喹嗪

摘要：中药白芷具有广泛的药理作用，其主要有效成分香豆素类化合物的分离提取和结构鉴定已有了长足发展。现代色谱技术在中药白芷研究中的广泛运用，使白芷的定量分析方法体系、质量指标体系和提取工艺优化等研究有了新的进展，文章对近5年的有关文献作了综述。　　关键词：色谱法；白芷；化学成分；质量；鉴定　　Research Development of Angelica dahurica by Chromatography 　　MENG Lanzhen， NIE Hong， XU Zhenxia， XIONG Aihua， LIU Jianjun　　（1.Department of Pharmacology of Pharmacy, College of Jinan University，Guangzhou 510632，China； 2.The Test Technology Center of Pharmacy, College of Jinan University, Guangzhou 510632, China）　　Abstract:The Angelica dahurica has been claimed to be effective on many diseases，and also there are great development for the isolation and instrumental analyses of its main effective components. The application of chromatography technology greatly advanced and accelerated the research of Angelica dahurica.　　Key words:Chromatography；Angelica dahurica；Development research　　白芷为伞形科植物白芷Angelica dahurica（Fisch. ex Hoffm.）Benth. et Hook. f. 或杭白芷Angelica dahurica（Fisch. ex Hoffm.） Benth. et Hook. f. var. formosana （Boiss.） Shan et Yuan 的干燥根。性温，味辛。具有散风除湿、通窍止痛、消肿排脓的功效。可用于治疗感冒头痛、眉棱骨痛、烧伤等症。色谱法（chromatography）或称层析法，其原理是利用不同组分在两相中的吸附能力、分配系数、离子交换能力或分子大小等性质的微小差别，经过连续多次在两相间的质量交换，使不同的组分得到分离，是分离分析多组混合物的分析方法，在各个学科领域中的应用日益普遍［1］。从经典的平板色谱到柱色谱，[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]技术（GC）、高效液相色谱法（HPLC）、超临界流体色谱法（SFC）到毛细管电泳法（CE）、色谱-光谱连用等现代色谱技术已广泛运用于中药白芷的研究。[b]　　1 白芷中化学成分的提取分离[/b]　　1.1 化学成分的分离结合现代光谱技术，近年陆续从白芷中发现了新结构的香豆素类化合物，如从日本白芷中分离得到七种新的bifuranocoumarins［2］，从韩国白芷的茎部首次发现6［（1S），2（R）2，3二羟基1甲氧基3甲基丁酸］7甲氧基香豆素［3］，从根部得到两种新的呋喃香豆素化合物［4］。国内游小琳等［5］首次发现白芷水溶性成分中丁二酸，葡萄糖，蔗糖等6个化学成分。聂红等［6］运用[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/bp][color=#3333ff]气质联用[/color][/url]（GCMS）技术发现白芷的水蒸气蒸馏所得的油状物的主要成分为甲基环癸烷（22.4%）、1十二烷醇（8.6％）等。　　1.2有效成分的提取刘文等［7］认为采用超临界流体CO2萃取白芷中欧前胡素速度快，HPLC法测定精度高。刘红梅等运用GCMS技术对白芷中香豆素类成分的最佳超临界流体CO2萃取工艺（萃取温度50℃，萃取压力21 MPa、萃取时间3.0 ｈ，分离压力6.5 MPa，粉碎度20目）的超临界样品进行了分析鉴定，主要成分氧化前胡素、欧前胡素、异欧前胡素的相对含量分别达到42.40％，22.14％和12.12％［ 8，9］。　　高速逆流色谱法［10］（HighSpeed CounterCurrent Chromatography）是一种可以在短时间内实现高效分离和分析的方法，具有无固体载体，可以避免分离样品与固体载体表面产生化学反应而变性和不可逆吸附等优点，已广泛应用于天然药物研究。