氨肽酶

各会员单位、相关单位：根据《中国生化制药工业协会团体标准制定工作程序（试行）》规定，中国生化制药工业协会批准并发布团体标准T/CBPIA 0004-2023 《重组双碱性氨基酸内肽酶质量标准》、团体标准T/CBPIA 0005-2023 《重组赖氨酸内肽酶质量标准》。标准发布日期2023年5月23日，自2023年5月23日起实施。现予公告。中国生化制药工业协会2023年5月23日

近日，北京大学化学与分子工程学院、北大-清华生命联合中心、北京大学合成与功能生物分子中心王初课题组在RSC Chemical Biology杂志上发表了题为“ Discovery of Cisplatin-binding Proteins by Competitive Cysteinome Profiling”的研究文章。在这项工作中，作者应用基于竞争的定量化学蛋白质组学策略rdTOP-ABPP，在MCF-7活细胞体系中全局性地鉴定了顺铂(cisplatin)结合蛋白与其结合顺铂的位点,发现并证明了顺铂可以结合谷氧还蛋白1(GLRX1)与具有硫氧还蛋白结构域的蛋白17(TXNDC17)的活性位点。除此之外也发现了一个全新的顺铂结合蛋白甲硫氨酸氨肽酶1(MetAP1)，并发现其对顺铂的细胞毒性有一定的保护作用。顺铂是1965年被发现的化疗药物，其在如睾丸癌，卵巢癌等癌症的治疗过程中被广泛应用。其在进入细胞后生成的活性的二价铂离子会进攻DNA上的腺嘌呤或鸟嘌呤，从而引起DNA损伤，最终杀死癌细胞，这个过程被认为是顺铂细胞毒性的主要原因。而近年来很多研究也发现活性二价铂离子除了结合DNA之外，其也会与细胞质中大量亲核性物质反应，比如GSH，RNA以及金属硫蛋白等进行结合，据统计，仅有1%左右的铂是结合到DNA上。大量游离的活性二价铂离子会与细胞中多种有功能的蛋白质结合，从而影响其正常的功能，因此对顺铂结合蛋白的研究有助于我们更完整的理解顺铂细胞毒性的机理以及帮助我们避免顺铂耐药性。目前已经有很多组学上鉴定顺铂结合蛋白的方法，例如利用Pt的特征同位素分布的特点，在一级质谱层面筛选那些潜在的顺铂结合蛋白 或者将ICP-MS与二维凝胶电泳结合，从而在组学层面鉴定潜在的顺铂结合蛋白等，但这些方法受限于较低的灵敏度和通量。对顺铂进行生物正交基团改造，从而通过生物素-亲和素富集来鉴定顺铂结合蛋白的方法也被开发，并成功在酵母细胞中鉴定到数百种潜在的顺铂结合蛋白。但由于顺铂的分子较小，并且其作为无机药物，在其上进行官能团化修饰可能会一定程度上改变顺铂本身的性质，并影响最终的鉴定结果。鉴于活性二价铂离子易与半胱氨酸残基反应并结合，因此作者考虑使用基于竞争的定量化学蛋白质组学策略rdTOP-ABPP来鉴定顺铂结合蛋白。首先作者在活细胞水平上证明了顺铂可以与半胱氨酸特异性反应的探针IAyne竞争结合蛋白质的半胱氨酸残基。在优化了质谱条件后，作者在三次重复的质谱实验中共鉴定并定量到1947个肽段，对其进行条件筛选，定义顺铂处理后肽段的色谱强度与对照组中相同肽段色谱强度比值为Ratio，作者认为三次重复的Ratio平均值与对应的p value满足-log10(p value) x log2(ratio) 1.5的是潜在的顺铂结合位点，共筛选到125个肽段归属于107种蛋白。这些蛋白显著富集于核质交换通路以及氧化还原相关通路，这与之前报道的顺铂会引起DNA损伤以及顺铂会引发细胞产生氧化应激相对应。　　随后作者在筛选的107种蛋白中，选择了归属于氧化应激通路的已知的与顺铂有关的靶点蛋白GLRX1以及TXNDC17进行验证，纯蛋白层面的竞争标记与ICP-MS结果均表明这两种蛋白为顺铂结合蛋白，并且其顺铂结合位点均是质谱鉴定到的位点，且均是两个蛋白的活性中心位点，暗示了顺铂结合可能会影响两种氧化还原相关的酶的活性，进而引起氧化应激。纯蛋白质谱实验中，二级谱也表明两个蛋白与顺铂的结合均是桥连结合，这与文献中报道过的其中一种顺铂与蛋白结合的模式是相对应的。　　之后作者选择了另一种尚未明确是否与顺铂有相互作用的蛋白MetAP1进行了后续的生化验证。纯蛋白层面的竞争标记实验与ICP-MS的实验结果证明MetAP1是顺铂结合蛋白，且其顺铂结合位点为我们鉴定到的C14位。随后我们测量了顺铂对MetAP1活性的影响，发现顺铂不会明显影响MetAP1纯蛋白的活性，但可以抑制MetAP1在体内的活性，表明顺铂会在活细胞中影响新生成蛋白的N端甲硫氨酸切割，最后通过比较MetAP1的敲除细胞系和野生型的细胞系对顺铂的MTT曲线，作者发现MetAP1在顺铂引起的细胞毒性中起到了一定程度的保护作用。　　总之，作者应用竞争性ABPP策略，在MCF-7活细胞中鉴定到了107种潜在的顺铂结合蛋白，并对其中的三个靶标进行了验证。作者发现顺铂可以结合与氧化还原相关的酶GLRX1与TXNDC17的关键酶活中心，暗示了顺铂结合可能会影响两种氧化还原相关的酶的活性，进而可能影响细胞的ROS水平。也证明了顺铂通过结合来影响MetAP1的活性从而影响新生成蛋白的N端甲硫氨酸的加工，并表明MetAP1可以作为提高顺铂细胞毒性以避免肿瘤耐药性的潜在靶点。本文的通讯作者为北京大学化学与分子工程学院、北大-清华生命联合中心、北京大学合成与功能生物分子中心的王初教授。其指导的化学与分子工程学院2019级博士研究生王相贺为本文的第一作者。该工作得到了国家自然科学基金委、国家重点研发计划的经费支持。　　本文作者：WXH　　责任编辑：JGG　　原文链接：https://pubs.rsc.org/en/content/articlehtml/2023/cb/d3cb00042g　　文章引用：DOI: 10.1039/D3CB00042G

