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[b]提要[/b] 百草枯、敌草快均为速效触杀型灭生性季铵盐类除草剂,本文研究了不同SPE柱净化对百草枯回收率的区别,前处理参照SN/T 0293-2014 出口植物源性食品中百草枯、敌草快残留量的测定提取方法,主要对净化做了分析和比对, 不足之处请各位仪友指正奥。[img]http://simg.instrument.com.cn/bbs/images/default/emyc1009.gif[/img][b]正文[color=#ff0000]1.样品前处理[/color][/b]1.1提取准确称取5.00 g 样品,加入25 mL 甲醇-0.1mol/L 盐酸提取液(1:9,V:V),均质1 min 左右(转速10000r/min),打碎样品,使细胞破裂,农药残留析出,再超声15min,4000 r/min 离心5 min, 将上清液倒入新的50 mL离心管中,残渣继续加入25 mL上述提取液重复提取一次,离心,合并两次提取液,用水定容到50mL,摇晃混合均匀,离心,采用[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/9p][color=#3333ff][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/9p][color=#3333ff]移液枪[/color][/url][/color][/url]准确取出10mL上清液,用1mol/L NaOH调节pH至7,4000 r/min 离心10 min,将全部上清液倒入新离心管中,准备净化。1.2净化效果比较[b]1.2.1 WCX净化[/b] 实验中采用WCX(3CC)弱阳离子交换柱对土豆、韭菜、胡萝卜等蔬菜的提取液进行净化,上样前一次用3mL甲醇,3mL水进行活化。上样后,弃去流出液,控制流速在1 mL/min~2mL/min,使目标物充分结合在萃取柱的填料中。之后用1 mL水,1mL甲醇淋洗填料,用2 mL乙腈-水-甲酸(88:10:2,V/V/V)洗脱,收集洗脱液于15 mL塑料离心管中,控制流速在1mL/min~2 mL/min。N[sub]2[/sub]吹干后,采用1.0 mL乙腈-0.1%甲酸溶液(1:1,V/V)定容,蜗旋溶解后,过0.22μm滤膜,供液相色谱-质谱测定。结果见附图1[b]1.2.2 HLB,WCX净化比较[/b] 我们发现经过WCX净化,敌草快的回收只有10~20%左右,效果不好,因此我们又采用了HLB萃取柱进行净化比较,实验操作简单。同样称取2.00g样品于50mL离心管中,加入20mL甲醇-水-乙酸(22:77:1,V/V/V)超声提取10 min, 4000r/min 离心5min,将全部上清液转移到已经预活化的OasisHLB固相萃取柱中,用5mL氨水-甲醇(5:95,V/V)洗脱,洗脱液经氮气吹干后,用1mL0.1%甲酸:乙腈(20:80,V/V)定容,涡旋溶解,过0.22μm滤膜,供液相色谱-质谱测定。结果见附图2[b]1.2.3 C18、MCX、WCX净化比较[/b]经过检测,HLB固相萃取小柱同样对敌草快的吸附作用不高,经过查阅文献,我们同时采用C18、MCX、WCX对同一样品韭菜进行萃取净化,并收集各个阶段的流出液检测,进行结果比较。提取方法见1.1,三种柱子经甲醇和水预活化后上样,收集上样时的流出液,依次采用水,甲醇淋洗,并且收集每次的淋洗液,抽干后,C18、WCX净化柱采用2 mL乙腈-水-甲酸(88:10:2,V/V/V)洗脱,MCX净化柱采用5 mL含有1mol/L甲酸铵的乙腈:水(1:3,V/V)且PH=3.7的洗脱液进行洗脱,收集各个净化柱的洗脱液,直接过0.22μm滤膜,上机检测,结果见附图3[b]1.2.4 C18-MCX联用,MCX净化比较[/b] 经过分析比较,我们发现Oasis MCX净化柱的效果在上述几种净化柱中最好,有文献采用C18-MCX联用的方法,因此我们同时比较了C18-MCX联用,MCX的净化效果,观察C18-MCX联用能否提高回收率,两者均采用5mL含有1mol/L甲酸铵的乙腈:水(1:3,V/V)且PH=3.7的洗脱液进行洗脱,洗脱液过滤膜后上机检测,结果如附图4[b]1.2.5 MCX不同柱容量及WCX净化效果比较[/b]为了提高回收效果,我们对Oasis MCX净化柱进行了不同柱容量的比较,同时比较WCX的净化效果。实验中分别采用了MCX-3CC-60mg、MCX-6CC-150mg、WCX-3CC-60mg不同柱容量,不同柱子对韭菜样品进行净化,提取方法均参照上述1.1,MCX-3CC、MCX-6CC依旧采用5 mL含有1mol/L甲酸铵的乙腈:水(1:3,V/V)且PH=3.7的洗脱液进行洗脱,WCX-3CC采用2 mL乙腈-水-甲酸(88:10:2,V/V/V)洗脱,收集洗脱液过0.22μm滤膜,上机检测,结果见附图5[b]1.2.6 MCX对土豆、胡萝卜的净化[/b] 经过分析,得出Oasis MCX固相萃取小柱(3CC)对敌草快,百草枯吸附作用较好,具有良好的回收效果,为了验证这个结果,同时对土豆、胡萝卜样品进行了净化检测,结果见附图6[color=#ff0000][b]2.结果与分析[/b][/color]2.1WCX净化[img=,400,249]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/07/201707011850_01_3081717_3.png[/img] [img=,403,249]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/07/201707011851_01_3081717_3.png[/img] 附图1. WCX净化由表中数据我们可以看出,使用WCX弱阳离子交换柱来萃取净化,敌草快和百草枯的回收均不高,但这也不排除实验操作及样品基质的影响,为此,我们接着进行验证。2.22.2 HLB,WCX净化比较[img=,400,249]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/07/201707011853_01_3081717_3.png[/img] [img=,400,249]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/07/201707011853_02_3081717_3.png[/img] 附图2. HLB,WCX净化从数据表中,我们可以看出HLB、WCX净化柱对土豆样品中的敌草快和百草枯萃取作用不好,而且HLB柱子的效果比WCX固相萃取柱较差一些。