质谱肽段分析

20 - 40%)。串联质谱多反应监测 (MRM/SRM)定量方法，一直以来就是定量的黄金标准，在小分子定量上早已成熟使用，随着液相色谱和串联质谱技术的提高，越来越多的生蛋白（肽段）定量的意义及出现 MRM 质谱技术平台的缘由化实验室开始大量采用串联质谱技术为基础的蛋白（肽段）定量流程。MRM 肽段定量方法的优点很多，它利用蛋白专属的肽段序列完成定量分析，一次运行可同时分析几十到几百种的蛋白，具备高通量的定量分析能力。特别是 2012 年，方法论领域的权威期刊《Nature Methods》将基于三重四极杆质谱 (QQQ) 平台的 MRM/SRM 定量思路的靶向蛋白质组学 (Targeted proteomics) 技术列为当年的年度方法，确立了目标蛋白定量分析的权威策略。近年来该杂志陆续发表了多篇论文，对 QQQ-MRM/SRM 思路成功应用于目标蛋白定量分析进行了持续报道。随着质谱灵敏度的大幅提高，以大流速常规液相色谱 (LC) 取代纳流液相色谱 (Nano-LC) 所组成的 MRM 肽段定量方法，代表着蛋白定量分析的最高技术标准，极大地促进生物化学及各种新应用快速向前发展，广泛应用在蛋白质组学、生物制药等研究领域，并迅速朝着诸如食品、环境、临床等更宽的应用范围发展。

本文采用岛津Nexera LC-40高效液相色谱仪及单四极杆质谱LCMS-2020联用对曲妥珠单抗的胰蛋白酶酶解样品进行分析，配套使用多肽分析专用色谱柱进行分离，利用紫外检测器和质谱进行检测，质谱检测结果对关键色谱峰进行定位。该方法重复性实验中，各肽段的保留时间RSD为0.04-0.22%；峰面积RSD值为0.46-1.88%。实验结果表明，该方法方便快捷，具有良好的重复性。

本应用纪要旨在证明ACQUITY QDa质谱检测器为检测宽分子量范围的肽(尤其是生物治疗药物的肽图分析)提供了一种经济有效的简单解决方案，并且该质谱检测功能完全兼容基于光学检测的传统LC肽监测分析(使用TFA或甲酸(FA))。为此，我们采用监测曲妥珠单抗(一种治疗性单克隆抗体(mAb))肽图的一种现有方法，并应用ACQUITY QDa质谱检测器开展了此次研究。

利用分析得到的母子离子的通道检测目标肽段，通常会针对每种肽段进行优化。本技术简报将介绍使用Skyline为Waters Xevo TQ-S质谱仪选择肽段和通道并进行方法开发的过程，同时包括分析复杂合成基质中的致敏肽段标准品的结果。Skyline是一款开源文档编辑器，可用于创建和分析靶向蛋白质组学实验。

实验表明，得益于主动离子管控技术（AIM），TSQ Quantiva在复杂基质中针对目标肽段的定量灵敏度表现突出，极大地提升了TSQ 质谱平台定量复杂基质中目标肽段的能力，适用于复杂生物学样本中低丰度蛋白质的分析，可用于潜在生物标志物的确证工作。

单克隆抗体 (mAb) 等蛋白质的翻译后修饰 (PTM) 是确定药品有效性和安全性的关键质量属性 (CQA)。分析技术的进步加快了 PTM 表征这项艰巨任务的速度。在生物制药行业，肽谱分析是蛋白质鉴定的常用方法。其中包括通过酶解生成肽片段，然后进行液相色谱 (LC) 分离、检测和肽段鉴定。肽谱分析与质谱 (MS) 检测联用，可鉴定单个氨基酸变化和 PTM。LC/MS 是 PTM 分析的首选技术。但由于蛋白质酶解物较为复杂，肽谱分离始终是一项具有挑战性的工作。高分离度和可靠的肽谱分离是可靠鉴定 PTM 的关键。目前的 LC/MS 方法中，采用质谱兼容的甲酸 (FA) 离子对试剂法，信号强度要优于其他改性剂。但 FA 的缺点是，与多种 C18 固定相配合使用时峰形较宽并会出现拖尾峰，从而导致肽对发生共洗脱。表征 PTM 时，需要对复杂的胰蛋白酶酶解物中经过修饰和未经修饰的肽进行高分离度液相色谱分离。肽保留和 MS 信号分别会受到所选反相液相色谱柱和流动相离子对试剂的影响。因此，选择正确的液相色谱柱对于提高含 PTM 肽的分离度至关重要。

