可比司他

可比性研究|使用HR-MAM方法对原研药与其生物类似药进行可比性研究关注我们，更多干货和惊喜好礼可比性研究生物类似药通常指与参考分子（原研药）高度类似的治疗性生物产品1。世界各地的监管机构，如美国食品药品监督管理局(United States Food and Drug Administration, USFDA), 欧洲药品管理局（European Medicines Agency, EMA）和中国市场监督管理总局（National Medical Products Administration, NMPA）均发布了指导规则，要求证实生物类似药与原研药之间在药品安全性/功效性等方面的相似度1。 随着高分辨质谱（HRAM MS）逐步成为创新药和生物类似药表征必不可少的分析工具，在氨基酸序列确认和化学/翻译后修饰等鉴定中，均起到不可或缺的作用2。2015年，Rogers 等2在公开发表的文献中提及可将基于肽图分析的Multi-Attribute Method (MAM) 工作流程用于多重PQA的监控与定量，与此同时还可进行新组分检测（new peak detection）2，进而提供更多产品质量相关信息，并提高生产率。由此，MAM在质量控制（QC）实验室中替代传统分析手段的潜力，引起越来越多生物制药行业和监管机构越来越多的关注2 3。2019年，US FDA的Rogstad等在发表的文献中提及可以考虑使用MAM替代一些常规的QC分析方法4。图1 赛默飞HR-MAM工作流程（点击查看大图）本期我们介绍赛默飞HR-MAM (图 1)工作流程的zui新进展：对未经处理/不同强制降解条件下的生物类似药与利妥昔原研药进行可比性研究，对多个选定PQA进行有效的鉴定、相对定量和监控，以减少分析实验所花费的时间，并提高生产率。 多PQA选定助力原研药与生物类似药结构相似性确证： PQA通常在药物安全性与有效性方面起到重要作用，基于肽图分析表征可以选择适合的PQA，如：糖基化（glycosylation），脱酰胺化（deamidation），琥珀酰亚胺化（succinimide formation），异构化（isomerization），氧化（oxidation），重链C-末端赖氨酸截断（C-terminal lysine truncation），N-末端焦谷氨酸环化（N-terminal pyroglutamate）。 所有被选中的PQA可在BioPharma Finder软件中创建为一个包含该PQA肽段保留时间/质荷比/价态/所有电荷态等信息的工作簿，随后此工作簿被导入至变色龙软件中，用于后续的MAM数据分析。使用HR-MAM工作流程，即使是含量约0.1%的组分，也可通过高分辨质谱平台提供的数据获得高重现性的定性与定量结果。在本文的研究中，选定了下列PQA来证实HR-MAM工作流程用于目标肽段定量的能力，进而评估利妥昔原研药与生物类似药之间的结构相似性：重链 N55 脱酰胺化和琥珀酰亚胺化 重链 N388和N393 脱酰胺化 重链 N388和N394 琥珀酰亚胺化 重链 M256 氧化 重链 D284 异构化 重链N-糖基化 重链C-末端赖氨酸截断和轻/重链N-末端焦谷氨酸环化。 PQA相对定量兼具稳健性与重现性，MAM展现独特潜力： 由于C-末端赖氨酸截断与N-末端焦谷氨酸环化等末端修饰会影响单克隆抗体产品的电荷异质性5，所以在结构可比性研究中需要对其进行评估。以本文中涉及的PQA为例，利妥昔原研药和两个不同批次的生物类似药，其重链C-末端赖氨酸截断与轻/重链N-末端焦谷氨酸环化的比率均在可比范围内（图2）。值得注意的是，所有定量结果三针技术重复的变异系数（coefficients of variation, CVs）均小于2%，显示了优异的重现性。图2. 利妥昔原研药/生物类似药在未经强制降解/强制降解条件下常见末端修饰相对定量结果。图中每个条柱均代表三针技术重复的平均值，误差线代表三针技术重复的标准偏差（下同）。