色谱填装系统

液相色谱柱是如何填装的

液相色谱柱是如何填装的？

请各位大虾帮忙说一下液相色谱柱的填装的最佳方法！

废水中甲醇分析 ，甲醇含量小于100mg/L自填装：1/8英寸1.8米10%PEG20M填充柱，1克PEG20M（上海安普购Carbowax 20M，外贴的试剂标签覆盖原有标签？）溶于四氯化碳中，加入9克101酸洗硅烷化白色担体60-80目（天津博瑞健和色谱技术有限公司，白色担体中有5%左右黑色杂质？）搅拌蒸干后装柱（空气中？水浴加热温度有些高85度左右？），N2载气200度老化8小时，水峰、甲醇峰分离不开？降柱温也分离不开？是固定液浓度不够，准备试验填装30%PEG20M固定液。 原机自带没有问题：1/8英寸1.8米10%PEG20M填充柱（目数不详），FID检测器分析废水中甲醇，柱温90度；汽化室150度；检测器250度，N2载气20ml/分，干扰峰（水峰）1.7分钟（峰形差）；甲醇峰：2.75分钟（峰形好）

论坛里有没有懂热解析管填装的大神，求指导，想自己填一些管子

6890+5975 的GC/MS不分流进样，如何填装玻璃棉

大家好！最近买了几根岛津[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp][color=#3333ff]气相[/color][/url]GC-2010的衬管，买来发现是直通的，里面没有填装石英棉，我想请问下这个石英棉自己填装可行吗？填装的时候有什么注意点吗？谢谢大家。

TD热脱附的冷肼能否自己填装？价格太贵伤不起

大家好，我是一名即将毕业的本科生，在校期间负责实验室仪器（HPLC、质谱及其他）的日常维护，期间负责奥秘科技集团HPLC柱的填装工作，并实现商品化。注：奥秘科技集团包括奥秘（上海）科技有限公司、奥秘（天津）科技有限公司、奥秘（山东）科技有限公司。（本人导师为奥秘科技集团的创始人）。2010年7月即将毕业，想找个HPLC柱填装、HPLC使用维护方面的工作，不知道有需要这方面人的没？如有兴趣可以联系我，联系方式：northeast005@gmai.com

请问GPC净化使用的溶剂必须和填装柱子用的溶剂一样吗？

如题，请教一下我们单位买了镍催化剂但是没人填装过镍粉，哪位大师给指点一下啊，仪器是安捷伦的7890A。

有谁知道，为了填装一个高柱效的动态轴向压缩柱，这个装柱的压力和填料的粒径、柱管的内径有着怎样的关系，如果可以列举的话更好

海德利森色谱装柱流程以填装5um 硅胶 4.6×250 分析柱为例 1 连接装柱所需空压机和海德利森色谱装柱机 确保装柱机工作时机身稳固2 称取填料3.0-3.5g （4.6×250 分析柱标准需要2.8g，经验3.2g比较合适）3 用40-50ml异丙醇（或异丙醇与乙腈比例1：1）溶解填料 用玻璃棒搅拌均匀 后用超声波超3分钟 以确保其分散性4 迅速将上述混合液倒入匀浆罐（尽量短时间内完成该工序并确保匀浆罐内无气泡） 如匀浆罐不满再用异丙醇（或异丙醇与乙腈比例1：1）补满 理想情况是不需要再补充异丙醇（或异丙醇与乙腈比例1：1）熟练后可知需要多少原料 所需原料的梁与温度、填料溶解性有关5 迅速将匀浆罐和柱子连接到泵上 以60MPA的压力 以甲醇（化学纯）做流动相开启装柱机 保持装柱机在60MPA压力下工作20分钟6 减压至30MPA 运行5-10分钟 缓慢降压至系统无压力 静止3分钟7 卸下柱子 看柱头部分是否平整 如不平整用美工刀铲平（很需要技术的步骤）8 将柱子接入高效液相色谱仪 用甲醇（色谱级）以1.0流速运行30分钟9 开始检验色谱柱效10 多次熟练此工作 以提高装柱质量备注：1异丙醇（或异丙醇与乙腈比例1：1）至少分析纯2甲醇 为控制成本可用化学纯 但事先需要经过0.2um 有机滤膜过滤3工作开始前开启装柱机用流动相甲醇冲洗管路 尽量确保管路中无气泡 北京海德利森科技有限公司. 陈海涛 工程师 13911876986 cht01310751@163.com

关于标示：1.色谱柱的流向不能改变在我们常规思维中，色谱柱上标示的流向是不可改变的，每次使用都要遵循。可是，大家有没有想过这个方向的作用是什么呢？为什么要标示一个使用方向呢？其实色谱柱前后端的填料及填装工艺都是一样的，标示方向的目的就是让我们在使用中记住流动相从哪个方向流入色谱柱，那么这个流入段就是最先污染端。这样就为我们日后维护或再生色谱柱做了准备，而我们需要遵循这个规定应该在色谱柱开始做样后。我曾将已经污染过的色谱柱反方向来使用，如果保留时间不是很长，而色谱柱足够长，还是能使用一段时间的。2.不去看说明书，直接就上机使用色谱柱内部保存着什么溶剂一定要看清楚，因此色谱柱的说明书一定要看清楚，当然也包括说明书上建议的维护保养规定，对我们都非常的有用。对于反相柱来说，溶剂基本就是乙腈或甲醇。但正相柱就不同了，因为正相柱除了可以适用正相系统，也可以适用反相系统，因此一定要看清楚，对于你的方法来说是否需要置换色谱柱内部保存溶剂。关于冲洗：3.用纯水冲洗色谱柱才能把缓冲液冲洗干净使用强溶剂冲洗色谱柱对内部填料的损伤是最大的，尤其是纯水，除非你的色谱柱是耐水的。冲洗色谱柱最好的方法是用流动相比例的水系和有机系来冲洗。如果你认为流动相比例无法把色谱柱冲洗干净或者此比例中有机系占有比例过大，你可以使用内含10%左右的纯水来冲洗。关于保存：4.保存在乙腈或甲醇中的新色谱柱可直接使用理论上液相色谱柱不同于气相色谱柱需要活化，但是由于液相色谱柱内部保存的有机系具有挥发性，因此在使用前还是应该用小流速的和色谱柱内部相同的溶剂冲洗一定的时间。可以是0.5ml/min，120min，但最好咨询厂家，根据色谱柱参数设定。5.色谱柱应该保存在纯乙腈或甲醇中根据第4条，色谱柱内部保存液具有挥发性，因此为了减少其挥发速度，可以添加5%-10%的水，这样的话可以在一定程度上减少一些有机系的挥发。如果再增加一个保险，我们可以在堵紧堵头后，再用封口膜封起来。同样道理，色谱柱一段时间不用后，也应该按照第4条，进行小流速的冲洗色谱柱。关于再生：6.色谱柱污染后把筛板卸下来超声清洗对于色谱柱的污染，首当其冲的就是筛板，因此我们最常用的做法就是把柱头卸下来，把筛板拿去超声清洗。但是我们在拆卸过程中对色谱柱前端填料的损害远远大于污染照成的伤害，因为我们不是专业的。因此建议这一步能不做就不做。7.自己填装色谱柱和第6条相同，这一步做法几乎可以把此色谱柱判死刑了，我们的填装工具有什么呢？就是手工的，其填装压力远远小于工厂内原始的填装压力。那么我们填装的结果会是个什么样也就很明显了。在我看来，自己填装也就是练练手，熟悉一下这个过程，要把色谱柱维修好的可能性几乎为零。8.用异丙醇冲洗再生后，柱子效果更差了这种情况我自己就遇到过，还好那根柱子本来就打算报废了，因此也没有照成多少损失。但是这是什么原因呢？其实很简单，就是在我反向冲洗前没有把管路中的污染物冲洗干净就直接接了柱子。所以说，方法是没有错的，色谱柱受污染时，我们应该先想到仪器也污染了！