采用TriSep ® -3000高效微流电动液相色谱系统与ESI离子源质谱联用，系统的研究了电解质浓度和pH对ESI-MS信号强度的影响，施加电压和有机改性剂对肽分离的影响。比较了cHPLC 和eHPLC分离肽混合物的能力。为了评价本系统的可行性和可靠性，采用eHPLC-ESI-MS对细胞色素C胰蛋白酶酶解液和修饰蛋白的进行了分析。实验结果表明，基于eHPLC-ESI-MS系统，在梯度条件下实现肽的基线分离。并可完成修饰蛋白和细胞色素c胰蛋白酶解液的检测。

肽谱分析是表征生物治疗蛋白质不可或缺的工具，该方法广泛运用于生物药物蛋白质的生产过程，以确保产品在各生产阶段的完整性和稳定性。利用 LC/MS 进行肽谱分析是表征肽段修饰的首选技术。稳定且重现性高的 LC/MS 方法，是成功实现肽谱分析分离的关键。因此，需要对 LC/MS 分离参数进行全面的研究。分析复杂蛋白质酶解物的过程中，如何实现肽段的高效、高分离度分离是一项巨大的挑战。甲酸是一种兼容质谱的离子对试剂，常用于 LC/MS 方法中，可实现灵敏检测。然而，甲酸也会导致峰形展宽，从而使肽段发生共洗脱。除此之外，流动相含甲酸的现有 LC/MS 方法具有峰容量小、峰展宽以及对相似肽段分离度差的限制。选择正确的反相色谱柱和 LC/MS 方法，对肽谱分离的成功十分重要。Agilent AdvanceBio Peptide Plus 色谱柱专为高效的肽段分离而设计。HPH Poroshell 填料包覆了一层带正电荷的改性表面基团。采用 C18 配基的表面多孔颗粒填料表面带电，可改善峰形并提高峰容量。最佳孔径 (120 Å ) 和粒径 (2.7 μ m) 能够以低色谱柱反压提供类似 UHPLC 的性能。AdvanceBio Peptide Plus 色谱柱还可以与含甲酸的流动相兼容，在与质谱联用时可提供出色的峰形。?本应用简报展示了 AdvanceBio Peptide Plus 色谱柱在用含甲酸的流动相对单克隆抗体 (mAb) 进行肽谱分离时显示出的卓越性能。本文通过研究流速、梯度时间和温度等不同的填料影响因素，开发出了实现最佳肽段分离的 LC/MS 方法。并对峰容量、峰宽、峰面积、峰高、重现性和序列覆盖率等肽谱分析的关键要素进行了评价。

采用TriSep ® -3000高效微流电动液相色谱系统与ESI离子源质谱联用，系统的研究了电解质浓度和pH对ESI-MS信号强度的影响，施加电压和有机改性剂对肽分离的影响。比较了cHPLC 和eHPLC分离肽混合物的能力。为了评价本系统的可行性和可靠性，采用eHPLC-ESI-MS对细胞色素C胰蛋白酶酶解液和修饰蛋白的进行了分析。实验结果表明，基于eHPLC-ESI-MS系统，在梯度条件下实现肽的基线分离。并可完成修饰蛋白和细胞色素c胰蛋白酶解液的检测。

