528.html 偏光显微镜http://leopard.91health.net/user1/chfang444/archives/2007/4955.html 显微镜http://club.imageedu.com/Blog/user1/2850/archives/2007/15609.html 偏光显微镜http://www.cipchina.com/blog/more.asp?name=chfang444&id=11188 偏光显微镜[img]http://www.chfang.com/produce/polarze/img/xp500e-1.gif[/img]http://blog.newrun.cn/u/chfang112/4285.html 高精度偏光显微镜 XP-500Ehttp://www.zhukuai.com/blog.asp?id=1047 偏光显微镜 XP-600E(电脑型)http://blog.newrun.cn/u/chfang444/4286.html 偏光显微镜 XP-700Z(数码型)http://chfang333.it.com.cn/articles/270675.htm 偏光显微镜 XPV-201(普通型)http://chfang333.it.com.cn/articles/270674.htm 偏光显微镜 XPV-203E(透反型)http://jinxiangxwj.blogbus.com/logs/8373309.html 偏光显微镜XPV-300Z(数码型)http://chinachfang.blogbus.com/logs/8373326.html 偏光显微镜 XPN-100Z(双目型)http://chfag112.blogbus.com/logs/8373340.html 偏光显微镜 XPN-203E(电脑型)http://chfang444.bokee.com/viewdiary.19488770.html 偏光显微镜 XPN-300E(电脑型)http://xianweijingjx.blog.sohu.com/64676869.html 偏光分析软件金相显微镜 偏光显微镜 生物显微镜 体视显微镜 荧光显微镜

共聚焦显微系统（LSCM）诞生至今，短短二十多年里，已经成为了科学研究的重要工具。在我国生命科学研究领域，也发挥着巨大的作用。如何更好利用激光共聚焦技术，推动生命科学研究，受到了学术界的广泛关注。 激光共聚焦显微镜作为光学显微镜的重大改进，与传统场式（widefield）照明显微镜相比有许多独特的优点， 它可以控制焦深、照明强度，降低非焦平面光线噪音干扰，从一定厚度标本中获取光学切片。可以在不改变普通荧光显微镜的制片方法的前提下，观察到非常清晰的高质量图像，并且通过共聚焦显微镜可以十分方便的观察活的细胞或组织。 它的诞生，大大提高了科学研究的效率。目前共聚焦显微镜在国内的应用已经相当广泛，在越来越多的国家级科研院所与高校实验室，都能看到科研工作者忙碌在共聚焦显微镜前的身影。以下为奥林巴斯品牌类显微镜：智能激光扫描共聚焦显微镜——FV10iFV1000MPE：只关注多光子荧光成像FluoView™ FV1000共聚焦显微镜DSU转盘扫描显微镜奥林巴斯FluoView™ FV300（已停产）大家了解多少？欢迎讨论用后感想。

资产名称单位数量原值本币ZEISS AXIOSTAR PLUS 显微镜台157200倒置式生物显微镜台15075系统显微镜B*41-32H02台135000A*IOSKOP40三目显微镜台174000德国ZMISS AXIOSTAS PLAS 荧光显微镜台1126000显微镜BX41-12JO2台121250系统显微镜BX41-32H02台131600九人共览显微镜台1341500日本OLYMPUS显微镜BX41-32HO2台136540日本OLYMPUS显微镜BX41-12HO2(非标套)台126760日本OLYMPUS显微镜BX41-12HO2(非标套)+物镜PL2X 2个台132800尼康551三目显微镜台153000尼康501双目显微镜台143000显微镜台1[font=宋体

