双向电泳系统

请问，双向电泳的电源电压要求多大。

[img]http://www.instrument.com.cn/bbs/images/affix.gif[/img][url=http://www.instrument.com.cn/bbs/download.asp?ID=164458]双向电泳操作手册[/url]

目　　录第一章 　　实验材料1．1 IPG预制胶条及载体两性电解质1．2 蛋白质定量试剂盒及其试剂1．3 试剂盒及其试剂1．4 化学试剂1．5 蛋白质Marker1．6 染色试剂1．7 注意事项第二章　　SDS-PAGE聚丙烯酰胺凝胶电泳2. 1 溶液的配制2. 2 SDS-PAGE凝胶的配制2. 3 操作方法2. 4 注意事项第三章　　双向电泳3. 1 溶液配制3. 2 操作步骤3. 3 注意事项附录1 双向电泳完整的操作步骤附录2　　聚丙烯酰胺凝胶电泳凝胶的配置附录3　　细胞样品的一般处理步骤附录4　　组织样品的一般处理步骤附录5　　我方主要工作人员通讯录[img]http://www.instrument.com.cn/bbs/images/affix.gif[/img][url=http://www.instrument.com.cn/bbs/download.asp?ID=18952]双向电泳实验培训资料[/url]

在资料中心上传了一本[url=http://www.instrument.com.cn/download/shtml/023576.shtml]《双向电泳简易中文操作手册》[/url]，如果大家觉得有用，可以看看。[em61]

哪位有GE荧光差异双向电泳的荧光标记试剂盒的渠道请站短

请问目前有可以替代进口双向电泳第一向的国产等电聚焦吗？能够使用胶条。

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各位专业朋友，请问LTQ Orbitrap XL组合型傅里叶变换高分辨质谱能用于双向电泳蛋白点的鉴定吗？先谢谢大家了~~

一、实验原理：2-DE的第一向电泳等电聚焦是基于等电点不同而将蛋白粗步分离，第二向SDS-PAGE是基于蛋白质分子量不同，而将一向分离后的蛋白进一步分离。这样就可以得到蛋白质等电点和分子量的信息。二、实验步骤：1. 样品的溶解取纯化后的晶体蛋白3.0mg，加入300ul裂解液（1mg蛋白：100ul裂解液）振荡器上振荡10min左右，共处理一个小时。其中每隔10~15分钟振荡一次，然后13200rpm离心15min除杂质，取上清分装，每管70ul，-80℃保存。2. Bradford法测蛋白含量取0.001g BSA（牛血清白蛋白）用1ml超纯水溶解，测定BSA标准曲线及样品蛋白含量。取7个10ml的离心管，首先在5个离心管中按次序加入0ul，5ul，10ul，15ul，20ul 的BSA溶解液，另2管中分别加入2 ul的待测样品溶液，再在每管中加入相应体积的双蒸水（总体积为80ul），然后，各管中分别加入4ml的Bradford液（原来配好的Bradford液使用前需再取需要的剂量过滤一遍方能使用），摇匀，2min在595nm下，按由低到高的浓度顺序测定各浓度BSA的OD值，再测样品OD值。（测量过程要在一个小时内完成）。3. 双向电泳第一向——IEF（双向电泳中一律使用超纯水）3.1 水化液的制备称取2.0mg 的DTT，用700ul水化液储液溶解后，加入8ul 0.05% 的溴酚兰，3.5ul（0.5%v/v）IPG buffer （pH 3-10）振荡混匀，13200rpm离心15min 除杂质，取上清。在含300ug 蛋白（经验值）的样品溶解液中加入水化液，至终体积为340ul，振荡器上振荡混合，13200rpm离心15min除杂质，取上清。3.2 点样，上胶分两次吸取样品，每次170ul, 按从正极到负极的顺序加入点样槽两侧，再用镊子拨开 Immobiline DryStrip gels （18cm，pH 3-10）胶条，从正极到负极将胶条压入槽中，胶面接触加入的样品。注意：胶条使用前，要在室温中平衡30分钟；加样时，正极要多加样，以防气泡的产生；压胶时不能产生气泡；酸性端对应正极，碱性端对应负极；样品加好后，加同样多的覆盖油（Bio-Rad），两个上样槽必须与底线齐平。3.3 IPG聚焦系统跑胶程序的设定（跑胶温度为20℃）S1 （30v, 12hr, 360vhs, step）S2 （500v, 1hr, 500vhs, step）S3 （1000v, 1hr, 1000vhs, step）S4 （8000v, 0.5hr, 2250vhs, Grad）S5 （8000v, 5hr, 40000vhs, step） 共计44110vhs, 19.5小时其中S1用于泡胀水化胶条，S2和S3用于去小离子，S4和S5用于聚焦3.4 平衡用镊子夹出胶条，超纯水冲洗后，在滤纸上吸干（胶面，即接触样品那一面不能接触滤纸，如果为18cm的胶条要将两头剪去），再以超纯水冲洗，滤纸吸干（再次冲洗过程也可省略），然后用镊子夹住胶条以正极端（即酸性端）向下，负极端（即碱性端）向上，放入用来平衡的试管中（镊子所夹的是碱性端，酸性端留有溴酚兰作为标记），用平衡液A,平衡液B先后平衡15min. 注：平衡时要注意保持胶面始终向上，不能接触平衡管壁。平衡第二次时，在沸水中煮Marker 3min,剪两个同样大小的小纸片，长度与一向胶条的宽度等同，然后吸取煮好的Marker,转入SDS-PAGE胶面上，保持紧密贴合；同样在第二次平衡时，煮5%的琼脂糖10ml.4. 双向电泳第二向——SDS-PAGE4.1 配胶（两根胶条所用剂量）分离胶：（T=8% 80 ml）：溶液于真空机中抽气后再加APS和TEMED30 % 丙烯酰胺储液 21.28ml分离胶buffer 20ml 10%APS 220ul TEMED 44 ul双蒸水 38.72ml浓缩胶：（T=4.8% 10ml）30 % 丙烯酰胺储液 1.6ml浓缩胶buffer 2.5ml 10%APS 30ul TEMED 5ul双蒸水 5.9ml4.2 灌胶将玻璃板洗净后，室温晾干，然后，将电泳槽平衡好，玻璃板夹好，再在玻璃板底部涂上凡士林以防漏胶，倒入正丁醇压胶，凝胶后（这时会出现三条线），用注射器吸去正丁醇，超纯水洗两次，再用滤纸除水后，倒入浓缩胶，正丁醇压胶，凝胶后，用注射器吸去正丁醇，超纯水洗两次，再加入超纯水，用保险膜封好。