单克隆抗体 (mAb) 是制药行业中发展最快的一类药物。mAb 作为蛋白质药物，从初始表达到最终商业化经历了一个高度复杂的过程，需要在每个步骤中对其进行仔细表征。在用于 mAb 表征的众多分析方法中，肽谱分析是一项至关重要的技术，它能够实现 mAb 的一级结构确认，还可以对翻译后修饰 (PTM)（如脱酰氨基化、氧化和糖基化）进行鉴定和定量分析。使用 LC/MS/MS 方法进行的 mAb 肽谱分析包括将纯化的 mAb 酶裂解为肽段、串联质谱分析以及数据解析。样品前处理通常涉及多个步骤，包括变性、还原、烷基化和酶解。手动进行肽谱分析样品前处理的过程十分繁琐，且易于受到可扩展性和重现性不佳的影响。此应用简报展示了一个高通量工作流程，能够同步进行样品消解和样品净化，具有很高的重现性。

通过裂解气相色谱－质谱（PGC-MS）和热重分析（TGA）等方法，对轮胎不同部位的硫化胶进行了一系列彻底地分析。成功利用PGC-MS确定了多组份橡胶的并用比，另外PGC-MS方法也是一种简单而迅速地测定促进剂和防老剂的方法，这种方法不需对硫化胶进行预处理。用TGA的方法可测定硫化胶的含胶率、碳黑含量、抽出物含量以及灰分含量。在轮胎硫化胶分析中与传统的繁琐的化学分析相比，PGC-MS和TGA被证明是一种准确而迅速的分析方法。

本应用纪要将串联四极杆质谱仪和飞行时间质谱仪与纳升级和微流(ionKey)液相色谱平台相结合，对经胰蛋白酶酶解的未分馏、未除高丰度的人血清样品中的肽进行MRM的定量分析，并全面比较了不同的LC-MS配置。不同的LC和MS平台相结合组成了八套不同的LC-MS配置。此外，我们还比较了这些平台的通量、灵敏度、线性和重现性，以证明它们在转化研究中用于分析大规模样品组的适用性。

2.7 μ m Agilent AdvanceBio 肽图分析色谱柱专为改善多肽分离和肽图分析应用而设计。该色谱柱采用了表面多孔技术，能够实现复杂多肽混合物的快速有效分离。本文以重组人促红细胞生成素(rhEPO) 的胰酶分解物作为糖肽分析的消化物模型，展示了AdvanceBio 肽图分析色谱柱卓越的肽图分析性能。与很多蛋白治疗药物类似，rhEPO 在生产过程中发生了修饰，因此表现出广泛的异质性。AdvanceBio 肽图分析色谱柱采用了优化的 C18 涂层技术，能在一个很宽的洗脱范围内为多肽分析提供卓越的选择性和分离度，以增强糖肽片段的分离，从而实现其快速、有效和灵敏的质谱分析。

Agilent AdvanceBio Peptide Plus 色谱柱专为高效的肽段分离而设计。HPH Poroshell 填料包覆了一层带正电荷的改性表面基团。采用 C18 配基的表面多孔颗粒填料表面带电，可改善峰形并提高峰容量。最佳孔径 (120 Å ) 和粒径 (2.7 µ m) 能够以低色谱柱反压提供类似 UHPLC 的性能。AdvanceBio Peptide Plus 色谱柱还可以与含甲酸的流动相兼容，在与质谱联用时可提供出色的峰形。本应用简报展示了 AdvanceBio Peptide Plus 色谱柱在用含甲酸的流动相对单克隆抗体 (mAb) 进行肽谱分离时显示出的卓越性能。本文通过研究流速、梯度时间和温度等不同的填料影响因素，开发出了实现最佳肽段分离的 LC/MS 方法。并对峰容量、峰宽、峰面积、峰高、重现性和序列覆盖率等肽谱分析的关键要素进行了评价。