Liu等［11］用该法成功分离测定了白芷中的欧前胡素、异欧前胡素和氧化前胡内酯，其上相固定相为正己烷甲醇水（5∶5∶5，V/V），下相流动相前150 min正己烷甲醇水（5∶5∶5，V/V），后150 min正己烷甲醇水（5∶7∶3，V/V）体积以线性递增，鉴定各峰分离物，纯度达到了98％以上。运用该技术还分离了丹参中的丹酚酸B［12］、川芎中的川芎嗪［13］，天麻中的天麻素［14］等多种化学成分。　　高效毛细管电泳法（High Performance Capillary Electrophoresis）为近年来发展最快的一种分离分析技术，具有分离效率高、分析速度快和样品用量少等特点。毛细管胶束电动色谱（Micellar Electrokinetic Capillary Chromatography）为它的一个重要分支，具有分离效果好，速度快，操作简单，费用低等优点，已迅速进入药物分析领域。其原理是向载体中加入表面活性剂，活性剂浓度大于临界值时，则在毛细管内形成胶束，被分析物受到电渗流和胶束相与水相之间分配的双重影响而实现分离。Wang［15］等成功的采用该法简单快速的从白芷中分离得到欧前胡素、异欧前胡素和东莨菪苷元（7羟6甲氧香豆素）。该技术还应用于测定西洋参中人参皂苷Rb1，Re的含量［16］，分离鉴定槐属植物苦豆子、苦参、山豆根中喹嗪烷类生物碱［17］，最近联用电化学检测器首次分离测定木犀科植物女贞叶和果实中的D甘露糖、蔗糖、葡萄糖和果糖［18］。[b]　　2 白芷的质量控制及鉴定[/b]　　HPLC被广泛应用于白芷的质量控制和鉴定：人工四倍体白芷主要有效成分欧前胡素的含量较原二倍体白芷成倍提高［19］；不同产地白芷中2种香豆素总量存在较大差异［20］；提取挥发油后欧前胡素损失较大［21］；建立了白芷药材质量的控制方法，其色谱条件：流动相甲醇水（70∶30），检测波长254 nm，欧前胡素在0.974～3.896 μg，异欧前胡素在0.360～2.640 μg范围内线性关系良好［22］。或同时检定出欧前胡素、异欧前胡素、比克白芷素及水化氧化前胡素，且其中的欧前胡素和异欧前胡素含量分别不得低于0.1%和0.04%［23］。王梦月等［24］证实白芷果实中总香豆素含量最高，茎中最低；以晒干法的含量最高。抽苔白芷中香豆素的含量不及白芷含量的50%，不能作白芷药用。[b]　　3 体内白芷有效成分的测定[/b]　　白芷的活性成分白当归素，是一种醛糖还原酶抑制剂，可用于治疗糖尿病性白内障。Kwon等［25］研究分析它的肾代谢产物。尿样经液液提取，GCMS、HPLCDAD以及H1核磁共振波谱等分析，发现两种主要代谢物分别是白当归素侧链经C脱甲基或O脱烷而产生，另一代谢物认为可能是由白当归素被羟基化而产生。　　Kazuhisa等［26］利用柱切换HPLC法快速检测大鼠血浆中的白当归素和水化氧化前胡素。血浆样品用过氯酸脱蛋白，离心后上清液制备成供试品。流动相为乙睛水（20∶80），流速1 ml/min，检测波长260 nm，柱温40℃。龚志南等［27,28］用HPLC测大鼠胃液、肠液、血液和脑组织中香豆素类化合物的含量，以考查其药动学参数，评价提取工艺指标和最佳剂型。[b]　　4 结语[/b]　　综上所述，现代色谱技术应用于白芷的研究，可以快速、高效地分离纯化有效成分［11，15］，优化提取工艺［7～9］，建立准确、重复性好的质量标准［19～24］等，但在指纹图谱方面的研究还未见报道。可见色谱技术以其分离效能高、分析速度快、定量结果准、易于自动化等优点，成为中药与天然药物有效成分的确定、鉴定等定性与定量工作以及分离纯化过程中最有效的方法。可以预见色谱技术必然会更广泛地应用于中药的制备和质量控制过程中，加速中药生产工艺的现代化进程。　　目前色谱技术应用于白芷等中药研究存在的问题有：一方面中药成分复杂、质量影响因素多，单用一种色谱技术研究中药捉襟见肘，如GC不适用于分析热不稳定性和不能气化的成分；HPLC则对强极性组分分离效果不好，色谱柱容易受污染，仪器运转费用高；新兴的高速逆流色谱法和高效毛细管电泳法，可以很好的为中药药效学评价及定性定量分析等提供技术支持，但在国内尚未普及和系统化。因此要求色谱技术在自身不断完善的基础上，结合其他学科的高新技术，推陈出新，以便更好地为我国中药现代化服务。另一方面该技术在中药活性成分筛选与作用机理研究方面期待突破性的进展。生物色谱法是生命科学和色谱分离技术结合形成的高新技术［29，30］，这种模型既具有很好的生物相关性又克服了成分分离与效应脱节的弊端，已成功应用于药物活性成分的筛选和作用机理的研究［31～32］，如果联用二极管列阵和高分辨率质谱等技术，将实现中药中微量活性成分的分离纯化和结构鉴定及活性测定的高度一体化。