双向电泳篇 1. 重泡胀后的胶可以不用转移到另一个电泳槽，直接跑 2D 的一向吗？ 一般情况下是可以的。但当上样量特别大时，可能会有一部分蛋白质没有被胶条吸收，这样跑完 1D 和 2D 胶后，会有很多横向条纹。所以在这种情况下，最好在重泡胀后，将胶条转移到另外一个电泳漕中进行电泳。 2. 为什么我在等电聚焦前加的矿物油在聚焦后会减少，暴露出了胶条的背面？ 这是因为 BioRad 的电泳槽有个盖子。为了固定电泳槽中的胶条，这个盖子上设计了对应的突起，以便压住胶条。由于虹吸作用，这个突起会导引矿物油到相邻的空电泳槽，从而降低有胶条的电泳槽中的矿物油液面。如果由此把胶条暴露在空气中，那对等电聚焦的影响将是毁灭性的。为了防止这个现象的发生，可以在相邻的空电泳槽里，也加入适量（ 80 ％满）的矿物油。 3. 跑第一向时，为什么要设定一个电流的最大值电压(50 μ A/ 胶)？ 电流的平方和功率成正比。电流增大，功率增大，放出的热量也随之增大，就会导致胶条的温度增加。当温度超过 30 摄氏度时，缓冲液里的尿素就容易解离，产生一些极性分子，从而对等电聚焦产生影响。 4. 跑第一向时，为什么刚开始的电压比较低，而后逐渐增高？ 刚开始时，体系内的带电小分子比较多（比如无机盐和双极性分子）。所以在这个阶段，电流主要是由这些小分子的移动所产生的。由于这些分子质量小，移动他们不需要很高的电压。当这些小分子移动到他们的目的地时（无机盐移动到极性相反的电极；两性分子移动到对应的 pH 条带），体系内的蛋白质才开始肩负起运载电流的任务，逐渐向所对应的 pH 区域移动。 5. 跑第一向时，为什么会产生一条蓝色的条带，并逐渐向酸性端移动？ 蓝色条带是缓冲液中痕量的溴酚蓝被聚焦所产生的。溴酚蓝也是 pH 指示剂，当它移动到酸性区时（ pH4 ），颜色会变成黄色。溴酚蓝的这个移动过程大体上发生在极性小分子的聚焦之后，蛋白质大分子聚焦之前。 6. 跑第一向时，为什么电压总达不到预定值？ 当上样量比较大时或体系内盐分比较多时，聚焦的电压有可能达不到所设定的数值。 7. 跑第一向时，在电压达到预定值后，电流为什么会降低？ 当上样量比较少时，所有蛋白在较短的时间内就移动到所对应的 pH 值区域值，从而变成中性分子。这样，体系的电阻越来越大，在恒定的电压下，电流就会越来越小。 8. 跑第一向时，为什么在两个电极丝附近有气泡产生？ 等电聚焦完成后，所有的蛋白质都移动到了相应的 pI 值区域，而成为中心分子。这是加在体系上的电压就开始电解水分子，在阳极产生氧气，在阴极产生氢气。 9. 重泡胀缓冲液(rehydration buffer)中的硫脲的作用是什么，双极性分子的作用是什么？ 硫脲的作用是增加蛋白质的溶解性，特别是碱性蛋白的溶解性。双极性分子的作用也是增加蛋白质的溶解性。当蛋白移动到相应的 pH 值后，就变成了中性分子。而不带电荷的蛋白质分子容易聚集，从而降低其在随后的二向胶时的迁移效率，可能会造成竖的脱尾。而硫脲和双极性小分子则会鉴定中性蛋白质之间的相互作用，防止它们的聚集。 10. 怎样估计 2D 胶上蛋白质点的分子量和 pI 值？ 可以用 BioRad 生产的 2D 胶标准蛋白来校准。也可以用体系内已知蛋白来做比对。 11. 为什么 2D 胶上的蛋白点有横的和竖的脱尾？ 横的脱尾可能是： 1 ）一向等电聚焦不完全； 2 ）某些蛋白质本身的原因（糖蛋白）； 3 ）蛋白的丰度太高。竖的脱尾是因为跑二向时，蛋白的溶解度不好。 12. 什么成分会影响 2D 胶的效果？ 核酸，盐，去垢剂等等。 13. 2D 胶的上样量应该在什么范围？ 上样量和样品有关。样品内蛋白种类多的上样量要大些，这样每个点才有足够的量被检测到。一般的全细胞裂解体系，上样量大概在 100 微克（银染）到 500 微克（考染）之间。 14. 我的蛋白质浓度很低，应该用什么方法来浓缩？ 蛋白质的浓缩有很多方法。大致有超滤法，沉淀法和透析法。超滤比较温和，对蛋白质不会有修饰和改变，蛋白的种类一般不会有丢失。它的缺点是总样品的量可能会减少（被膜所吸附）。另外超滤对样品的要求比较高。甘油，去垢剂都会堵塞滤膜，影响超滤的效果。沉淀法比较快速，容易操作，对盐，甘油，去垢剂的耐受性好。缺点是可能会有部分种类的蛋白没有被沉淀下来（丢失）。沉淀法中，又以 TCA 法最为普遍使用。使用 TCA 法时，一定要用冷的纯丙酮清洗蛋白沉淀两次，去处残留的 TCA 和其他沉淀下来的杂质。透析法只使用于量比较大的样品，量小时，操作困难。 透析法可以和超滤法联用。先把样品透析到一个比较干净的环境（ 不含盐，甘油，去垢剂或其它杂质，比如碳酸氢氨溶液），然后再进行超滤。

