蒽二酮

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一、原理糖在浓硫酸作用下，可经脱水反应生成糠醛或羟甲基糠醛，生成的糠醛或羟甲基糠醛可与蒽酮反应生成蓝绿色糠醛衍生物，在一定范围内，颜色的深浅与糖的含量成正比，故可用于糖的定量测定。该法的特点是几乎可以测定所有的碳水化合物，不但可以测定戊糖与己糖，而且可以测所有寡糖类和多糖，共中包括淀粉、纤维素等（因为反应液中的浓硫酸可以把多糖水解成单糖而发生反应），所以用蒽酮法测出的碳水化合物含量，实际上是溶液中全部可溶性碳水化合物总量，在没有必要细致划分各种碳水化合物的情况下，用蒽酮法可以一次测出总量，省去许多麻烦，因此，有特殊的应用价值。但在测定水溶性碳水化合物时，因与蒽酮试剂发生反应而增加了测定误差。此外，不同的糖类与蒽酮试剂的显色深度不同，果糖显色最深，葡萄糖次之，半乳糖、甘露糖较浅，五碳糖显色更浅，故测定糖的混合物时，常因不同糖类的比例不同造成误差，但测定单一糖类时，则可避免此种误差。糖类与蒽酮反应生成的有色物质在可见光区的吸收峰为630nM，故在此波长下进行比色。二、仪器与用具电子天平；容量瓶：100ml 4个，50ml 2个；漏斗；小试管若干支；电炉；刻度吸管0.5ml1支，2.0ml 3支，5ml 4支；分光光度计；记号笔。三、试剂蒽酮乙酸乙酯试剂：取分析纯蒽酮1g，溶于50ml乙酸乙酯中，贮于棕色瓶中，在黑暗中可保存数周，如有结晶析出，可微热溶解；浓硫酸（相对密度1.84）。四、方法1. 标准曲线的制作按方法一标准曲线的制作方法加入标准的蔗糖溶液，然后按顺序向试管中加入0.5Ml蒽酮乙酸乙酯试剂和5Ml浓硫酸，充分振荡，立即将试管放入沸水浴中，逐管准确保温1Min，取出后自然冷却至室温，以空白作对照，在630nM波长下测其光密度，以光密度为纵坐标，以糖含量为横坐标，绘制标准曲线，并求出标准线性方程。2.可溶性糖的提取取新鲜植物叶片，擦净表面污物，剪碎混匀，称取0.10～0.30g，共3份，分别放入3支刻度试管中，加入5～10ml蒸馏水，塑料薄膜封口，于沸水中提取30min(提取2次)，提取液过滤入25ml容量瓶中，反复冲洗试管及残渣，定容至刻度。3. 显色测定吸取样品提取液0.5ml于20ml刻度试管中（重复2次），加蒸馏水1.5ml，以下步骤与标准曲线测定相同，测定样品的光密度。4. 计算可溶性糖的含量，由标准线性方程求出糖的量，按式（1－1）计算测试样品中糖含量。可溶性糖含量(％)＝(C×V / A×n) / (W×106)　　　　　　　　　　(1－1)式中C:标准方程求得糖量(μg)；A:吸取样品液体积(Ml)；V：提取液量(ml)；n：稀释倍数；W：组织重量(g)。

[align=center][font=DengXian]单糖的测定[/font]--[font=DengXian]蒽酮比色法[/font][/align][font=DengXian]蒽酮比色法[/font]1[font=DengXian]．原理[/font] [font=DengXian]单糖类遇浓硫酸时，脱水生成糠醛衍生物，后者可与蒽酮缩合成蓝绿色的化合物，在[/font]620nm[font=DengXian]处有最大吸收。[/font][font=DengXian]当糖的量在[/font]20[font=DengXian]一[/font]200mg[font=DengXian]范围内时[/font],[font=DengXian]其呈色强度与溶液中糖的含量成正比，故可比色定量。[/font][font=DengXian]蒽酮比色法是一个快速而简便的定糖方法。蒽酮可以与游离的已糖或多糖中的已糖基、戊糖基及已糖醛酸起反应[/font].[font=DengXian]本法多用于测定糖原的含量，也可用于测定葡萄糖的含量。[/font][font=DengXian]蒽酮试剂：取[/font]2g[font=DengXian]蒽酮溶解到[/font]80%H2SO4[font=DengXian]中，以[/font]80%H2SO4[font=DengXian]定容到[/font]1000mL[font=DengXian]，当日配制使用。[/font]3[font=DengXian]，[/font]5-[font=DengXian]二硝基水杨酸（[/font]DNS[font=DengXian]）[/font][font=DengXian]在碱性条件下还原糖与[/font]DNS[font=DengXian]试剂反应，还原糖被氧化成糖酸及其他物质，[/font]DNS[font=DengXian]被还原为棕红色的[/font]3-[font=DengXian]氨基[/font]-5-[font=DengXian]硝基水杨酸。[/font]540nm[font=DengXian]比色[/font][font=DengXian]多糖水解为单糖时每断裂一个糖苷键就需要一分子水，因此单糖换算多糖时要乘系数[/font]0.9