近几年，液相色谱仪器在硬件方面最大了突破就是推出了UHPLC或UPLC系统;但在色谱柱填料及形式方面也还是有一些新的技术，我收集了相关资料，简单回顾一下此方面相关的新技术。　　一、色谱柱填料新技术　　1、亚2微米填料　　首当其冲就是很热门的亚2微米填料。根据色谱速率理论，粒径越小，柱效越高，而且当粒径小到亚2微米左右时，线速度的提高，其分离度就不再降低，而亚2微米填料的优势也正在与此。这个理论很早就有，但是为什么UPLC或UHPLC直到2004年才出现呢?原因主要是粒径减小，柱压的急剧升高，因此亚2微米填料对系统的耐压性能要求很高，长久以来，材料及工艺不能满足亚2微米填料对系统的要求。　　随着材料及技术的进步，2004年沃特世推出了首款商品化地UPLC系统及配套的亚2微米填料的色谱柱。如今已有沃特世、安捷伦、赛默飞（戴安）、岛津、日立、珀金埃尔默等10余家公司推出UHPLC系统;国内上海伍丰也推出了国内首台UHPLC系统。但在填料方面，相比于常规的液相色谱填料，能够生产亚2微米色谱柱的公司还不是很多，色谱柱的种类也偏少。但毫无疑问，UPLC或UHPLC、亚2微米填料是液相色谱发展的主流。沃特世公司首席科学官Thomas E.Wheat先生认为，“未来10-15年，UPLC有可能完全取代HPLC。”　　2、核壳型填料　　最近，多家公司推出了一种新型液相色谱填料——核壳型填料。这种填料的优势在于，其可以缩短分析时间，提高柱效，但是对系统压力的增加却不是很多。换句话说，可以部分实现亚2微米填料的优势，但是由于对系统耐压要求不高，其可以在常规的HPLC上运行，可视为UPLC/UHPLC好的替代品。　　核壳型填料就是在坚实的硅胶核心上生成一个均匀的多孔外壳。由于核心硅球是实心的，这样样品在通过色谱柱时，只需要花费少量的时间便能扩散出硅球表面的颗粒孔中，在较短时间完成扩散，更快地传质，因此分析速度及柱效都较原来普通的色谱柱有很大提高。目前，生产和供应核壳型填料的厂家有安捷伦、菲罗门、Sigma-Aldriich等。　　3、整体柱(monolithic column)　　整体住也是近年来液相色谱柱填料研究的又一大方向。整体柱,又称为棒状柱、连续床层、无术塞术，是一种用有机或无机聚合方法在色谱柱内进行原位聚合的连续床固定相。与常规装填的液相色谱柱相比具有更好的多孔性和渗透性，以及具有灌注色谱的特点，即色谱柱中既有流动相的流通孔又有便于溶质进行传质的中孔(几十个纳米)，目前多应用于对生物大分子进行快速分离分析，应用还具有一定的局限性。目前，商品化的整体柱产品也不是很多，主要还处于科研阶段。在售的整体柱比较有名的是默克公司的ChromolithTM。　　二、色谱柱新形式　　1、色谱饼　　色谱饼这一说法源自西北大学现代分离科学研究所、现代分离科学陕西省重点实验室耿信笃教授课题组，其与普通的色谱柱最大区别在于，其柱直径远远大于柱长，因而呈现饼的形状，故称为色谱饼。　　此种形式的改变带来的好处是，色谱柱的平衡时间、进样、洗脱及色谱柱的平衡时间都显著地缩短，从而实现了快速。当然使用色谱饼的前提是，分离度不能有很大的损失。目前，这一形式的色谱柱在分析蛋白方面有很好地效果。　　2、固定相优化液相色谱(Phase Optinized Liquid Chromatography POPLC)　　固定相优化色谱产品来自于德国BISCHOFF公司，上海通微是该产品在中国的代理。POPLC改变了我们原来创建分析方法的传统思路，不从改变流动相或更换色谱柱来改善分析效果的角度出发，而是从“优化固定相”的角度出发来摸索分析方法。据悉，目前商品化的固定相种类非常多，如何从中选出适合的固定相是头疼的问题。研发者希望通过固定相的组合能帮助方法开发人员更快更好地找到适合的固定相。　　德国BISCHOFF公司开发的POPLC系统由迷你柱管、填装不同填料的可替换短柱芯和分析软件三部分组成。在实验中，先选择几根装有不同填料的短柱芯作为一个实验组，通过单根柱子先做基础实验，然后用配套软件计算可能的柱连接方式(即将各种固定相串联)，再预测分离效果，最后做验证实验。实验表明，这种方式可以有效缩短分离时间，相应提高检测灵敏度。