（点击查看大图） N-糖基化可能会影响单克隆抗体产品的免疫原性、药效、抗体依赖的细胞介导细胞毒性（antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity, ADCC）、补体依赖的细胞毒性（complement-dependent cytotoxicity, CDC）、血清清除率和药代动力学5。在生物类似药的开发和生产过程中，为了确保产品的安全性和有效性，N-糖基化必须被密切监控并严格控制。对于生物类似药开发厂商而言，生物类似药的糖基化异质性分布必须与其原研药具有可比性，以避免扩大临床试验的规模。 在本方案涉及的实验所用的原研药和生物类似药样品中，总共鉴定到15种不同糖型，这些糖型的相对含量在不同样品之间并没有明显区别（图3）。与传统N-糖链定量方法相比，未发生糖基化修饰的肽段相对含量也可在HR-MAM工作流程中同时被监控，这是传统方法无法做到的，展现了其独到价值。对所有糖型的相对定量结果同样显示了优异的重现性和灵敏度。例如，对于相对含量约0.3%的糖型A2S1G0F ，其技术重复之间的CVzui新应用方案，码上下载想要深入了解详细实验结果、参数设置、MAM优势，立即下载zui新Application Note相关阅读• 客户案例｜辉瑞在多个实验室同时部署MAM• HR Multi-Attribute Method Workflow 化繁为简,有规可循|为生物制药表征和质量控制保驾护航 参考文献：[1] US Food and Drug Administration, Center for Drug Evaluation and Research (CDER), Center for Biologics Evaluation and Research (CBER). Scientific Considerations in Demonstrating Biosimilarity to a Reference Product. Guidance for Industry. April 2015. [2] Liu, H., et al. A high-resolution accurate mass multi-attribute method for critical quality attribute monitoring and new peak detection. APPLICATION NOTE 72916. [3] Rogstad, S., et al. Multi-Attribute Method for Quality Control of Therapeutic Proteins. Anal. Chem. 2019, 91, 14170−14177.[4] US Food and Drug Administration, Center for Drug Evaluation and Research (CDER), Center for Biologics Evaluation and Research (CBER). Scientific Considerations in Demonstrating Biosimilarity to a Reference Product. Guidance for Industry. April 2015. [5] Beck, A., et.al. Characterization of Therapeutic Antibodies and Related Products. Anal. Chem. 2013, 85,715−736. 如需合作转载本文，请文末留言。扫描下方二维码即可获取赛默飞全行业解决方案，或关注“赛默飞色谱与质谱中国”公众号，了解更多资讯+了解更多的产品及应用资讯，可至赛默飞色谱与质谱展台。https://www.instrument.com.cn/netshow/sh100244/