双向电泳完整操作步骤（一）第一向等电聚焦1. 从冰箱中取-20℃冷冻保存的水化上样缓冲液（I）（不含DTT，不含Bio-Lyte）一小管（1ml/管），置室温溶解。2. 在小管中加入0.01g DTT， Bio-Lyte 4-6、5-7各2.5ml，充分混匀。3. 从小管中取出400ml水化上样缓冲液，加入100ml样品，充分混匀。4. 从冰箱中取-20℃冷冻保存的IPG预制胶条（17cm pH 4-7），室温中放置10分钟。5. 沿着聚焦盘或水化盘中槽的边缘至左而右线性加入样品。在槽两端各1cm左右不要加样，中间的样品液一定要连贯。注意：不要产生气泡。否则影响到胶条中蛋白质的分布。6. 当所有的蛋白质样品都已经加入到聚焦盘或水化盘中后，用镊子轻轻的去除预制IPG胶条上的保护层。7. 分清胶条的正负极，轻轻地将IPG胶条胶面朝下置于聚焦盘或水化盘中样品溶液上，使得胶条的正极（标有+）对应于聚焦盘的正极。确保胶条与电极紧密接触。不要使样品溶液弄到胶条背面的塑料支撑膜上，因为这些溶液不会被胶条吸收。同样还要注意不使胶条下面的溶液产生气泡。如果已经产生气泡，用镊子轻轻地提起胶条的一端，上下移动胶条，直到气泡被赶到胶条以外。8. 在每根胶条上覆盖2-3ml矿物油，防止胶条水化过程中液体的蒸发。需缓慢的加入矿物油，沿着胶条，使矿物油一滴一滴慢慢加在塑料支撑膜上。9. 对好正、负极，盖上盖子。设置等电聚焦程序。10.聚焦结束的胶条。立即进行平衡、第二向SDS-PAGE电泳，否则将胶条置于样品水化盘中，-20℃冰箱保存。（二）第二向SDS-PAGE电泳1. 配制10%的丙烯酰胺凝胶两块。配80ml凝胶溶液，每块凝胶40ml，将溶液分别注入玻璃板夹层中，上部留1cm的空间，用MilliQ水、乙醇或水饱和正丁醇封面，保持胶面平整。聚合30分钟。一般凝胶与上方液体分层后，表明凝胶已基本聚合。 2. 待凝胶凝固后，倒去分离胶表面的MilliQ水、乙醇或水饱和正丁醇，用MilliQ水冲洗。3. 从-20℃冰箱中取出的胶条，先于室温放置10分钟，使其溶解。4. 配制胶条平衡缓冲液I。5．在桌上先放置干的厚滤纸，聚焦好的胶条胶面朝上放在干的厚滤纸上。将另一份厚滤纸用MilliQ水浸湿，挤去多余水分，然后直接置于胶条上，轻轻吸干胶条上的矿物油及多余样品。这可以减少凝胶染色时出现的纵条纹。6. 将胶条转移至溶涨盘中，每个槽一根胶条，在有胶条的槽中加入5ml胶条平衡缓冲液I。将样品水化盘放在水平摇床上缓慢摇晃15分钟。7. 配制胶条平衡缓冲液II。8. 第一次平衡结束后，彻底倒掉或吸掉样品水化盘中的胶条平衡缓冲液I。并用滤纸吸取多余的平衡液（将胶条竖在滤纸上，以免损失蛋白或损坏凝胶表面）。再加入胶条平衡缓冲液II，继续在水平摇床上缓慢摇晃15分钟。9. 用滤纸吸去SDS-PAGE聚丙烯酰胺凝胶上方玻璃板间多余的液体。将处理好的第二向凝胶放在桌面上，长玻璃板在下，短玻璃板朝上，凝胶的顶部对着自己。10.将琼脂糖封胶液进行加热溶解。11.将10×电泳缓冲液，用量筒稀释10倍，成1×电泳缓冲液。赶去缓冲液表面的气泡。12.第二次平衡结束后，彻底倒掉或吸掉样品水化盘中的胶条平衡缓冲液II。并用滤纸吸取多余的平衡液（将胶条竖在滤纸上，以免损失蛋白或损坏凝胶表面）。13.将IPG胶条从样品水化盘中移出，用镊子夹住胶条的一端使胶面完全浸末在1×电泳缓冲液中。然后将胶条胶面朝上放在凝胶的长玻璃板上。其余胶条同样操作。14.将放有胶条的SDS-PAGE凝胶转移到灌胶架上，短玻璃板一面对着自己。在凝胶的上方加入低熔点琼脂糖封胶液。15.用镊子、压舌板或是平头的针头，轻轻地将胶条向下推，使之与聚丙烯酰胺凝胶胶面完全接触。注意不要在胶条下方产生任何气泡。在用镊子、压舌板或平头针头推胶条时，要注意是推动凝胶背面的支撑膜，不要碰到胶面。16.放置5分钟，使低熔点琼脂糖封胶液彻底凝固。17.在低熔点琼脂糖封胶液完全凝固后。将凝胶转移至电泳槽中。18.在电泳槽加入电泳缓冲液后，接通电源，起始时用的低电流（5mA/gel/17cm）或低电压，待样品在完全走出IPG胶条，浓缩成一条线后，再加大电流（或电压）（20-30mA/gel/17cm），待溴酚蓝指示剂达到底部边缘时即可停止电泳。19.电泳结束后，轻轻撬开两层玻璃，取出凝胶，并切角以作记号（戴手套，防止污染胶面）。20.进行染色。