因公司转型，现有全套装柱机低价出售，包含装柱机、空压机、通风橱、色谱柱内外包装盒。。。

11、关于色谱柱的填装问题!我个人认为现在色谱柱的填装一般有3种情况：1.国外生产填料并填装完成成品卖到国内;2.国外生产填料，国内填装销售;3.国内生产填料，国内填装销售。一般情况下，第1种情况卖的最贵，也质量最好!可是我就不明白了：如果是填料的生产很复杂的话，那么填装上国内也跟不上去吗?为什么换在国内填装就会出现或多或少的一些小问题呢?　　答：国内填装会出现质量小问题，和国内目前普遍做事没有国外严谨有关吧。如果工艺技术上没有问题，又能制订并切实执行一整套严格的生产质量管理措施，国内填装和国外填装并无区别。　　12、什么原因导致峰比原来大，而且出现的早?　　答：过快、过大的峰通常是由于从分流口和隔垫吹扫口排出的载气减少，而更多的进入色谱柱;因此增加柱头压力，可降低分流比。检查分流出品的气体流量，如需调整分流比则对调整此流量。如果问题依然存在，可卸下并清洁分流口。这个问题也可能由于柱头压调节阀有问题而引起。　　13、预柱或保护柱用还是不用的问题!原来分析中药品种时，我一直都是用保护柱。但来到新公司后，发现大家都没有使用，几个实验室连保护柱都没找到一个，也就是说大家从来都没有用过。后来问一个老员工，说是有可能影响药品分析。我就想问：安装保护柱后会影响样品分析吗?我们做的大多是头孢类的抗生素。　　答：应该这样说，加上保护柱，肯定有利于保护色谱柱不受一些颗粒物质的堵塞，肯定有害于分离度和柱效，因为保护柱中间有着死体积的存在，但是如果保护柱接得好，并且尽量控制其匹配性和经常更换，分离度和柱效应该影响并不大。头孢类的抗生素也要看到底是原料药还是制剂喽，有些原料药，可以根据色谱柱的损耗选择添加预柱(中间是个筛板)，制剂的话，如果有辅料严重干扰或者流动相盐分比较大，那还是最好配个保护柱。　　14、用的是四元梯度泵A50%甲醇B50%水，经常出现停或进气泡这是什么原因?　　答：水/甲醇比例在55：45时，黏度和柱压有个极大值。50：50接近了这个极值，柱压是比较高的，但影响柱压最大的还是填料粒径和色谱柱内径，你这个实例中不知用的什么规格的色谱柱?系统压力高，可能会因溶剂泵中的过滤头供液速度跟不上而导致气泡进入系统，停机也应该是因为气泡进入压力下降的原因，可考虑更换液体通量更大的过滤头。　　15、何时需更换隔垫或衬管?　　答：通常比较好的隔垫至少能保证100次进样不发生问题。当色谱特征说明衬管有问题时，需要更换衬管。影响隔垫寿命的因素有注射器尺寸、进样口温度和压力，当然受压力影响的程度比较小。影响衬管寿命的因素通常是样品的清洁度。应该根据仪器维护历史记录来选择色谱需要的特定程序。　　16、想请您具体说明一下反冲色谱柱的方法，是不连检测器吗?　　答：反冲就是将柱子反向连到系统中。因为有污染物反冲出来，当然不连检测器，出液端直接接到废液瓶就可以。　　17、如果不使用不锈钢接头，而改用PEEK头，是否可以完全解决接头匹配问题?　　答：色谱柱接头其实大都不是色谱柱厂商自己生产的，供货商有多个，VICI，Upchurch，Parker等，他们的标准相互之间不统一，那色谱柱接头的标准就统一不起来。不过一般这个问题也不难解决的，换个接头就可以了，而且现在有了万用接头，可以配所有不同类型的柱头，不泄露，连接死体积又很小。　　18、有的厂商为避免堵塞，使用了较大孔径(2-5um)的前筛板，这种情况反冲会将填料冲出。厂商一般在使用说明书中会说明前后筛板的孔径吗?　　答：厂商如果前后筛板孔径不对称，肯定会在说明书里特别提到的。　　19、我在做多肽药物时遇到下列问题：1).基线不稳定波动大，流动相A：1%TFA水溶液，B:1%TFA乙腈溶液，检测波长210nm 流速1.0ml/ml，什么原因?怎么解决?TFA有什么作用?流动相中不加TFA见不到主峰，基线良好。2)做完肽类样品时怎么冲洗C18比较好;3)药典上介绍测定分子量大于2000的样品，选择柱子填料的孔径为30nm，30nm与10nm对结果有什么区别?　　答：应该是起“离子对”的作用吧。在做多肽类样品的时候，300A孔径的填料相对100A孔径肯定要选择性好点，也就是分离度相对比较好点。流动相加入TFA，在反相色谱分离多肽和蛋白质的实验中，使用三氟乙酸(TFA)作为离子对试剂是常见的手段。流动相中的三氟乙酸通过与疏水键合相和残留的极性表面以多种模式相互作用，来改善峰形、克服峰展宽和拖尾问题。三氟乙酸优于其他离子修饰剂的原因是它容易挥发，可以方便地从制备样品中除去。另一方面，三氟乙酸的紫外最大吸收峰低于200nm，对多肽在低波长处的检测干扰很小。　　20、waters Atlantis C18柱可以用较高比例的流动相，那麽用完后应该怎麽清洗?在什麽体系中保存比教合适?　　答：反相柱都可以用下面通用的方法清洗维护：流动相中不含缓冲盐分析完成后，用甲醇(或乙腈)：水=90：10反向冲洗色谱柱45min流动相中含有缓冲盐，分析完成后，先用甲醇(或乙腈)：水=10：90反向冲洗45min，然后再用甲醇(或乙腈)：水=90：10反向冲洗色谱柱45min;(注意：甲醇(或乙腈)：水=10：90容易长菌，使用时间不可超过3天);水性柱保存体系也不特别：短期保存在所用的流动相中(不含缓冲盐)，中长期保存在纯甲醇(乙腈)或80%的甲醇(乙腈)/水中。【来源：互联网】

