色谱噪比测试

应雪妖版主的客户要求，对月旭不同型号的C8色谱柱进行知母皂苷BⅡ的测试，最终选择一款适合知母皂苷BⅡ测试的柱子。前言很快我就收到了雪妖寄来的快递，里面装了满满5根柱子，当然还有知母皂苷BⅡ对照品溶液和知母样品溶液。因为当时氮气用完了，中间等待了两天才开始实验，实验总共花了3天时间。1、实验部分1.1、仪器和和设备LC310 液相色谱仪-ELSD 蒸发光散射检测器（LC310 为江苏天瑞仪器股份有限公司生产，ELSD 为美国奥泰公司提供）；超纯水机（南京易普易达科学发展有限公司）；超声波清洗机（张家港市神科超声电子有限公司）1.2 试剂氮气（购于昆山当地，纯度大于99.999%）；乙腈（色谱纯，美国TEDIA 公司生产）；超纯水：自制；色谱柱（C8）共5根，均为月旭材料科技（上海）有限公司提供。5根色谱柱型号如下：1#：Xtimate C8，编号：22904 ，4.6mm*250mm，5um；2#：XB-C8，编号：Ult 101202c1，4.6mm*250mm，5um；3#：Ultimate LP-C8，编号：631001522，4.6mm*250mm，5um；4#：Xtimate C8，编号：4311015264.6mm*250mm，5um；5#：Topsil C8，4.6mm*250mm，5um。1.3 色谱条件知母药材中知母皂苷BⅡ的含量测定在中国药典2010 版一部正文198 页中规定：以辛烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈：水=25:75 为流动相，蒸发光散射检测器检测。理论板数按照知母皂苷BⅡ峰计算应不低于10000。备注：因客户按药典方法制备提供的对照品和供试品溶液，因此制备溶液部分不做深究。 2 实验数据按液相色谱仪器操作规程打开仪器、氮气钢瓶、调整流动相比例，同时参照相关网络文献，首先将流速设置为1.0ml/min，色谱柱温：35℃，氮气压力设置为0.3MPa， 漂移管温度70℃。用1#色http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/09/201109191501_317791_1628076_3.jpg在此色谱条件下对照品溶液进样10ul，色谱图如下：http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/09/201109191503_317792_1628076_3.jpghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/09/201109191503_317793_1628076_3.jpg按照同样的色谱条件，对供试品进样测试，谱图如下：http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/09/201109191504_317795_1628076_3.jpghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/09/201109191505_317796_1628076_3.jpg对照品与供试品谱图叠加如下：http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/09/201109191505_317797_1628076_3.jpg备注：在此之前，对氮气压力做过调整，试过0.25MPa，漂移管温度试过65℃，与0.3MPa和70℃基本没有什么区别，故将色谱条件设置为0.3MPa 的氮气压力和70℃的漂移管温度。且在此色谱条件下，色谱图能满足测试要求，理论板数都大于10000。同样的色谱条件，对其他几根色谱柱进行试验。2#色谱柱试验谱图基线谱图：http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/09/201109191507_317798_1628076_3.jpghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/09/201109191508_317799_1628076_3.jpghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/09/201109191509_317800_1628076_3.jpg供试品溶液色谱图如下：http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/09/201109191509_317801_1628076_3.jpghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/09/201109191510_317802_1628076_3.jpg对照品和供试品谱图叠加如下：http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/09/201109191511_317803_1628076_3.jpg备注：用2#色谱柱进行测试，理论板数均大于10000，且峰形对称。3#色谱柱，色谱条件同前：空跑基线谱图：http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/09/201109211054_318270_1639959_3.jpg两针对照品溶液色谱图：http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/09/201109211055_318274_1639959_3.jpghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/09/201109211055_318275_1639959_3.jpg供试品溶液色谱图如下：http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/09/201109211057_318276_1639959_3.jpg对照品与供试品色谱图叠加如下：http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/09/201109211057_318278_1639959_3.jpg备注：3#色谱柱测试谱图，理论板数均大于10000。4#色谱柱，色谱条件同前：空跑基线谱图：http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/09/201109211058_318279_1639959_3.jpg对照品色谱图：http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/09/201109211059_318280_1639959_3.jpghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/09/201109211100_318281_1639959_3.jpg供试品色谱图：http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/09/201109211100_318282_1639959_3.jpg对照品与供试品色谱图叠加如下：http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/09/201109211101_318283_1639959_3.jpg5#[size

[img=[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]谱图，升温80-200-250-300-315度，检测器300°,690,281]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2021/11/202111031013369374_9410_5406430_3.png!w690x281.jpg[/img]如上图所示，萃取样品方法使用生物标志物法，空白实验无杂峰，样品实验如图中所示，有较大的杂峰，不知何原因，请各位大佬指教一二。思考如下：1.空白实验和样品实验除一个加样品，一个不加样品外，其他操作步骤均相同，样品瓶、试剂、量取仪器均同一套，如是污染的问题，但空白没污染2.这个样品之前也做过几次，均没有大杂峰出现，且是在一个样品袋里的样品，可能是样品本身的问题3.整个实验过程中，除萃取甲藻甾醇和烯酮组分，还萃取了烷烃组分，本次萃取的烷烃组分无异常。萃取顺序：先烷烃后甲藻甾醇和烯酮，如是样品问题，烷烃组分却没有异常4.此样品在仪器上测试两遍，中间间隔一周，测试结果相同。如是仪器问题，间隔一周中其他人使用该仪器无异常