奥林巴斯显微镜各型号汇总对比本文是在汇集各个常规的奥林巴斯推出的型号和参数，旨在帮助实验室观察研究人员对于奥林巴斯显微镜有个更加深入的了解： 产品名称详细参数奥林巴斯显微镜CX22显微镜类型：教学级显微镜；观察头：双目观察筒, 镜筒倾角为30度, 瞳间距48-75mm；目镜：10×, 视场数F.N. 18(防霉处理)；物镜：平场消色差;4×N.A.0.10 W.D. 22.0mm;10×N.A.0.25 W.D. 10.5mm;40.. 奥林巴斯显微镜CX31显微镜类型：教学级显微镜；观察头：三目, 视场数20, 镜筒倾角为30度, 瞳间距48-75mm, 光路选择(50双目/50摄像)；调焦：载物台垂直运动由滚柱(齿条—小齿轮)机构导向, 采用粗微同轴旋钮, 粗调行程每一圈为36.8mm,奥林巴斯显微镜BX53显微镜类型：研究级显微镜；观察头：宽视野(视野数为22): 宽视野双目镜筒，倾角为30度 宽视野可倾斜式双目镜筒，倾角为5度-35度 宽视野三目镜筒，倾角为30度 宽视野人机工程(倾斜/伸缩式)双目镜筒，倾角为0度-25. 奥林巴斯显微镜BX51显微镜类型：研究级显微镜(正置)；观察头：宽视野(视野数为22):·宽视野双目镜筒, 倾角为30度·宽视野可倾斜式双目镜筒, 倾角为5度-35度·宽视野三目镜筒, 倾角为30度·宽视野人机工程(倾斜/.. 奥林巴斯显微镜BX43显微镜类型：临床用的万能研究级显微镜；观察头：宽视野(视场数22): 宽视场三目观察筒, 倾角30度; 宽视场人机工程学双目观察筒, 倾角0～25度. 超宽视野(视场数26.5): 超宽视场三目观察筒, 倾角24度；调焦：聚焦: .. 奥林巴斯显微镜SZ51显微镜类型：体视显微镜(解剖镜)；观察头：观察筒倾角: 45度；目镜："ComfortView"WHSZ系列, 无铅；物镜：辅助物镜: 用螺丝在框架底部固定(M48螺纹×0.75)；调焦：调焦旋钮: 左/右单轴水平旋钮, 结合瞳间距高低放.. 奥林巴斯显微镜SZ61显微镜类型：体视显微镜(解剖镜)；观察头：观察筒倾角: 45度；目镜："ComfortView"WHSZ系列, 无铅；物镜：辅助物镜: 用螺丝在框架底部固定(M48螺纹×0.75)；调焦：调焦旋钮: 左/右单轴水平旋钮, 结合瞳间距高低放.. 奥林巴斯显微镜CX41显微镜类型：教学级显微镜；观察头：U-CBI30-2, 双目; U-CTR30-2, 三目, 视场数: 20, 镜筒倾角为30度, 瞳间距48-75mm, 光路选择(50双目/50摄像)；物镜：平场消色差物镜, 4x、0.10、22.0mm; 10x、0.25、10.5mm; 40... 奥林巴斯显微镜CkX41(临床级)显微镜类型：倒置显微镜；观察头：双目镜筒:U-CBI30-2: 倾斜30度双目观察筒, 瞳间距在48～75mm, 左目筒可进行屈光度调节(F.N.20);U-CBI30-2: 倾斜30度双目观察筒, 瞳间距在48～75mm, 左目筒可进行屈光... OLYMPUS显微镜SZ61TRC显微镜类型：体视显微镜(解剖镜)；观察头：观察筒倾角: 45度；目镜："ComfortView"WHSZ系列, 无铅；物镜：辅助物镜: 用螺丝在框架底部固定(M48螺纹×0.75)；调焦：调焦旋钮: 左/右单轴水平旋钮, 结合瞳间距高低放 奥林巴斯显微镜BX41(临床用 显微镜类型：临床用的万能研究级显微镜；观察头：宽视野(视场数22): 宽视场双目观察筒, 倾角30度;宽视场可变倾角双目观察筒, 倾角5～35度.超宽视野(视场数26.5): 超宽视场三目观察筒, 倾角24度.；调焦...奥林巴斯显微镜CKX31(临床级)显微镜类型：倒置显微镜；观察头：双目镜筒: 固定式双目镜筒, 镜筒倾角为45度. 瞳距可在48-75mm范围内进行调节, 右筒备有螺旋面, 可调节屈光度.；目镜：10×(F.N.20)；调焦：通过物镜转盘的上下移动进行调焦(载物..奥林巴斯显微镜BX51(临床级 显微镜类型：临床用的万能研究级显微镜；观察头：宽视野(视场数22): 宽视场三目观察筒, 倾角30度; 宽视场人机工程学双目观察筒, 倾角0～25度.超宽视野(视场数26.5): 超宽视场三目观察筒, 倾角24度.；调焦：.. 奥林巴斯显微镜BX51IX51 显微镜类型：研究级显微镜(倒置)；观察头：可倾斜式双目: U-TBI90: 35度-85度连续可调倾角(眼点高度406-471mm), 瞳间距调节范围50-76mm, 屈光度调节功能, 正立像, F.N.22双目: U-BI90CT: 内置对中望远镜, 瞳... 通过对比不难发现，不同的型号所对应的产品的参数性能