1、 粒径一般认为，基质的颗粒形状和大小，主要影响流体动力学行为，影响分离效率。填料的粒径决定了填充液相色谱柱的柱效。从VanDeemter方程可知，在优化的流动相线速度下，最佳理论塔板高度为： H min=2.48 dp根据这一公式，可以计算出不同力度填料填装的柱子可获得的最大理论塔板数。例如，3um粒子可获得13.4万理论塔板/米，5um粒子可获得8万理论塔板/米。但是，小粒子填料容易造成柱压高、易堵塞、寿命较短。为保证一定的流动相线速度就得提高输液压力，虽然，大多数高效液相色谱仪的压力上限可允许达到42Mpa,但因长时间工作在高压状态下肯定会缩短输液泵及进样阀的使用寿命。为此，小粒径的柱子一般较短。2、 填料形状现在，10um以下的分析型柱多使用球形填料，而制备型的柱子则多选用无定形填料，因为无定形填料较为便宜且大粒度填料的粒间孔较大，所填装的柱子并不需太高的压力便能很好的运行。3、 孔径及孔径分布填料粒子的孔径及孔径分布，主要从三个方面影响反相色谱的色谱行为。首先，是孔径影响了粒子必表面积的大小，从而对配基的数量，即碳含量造成影响，它涉及到样品的负载量。其次，孔径的大小，从空间上必然对溶质的分子量大小有所限制。此外，孔的不均一性，及孔径分布，也会带来尺寸排阻效应。4、 比表面积 填料的多孔性，极大地增加其比表面积。对于无孔的小球，其比表面积是很小的。但是一旦具多孔性，则多孔微球的比表面积为球 外比表面积与孔内表面积之和。比表面积不同，其键合配基的量亦有所不同。所以，即使是以相同的反应条件制备的同样配基的反 相填料，也会有不同的保留行为。特定溶质的保留值随比表面积的增大而减少。 5、 基质硅胶的纯度硅胶基质上残存的硅羟基和杂质金属离子，共同造成了以硅胶为基质的反相填料的“次级保留行为”。较多的杂质金属离子，会使具有螯合作用的样品被吸附在柱子上。在生物医药体系的分离、分析中，经常会遇到强极性的溶质，他们在制造不良的反相色谱柱中，经常会因强烈的非特异性吸附而难以获得良好分离。究其原因，除孔径大小的因素外，最大的可能是硅胶表面的覆盖率低和基质含金属离子太多所致。