本文研究了霉酚酸酯API 在pH 2.0、3.5、6.0 和8.2 条件下的热和过氧化氢降解。采用台式高分辨率质谱仪Q Exactive 与UHPLC 系统联用快速准确地分析了降解产物，● 高分辨率准确质量数测定（HRAM）的全扫描图谱实现了快速的鉴定 – 获得降解产物元素组成的关键信息。● 信息量丰富的高能量碰撞解离（HCD）MS/MS 图谱有利于准确鉴定降解产物。● 全扫描和MS/MS 模式下的正/ 负离子切换模式能全面鉴定降解产物，如图4 和5 所示。● 数据分析软件Mass Frontier 极大的提高了降解产物结构解析的速度和可靠性。Q Exactive 台式Orbitrap MS 具有强大的功能，在一体化UHPLC/HR-MS/MS 平台上快速高效地完成降解产物分析，从而显著提高了药物研发过程中降解产物的鉴定通量。

运用静态顶空2毛细管气相色谱2质谱法对6 种不同产地柴胡的挥发性成分进行了检测,并运用质谱检索和保留指数相结合的手段对检出的挥发性成分进行定性,6 种柴胡中定性相对含量大于0. 2 %的挥发性成分60 种。结果表明:柴胡的挥发性成分中脂肪醛类物质的含量最大,占总挥发性物质的25 %～44 % 萜类化合物占8. 1 %～17. 3 % 萜类衍生物占10. 3 %～37. 0 %。分析结果的相对标准偏差(RSD) 在1. 20 %～7. 02 %。本法可用于柴胡挥发性化学成分的分析。

MALDI-8020作为台式基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱，具有体积紧凑、分析速度快、仪器维护方便和软件合规的特点

在哺乳动物和昆虫世界里，信息素强烈影响其社会行为，如攻击性和配偶识别。果蝇的信息素以表皮烃类形式存在，在求偶中发挥着重要作用。GC/MS是目前研究果蝇表皮烃类的主要分析工具。虽然其重现性和灵敏度很高，但需要将果蝇放在毁灭性的有机溶剂中，因而无法再对其进一步的行为进行研究。我们提出了一种用实时直接分析（DART）MS分析活体动物烃类和其它表面分子的技术。用一种钢制小探针从清醒状态的果蝇腹部取样进行表面烃类分析。对探针进行DART质谱分析，检测以前鉴定过的许多不饱和烃类化合物质子化分子离子的质荷比（m/z）。与用GC/MS研究的结果一致，雄性和雌性的化学成分有很大差异。 我们还观察到了雄性表达轮廓图的空间差异。首先从一只处子状态的雌性果蝇取样，然后在其成功交配后45分钟和90分钟再取样，结果显示交配后顺vaccenyl醋酸酯、tricosene和pentacosene 的质谱信号强度增加。本方法适用于行为学研究时对个体动物的化学轮廓进行近瞬时分析，扩展了信息素介导的行为学模型。 已有研究表明，许多挥发性化学信号强烈影响着哺乳动物和昆虫的复杂社会行为，包括配偶选择、亲缘识别、攻击与聚集等。在昆虫和节肢动物中，这类信号，许多是表皮烃类化合物，除影响求偶、群体识别和攻击外，还可能标志其在社会网络中的角色。对果蝇的研究文献表明，烃类化合物起着催欲剂或抑制剂的作用。特别是，许多研究都将重点放在z-11-octadecenyl 醋酸酯[顺-vaccenyl 醋酸酯 (cVA)]上，认为其既是配偶识别的介导剂，又是攻击因子。通过提供从感觉输入到行为输出的信息，可以解析信息素受体和上游中性通路，为描绘复杂社会行为通路提供的方法。表征昆虫烃类化合物所用的主要方法一直是GC/MS联用法。GC/MS分析除个别异构体不能分离外，可以定量测定烃类化合物。虽然这种方法重现性和灵敏度很高，但却有三个局限。首先，提取时要把动物放置到己烷或氯仿中，这种条件是毁灭性的，因此已无法在对其下一步的行为进行研究。第二，所用的溶剂和检测条件对表面化合物的类别是有选择性的，其它行为相关的表皮信息将无法用现有方法检测。第三，GC/MS分析时间较长，一般需要几十分钟到1小时以上。针对这些局限，我们提出了一种分析清醒状态果蝇表皮烃类化合物和其它表面分子的方法。常压质谱是最近发展起来的技术，以最少的样品制备进行质荷比（m/z）测定。常压质谱的一种模式就是实时直接分析（DART），采用激发态氦原子使化合物直接从样品表面解吸并离子化，不需要化学提取或高真空条件。用DART MS研究果蝇烃类化合物，较过去的GC/MS方法有了较大改善，在平行进行行为学研究的同时，实现了动物化学轮廓图的快速分析。本方法可以追踪同一动物在其社会交往前后化学轮廓图的变化，控制表皮烃类表达的个体变化，还可以从所观察的个体动物中发现与行为差异相关的化学信号。采用DART MS技术，可以以高重现性对活体果蝇表皮进行化学轮廓分析、检测雄性和雌性轮廓图的差异、检测雄性烃类表达的空间特异性，并监测同一个体社会交往见后烃类化合物的变化。