实验室一台olympus BX51M 金相显微镜，第三目位置目前加了个佳能的照相机，可以拍。 另有一套光纤光谱仪，用光纤置换相机，可以采集光谱。 但是拍照和采谱不能同时进行。 有没有一转二接口的适配器？ 原厂的价格太高了，国产的有做光学配件比较好的推荐么？ 上海地区

激光共聚焦扫描显微镜简介一、 激光共聚焦显微镜的基本组成激光扫描共聚焦显微镜(laser scanning confocal microscope LSCM)是20世纪80年代发展起来的一项具有划时代意义的高科技新产品，是当今世界最先进的细胞生物学分析仪器。激光共聚焦显微镜利用激光作为光源，在传统光学显微镜基础上采用共轭聚焦的原理和装置，以及通过针孔的选择和PMT的收集，并带有一套对其所观察到的对象进行数字图像分析处理的系统软件。与传统光学显微镜相比，它具有更高的分辨率，实现多重荧光的同时观察并可形成清晰的三维图象等优点。所以它问世以来在生物学的研究领域中得到了广泛应用。激光共聚焦显微镜主要有四部分组成：1、显微镜光学系统。2、扫描装置。3、激光光源。4、检测系统。整套仪器由计算机控制，各部件之间的操作切换都可在计算机操作平台界面中方便灵活地进行。1.1 显微镜光学系统　　显微镜是LSCM的主要组件，它关系到系统的成象质量。显微镜光路以无限远光学系统可方便地在其中插人光学选件而不影响成象质量和测量精度。物镜应选取大数值孔径平场复消色 差物镜，有利于荧光的采集和成象的清晰。物镜组的转换，滤色片组的选取，载物台的移动调节，焦平面的记忆锁定都应由计算机自动控制。1.2 扫描装置　　LSCM使用的扫描装置在生物领域一般为镜扫描。由于转镜只需偏转很小角度就能涉及很大的扫描范围，图象采集速度大大提高，512×512画面每秒可达4帧以上，有利于那些寿命短的离子作荧光测定。扫描系统的工作程序由计算机自动控制。1.3 激光光源　　LSCM使用的激光光源有单激光和多激光系统。多激光器系统在可见光范围使用多谱线氩离子激光器，发射波长为457nm、488nm和514nm的蓝绿光，氦氖绿激光器提供发射波长为543nm的绿光，氦氖红激光器发射波长为633nm的红光，新的405nm半导体激光器的出现可以提供近紫外谱线，但是小巧便宜而且维护简单。1.4 检测系统　　LSCM为多通道荧光采集系统，一般有三个荧光通道和一个透射光通道，能升级到四个荧光通道，可对物体进行多谱线激光激发，样品发射荧光的探测器为感光灵敏度高的光电倍增管PMT，配有高速12位A/D转换器，可以做光子计数。PMT前设置针孔，由计算机软件调节针孔大小，光路中设有能自动切换的滤色片组，满足不同测量的需要,也有通过光栅或棱镜分光后进行光谱扫描功能的设置。二、激光共聚焦显微镜的特点以及在生物领域的应用传统光学显微镜相比，激光共聚焦显微镜具有更高的分辨率，实现多重荧光的同时观察并可形成清晰的三维图象等优点，在对生物样品的观察中，激光共聚焦显微镜有如下优越性：1、对活细胞和组织或细胞切片进行连续扫描，可获得精细的细胞骨架、染色体、细胞器和细胞膜系统的三维图像。2、 可以得到比普通荧光显微镜更高对比度、高解析度图象、同时具有高灵敏度、杰出样品保护。3、***图象的获得，如7 维图象(XYZaλIt): xyt 、xzt 和xt 扫描,时间序列扫描旋转扫描、区域扫描、光谱扫描、同时方便进行图像处理。 4、细胞内离子荧光标记，单标记或多标记，检测细胞内如PH和钠、钙、镁等离子浓度的比率测定及动态变化。5、荧光标记探头标记的活细胞或切片标本的活细胞生物物质，膜标记、免疫物质、免疫反应、受体或配体，核酸等观察；可以在同一张样品上进行同时多重物质标记，同时观察； 6、对细胞检测无损伤、精确、准确、可靠和优良重复性；数据图像可及时输出或长期储存。 由于共聚焦显微镜的以上优点，激光共聚焦显微镜在以下研究领域中应用较为广泛：1、细胞生物学：如：细胞结构、细胞骨架、细胞膜结构、流动性、受体、细胞器结构和分布变化、细胞凋亡机制；各种细胞器、结构性蛋白、DNA、RNA、酶和受体分子等细胞特异性结构的含量、组分及分布进行定量分析；DNA、RNA含量、利用特定的抗体对紫外线引起的DNA损伤进行观察和定量；分析正常细胞和癌细胞细胞骨架与核改变之间的关系；细胞黏附行为等 2、生物化学：如：酶、核酸、受体分析、荧光原位杂交、杂色体基因定位等，利用共聚焦技术可以取代传统的核酸印迹染交等技术，进行基因的表达检测，使基因的转录、翻译等检测变的更加简单、准确。3、药理学：如：药物对细胞的作用及其动力学；药物进入细胞的动态过程、定位分布及定量 4、生理学、发育生物学：如：膜受体、离子通道、离子含量、分布、动态；动物发育以及胚胎的形成，骨髓干细胞的分化行为；细胞膜电位的测量.荧光漂白恢复（FRAP）、荧光漂白丢失（FLIP）的测量等。 5、遗传学和组胚学：如：细胞生长、分化、成熟变化、细胞的三维结构、染色体分析、基因表达、基因诊断； 6、神经生物学：如：神经细胞结构、神经递质的成分、运输和传递； 7、微生物学和寄生虫学：如：细菌、寄生虫形态结构； 8、病理学及病理学临床应用：如：活检标本的快速诊断、肿瘤诊断、自身免疫性疾病的诊断； 9、免疫学、环境医学和营养学。如：免疫荧光标记（单标、双标或三标）的定位，细胞膜受体或抗原的分布,微丝、微管的分布、两种或三种蛋白的共存与共定位、蛋白与细胞器的共定位；对活细胞中的蛋白质进行准确定位及动态观察可实时原位跟踪特定蛋白在细胞生长、分裂、分化过程中的时空表达，荧光能量共转移（FRET）。