水化上样( 被动上样)1. 从冰箱中取出 IPG 胶条，室温放置 10min。2. 沿水化盘槽的边缘从左向右线性加入样品，槽两端各 1cm 左右不加样，中间的样品液一定要连贯。注意：不要产生气泡，否则会影响胶条中蛋白质的分布。3. 用镊子轻轻撕去 IPG 胶条上的保护层。注意：碱性端较脆弱，应小心操作。4. 将IPG胶条胶面朝下轻轻置于水化盘中样品溶液上。注意：不要将样品溶液弄到胶条背面，因为这些溶液不会被胶条吸收； 还使胶条下面的溶液产生气泡。如产 生了气泡，用镊子轻轻地提起胶条的一端，上下移动胶条，直到气泡被赶走。5. 放置 30~45min 大部分样品被胶条吸收，沿着胶条缓慢加入矿物油，每根胶条 约 3ml(17cmIPG)，防止胶条水化过程中液体蒸发。6. 置等电聚焦仪于- 20℃水化 11~15h。第一向 等电聚焦1. 将纸电极置于聚焦盘的正负极上，加 ddH2O 5~8μl 润湿。2. 取出水化好的胶条，提起一端将矿物油沥干，胶面朝下，将其置于刚好润湿 的滤纸片上杂交以去除表面上的不溶物。3. 将 IPG 胶条胶面朝下置于聚焦盘中，胶条的正极（标有+）对应于聚焦盘的正 极，确保胶条与电极紧密接触。4. 在每根胶条上覆盖 2- 3ml 矿物油。5. 对好正、负极，盖上盖子。设置等电聚焦程序。6. 聚焦结束的胶条，立即进行平衡、第二向 SDS-PAGE电泳。或将胶条置于样 品水化盘中，- 20℃冰箱保存，电泳前取出胶条， 室温放置10 分钟，使其溶解。