1对于一根常用的C18柱，拿到一根新柱的时候应该怎样进行活化及维护？为什么要这样做？　　答：新柱活化，实际上是一个平衡的过程，除了用流动相平衡外，有时候还必须用所测样品对新柱进行平衡，特别是测定分子量比较高的多肽，尤其重要。因为分子量高的物质分子，扩散速度慢，平衡所需时间也相应较长。具体平衡方式也很简单，多进几次样品，直到峰面积和保留时间稳定，再进行正式进样测定。　　如果要加快平衡时间，把前面用来平衡的进样样品浓度加大，或者不等洗脱完成，连续进样多针。用待测物对新柱平衡，目的是将硅胶基质填料表面具有非特异性吸附的位点的吸附能力饱和掉。2测定多肽，一般采用什么柱子？流动相是乙腈和水，还有微量的TFA。特别是像类似三肽的短肽，应该怎么选择柱子？　　答：分子量不高的多肽一般选用常规C18柱就能测定，也有用离子交换柱、水性C18柱和Hilic亲水作用柱的。3氨基柱在进酸性样品时，很伤柱子，如使用一段时间后，柱效降低，峰形改变，如何恢复？　　答：氨基柱测酸性样品，应该是用氨基柱的HILIC模式。酸的存在可能会使略带负电荷的氨基官能团质子化，导致使用一段时间后对于某些类的分析物保留性质有所改变或表现在柱效下降。建议：用5-10倍的柱体积的含0.5-1.0％NH3的乙腈-水(50:50)溶液冲洗该柱(冲洗后当然要再用不含碱的流动相洗去多余氨)，之后再进行分析这类酸性分析物时建议在流动相中略微添加少许氨如0.1％。4色谱柱的技术都有哪些？比如封尾等，这些技术在应用时都体现在哪里？　　答：色谱柱技术包括填料技术和装柱技术，填料技术自不待言，填料的好坏对色谱柱分离性能和选择性有决定性影响。装柱技术也没有想象中的这么简单，不同固定相、不同粒径、不同柱管内径和长度，装柱工艺都有所不同，要装出紧密、稳定、均一的柱床，更多是一门艺术，需要经验积累。　　国内和国外想比，我认为色谱柱的差距在于：国内公司以前都不会自己开发填料，一般买国外现成填料装柱，买到的填料质量控制权不在自己手里。另外因为装柱历史短，经验积累少，装柱工艺也没有完全达到国外水平。另外，对色谱柱性能很关键的基础材料-----裸硅胶，国产的还不过关，在纯度、粒径和孔径的均一性方面和国外产品相比，差距很大。5色谱柱技术的差距在哪里？　　答：液相色谱柱装填实际上是有一定技巧和程序，可能还有一些运气。一般使用高压匀浆方法装填。也就是能让填料在溶剂内均匀地悬浮。然后用瞬间高压压实，这实际上用到了不同比例的匀浆液体，和合适的压力。压力太大，颗粒破碎，压力太小，塔板数少。同时压力需要稳定，不然分布不均，拖尾严重。同时还有头上平整程度。套上套，就可以用了。6柱子在什么情况下可以清洗一下筛板呢？原来也讨论过这个问题，我也拆下来清洗过，但我看到柱前段的污染更甚，于是就用刀片刮了刮，然后把清洗好的筛板安装上去。问题解决了，但使用寿命会不会减少呢？　　答：柱头污染了，就取出污染的，再装一些填料。因为加入你刮了些填料，那么微观的塔板数就少了。假入你刮得不多，仅表面，可能就是一些脏物，所以，问题解决。但是今后还会有同样问题，再挂，那么不小心刮，影响柱效。建议还是装一个预柱。7如果柱子取下来放置一段时间，需要做什么保护吗？　　答：对一般的反相柱，也就是洗干净后放到纯甲醇(乙腈)或者是80%左右的甲醇(乙腈)水中，然后用堵头塞紧柱两头，以免保存溶剂挥发，应该不需要做特殊的保护。8流动相中加入适量的四氢呋喃可以改善峰形的机理是什么？　　答：《高效液相色谱方法及应用》于世林编著的上面说：甲醇为质子给予体、乙腈为质子接受体、四氢呋喃是偶极溶剂，应该除了极性影响，还有另外的影响因素，至于分离机理，还是比较复杂的，不能看成是个万能方法。9关于色谱柱的填装问题。我个人认为现在色谱柱的填装一般有3种情况：　　(1)国外生产填料并填装完成成品卖到国内；　　(2)国外生产填料，国内填装销售；　　(3)国内生产填料，国内填装销售。　　一般情况下，第1种情况卖的最贵，也质量最好！可是如果是填料的生产很复杂的话，那么填装上国内也跟不上去吗？为什么换在国内填装就会出现或多或少的一些小问题呢？　　答：国内填装会出现质量小问题，和国内目前普遍做事没有国外严谨有关吧。如果工艺技术上没有问题，又能制订并切实执行一整套严格的生产质量管理措施，国内填装和国外填装并无区别。10国产色谱柱在市场上占有比例如何啊？　　国内色谱柱市场还没有人进行过科学统计，连一年色谱柱销售总量也众说纷云，更别说国内生产色谱柱所占份额了。我估计是占30%左右吧。11预柱或保护柱用还是不用的问题！原来分析中药品种时，我一直都是用保护柱。但来到新公司后，发现大家都没有使用，几个实验室连保护柱都没找到一个，也就是说大家从来都没有用过。后来问一个老员工，说是有可能影响药品分析。想问：安装保护柱后会影响样品分析吗？我们做的大多是头孢类的抗生素。　　答：应该这样说，加上保护柱，肯定有利于保护色谱柱不受一些颗粒物质的堵塞，肯定有害于分离度和柱效，因为保护柱中间有着死体积的存在。但是如果保护柱接得好，并且尽量控制其匹配性和经常更换，分离度和柱效应该影响并不大。头孢类的抗生素也要看到底是原料药还是制剂喽，有些原料药，可以根据色谱柱的损耗选择添加预柱(中间是个筛板)，制剂的话，如果有辅料严重干扰或者流动相盐分比较大，那还是最好配个保护柱。12用的是四元梯度泵A50%甲醇B50%水经常出现停或进气泡这是什么原因？　　答：水/甲醇比例在55：45时，黏度和柱压有个极大值。50：50接近了这个极值，柱压是比较高的，但影响柱压最大的还是填料粒径和色谱柱内径，你这个实例中不知用的什么规格的色谱柱？系统压力高，可能会因溶剂泵中的过滤头供液速度跟不上而导致气泡进入系统，停机也应该是因为气泡进入压力下降的原因，可考虑更换液体通量更大的过滤头。13资料显示：在正常条件下，填料粒度＞20μm时，干法填充制备柱较为合适；颗粒＜20μm时，湿法填充较为理想。各种填充方法有什么区别？答：填充方法一般有4种　　①高压匀浆法，多用于分析柱和小规模制备柱的填充；　　②径向加压法，Waters专利；　　③轴向加压法，主要用于装填大直径柱；　　④干法。柱填充的技术性很强，大多数实验室使用已填充好的商品柱。为什么以20um为分界点？填料方法的前三种都是湿法吗，能不能对四种填充方法做一个简短的说明？14想请您具体说明一下反冲色谱柱的方法，是不连检测器吗？　　答：反冲就是将柱子反向连到系统中。因为有污染物反冲出来，当然不连检测器，出液端直接接到废液瓶就可以。15网上对柱子是否可以反冲一直有争论，那什么样的柱子可以反冲，什么不可以。反冲后是正者用，还是反着用。具体到各型号柱子不仅是ODS柱，其他如正向柱、氨基柱、离子交换柱等最好都有解释。　　答：一般的正相反相柱应该都能反冲，只有两端筛板孔径不对称的柱子不能反冲，不过目前这样的柱子已经比较少见了。反冲是为了把柱头的污染物冲洗掉，反冲后还是正着用比较好，以免柱子的两头都被污染。我们一直提倡的是：正向使用，反向冲洗。16在做方法开发的时候,用乙腈和水作为流动相,在调整梯度的时候发现，刚开始用60%乙腈，RT为2.5分钟，调到40%乙腈，RT没有变化，30%也没有变化,一直调到20%的时候，RT突然变到了约13分钟，请问这是什么原因？我用的是离子交换柱。　　答：离子交换柱的保留时间主要由洗脱液的离子强度和pH决定，你现在讲的比较简单，需要把你的方法说的详细一点才能做具体的分析。譬如分析物是什么情况，其含有极性电离基团和非极性基团是什么性质？离子交换柱是聚合物基质还是硅胶基质？水相是什么缓冲盐？转自公众号《化工信息网》