p 　　 strong 仪器信息网讯 /strong 2017年10月9日，第十七届北京分析测试学术报告会暨展览会(BCEIA 2017)学术报告会在北京国家会议中心正式召开。本届学术报告会为期3天，继续坚持“分析科学创造未来”方向，围绕“生命生活生态—面向绿色未来”主题，举办包括大会报告、分会报告、热点论坛、同期会议等在内的400多场形式多样的学术报告。 /p p style=" text-align: center" img src=" http://img1.17img.cn/17img/images/201710/insimg/97e78ef3-c1c5-4962-b6b4-b534fcba404e.jpg" title=" IMG_5639.JPG" width=" 450" height=" 300" border=" 0" hspace=" 0" vspace=" 0" style=" width: 450px height: 300px " / /p p style=" text-align: center " strong 材料分析测试技术与青年人才论坛会场 /strong /p p 　　10日，作为八大学术论坛之一，“材料分析测试技术与青年人才论坛”如期进行，该论坛按主题分设三个场次依次进行。第一场——“材料分析中的新技术和新方法”于10日上午首先开讲，来自高校、科研院所、仪器厂商等的5位专家、学者为大家分享了各自领域材料分析检测技术的最新动态。 /p p style=" text-align: center" img src=" http://img1.17img.cn/17img/images/201710/insimg/4999f19e-59f9-4785-9ab2-e12efc3b6ba7.jpg" title=" IMG_5540.JPG" width=" 450" height=" 300" border=" 0" hspace=" 0" vspace=" 0" style=" width: 450px height: 300px " / /p p style=" text-align: center " strong 北京材料分析测试服务联盟副秘书长关璐主持会议 /strong /p p style=" text-align: center" img src=" http://img1.17img.cn/17img/images/201710/insimg/c6e67a08-811e-41c6-9c50-6b7d983e386b.jpg" title=" IMG_5545.JPG" width=" 450" height=" 300" border=" 0" hspace=" 0" vspace=" 0" style=" width: 450px height: 300px " / /p p style=" text-align: center " strong 报告人：国家纳米科学中心 研究员 葛广路 /strong /p p style=" text-align: center " strong 报告题目：纳米材料分析测试技术的标准化 /strong /p p 　　纳米材料分析测试涉及众多参数和方法，方法普适性差别很大，检测方法标准便成为测试数据良好置信度的保障。葛广路在报告中首先介绍了纳米检测标准在标准化过程中遇到的诸多难点，如涉及多个测量技术标委会的工作范围，需要协调和界定各自工作内容，以及准确性、可靠性往往缺乏多家实验室比对结果的支持等。另外，相关标准样品、物质缺乏，仅由少数国家级研究机构制备，且多是主要针对基础研究中的方法比较和效应评估。接着介绍了纳米检测标准相关的基础研究及展望。展望中，建议建立国内纳米测量实验比对的联盟组织，同时广泛吸纳企业、专家、检测机构参与，以多种形式开展标准制定。 /p p style=" text-align: center" img src=" http://img1.17img.cn/17img/images/201710/insimg/e635f8dd-6d16-455c-8421-5b90d0448c3e.jpg" title=" IMG_5626.JPG" width=" 450" height=" 300" border=" 0" hspace=" 0" vspace=" 0" style=" width: 450px height: 300px " / /p p style=" text-align: center " strong 报告人：国家有色金属及电子材料分析测试中心 教授 马通达 /strong /p p style=" text-align: center " strong 报告题目：材料表征技术与无损检测新方法研究 /strong /p p 　　马通达在报告中向大家介绍了在材料表征技术方面，近期的主要工作进展。