[align=center][size=3][b][font=楷体_GB2312]双向电泳常用溶液配方[/font][/b][/size][/align][size=3][b][font=Times New Roman]A. [/font][font=楷体_GB2312]水化[/font][font=Times New Roman]/[/font][font=楷体_GB2312]上样缓冲液[/font][/b][font=Times New Roman](rehydration/sample lysis buffer)[/font][/size][font=楷体_GB2312]水化上样缓冲液[/font][font=楷体_GB2312]（[/font][font=Times New Roman]I[/font][font=楷体_GB2312]）[/font][font=Times New Roman] [b]1ml[/b][/font][size=3][font=Times New Roman] [/font][/size][table][tr][td=1,1,189][font=Times New Roman][size=3]urea[/size][/font][/td][td=1,1,189][font=Times New Roman][size=3]8M [/size][/font][/td][td=1,1,189][font=Times New Roman][size=3]0.48g[/size][/font][/td][/tr][tr][td=1,1,189][font=Times New Roman][size=3]CHAPS[/size][/font][/td][td=1,1,189][font=Times New Roman][size=3]4%[/size][/font][/td][td=1,1,189][font=Times New Roman][size=3]40mg[/size][/font][/td][/tr][tr][td=1,1,189][font=Times New Roman][size=3]DTT[/size][/font][/td][td=1,1,189][font=Times New Roman][size=3]50~65mM[/size][/font][/td][td=1,1,189][font=Times New 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l[/font][/size][/td][/tr][/table][size=3][font=Times New Roman] [/font][/size][size=3][font=Times New Roman] [/font][/size][font=Times New Roman][size=3]1.[/size] [/font][size=3][font=楷体_GB2312]水化上样缓冲液[/font][font=楷体_GB2312]（[/font][font=Times New Roman]I[/font][font=楷体_GB2312]）[/font][font=楷体_GB2312]中的尿素浓度可以调高到[/font][font=Times New Roman]9[/font][font=楷体_GB2312]或者[/font][font=Times New Roman]9.8M[/font][font=楷体_GB2312]；[/font][font=楷体_GB2312]用[/font][font=Times New Roman]7M Urea[/font][font=楷体_GB2312]和[/font][font=Times New Roman]2M Thoiurea[/font][font=楷体_GB2312]溶解蛋白的能力较单用尿素强。[/font][/size][font=Times New Roman][size=3]2.[/size] [/font][size=3][font=楷体_GB2312]目前常用的去垢剂为[/font][font=Times New Roman]CHAPS[/font][font=楷体_GB2312]，也可用[/font][font=Times New Roman]Triton X-100[/font][font=楷体_GB2312]、[/font][font=Times New Roman]NP-40[/font][font=楷体_GB2312]等代替。[/font][/size][font=Times New Roman][size=3]3.[/size] [/font][size=3][font=楷体_GB2312]可以加蛋白质酶的抑制剂和[/font][font=Times New Roman]/[/font][font=楷体_GB2312]核酸酶。[/font][font=Times New Roman] [/font][/size][b][font=Times New Roman][size=3]4.[/size] [/font][/b][size=3][font=楷体_GB2312]还原剂可用[/font][font=Times New Roman]DTT[/font][font=楷体_GB2312]或[/font][font=Times New Roman]TBP[/font][font=楷体_GB2312]，分离碱性蛋白时最好用[/font][font=Times New Roman]TBP[/font][font=楷体_GB2312]。[/font][b][font=Times New Roman] [/font][/b][/size][b][size=3]5.[/size] [/b][size=3]5[/size][size=3][font=楷体_GB2312]溴酚蓝作为指示剂，可以监测上样和聚焦过程，如操作熟练，可以不加。[/font][font=Times New Roman].[/font][/size][b][/b]