我想购买填装色谱柱用的硅胶在哪里能买得到请高人指教， 在哪里能买得到填装色谱柱用的硅胶， 粒度在50um左右的， 价钱是多少？谢谢了。

（为了方便大家阅读，现将月旭公司和仪器信息网液相色谱版联合举办的，第33期在线讲座------液相色谱柱使用疑难问题解析中，板友提问和plexu版主的回答汇总如下）1、网上对柱子是否可以反冲一直有争论，那什么样的柱子可以反冲，什么不可以。反冲后是正者用，还是反着用。具体到各型号柱子不仅是ODS柱，其他如正向柱、氨基柱、离子交换柱等最好都有解释。答：一般的正相反相柱应该都能反冲，只有两端筛板孔径不对称的柱子不能反冲，不过目前这样的柱子已经比较少见了。反冲是为了把柱头的污染物冲洗掉，反冲后还是正着用比较好，以免柱子的两头都被污染。我们一直提倡的是：正向使用，反向冲洗。2、我在做方法开发的时候,用乙腈和水作为流动相,在调整梯度的时候发现,刚开始用60%乙腈, RT为2.5分钟,调到40%乙腈,RT没有变化,30%也没有变化,一直调到20%的时候,RT突然变到了约13分钟,请问这是什么原因?我用的是离子交换柱. 答：离子交换柱的保留时间主要由洗脱液的离子强度和pH决定，你现在讲的比较简单，需要把你的方法说的详细一点才能做具体的分析。譬如分析物是什么情况，其含有极性电离基团和非极性基团是什么性质？离子交换柱是聚合物基质还是硅胶基质？水相是什么缓冲盐？3、对于一根常用的c18柱，拿到一根新柱的时候应该怎样进行活化及维护？为什么要这样做？答：新柱活化，实际上是一个平衡的过程，除了用流动相平衡外，有时候还必须用所测样品对新柱进行平衡，特别是测定分子量比较高的多肽，尤其重要。因为分子量高的物质分子，扩散速度慢，平衡所需时间也相应较长。具体平衡方式也很简单，多进几次样品，直到峰面积和保留时间稳定，再进行正式进样测定。如果要加快平衡时间，把前面用来平衡的进样样品浓度加大，或者不等洗脱完成，连续进样多针。用待测物对新柱平衡，目的是将硅胶基质填料表面具有非特异性吸附的位点的吸附能力饱和掉。4、测定多肽，一般采用什么柱子？流动相是乙腈和水，还有微量的TFA。特别是像类似三肽的短肽，应该怎么选择柱子？答：分子量不高的多肽一般选用常规C18柱就能测定，也有用离子交换柱、水性C18柱和Hilic亲水作用柱的。5、氨基柱在进酸性样品时，很伤柱子，如使用一段时间后，柱效降低，峰形改变，如何恢复？答：氨基柱测酸性样品，应该是用氨基柱的HILIC模式。酸的存在可能会使略带负电荷的氨基官能团质子化，导致使用一段时间后对于某些类的分析物保留性质有所改变或表现在柱效下降。建议：用5-10倍的柱体积的含0.5-1.0％NH3的乙腈-水(50:50)溶液冲洗该柱（冲洗后当然要再用不含碱的流动相洗去多余氨），之后再进行分析这类酸性分析物时建议在流动相中略微添加少许氨如0.1％。6、色谱柱的技术都有哪些？比如封尾等，这些技术在应用时都体现在哪里？答：色谱柱技术包括填料技术和装柱技术，填料技术自不待言，填料的好坏对色谱柱分离性能和选择性有决定性影响。装柱技术也没有想象中的这么简单，不同固定相、不同粒径、不同柱管内径和长度，装柱工艺都有所不同，要装出紧密、稳定、均一的柱床，更多是一门艺术，需要经验积累。国内和国外想比，我认为色谱柱的差距在于：国内公司以前都不会自己开发填料，一般买国外现成填料装柱，买到的填料质量控制权不在自己手里。另外因为装柱历史短，经验积累少，装柱工艺也没有完全达到国外水平。另外，对色谱柱性能很关键的基础材料-----裸硅胶，国产的还不过关，在纯度、粒径和孔径的均一性方面和国外产品相比，差距很大。7、色谱柱技术的差距在哪里？答：液相色谱柱装填实际上是有一定技巧和程序，可能还有一些运气。一般使用 高压匀浆方法装填。也就是能让填料在溶剂内均匀地悬浮。然后用瞬间高压压实，这实际上用到了不同比例的匀浆液体，和合适的压力。压力太大，颗粒破碎，压力太小，塔板数少。同时压力需要稳定，不然分布不均，拖尾严重。同时还有头上平整程度。套上套，就可以用了。8、柱子在什么情况下可以清洗一下筛板呢？原来也讨论过这个问题，我也拆下来清洗过，但我看到柱前段的污染更甚，于是就用刀片刮了刮，然后把清洗好的筛板安装上去。问题解决了，但使用寿命会不会减少呢？答：柱头污染了，就取出污染的，再装一些填料。因为加入你刮了些填料，那么微观的塔板数就少了。假入你刮得不多，仅表面，可能就是一些脏物，所以，问题解决。但是今后还会有同样问题，再挂，那么不小心刮，影响柱效。建议还是装一个预柱。9、如果柱子取下来放置一段时间，需要做什么保护吗？答：对一般的反相柱，也就是洗干净后放到纯甲醇（乙腈）或者是80%左右的甲醇（乙腈）水中，然后用堵头塞紧柱两头，以免保存溶剂挥发，应该不需要做特殊的保护。10、流动相中加入适量的四氢呋喃可以改善峰形的机理是什么？答：《高效液相色谱方法及应用》于世林编著的上面说：甲醇为质子给予体、乙腈为质子接受体、四氢呋喃是偶极溶剂，应该除了极性影响，还有另外的影响因素，至于分离机理，还是比较复杂的，不能看成是个万能方法。11、关于色谱柱的填装问题！我个人认为现在色谱柱的填装一般有3种情况：1.国外生产填料并填装完成成品卖到国内；2.国外生产填料，国内填装销售；3.国内生产填料，国内填装销售。一般情况下，第1种情况卖的最贵，也质量最好！可是我就不明白了：如果是填料的生产很复杂的话，那么填装上国内也跟不上去吗？为什么换在国内填装就会出现或多或少的一些小问题呢？答： 国内填装会出现质量小问题，和国内目前普遍做事没有国外严谨有关吧。如果工艺技术上没有问题，又能制订并切实执行一整套严格的生产质量管理措施，国内填装和国外填装并无区别。12、国产色谱柱在市场上占有比例如何啊？国内色谱柱市场还没有人进行过科学统计，连一年色谱柱销售总量也众说纷云，更别说国内生产色谱柱所占份额了。我估计是占30%左右吧。13、预柱或保护柱用还是不用的问题！原来分析中药品种时，我一直都是用保护柱。但来到新公司后，发现大家都没有使用，几个实验室连保护柱都没找到一个，也就是说大家从来都没有用过。后来问一个老员工，说是有可能影响药品分析。我就想问：安装保护柱后会影响样品分析吗？我们做的大多是头孢类的抗生素。答：应该这样说，加上保护柱，肯定有利于保护色谱柱不受一些颗粒物质的堵塞，肯定有害于分离度和柱效，因为保护柱中间有着死体积的存在但是如果保护柱接得好，并且尽量控制其匹配性和经常更换，分离度和柱效应该影响并不大。头孢类的抗生素也要看到底是原料药还是制剂喽，有些原料药，可以根据色谱柱的损耗选择添加预柱（中间是个筛板），制剂的话，如果有辅料严重干扰或者流动相盐分比较大，那还是最好配个保护柱。14、用的是四元梯度泵 A50%甲醇 B50% 水 经常出现停或进气泡这是什么原因？答：水/甲醇比例在55：45时，黏度和柱压有个极大值。50：50接近了这个极值，柱压是比较高的，但影响柱压最大的还是填料粒径和色谱柱内径，你这个实例中不知用的什么规格的色谱柱？系统压力高，可能会因溶剂泵中的过滤头供液速度跟不上而导致气泡进入系统，停机也应该是因为气泡进入压力下降的原因，可考虑更换液体通量更大的过滤头。15、资料显示：在正常条件下，填料粒度＞20µm时，干法填充制备柱较为合适；颗粒＜20µm时，湿法填充较为理想。填充方法一般有4种①高压匀浆法，多用于分析柱和小规模制备柱的填充；②径向加压法，Waters专利；③轴向加压法，主要用于装填大直径柱；④干法。柱填充的技术性很强，大多数实验室使用已填充好的商品柱。为什么以20um为分界点？填料方法的前三种都是湿法吗，能不能对四种填充方法做一个简短的说明？16、想请您具体说明一下反冲色谱柱的方法，是不连检测器吗？答：反冲就是将柱子反向连到系统中。因为有污染物反冲出来，当然不连检测器，出液端直接接到废液瓶就可以。