生物显微镜相关知识一、应用领域 生物显微镜适用于生物细胞、各种血细胞、各种细菌、污水杂质等！二、主要功能/参数1.调焦机构： 粗微动同轴，三角钢柱导轨，带有手轮松紧调节和限位装置粗调22mm，微调0.002mm2.转换器：四孔内倾，钢珠定位 3.载物台：双层机械移动平台，双切片夹大小140×132mm，移动范围70×50mm 4.聚光镜：阿贝聚光镜，N.A.=1.25，可变光阑，聚光镜中心可调 5.电 源：开关电源，宽电压AC 100V-250V选配： 可选择配置工业相机：1. 分别有A系列的 A-700 （特点反应速度快） 2. V系列 V-130和V-200（特点：高清晰） 3. U系列 U-300 U-500 U-900 U-1400 （特点：高清晰画面、功能强大）在U系列里面可选择配置测量系统：分别分为三类：有基础版、中级版、专业版1.基础版：静态测量 可测实际物体的尺寸，面积，角度，弧度等。 具体请看相关资料。2.中级版：动态测量 具备基础版的所有功能，可以直接输出 WORD ,EXCE格式测量结果。3.专业版：动态测量 具备中级版的所有功能，可以自动统计数量， 自动抓去边缘，自动测量等。