MALDI TOF 质谱成像可早广泛的分子质量范围内同时检测和定位分子种类，在生物样品中，多种类别的生物分子可被找到，包括代谢物，糖，脂质，肽段和蛋白质。

本文展示了应用成像质谱显微镜iMScope QT对不同营养状态下小鼠肾脏中脂质化合物的代谢变化进行研究的应用案例。使用iMScope QT结合数据分析软件IMAGEREVEAL MS对正常饮食小鼠和高糖高脂饮食小鼠肾脏组织切片中的脂质化合物进行检测和数据分析，计算每组的平均值、比值、P值等信息，最终筛选出17个上调脂质化合物、10个下调脂质化合物，为研究膳食模式、脂质代谢变化与肥胖三者之间的关系提供理论依据。

本申请说明说明了SFC分离肽的能力。这种高速分析技术与质谱鉴定能力的结合提供了一种适用于多种化合物的通用系统。

液质联用鉴定肽段的样品制备，通常由多步骤工作流程组成，包括溶液内蛋白酶解、肽段纯化，以及肽段分馏。该过程通常需要根据样品特性及分析目的（ 即定量或表征）定制为具体的应用方法。样品制备工作流程的自动化可提高样品处理能力、降低差异性，并且无需熟练操作人员执行重复工作。然而，自动化平台通常并不用于最初的分析开发，这是因为分析开发者很少具有开发复杂自动化方案的经验。相反，分析通常是采用湿式工作台相关技术进行开发，然后在自动化专家的帮助下移植到自动化平台。采用 AssayMAP 肽段样品制备解决方案，无需掌握专门的技术也能实现自动化操作。开发者可通过一个简单的软件用户界面和灵活的实验方案对关键实验变量进行完全控制，从而能够专注于科学分析研究。如今，分析开发者、科学家或技术员无需具备自动化专业知识也能实现可扩展、精确的自动化操作。采用 AssayMAP 平台，整个工作流程可直接在相同的硬件上进行开发，如需实现高通量样品前处理，也易于对硬件进行扩展，从而可减少或避免已有实验方案实现自动化所需的额外时间和资源。本文将介绍发现（鸟枪法）蛋白组学研究的一种常规液质联用工作流程，包括溶液内酶解、反相肽段纯化，以及肽段的强阳离子交换分馏 (SCX)，所有这些操作均由 AssayMap Bravo 液体处理器完成。采用 SCX 小柱通过增加 pH 或离子强度对大肠杆菌蛋白裂解液进行逐步洗脱，在六个 SCX 馏分中鉴定出 15000 多条特定肽段序列，其中 64-67% 的肽段可专属性地在其中一个馏分中得到鉴定。