挑战你的思维之液相色谱柱的维护保养8‘小’误区大家使用的液相色谱柱最多的就是C18了，我在这里讨论的也就是这个类型的。由于使用液相很久了，听了大家的很多讨论，也咨询过很多厂家工程师，同时也听过一些讲座，于是把这个方面的知识总结了一下。也许你对这些知识很熟悉了，在平时就这么做的，但对于刚接触色谱柱的朋友也许有点小帮助。好了，进入正文。关于标示：1.色谱柱的流向不能改变在我们常规思维中，色谱柱上标示的流向是不可改变的，每次使用都要遵循。可是，大家有没有想过这个方向的作用是什么呢？为什么要标示一个使用方向呢？其实色谱柱前后端的填料及填装工艺都是一样的，标示方向的目的就是让我们在使用中记住流动相从哪个方向流入色谱柱，那么这个流入段就是最先污染端。这样就为我们日后维护或再生色谱柱做了准备，而我们需要遵循这个规定应该在色谱柱开始做样后。我曾将已经污染过的色谱柱反方向来使用，如果保留时间不是很长，而色谱柱足够长，还是能使用一段时间的。2.不去看说明书，直接就上机使用色谱柱内部保存着什么溶剂一定要看清楚，因此色谱柱的说明书一定要看清楚，当然也包括说明书上建议的维护保养规定，对我们都非常的有用。对于反相柱来说，溶剂基本就是乙腈或甲醇。但正相柱就不同了，因为正相柱除了可以适用正相系统，也可以适用反相系统，因此一定要看清楚，对于你的方法来说是否需要置换色谱柱内部保存溶剂。关于冲洗：3.用纯水冲洗色谱柱才能把缓冲液冲洗干净使用强溶剂冲洗色谱柱对内部填料的损伤是最大的，尤其是纯水，除非你的色谱柱是耐水的。冲洗色谱柱最好的方法是用流动相比例的水系和有机系来冲洗。如果你认为流动相比例无法把色谱柱冲洗干净或者此比例中有机系占有比例过大，你可以使用内含10%左右的纯水来冲洗。关于保存：4.保存在乙腈或甲醇中的新色谱柱可以直接使用理论上液相色谱柱不同于气相色谱柱需要活化，但是由于液相色谱柱内部保存的有机系具有挥发性，因此在使用前还是应该用小流速的和色谱柱内部相同的溶剂冲洗一定的时间。可以是0.5ml/min，120min，但最好咨询厂家，根据色谱柱参数设定。5.色谱柱应该保存在纯乙腈或甲醇中根据第4条，色谱柱内部保存液具有挥发性，因此为了减少其挥发速度，可以添加5%-10%的水，这样的话可以在一定程度上减少一些有机系的挥发。如果再增加一个保险，我们可以在堵紧堵头后，再用封口膜封起来。同样道理，色谱柱一段时间不用后，也应该按照第4条，进行小流速的冲洗色谱柱。关于再生：6.色谱柱污染后把筛板卸下来超声清洗对于色谱柱的污染，首当其冲的就是筛板，因此我们最常用的做法就是把柱头卸下来，把筛板拿去超声清洗。但是我们在拆卸过程中对色谱柱前端填料的损害远远大于污染照成的伤害，因为我们不是专业的。因此建议这一步能不做就不做。7.自己填装色谱柱和第6条相同，这一步做法几乎可以把此色谱柱判死刑了，我们的填装工具有什么呢？就是手工的，其填装压力远远小于工厂内原始的填装压力。那么我们填装的结果会是个什么样也就很明显了。在我看来，自己填装也就是练练手，熟悉一下这个过程，要把色谱柱维修好的可能性几乎为零。8.用异丙醇冲洗再生后，柱子效果更差了这种情况我自己就遇到过，还好那根柱子本来就打算报废了，因此也没有照成多少损失。但是这是什么原因呢？其实很简单，就是在我反向冲洗前没有把管路中的污染物冲洗干净就直接接了柱子。所以说，方法是没有错的，色谱柱受污染时，我们应该先想到仪器也污染了！感谢大家的支持，能力有限，就先总结这几条了，有什么意见我们回帖讨论！（全文完！）

朋友短信：我看了你那个X-3凝胶色谱填料的帖子，还是云丽雾里，我连说明书都没有。。求助几个问您有时间就回我下吧，第一个我填填料的时候是干的直接倒进去的然后乙酸乙酯正己烷1：1拿泵拉了个把小时，不用的时候柱子就干了，不知道这个填料是不是干了就没用了，还有我也是净化生物样品的，不知道能不能重复的用这个填料做不同的样，我们这边也是没GPC这个泵拉的流速大概7ml一分钟，文献说敌敌畏肉样提取收集35-70ml就可以了，但是我在35-70ml的时候还很明显的看见一层黄黄的油脂状的东西，因为是气质就没敢上样，但是把后面洗下来清澈的溶剂旋干上仪器后发现敌敌畏出峰了奇怪的是添加10ppb居然出了50ppb，不知道这个凝胶色谱是不是还会洗下来本身的杂质呢