仪器信息网讯 岛津新品三重四极杆液质联用仪LCMS-8030专家推介会在上海、广州、北京三地分别举行(岛津首次推出三重四极LCMS 定位中端市场)。2010年11月8日，LCMS-8030北京专家推介会在岛津北京办事处所在地——中国人寿大厦举行。推介会结束后，仪器信息网(以下称“Instrument”)就LCMS-8030的技术特点、应用领域、市场定位等情况独家采访了岛津LCMS产品全球市场经理、资深质谱产品专家平野一郎先生(Mr. Ichiro Hirano)。 　　推介会现场 　　岛津LCMS产品全球市场经理、资深质谱产品专家平野一郎先生 　　岛津三重四极杆液质联用仪LCMS-8030 　　Instrument：质谱仪的测定速度已成为限制三重四极杆液质联用仪技术发展的瓶颈，请问贵公司在LCMS-8030质谱部分进行了哪些独特设计，使其能与前置的UHPLC相得益彰? 　　平野一郎先生：目前，液质联用仪中的液相色谱部分已逐渐从HPLC(高效液相色谱)发展到UHPLC(超高效液相色谱)，由于UHPLC的出峰速度很快，所以液质联用仪质谱部分的分析速度必须很快，否则无法让UHPLC快速分析的优势发挥出来。 　　针对这一问题，岛津公司在LCMS-8030三重四极杆的Q2碰撞室部分中采用了UFsweeper® 碰撞室技术(专利申请中)，快速去除产物离子。除此之外，在进行MRM检测时，我们还采用了岛津独有RF电压切换技术，缩短测定通道之间电压设定所需的延迟时间，实现500通道/秒的超高速MRM测定。LCMS-8030采用最快15000u/sec 的UFscanning超快速扫描和15msec的UFswitching超快速正负极性切换的专利技术，使LCMS-8030在不牺牲信号强度的情况下真正实现高通量分析。 　　Instrument：能否详细谈谈岛津独有的UFsweeper® 技术?该技术使得LCMS-8030具备了哪些独特性能? 　　平野一郎先生：UFsweeper® 技术的原理是采用赝势(pseudo potential)加速技术，使碰撞室里的产物离子再加速。一般而言，进入碰撞室的离子在碰撞室会因为与反应气碰撞而失速，在MRM测定时容易产生串扰。赝势电位的形成与碰撞室的设计有关，简单来说，LCMS-8030碰撞室的入口内切圆比出口内切圆小，而赝势的大小是与内切圆面积成反比的，这样碰撞室入口处的赝势比出口处的赝势高，这就形成了赝势电位差。利用这个电势差，UFsweeper® 实现了给离子加速。 　　给碰撞室里失速的离子加速，这是UFsweeper® 技术的最主要功能。同时，该技术将碰撞室所需长度减至最小限度，实现高效碰撞诱导解离和离子快速输送。UFsweeper® 技术使进入碰撞室的离子被连续快速地去除，即使在快速测定中也可以防止信号强度下降或发生串扰。 　　Instrument：贵公司在提高LCMS-8030扫描速度的同时是如何保证仪器检测的准确度的? 　　平野一郎先生：质谱检测准确度主要依赖于两个因素，一是四极杆的加工精度，二是四极杆供电装置性能。岛津开发四极杆质谱仪器已30多年，在长期的实践中累积了丰富的四极杆制作经验，我们有信心能提供制作精良的四极杆装置。至于四极杆的供电装置，岛津公司在LCMS-8030中采用了快速RF电压供电装置， RF电压切换后离子强度迅速稳定化，能够在快速切换同时能够保证仪器的准确度和精度。此外，对于四极杆RF增益电压和偏置电压分别独立控制，根据扫描速度和扫描质量数范围，自动设置适用于四极杆的RF电压，这也是岛津公司的一项专利技术。 　　Instrument：请问与其它公司同类产品相比，LCMS-8030的核心竞争优势是什么?将重点应用于哪些领域? 　　平野一郎先生：LCMS-8030的最大竞争优势是——速度快，这主要体现在以下几个方面：一是扫描速度快，最高扫描速度可达1,5000u/sec；二是正负极性切换速度快，岛津采用UFswitching超快速正负极性切换技术，实现了15msec的正负极性切换。另外，超快速RF电压供电装置，离子强度稳定时间不超过1msec，大幅缩短延迟时间。 　　三重四极杆液质联用仪是比较通用的仪器，在许多研究领域均能使用，但是更多应用在食品安全、环境监测、药物分析等领域。对于那些既想做定量检测又想做定性检测的用户而言，这款仪器是不错的选择。LCMS-8030于2010年9月1日在日本分析展上面向全球发布，至今已有日本、美国的用户订购了该仪器。 　　Instrument：原来用单四极杆测定的样品现在用三重四极杆液质联用仪也能测定，那么单四极杆液质联用仪的市场是否会受到冲击而逐渐萎缩?