相衬显微镜 摘要：本文详细介绍了相衬显微镜的光学结构、相衬装置、相衬原理、相衬显微分析的基本原理、相衬显微镜的操作以及其在金相分析中的应用。相衬显微镜是利用特殊相板的作用，使不同相位的反射光发生干涉或迭加，借以鉴别金相组织，又称“相差显微镜”。试样表面高度差大概在十埃到几百埃范围内均能清楚地被“相衬显微镜”所鉴别。 关键字：相衬显微镜、相衬原理、相衬装置 1. 相衬显微镜的光学结构 相衬显微镜的特点是在一般金相显微镜中加两个特殊的光学元件，在光源系统光阑的位置上，更换一块单环或同心双环遮板在物镜后焦面上放置一块相板，它是一块透明的玻璃片，在对应于圆环形遮板透光的狭缝处，真空喷镀两层不同物质的镀膜，称为“相环”，它起着移相合降低振幅的作用，当光线经遮板狭缝后形成环形光束射入显微镜，借助透镜调整遮板，使圆环狭缝正好聚焦在相板上，即使射入的环形光束与相板上的环状涂层完全吻合，为了调节方便，实际板上的环状涂层略大于狭缝的投影。 环形光束通过相环后经物镜投射在试样表面上，如果试样是一块平整光滑的磨面，那么反射光进入物镜光线必然与相环吻合，如果磨面有凸凹差别，，则不同部位的反射结果不同，凸出部分的反射光是直射光，经物镜后重又投在相环上，透过相环进入目镜，而凹陷部分的反射光包括直射光和衍射光两部分，直射光透过相环而衍射光则由各个方向进入物镜投射在相板的整个平面上，可见借遮板与相板的配合使反射光中的直射光裕衍射光在相板上通过不同的区域，即直射光通过相板上的相环部分，而衍射光则通过相板整个平面，通过和相环部分的直射光可借相环移相和降低振幅，达到提高衬度的效果。 2. 相衬装置 2.1 相板 相板是相衬显微镜中最重要的元件，它是一块圆形平面光学玻璃，在相环部位真空喷镀一层氟化镁，则通过相环部分的光线比通过其它部分的光线迟后一定位相，这就实现了移相，只要适当控制薄膜厚度，使相位刚好迟后π／２，这就是负相衬或明衬。如果镀膜加厚，使直射光迟后３π／２，这就是正相衬或暗衬。 除使直射光移相外，还需要降低振幅，使得迭加后的相衬效果更为明显，为此在相环上再喷镀一层银，使直射光通过镀银层振幅显著降低。 相板分为固定相板和活动相板，相板安置在物镜与垂直照明器之间，配有专用相衬物镜的相衬显微镜中，相板安置在物镜的后焦面上，但随着数值孔径的改变，相板与相环尺寸必须相应改变，才能得到正确的配合，因此每一物镜必须装有一个相应尺寸的相板，这种配有相板的专用物镜称相衬物镜，物镜上必须装有一个相应尺寸的相板，这种

生物显微镜与金相显微镜的区别主要是在照明方式与物镜上面： 1、生物显微镜用的是透射照明，一般用来观察透时和半透明的样本，不能用来观察不透明物体，而金相显微镜主要是落射照明方式（也叫同轴照明），光源从物镜射出，主要用于观察不透明样本的表面，当然也有附带透射照明装置的较高级金相显微镜，可同时用于观察透明样本。 2、从物镜来看，生物显微镜的高倍物镜都有考虑盖玻片厚度（0.17）和载玻片、培养器皿厚度（1.2），所以其物镜是通常标有 /0.17（正置显微镜）、 /1.2（倒置显微镜），正置生物显微镜10倍以下物镜则是 /-，也就是可以不考虑，这是为了校正玻璃对于光折射的影响，而金相显微镜的物镜通常标有/0 。

生物显微镜和工具显微镜又称工具制造用显微镜，是一种工具制造时所用高精度的二次元坐标测量仪。生物显微镜工具显微镜是利用光学原理将工件成像经物镜投射至目镜，即借着光线将工件放大成虚像，再利用装物台与目镜网线(eyepiece reticle)等辅助，以作为尺寸、角度和形状等测量工作，可作为检验非金属光泽的工件表面。生物显微镜工具显微镜仪器在立柱上装有一显微镜，放大倍率从10倍至100倍间等数种倍率，工具显微镜的测量系统光源( 灯炮 ) 通电后，光线依次经过二个透镜滤热镜 ( 片)、镜径薄膜、透镜、反射镜、装物台、物镜、反射镜、目镜等，工件与物镜间的距离，随着放大倍率和工件厚薄，可利用对焦旋钮调至理想位置。1、 生物显微镜工具显微镜将人眼瞄准，采集元素的个别点坐标，改为CCD摄像机自动采集元素图像，采集信息量增大，减少人工干预，操作效率提高。 2、生物显微镜工具显微镜软件数据处理结果除以数据表示外,增加了图形信息窗，处理的点、线、图、弧等元素展现在屏幕上，形象直观，条理清晰，避免出错，并且可以输出到AUTOCAD形成工程图。3、引进先进的英国RENISHAW钢带反射光栅系统代替原有的玻璃光栅系统，该系统信号优良，安装间隙大，外形小巧，发热量小，安装调试简单，抗污染，抗腐蚀能力强，耐震性好等众多优点，大大提高了系统的可靠性，是当今国际最先进的光栅系统之一。4、 生物显微镜和工具显微镜生物显微镜工具显微镜除X、Y坐标数字显示外，将测高坐标和分度头角度坐标也改成数显，实现了四坐标全数显化，这一改进对凸轮轴测量十分有益。5、用半导体激光器作为指向器，红色光点打在工件表面，用于快速确定测量部位，避免了因CCD视场面积小带来的找象困难，解决了目前图像系统的通病。引用：www.bsdgx.com