根据电泳仪原理、电泳仪功能、电泳仪的使用方法、电泳仪的用途不同可以为：琼脂糖凝胶电泳、毛细管电泳、凝胶电泳、聚丙烯酰胺凝胶电泳、醋酸纤维薄膜电泳、高效毛细管电泳、琼脂糖电泳、SDS-PAGE凝胶电泳、蛋白质电泳、血清蛋白电泳、dna电泳、血红蛋白电泳、蛋白质双向电泳、免疫电泳、等电聚焦电泳、单细胞凝胶电泳、蛋白质凝胶电泳、质粒电泳、对流免疫电泳、变性电泳等。电泳仪分类：1、毛细管电泳仪：其主要部件有0～30kV可调稳压稳流电源，内径小于100μm(常用50～75μm)、长度一般为30～100cm的弹性石英毛细管、电极槽、检测器和进样装置。检测器有紫外／可见分光检测器、激光诱导荧光检测器和电化学检测器，前者最为常用。进样方法有电动法(电迁移)、压力法(正压力、负压力)和虹吸法。成套仪器还配有自动冲洗、自动进样、温度控制、数据采集和处理等部件。 2、常规电泳仪：其组成部件为可调稳压稳流电源，垂直电泳槽，水平电泳槽，电极连接线，支持体【非凝胶性支持体区带电泳（支持体有：①淀粉②纤维素粉③玻璃粉，硅胶等) ；凝胶支持体区带电泳支持体有：①淀粉液②聚丙烯酰胺凝胶③琼脂（糖）凝胶】；陶瓷板，抽水泵，输水管，冰水曹等部件组成。3、其他电泳仪：Tiselius或微量电泳、显微电泳、等电点聚焦电泳技术、等速电泳技术、密度梯度电泳等。是一种非支持体的电泳仪也称为自由电泳法的发展并不迅速，因为其电泳仪构造复杂、体积庞大，操作要求严格，价格昂贵等很少使用。毛细管电泳仪、凝胶电泳仪、垂直电泳仪、微电泳仪、高压电泳仪、水平电泳仪、高效毛细管电泳仪、双向电泳仪、bio rad 电泳仪、脉冲场电泳仪、伯乐电泳仪、北京六一电泳仪上海巴玖均可提供！

做了一年多的双向电泳,却一直苦于找不到软件分析.曾经联系了一家仪器公司,等了一年多,差点花两万元买回一个用不了的水货软件.在一些网上下载的破解版又安装不了.请哪位好心人帮帮忙,鄙人将感激涕零.