有时候接到客户电话咨询，我现在分离某某化合物分离效果不好了，原来分得挺好的，现在咋就分不了了，是色谱柱污染还是仪器问题呢？遇到这种情况，我们首先对色谱柱进行柱效测试，不同品牌色谱柱对柱效测试的方面略有不同，下面以Dikma色谱柱测柱效为例来说明如何测柱效：分别精密称取下列标准品，溶解在15ml乙腈：水=65：35的溶液中。1、尿嘧啶：0.0015g2、苯甲酸甲酯：30ul3、甲苯：200ul4、萘：0.025g然后，按照以下色谱条件进行HPLC分析色谱柱如图所示规格250 × 4.6 mm流动相乙腈: 水 = 65:35流速1.0 mL/min柱温30 oC检测器UV 254 nm进样量2.0 μL样品1. 尿嘧啶2. 苯甲酸甲酯3. 甲苯4. 萘http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/05/201505211453_546927_2452211_3.png

高效液相色谱仪及色谱柱测试 仪器信息网论坛不缺液相色谱方面的高手，不管是维修方面研发方面还是检测方面的。其中仪器及色谱柱检测，大家都有独到之处，科学之举。 在这我介绍种方法，可能也有很多同仁们用过。在这方法能同时检测液相色谱仪和色谱柱，但检测的只是众多检测项目中比较简单的几种。仪器主要检测检出限、线性、重复性等，色谱柱主要检测分离度、理论塔板数、重复性（和仪器检测相同）等。 下面我们就来具体介绍下。用苯、甲苯、萘测试下高效液相色谱仪及C18色谱柱。实验部分【仪器】高效液相色谱仪（紫外检测器+等度泵+柱温箱+自动进样器+在线脱气机等）超声波振动仪溶剂过滤器【试剂】甲醇：色谱纯超纯水苯、甲苯、萘标准品溶液【色谱条件】检测器：紫外检测器色谱柱：Promosil C18 ( 250 mm X 4.6mm，5μm )流动相：甲醇：水=80:20（V:V）检测波长：254nm流速：1.0mL/min柱温：30℃进样量：20ul【色谱图】 先来张浓度大的，苯、甲苯、萘含量均为1.0 × 10-4g/ml的色谱图：http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/09/201509121050_565838_2536753_3.png 效果不错吧，各指标一看就应该能看个差不多吧。浓度大如果看不出好坏，那简单，咱们换个浓度小的，这样各种效果一目了然了。 下面这个是苯、甲苯、萘含量均为5.0 × 10-7g/ml的色谱图：http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/09/201509121050_565839_2536753_3.png 再来张重复性（重叠模式）对比的色谱图：http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/09/201509121050_565840_2536753_3.png 再来张上下交错模式重复性对比色谱图：http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/09/201509121050_565841_2536753_3.png 再来张上下左右交错模式重复性对比色谱图：http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/09/201509121051_565842_2536753_3.png 当然浓度大的，重复性色谱图看着效果更好，不信您就来看，这张就是苯、甲苯、萘含量均为1.0 × 10-4g/ml的重复性色谱图：http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/09/201509121058_565843_2536753_3.png 这下看明白了吧，效果确实不错吧，各项指标都较理想吧。 下面再来张检出限的色谱图，这个各成分的浓度分别是5.0 × 10-8g/ml：http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/09/201509121050_565837_2536753_3.png【结论】 经计算以上各成分的检出限（按2倍噪声计算）大约分别是7.0× 10-9g/ml、4.5× 10-9g/ml、2.5 × 10-9g/ml，线性系数均在0.9999以上，定性重复性均小于0.3%，定量重复性均小于0.5%，分离度也均大于5，色谱柱理论塔板数也均在1万以上，色谱峰较对称，峰形较好。 这就说明该色谱条件适合高效液相色谱仪及常规C18( 250 mm X 4.6mm，5μm )色谱柱测试，测试效果较好。另外可以确定该仪器和该色谱柱测试的这几项内容都没问题，指标都不错。 国标中单用萘标液测试仪器或色谱柱，这样一般也基本能测出仪器及色谱柱的基本性能指标，但却测不出液相重要指标分离度。以上这种方法在国标的基础上又增加了两种成分，分离度指标也可以一块测试。当然也可能有人还会选萘、蒽、茵、菲、芘、苯、甲苯、二甲苯等标准品测试以上项目，也可能会有不错的效果。 以上测试方法我们经常用，效果不错，大家如有这方面测试不防试试。

[img=,690,920]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/08/201908081027400556_1946_2650137_3.jpg!w690x920.jpg[/img]凡请问一下：1、waters色谱柱测试报告里的USP Tangent Efficiency和理论塔板数是一回事吗？2、报告里的结果拖尾因子等结果 是丙酮峰还是苊峰？ 3、报告里没有塔板数限度的要求，通过测试结果如何评价柱效？如何判断该色谱柱是要继续使用还是报废？