采用Exactive Plus EMR质谱仪，直接进样方式，突破了传统的RPLC/MS平台无法进行cysteine-linked ADCs分析的瓶颈，建立了cysteine-linked ADCs的精确分子量测定方法，为cysteine-linked ADCs 单抗药物研发和生产检测提供了高效、快速的分析平台。实验结果表明Exactive Plus EMR质谱仪凭借其超高的分辨率、超快的扫描速度、超高的质量精度、超高的灵敏度以及拓展的质量范围，极大地完善和推动了ADCs药物的鉴定分析。

"全自动核酸质谱分析系统基本原理是将预处理后的PCR扩增产物，通过仪器点样至带有基质的芯片上，使其与基质结合形成共结晶，采用基质辅助激发技术，使样品离子加速进入飞行管，将不同目标离子进行质量分离，离子质量越小，飞行速度越快，也就更早到达检测器，不同分子量的核酸分子因到达检测器的时间不同而得到检测，根据标准物质标定出不同质量数的特征谱图，经过软件的分析计算，实现对样品结果的目标判断。该系统整合了PCR技术的高灵敏度、芯片技术的高通量、质谱技术的高精确度，以及生物信息的智能化分析功能，为临床研究与应用提供了另一个技术平台。具有多重检测、低成本、高通量、检测周期短、灵活性高、准确度高、高度自动化等特点。适用于遗传病筛查、药物基因组学、病原体检测、肿瘤早筛等多个领域的基因检测。"

肽谱分析是表征生物治疗性蛋白质的一种常用分析技术。首先用一种或两种蛋白酶将蛋白质酶解成小分子肽。肽混合物通常采用反相色谱法分离，然后通过紫外或质谱检测器进行检测。质谱可以提供肽的质量数据，从而大大扩充肽谱分析的信息含量。由于增加了质量分离模式，可以轻松鉴定出共流出的多肽，同时也可以大幅缩短梯度时长。此外，串联质谱可以将肽碎裂为更小的片段，并为肽的氨基酸序列以及糖基化、磷酸化、氧化和脱酰氨基化等翻译后修饰(PTM) 提供证据。本应用简报介绍了如何使用新型表面多孔肽谱分析色谱柱配合 Agilent 6550 iFunnel Q-TOF LC/MS 系统对一种 IgG (1) 治疗性单克隆抗体 (mAb) 进行肽谱分析。结合 MS/MS 分析，肽谱分析色谱柱独特的分离能力可以最大限度提高分离度和效率，可确保实现可靠灵敏的肽鉴定，而且只需 15 分钟的运行即可实现高序列覆盖。6550 iFunnel Q-TOF LC/MS 系统可为肽鉴定提供出色的质量准确度和灵敏度，而 MS/MS 功能则有助于更可靠地确定被修饰肽的鉴定结果。此外，本文还探讨了通过 IgG (1) 肽谱分析梯度和 LC/MS/MS 参数的优化，实现稳定、快速、可靠的 mAb 肽谱分析。

样品中C12、C13 短链氯化石蜡组分，该样品用EI 扫描时干扰非常大，使用NCI 扫描时干扰小，可以有效进行判别，表明TRACE 1310 ISQ-NCI 能很好的去除干扰，准确的对SCCP 进行定量和定性。上述分析结果表明，TRACE1310-ISQ NCI 气相色谱质谱联用仪有非常高的灵敏度，同时仪器重现性好，稳定性佳，能够非常好的SCCP 定量定性的分析。

针对多种农药建立一种快速、灵敏的定量方法是每一个农残分析实验室的主要目标。采用上文建立的农残测试方法，可在 28 分钟内对 200 余 种农药化合物完成筛查和定量分析。QuEChERS前处理方法具备高回收率和良好的重复性。配有 TRACEGuard 的 TR-5MS 色谱柱可有效分离所有目标化合物。三重四极杆质谱仪 TSQ 8000 GC-MS/MS 与 TraceFinderTM 软件联合使用，有效节省数据处理时间，从而实现了高通量检测。在待测样本进行前处理的短暂时间内即可完成方法线性、专属性、回收率和重复性测试。TSQ 8000 系统具备超高灵敏度，即使是对经过 QuEChERS 快速处理的复杂样品基质仍能实现高灵敏检测和可信定量。本方法可应用于如混合植物药等复杂基质样本中痕量农药残留的检测和确证。最低检测限可低至 2.5 ng/g。依据现行的指导规范，本次测试的农残浓度（0.0023 和 0.0027 mg/kg）已低于尤纳尼测试指南所规定限值。