简单的说，电泳仪电源一般可分为两类：精简型和多用型，精简型均为双稳型，而多用型都是三稳（三恒）型。无论有几种稳定功能，电泳仪电源在实际工作时只能稳其中一种参数，至于稳哪一种参数，要看电泳仪电源的设定以及电泳仪的等效负载电阻而定。市面上销售的电泳仪电源，按电压分为高压1500～5000V、中压500～1500V、低压500V以下三种；按电流分为大电流500mA～2000mA、中电流100～500mA、小电流100mA以下三种；按功率分为大功率200～400W、中功率60～200W、小功率60W以下三种。从电压的角度来看，用于核酸（琼脂糖）水平电泳、PCR电泳、DNA回收、印迹转移等实验只需最高电压300V；用于蛋白垂直电泳、种子纯度电泳、醋酸纤维膜电泳等需要使用最高电压600V左右的电泳仪；用于DNA测序（SSR分子标记）、等点聚焦电泳、双向电泳等要求最高电压3000V；用于DNA测序电泳（AFLP分子标记）要求最高电压3800V。电泳仪电源输出的所有参数根据其型号的不同都有一个特定的工作范围，如果实际需要超过这一范围，就应当选择能够满足使用的另外型号的电泳仪电源。因为高、低压电泳仪内部结构特征不同，由于高压电泳仪常附加着多功能，而且高压电泳仪决不能空载运行（容易造成人身伤害内部器件损坏），导致操作上难易程度的不同等。因此，选用合适规格的电泳仪很重要。用户如果需要一台电泳仪电源带几个电泳槽工作时，首先要确定总电流不要超过仪器的最大范围，其次各电泳仪之间是并联的，因而每个电泳仪的电压都是相同的，总电流为各电泳仪电流之和。使用时注意不能超出电泳仪电源额定的范围。

想请教质谱专家，二维色谱是否可取代双相电泳。

1. 用 PDQuest软件或肉眼比对，找出感兴趣的蛋白点，并做好标记和记录。2. 用 MilliQ水冲洗胶 2 次。3. 用色谱纯甲醇和 MilliQ水冲洗 Ep 管4. 将枪头(200μl)下端剪去，使其内径略小于蛋白斑点的直径，用色谱纯甲醇和MilliQ水冲洗枪头。5. 对准斑点中央小心将蛋白切割下来，放入Ep 管，MilliQ水漂洗 2 次，如胶块 太大，将其切成 1 x 1 mm 的胶片。6. 将切好的点做好标记和记录，置- 80℃ 保存或冻干后- 20℃ 存放。注意事项：1. 尽量避免皮肤和头发的角蛋白的污染，在操作过程中应戴一次性的 PE 手套 （不用乳胶手套）和帽子。2. 不要将胶长期存放于乙酸溶液中。3. Ep 管及染胶的容器必须用甲醇和水充分清洗，尤其应与进行Western blotting 的容器分开，以避免 casein 或 BSA 的污染。