请谈谈您对此问题的看法。 　　平野一郎先生：单四极杆液质联用仪已越来越多的作为液相色谱的一种检测器来使用。但是，三重四极杆液质联用仪具有更高的灵敏度，并且可以获得更为丰富的化合物结构信息。所以随着三重四极杆液质联用仪的逐渐普及，单四极杆液质联用仪的市场可能会受到一定冲击。 　　但是，用户的需求是多样的，其最终决定购买哪种仪器也与其购买仪器的预算有关。目前，三重四极杆液质联用仪的价格比单四极杆液质联用仪的价格高出一倍以上。对于样品基质不太复杂，灵敏度要求不太高的情况下，单四极杆液质联用仪也可以满足用户的检测要求。但是如果用户资金充裕的话，可能会更倾向于购买三重四极杆液质联用仪。 　　Instrument：请谈谈贵公司质谱产品线的发展规划? 　　平野一郎先生：岛津公司这次推出的LCMS-8030在扫描速度上已经做得很好，未来我们不仅要提高仪器的检测速度，更要提高检测灵敏度。速度更快，灵敏度更高，这是我们未来产品的研发方向。 　　岛津公司现已经掌握了四极杆质谱、离子阱质谱、飞行时间质谱以及这次介绍UFsweeper® 碰撞室等技术，在未来我们可能会利用现有技术，开发出目前岛津公司还没有的仪器。 　　平野一郎先生(右二)接受仪器信息网采访 　　附录1：岛津国际贸易(上海)有限公司 　　http://www.shimadzu.com.cn/ 　　http://www.instrument.com.cn/netshow/SH100277/ 　　附录2：岛津资深质谱产品专家平野一郎先生(Mr. Ichiro Hirano)简介 　　Mr. Ichiro Hirano(平野一郎先生)，1994年毕业于日本广岛大学理学院，同年加入岛津公司，担任质谱产品经理负责岛津质谱产品市场开发及推广 自2004年起，担任LCMS产品全球市场经理 作为岛津资深质谱产品专家，平野一郎先生先后参与了LCMS-IT-TOF、LCMS-2020、LCMS-8030的研发工作，对于LCMS-IT-TOF、LCMS、LCMS/MS的硬件、软件及应用具有较深的造诣。

购买 RCT 主机，送附件一套，以下附件任选其一：A) H 16 V / H 38 / H 44 支杆和夹头,价值 610 元；B) LABLIFT 实验室手动升降台, 价值 1996 元。 凡订购合成套装配件的用户，除了赠送以上任选附件(A 或 B)，再送 500 元现金券, 此券可直接用于抵扣任何超过 2000 元(折后净价)总额的订单。凭合同或发票领取。RCT 合成套装 1RCT 合成套装 2- RCT 基本型- RCT 基本型- H 16 V 支杆- H 16 V 支杆- H 38 固定支杆- H 38 固定支杆- H 44 夹头- H 44 夹头- H135.10 方形加热托盘- H 135.30 500 ml 烧瓶加热套- H 135.101 加热块 16 x 4 ml- H 135.302 Flask inlay 250 ml 烧瓶加热套内衬- H 135.104 加热块 4 x 20 ml- H 135.105 加热块 4 x 30 ml- H 135.106 加热块 4 x 40 ml市场价：RMB 9627市场价：RMB 8404 本促销不与 IKA 其它活动同享。 活动时间: 2014 年 3 月 15 日 - 2014 年 6 月 30 日。IKA? 中国公司具有本活动最终解释权，并有权根据实际情况对本活动作出修订。 关于 IKA( www.ika.cn )IKA 集团是实验室前处理, 量热分析, 混合分散工业技术的市场领导者. 磁力搅拌器, 顶置式搅拌器, 分散均质机, 混匀器, 恒温摇床, 研磨机, 旋转蒸发仪, 加热板,恒温循环器,量热仪, 实验室反应釜等相关产品构成了IKA实验室分析的产品线, 而工业技术主要包括用于规模生产的混合设备, 分散乳化设备, 捏合设备, 以及从中试到扩大生产的整套解决方案. 集团总部位于德国南部的Staufen, 在美国,中国, 印度, 马来西亚, 日本, 巴西等国家都设有子公司.IKA成立于1910年，IKA集团现在可以自豪地回顾过去100年的历史。