样品中C12、C13 短链氯化石蜡组分，该样品用EI 扫描时干扰非常大，使用NCI 扫描时干扰小，可以有效进行判别，表明TRACE 1310 ISQ-NCI 能很好的去除干扰，准确的对SCCP 进行定量和定性。上述分析结果表明，TRACE1310-ISQ NCI 气相色谱质谱联用仪有非常高的灵敏度，同时仪器重现性好，稳定性佳，能够非常好的SCCP 定量定性的分析。

强制降解实验能揭示各种环境因素对原料药和制剂的影响。它能提供药品安全信息、确定推荐储存条件、保质期和分析方法的特异性。而降解产物的信息能帮助改进化合物或配方的发展。霉酚酸酯（MMF）的商标名称为骁悉（CellCept），是一种免疫抑制剂和霉酚酸（MPA）的前体药物。MMF 广泛的应用在治疗器官移植排异反应和自体免疫疾病的移植药物中。本研究选择 MMF 作为模型化合物。本文开发了一种快速可靠的分析霉酚酸酯降解产物的完整工作流程，使用的仪器是赛默飞世尔科技的 AccelaTM UHPLC 系统和台式 Orbitrap Q Exactive FocusTM 质谱仪，数据处理采用 Mass FrontierTM 软件。霉酚酸酯在热和过氧化物催化下的降解研究的 pH 值设定为 2.0、3.5、6.0 和 8.2。采用 HRAM 全扫描和数据依赖 MS/MS 在高分辨率和极性切换模式下实现降解产物的快速鉴定。HRAM MS 和 MS/MS 谱图以及正 / 负离子模式切换，能可靠完成降解产物的定性和结构鉴定。

反相色谱(RP) 肽图分析是生物治疗药物分析中最主要的技术，可为生物制药产品提供全面的表征。当与质谱仪(MS) 联用时，能实现对蛋白质及其变异体的鉴定，确定翻译后修饰(PTM) 及其位点，并确认蛋白质序列。然而，由于蛋白质裂解物固有的复杂性，使得利用色谱进行肽图分析非常具有挑战性。因此，许多组织都致力于开发稳定、可靠的肽图分析方法。通常而言，肽图分析受到灵敏度低、峰形差及需要较长分离时间来达到所需分离度的影响。近年来，人们应用超高效液相色谱(UHPLC) 以克服这些挑战，与常规HPLC 相比，UHPLC 经证实具有超高分离度、更高的灵敏度，且可大大缩短分析时间。UHPLC 技术可更详尽地表征蛋白生物治疗药物，其通过加快流速、缩小粒径及缩短柱长，可在更短的分析时间内实现更高的分离性能。但是，这种类型的分离对压力要求越来越高，不能在常规的400 和600 bar 高效液相色谱仪上进行操作，严重地限制了其应用范围。为了解除这种限制，安捷伦引入一种2.7 μ m AdvanceBio 肽图分析色谱柱以弥补生物治疗药物表征中的关键缺陷，可在常规液相色谱系统压力下，实现快速而高效的肽图分析。采用表面多孔色谱填料，AdvanceBio 肽图分析色谱柱可在很短的分析时间和低系统压力下大大改善肽图分析，同时保持很高的峰性能和分析效率。本研究采用AdvanceBio 肽图分析色谱柱，在较短的分析时间内对一种单克隆抗体(mAb) 胰蛋白酶消化物进行LC/MS 肽图分析。此外还将AdvanceBio 色谱柱及方法与一种亚2 μ m 非安捷伦UHPLC 肽图分析色谱柱进行性能比较。