工业显微镜和生物显微镜的区别，但就字面意思上能了解到它们最大的区别，就是用途不同，这里主要从其物镜上来说明它们的不同之处：物镜的鉴别能力可分为平面和垂直鉴别能力。物镜(objectivelens)物镜是决定光学显微镜基本性能及功能的最重要的光学单元。因此，为了满足各种需求和应用，我们研制出了有着最佳光学性能和功能(这对光学显微镜而言也是最重要的性能和功能)的物镜，推出了能满足不同使用目的多种物镜产品。　光学显微镜的用途大致分为“生物用”和“工业用”两大类。物镜也可以按照这两种用途，划分为“生物物镜用”物镜和“工业用”物镜。在工业用途中，一般是在金属矿物切片、半导体晶圆和电子零部件等标本没有被遮盖的状态下进行观察的。所以，工业显微镜用物镜采用了物镜前端和标本之间没有盖玻片状态的最佳光学系统设计。然而在生物用途中，一般是将生物标本放置在载玻片上，并从上面用盖玻片遮盖固定。由于生物用物镜需要透过盖玻片观察样本，所以采用了考虑到盖玻片的厚度(一般为0.17mm)的光学系统设计。　　在这里说明生物显微镜和工业显微镜的物镜也是大有不同的，基本上物镜是按照用途、观察方法、倍率、性能(像差校正)等进行分类。其中，按照像差校正来分类的是显微镜物镜特有的分类方法。

金相显微镜相关知识 一、应用领域 金相显微镜适用于工矿企业、院校及科研等机构作材料内部组织结构观察、电子企业、夹层电路观察、化工企业、对各种粉末进行质量监控等。 L2030A透反射（双色）正置金相显微镜配置透反射照明系统,长距平场消色差物镜（无盖玻片）、大视野目镜和内置偏光观察装置,光学系统成像清晰,视野广阔。 特点：带简易偏光，大视野，成像清晰，调试方便，拓展性强。可接工业相机，可配分析测量软件。 二、主要功能/参数 型号：正置上下光源金相显微镜 L2030A 目镜：大视野 WF10X(Φ18mm) 物镜：(20 40 60只能选2个) 长距平场消色差物镜(无盖玻片)PL 5X/0.12 长距平场消色差物镜(无盖玻片)PL L10X/0.25 长距平场消色差物镜(无盖玻片)PL L20X/0.40 长距平场消色差物镜(无盖玻片)PL L40X/0.60 长距平场消色差物镜(无盖玻片)PL L60X/0.75 (弹簧) 目镜筒：三目镜,倾斜30˚,(内置检偏振片,可进行切换) 落射照明系统：6V 20W卤素灯,亮度可调 落射照明器带视场光栏、孔径光栏、起偏振片,(黄,蓝,绿)滤色片和磨砂玻璃 调焦机构：粗微动同轴调焦, 微动格值:2μm,粗动松紧可调，带锁紧和限位装置 转换器 ：四孔(内向式滚珠内定位) 五孔 ([fo