看到这篇文章内容不错，转载下来，希望对大家的实验操作有所帮助。 尽管有了教科书、仪器说明书、产品操作指南和网络教程，但周围仍存在着多种错误的操作步骤，使电泳运行反复出现问题，并导致不适当的结果。迷你系统的相对低分辨率以及短运行时间常常掩盖了这些问题。然而，在大型凝胶的高分辨率双向电泳中，这也是蛋白质组学中最重要的分离方法之一，这些错误的后果会变得更为明显。来自GE Healthcare Life Sciences的Reiner Westermeier博士指出了电泳中常犯的几点错误。 1. 聚丙烯酰胺凝胶的交联系数的错误计算聚丙烯酰胺凝胶的孔大小是由两种因素控制的：丙烯酰胺的总浓度T和交联度C：http://www.ebiotrade.com/imagewatermark/UploadFile/2011031817245713.JPG 其中a是丙烯酰胺的质量，以g为单位，b是亚甲基双丙烯酰胺的质量，以g为单位，V是体积，以mL为单位。错误有时候假设给定的丙烯酰胺总浓度T就是单位体积中丙烯酰胺的百分比，而交联系数C就是单位体积中亚甲基双丙烯酰胺的百分比。这导致凝胶中交联剂的含量过高，产生了不透明的凝胶，不但易碎，而且高度疏水。正确的操作根据上面的等式配置溶液，或者使用即用型的丙烯酰胺/亚甲基双丙烯酰胺储备液，它可从不同的来源购买到。2. 聚丙烯酰胺凝胶的聚合温度和时间丙烯酰胺和亚甲基双丙烯酰胺的聚合通常在30分钟至一小时内发生。然而，在这段时间内，基质的形成并没有结束。所谓的沉默聚合仍在继续，直至完整的基质形成。这一部分的聚合过程需要数小时，并且只在室温（20-25°C）下才能高效开展。错误在有些实验室，聚丙烯酰胺凝胶在冰箱或冷库中聚合，或者在聚合开始后一个或几个小时就已经使用。这可能会造成分离的干扰，尤其是当蛋白必须在天然条件下分离时。并且，若下游必须开展质谱分析，那么未完全聚合的丙烯酰胺单体或寡聚物会在质谱图中产生高的背景噪音。正确的操作让凝胶聚合在室温下过夜进行。如果需要，凝胶可随后储存在冰箱或冷库中。3. SDS样品中产生聚集物单向SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳的样品通常须在1-2 % SDS和1 %（w/v）DTT（≈65 mM）或2 %（v/v）β-巯基乙醇（≈350 mM）存在时煮沸几分钟，以实现多肽链的彻底变性和解折叠。错误样品常常在冷却后直接上样到SDS凝胶中。通常还原剂被部分氧化，其中一部分半胱氨酸不受保护，导致重折叠和多肽间聚集物的形成。重折叠形成模糊的区带，有时是两条带。一些聚集物在高分子量区域形成了人为的区带；其他聚集物则过大，无法进入凝胶，在点样孔形成了沉淀聚集。还原剂的过量可能在整个凝胶上40-60 kDa的分子量范围内形成两条或三条水平线。正确的操作煮沸后让样品冷却至60°C左右，然后加入碘乙酰胺。通常我们在100 μl样品中加入10 μl 20%（w/v）的碘乙酰胺水溶液，并在室温下孵育30分钟。通过这一步，我们可以获得更为锐利的条带，并排除了一些假象，如两条带、其他的高分子量条带、点样孔中的沉淀，以及凝胶上的线。

附件请参考。

请问专家，我们学院准备购买生物质谱，用与生物制药分析，和化学分析，仪器厂商给我们的配置是这样的：离子交换液相色谱，反向液相色谱，离子阱质谱，（可换maldi 源)，TOF，和一台毛细管电泳。这样配置合理吗？双向电泳可不用了吗。请专家指教。

我在河南，谁有BIO-RAD电泳仪、BIO-RAD电泳图像处理系统、BIO-RAD脉冲电泳仪？可以将型号、参数、价格发给我，站内信联系谢谢

美国Alpha Innotech 的凝胶电泳成像系统的camera卡的驱动，使用的是Chemilmager TM IS 4400软件,仪器上写的是 Multilmage Light cabinet ，需要的驱动是仪器上那个卡的驱动，叫着 ITI Image capture device,请使用相同仪器的兄弟姐妹们给我发过来一个吧，愁死了，仪器没法用了

[img]http://www.instrument.com.cn/bbs/images/affix.gif[/img][url=http://www.instrument.com.cn/bbs/download.asp?ID=100748]图片教程系统之：毛细管电泳仪[/url]

小型便携的毛细管电泳以及微流控系统、芯片

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平板电泳，1×TBE琼脂糖1.2%，有总DNA、50V，也有PCR产物、150V，都是等胶凉了以后先点样再放进电泳槽的。VL Photo-print 215 SD成像系统。出的条带都不是很干净的一条线，有点带点“凹”字形，有的就成了“口”字形了（接近点样孔的大小）。帮忙分析下都可能会有哪些因素http://edu.emuch.net/attachment/f6/46/1554936_1329815398_172.jpg总DNAhttp://edu.emuch.net/attachment/ca/e9/1554936_1329815491_811.jpghttp://edu.emuch.net/attachment/a9/d1/1554936_1329815498_911.jpg口字形

我在做一个课题，将糖类用琼脂糖凝胶电泳分离后，染色，再定量。现在的问题是到底用凝胶成像系统准确些，还是用薄层扫描仪效果好些？看国外的文献，用的是一种叫做“光密度计”的设备，国内难以找到。我的老板曾去相关实验室访问，他说对方用的是薄层扫描仪。我在想是否凝胶成像系统会更好些。不知各位高人有无好的建议给我？