首先通过原位电子显微法、薄样品厚度测量法两种技术的开发过程，讲解了透射电子显微术在钒合金辐照损伤研究中的应用。接着又以小冲杆实验法、纳米压痕法，介绍了金属材料压入测试方法在金属材料性能研究中的应用及最新技术进展。关于无损检测新方法的进展，主要与大家分享了光和超声复合激励红外无损方法，及棒材超声相控阵检测方法的研究。 /p p style=" text-align: center" img src=" http://img1.17img.cn/17img/images/201710/insimg/88643aae-0f3f-4f70-89f4-78d5300a1275.jpg" title=" IMG_5668.JPG" width=" 450" height=" 300" border=" 0" hspace=" 0" vspace=" 0" style=" width: 450px height: 300px " / /p p style=" text-align: center " strong 报告人：中国科学院化学研究所 研究员 马会民 /strong /p p style=" text-align: center " strong 报告题目：光学探针与传感分析 /strong /p p 　　光学探针具有时空分辨能力高、信号响应快，能对分析物的动态变化进行实时跟踪等特点，已成为生物分子的原位传感与成像、甚至蛋白质区域结构分析的最有效手段之一。马会民首先向大家一一列举了光学探针的设计方法，包括利用共价键形成、粘度变化、温度变化等设计原理。接着介绍了近年的若干相关研究工作，包括利用低背景信号、打开型光学探针进行新的酪氨酸酶识别基因、超灵敏亮氨酸氨肽酶光学探针设计等。 /p p style=" text-align: center" img src=" http://img1.17img.cn/17img/images/201710/insimg/8f7f2d8c-ad4e-4ad2-a3e7-31931d23ac61.jpg" title=" IMG_5700.JPG" width=" 450" height=" 300" border=" 0" hspace=" 0" vspace=" 0" style=" width: 450px height: 300px " / /p p style=" text-align: center " strong 报告人：北京工业大学 教授 汪夏燕 /strong /p p style=" text-align: center " strong 报告题目：微纳尺度分离分析 /strong /p p 　　随着生命科学研究的深入，对生物体的研究深入到细胞、单分子层次。迫切需要在微纳尺度上原位、活体、实时地获取相关生物化学信息。汪夏燕在微纳尺度分离分析方面的相关研究进展包括：基于电渗的原理建立了对微纳流体可控驱动和精准操控的方法，并可用于驱动HPLC分离 研制了皮/飞升取样器，实现飞升到皮升范围的精确体积取样和转移 建立和发展了多种微纳色谱方法等。 /p p style=" text-align: center" img src=" http://img1.17img.cn/17img/images/201710/insimg/ba770a22-08e1-416b-a511-9199398cfd91.jpg" title=" IMG_5771.JPG" width=" 450" height=" 300" border=" 0" hspace=" 0" vspace=" 0" style=" width: 450px height: 300px " / /p p style=" text-align: center " strong 报告人：钢研纳克检测技术有限公司 副总经理 陈吉文 /strong /p p style=" text-align: center " strong 报告题目：激光原位统计分布分析技术及其应用 /strong /p p 　　陈吉文首先介绍了激光原位统计分布分析仪的关键技术，包括激光剥蚀光斑调节与均匀剥蚀技术、激光光谱瞬态信号探测技术、惰性气体保护的低压原位同步扫描控制系统等。接着介绍了钢研纳克公司研制的LA与ICP-MS联用系统与国外先进设备的参数对比，结果显示方法检出限及定量限比对比较一致，定量分析线性范围、精密度、准确度等水平基本相当。最后，列举了激光原位分析仪器(LIBSOPA)在深度分布分析、镀层分布分析、夹杂物统计分布分析等领域的应用案例。 /p p style=" text-align: center" img src=" http://img1.17img.cn/17img/images/201710/insimg/4746dd14-86d4-4de4-84ee-f76ac9e0fb7a.jpg" title=" IMG_5619_meitu_1.jpg" width=" 450" height=" 625" border=" 0" hspace=" 0" vspace=" 0" style=" width: 450px height: 625px " / /p p style=" text-align: center " strong 现场提问互动环节 /strong /p