本文来自显微镜之家转贴显微镜之家融合了各种进口国产显微镜的集中展示，集显微镜知识/咨询/动态等于一体的显微镜之家 http://goldroom.zhan.cn.yahoo.com/登陆指导！光学显微镜一般由载物台、聚光照相系统物镜、目镜和调焦机构组成。载物台用于承放被观察的物体，利用调焦旋扭可以驱动调焦机构，使载物台作粗调和微调的升降运动，使被观察物体调焦清晰成像，它的上层可以在水平面内沿作精密移动和转动，一般都把被观察的部位调放到视场中心。聚光照明系统由灯源和聚光镜构成，聚光镜的功能是使更多的光能集中到被观察的部位。照明灯的光谱特性必须与显微镜的接收器的工作波段相适应。物镜位于被观察物体附近，是实现第一级放大的镜头，在物镜转换器上同时装着几个不同放大倍率的物镜，转动转换器就可让不同倍率的物镜进入工作光路，物镜的放大倍率通常为5~100倍。物镜是显微镜对成像质量优劣起决定性作用的光学元件，常用的有能对两种颜色的光线校正色差的消色差物镜；质量更高的还有能对三种色光校正色差的复消色差物镜；能保证物镜的整个像面为平面，以提高视场边缘成像质量的平像场物镜。高倍物镜中多采用浸液物镜，即在物镜的下表面和标本片的上表面之间填充折射率为1.5左右的液体，它能显著的提高显微观察的分辨率。目镜是位于人眼附近实现第二级放大的镜头，镜放大倍率通常为5~20倍，按照所说的所能看到的视场大小，目镜可分为视场较小的普通目镜和视场较大的大视场目镜（或称广角目镜）两类。载物台和物镜两者必须能沿物镜光轴方向作相对运动以实现调焦，获得清晰的图像.用高倍物镜工作时，容许的调焦范围往往小于微米，所以显微镜必须具备极为精密的微动调焦机构。显微镜放大倍率的极限即有效放大倍率，显微镜的分辨率是指能被显微镜清晰区分的两个物点的最小间距，分辨率和放大倍率是两个不同的但又有联系的概念。当选用的物镜数值孔径不够大，即分辨率不够高时，显微镜不能分清物体的微细结构，此时即使过度地增大放大倍率，得到的也只能是一个轮廊虽大但细节不清的图像。聚光照明系统对显微镜成像性能有较大影响，但又是易于被使用者忽视的环节。它的功能是提供亮度足够且均匀的物面照明，聚光镜发来的光束应能保证充满物镜孔径角，否则就不能充分利用物镜所能达到的最高分辨率。为此目的，在聚光镜中没有类似照相物镜中的，可以调节开孔大小的可变孔径光阑，用来调节照明光束孔径，以与物镜孔径角匹配。改变照明方式，可以获得亮背景上的暗物点（称亮视场照明）或暗背景上的亮物点（称暗视场照明）等不同的观察方式，以便在不同情况下更好地发现和观察微调结构。

今天，我的显微镜客户在QQ上主动找我。他的第一句话就说，我上几天给他的数码显微镜报价太高了，说上海那边报价只有我的一半那么多。我感到很意外，虽然每家商家报价会有所出入，但差距绝对不会是这么大。于是，我问他，那家给他的是什么配置的数码显微镜，他也很爽快地把商家给他的图片发给我了。我一看，才终于明白了。原来，那商家所给他推荐的数码显微镜与我给他推荐的数码显微镜根本不是同一类型的产品，而且根本不是同一档次的显微镜。于是，我就开始跟我客户解释了，说这两种显微镜是不同类型的，档次也不一样。可是，客户本来就是对显微镜了解不太深，我的解释他听不进去，他是那种对价格非常敏感的客户类型。可当我正头痛着，想着该如何跟客户作进一步的解释时，没想到，他竟然进我的QQ空间，把我相册里的照片贴出来，还说：这个才高档。我一看这几个字。心里确实很火，马上回他说：先生，生意做不成，我们还可以是朋友式的聊天，请你尊重一下我。这样，他就有点不好意思起来了，给自己找个下台阶，说：调节一下气氛。我没再理他，他摆明当时就是以那种不尊重女业务员的态度来对对待我。这样的客户，我不做他的生意也不后悔。大概过了有2分钟吧，那客户又开始主动找我了，他说：对不起，刚才是我错了。我见客户有忏悔之意也气消了。说：没事了。我还有什么可以帮到您吗？他说：我让我公司的技术（也就是显微镜使用者）看了一下两家的显微镜配置和图片，技术说确实如你所说。所以，我现在想再次确认一下能否再优惠一点。我也是个爽快的销售者，在我能出货的底线下，再给他减了100元。于是这一单就立即做成了。不过，我想说明的是：面对客户对你不尊重时，少做一单无所谓，但一定不能没自尊。今天，我就勇敢地向我的显微镜客户要回了自尊。

如题，光学显微镜、解剖显微镜和倒置显微镜的区别？土豆在填写药检仪器调查表的时候发现这几个名词，有点不太明白，一般常用的就是光学显微镜了，那解剖显微镜和倒置显微镜用在什么实验上的啊？有何不同之处，还望各位指教。