2010版药典规定了头孢类药品的聚合物检测使用葡聚糖凝胶柱和、液相色谱仪，那么旧方法中的高分子杂质仪中使用自己填装的柱子就不适用了，于是葡聚糖凝胶柱就应需而生！那么，这个柱子你对其了解有多少呢？你认为工业填装和自己的手动填装会有什么区别吗？

编者按：色谱柱装填的工作是一件很辛苦，很累，而且赚钱不多的工作。装色谱柱的朋友的内心世界是丰富的。但是，很多时候，他们被局限于一个狭小的空间，如机器人地安装色谱柱。我们是否应该关心下他们的心情，真正了解下他们的生活？在创建和谐社会中，我们都需要关心和爱。正文：劳动节收到了信息网上的 站短，是一位很年轻的朋友写的。其内容如下：你好，看到你的文章就想到现在的自己，我现在也从事色谱柱的填装，C18对我来说小菜，我装过体积排阻，孔径有100A，150A，300A，500A，1000A,2000A等。粒径有1.8um，3um，5um等。各类正相色谱柱，包括:氨基，氰基，咪唑，硅胶，Diol等各类C18，C8，C4，还有手性色谱柱，各类制备柱，还有糖柱，离子柱柱等等，太多了。因为现在待遇不是很好，请问哪里可以找到待遇好点的色谱柱填装公司。 如果您看到的话联系下我可以吗？我的电话是******因为去年我写了篇关于装填色谱柱的文章，得到了一些朋友们的关注。实际上，我那篇文章没有谈论多少技术，而是主要讲了自己的感悟，从装色谱柱，明白了自己的理想和需求也回忆了当年的情景，也许写的有点煽情。所以有朋友给我些过些站短。但是这封站短，却表现了一位从事装柱朋友的心声。我随即给他打了电话，由于忙，他晚上给我电话。我们的通话开始了。通话的那头，是一位年轻的小伙子，88年的，大学毕业一年。他遇到了迷茫。因为，他发现，每天从事着同样的工作，这简直使得他感到了一丝惆怅。难道我每天就这么生活？我是否要废了？我读书的目的为了什么？……等等的疑问困扰着这个年轻的朋友。我听了之后，也感到了一丝丝的熟悉，我在他的年纪，是否有着同样的想法，是否也有着同样的困惑？是否需要一个人来给我指一条明路？他让我陷入了沉思。在短暂的沉思后，我发现，自己的一路走来，充满着机遇和挑战。而我慢慢地走过来了。正如在欢愉的生活中，发现了人生苦短，人生将会走向成熟的道理会使人觉悟。而我思维的火花，迸发出来了。1. 坚持下来，你就胜利坚持。坚持不是一般人能够达到的。《北爱》中的疯子，用着他的坚持，用着他炙热的爱爱着。而我们芸芸众生却往往发现一样东西更好而放弃了原来的坚持。而坚持的意义，使迷茫中的我们获得了无穷的力量。慢慢地好多人离开了，而留下的，却是见证着历史的发展。如果，能坚持，它是一种境界。他不是妥协，而是一种力量，精神，信仰。坚持下来，一定会胜利。这个道理大多数人都懂，但是实施起来，很难。正如 勿以善小而不为，勿以恶小而为之。善要为，恶不能为。而坚持着从小事做起，一步步的脚印，必定会给予回报。而这个回报，也许是几十年后才发现的。仿佛每年都存着一点点钱，到了几十年后，发现，那是一笔巨款。2.如果不喜欢，那么就找到你的所爱我们无法左右我们的命运。而我们有我们的喜好。我们有我们的双手。即使命运欺骗了我们，我们庆幸，还有大脑和双手。而时常，我们违心地去做自己不喜欢做的事情。这是这个时代造就的。我一直很反对 “丛林法规”，这个法规把人与人当成了动物性。人是具有独创性，人是拥有精神，人不是动物，人是社会性的。所以，“丛林法规”的问题在于，它简单地把竞争看成了一切生物的本性。而恰恰在这个个性解放的时代，人只有合作，才能够形成和谐。才能够可持续发展。所以，丛林法规 在一定程度上默许了官二代，富二代的现象，而严重抹杀了寒窗苦读的学子和生活在社会底层的劳动者。我要说，根本就没有丛林，这些丛林是那些记得利益集团为了巩固自己的“吃人”本质编造出来的。请允许我用“吃人”。因为，这是文学用法，而现实比“吃人”更残酷。读了鲁迅的小说，感受到了什么是吃人，什么是麻痹人神经的毒素。阿Q的精神胜利法，淡漠的看客，急功近利的商人，假洋鬼子们……我们看清楚了欺骗。而我们需要做我们自己。老庄子所说的：无为。无用。实际都是精神上的东西。缺少了精神的人，仿佛行尸走肉。所以，我么追求自己的爱，自己喜欢的东西，坚持，坚持。3.机遇偏爱有准备的人为什么我们会抱怨，有时候，我们的眼睛太远，也太近。没有合理地看到真实。或者我们太过于从众。而机会，在我们眼皮下溜走了。时间就这么匆匆。虽然，我也没有什么能耐。但是，我一直知道，机遇就在身边。即便自己现在一无所有，但是，我有着自己独立思考的大脑。工作了这么多年，也没有荒废学习。工作了这些年，懂得了需要付出，才能够得到。所谓：手捧玫瑰，手留余香，就是这个道理。而机遇在何处？真不能盲从。虽然，我现在说出的机遇，大家都嗤之以鼻，但是我坚信这个机遇适合我的，适合社会发展。广播，电视，电脑一遍遍地暗示我们什么是机遇，在哪里，也许少数人看懂了，但是他们是一群孤独者。孤独得让他们很可怜。但是，信念支撑着他们，所以，机遇，一直偏爱准备。没有准备就没有慧眼。而准备是一件孤独得事情，孤独得让我们失去很多。而想到量变质变的原理，我更庆幸，自己清楚明白的东西太少。所以，使我更加认真地去努力。而非坐井观天。历史的车轮毕竟要这么走的，任何螳臂挡车者，均无法幸免。我用这种理想化的语句和抑扬顿挫的讲话给了这位年轻的朋友一点点建议。如果他能够明白我的想法，那么也是一种超越。相信他的日子会更好！