通过分析比较已有的数据和实验操作步骤,个别基质的样品提取液调完PH后直接过柱萃取,流速十分缓慢,可能对结果有影响,应该过固相萃取柱前再离心一次。此外,洗脱液中的甲酸含量对结果也可能造成一定的影响,为了验证这些猜测,实验中又采取了新的离子交换柱进行净化,并且收集了各个阶段的流出液检测,之后又进行了不同酸度的洗脱液洗脱之后的检测,如下所示。[img=,400,221]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/07/201707011855_02_3081717_3.png[/img] [img=,400,249]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/07/201707011856_01_3081717_3.png[/img] 附图2-2. HLB,WCX净化2.3 C18、MCX、WCX净化比较[img=,400,249]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/07/201707011857_01_3081717_3.png[/img] [img=,400,249]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/07/201707011857_02_3081717_3.png[/img] 附图3. C18、MCX、WCX净化通过对比C18,WCX,MCX, 发现C18、WCX固相萃取柱萃取后,敌草快和百草枯均有一定的回收,但是不高。经过重复试验后,发现MCX强阳离子交换柱的对敌草快和百草枯的回收能达到80%以上,是更优的净化柱的选择。2.4 C18-MCX联用,MCX净化比较[img=,400,246]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/07/201707011859_01_3081717_3.png[/img] [img=,400,249]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/07/201707011859_02_3081717_3.png[/img] 附图4. C18-MCX联用,MCX净化通过结果比较,对于百草枯和敌草快两种农药来说,MCX固相萃取柱和C18固相萃取柱联用的效果与MCX固相萃取柱单独使用的效果相差不大,本着节约实验耗材的原则,优先考虑使用MCX强阳离子交换柱来净化萃取上述两种农药。2.5 MCX不同柱容量及WCX净化效果比较[img=,400,249]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/07/201707011901_01_3081717_3.png[/img] [img=,400,249]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/07/201707011902_01_3081717_3.png[/img] 附图5. MCX不同柱容量及WCX净化效果比较当加入100μg/L的标准品时,强阳离子交换柱MCX-6cc150mg 的对敌草快和百草枯的吸附净化的效果几乎等同于MCX-3CC60mg,这说明在一定的浓度范围内,MCX-3CC足够吸附所有的目标化合物,排除确定浓度范围内柱容量对回收率的影响。通过数据比较,再次证明WCX弱阳离子交换柱对敌草快农药的回收不好,排除此种萃取柱在上述两种农药一起检测中的使用。2.6 MCX对土豆、胡萝卜的净化(土豆、胡萝卜根据制样规则不能用水清洗,只能用纸擦拭,故会有少许泥土存在,百草枯敌草快遇到全泥土会急速失效,笔者一开始做韭菜、土豆、胡萝卜时发现韭菜有回收,土豆胡萝卜没有回收,但基质SP有,故最终做实验试验土豆、胡萝卜)[img=,400,249]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/07/201707011904_01_3081717_3.png[/img] [img=,400,249]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/07/201707011906_01_3081717_3.png[/img] 附图6. MCX对土豆、胡萝卜的净化为了验证MCX强阳离子交换柱在植物源性蔬菜中敌草快和百草枯残留量的检测中的使用,实验中又分别采用了地下蔬菜土豆和胡萝卜为基质,同样使用MCX净化柱对其进行净化,得出两种蔬菜中百草枯和敌草快的回收率均达到100%-120%,其中标曲为纯溶剂标曲。3 结论 本验证过程利用液相色谱-串联质谱法同时分析蔬菜中百草枯和敌草快的残留量,采用甲醇-0.1mol/L盐酸提取后取10mL提取液,将其pH调至7.0左右,离心后全部转移至经过预活化的MCX强阳离子交换柱,洗脱后过滤膜检测。方法前处理过程简单、回收率高,结果可靠,适用于植物源性食品中百草枯、敌草快残留量的检测。以上,是笔者做百草枯、敌草快遇到问题时解决问题的一些历程,望广大仪友多多提意见哈[img]http://simg.instrument.com.cn/bbs/images/default/em09505.gif[/img]。[align=center][/align][align=center][/align]
甘草提取液,同样的条件,在Agilent ZOBAX Eclipse plus C18 和迪马铂金C18上跑出来的图相比,前者就硬是差一个最大的峰----甘草酸,用对照品进样也发现在前者上不出峰,后用100%乙腈冲很久才出来一大堆杂质峰,应该是吸附在柱子上了。请问这2种都是C18的柱子,为什么会有如此大的差别,前者为什么会产生强吸附?谢谢
敌草快(diquat)是1957年由英国首次在世界上开发应用的一种联吡啶类除草剂,其中文商品名为利农,通用名为杀草快、双快,化学名为1,1’-乙撑-2,2’-联吡啶二溴盐,属于季胺盐类化合物,结构式见图1。敌草快可迅速被绿色植物组织吸收,对植物的脂类合成和叶绿体的双层膜结构具有极强的破坏力,使植物光合作用终止,迅速失水、枯萎死亡,但其传导性差,与土壤接触后很快失去活性。因此,敌草快是一种作用迅速的接触性除草剂和植物脱水剂。由于敌草快具有速效、广谱,在土壤中迅速钝化等优点,所以在果园、田埂、行间、非耕地及免耕地等的快速灭草方面,得以快速推广和应用。敌草快的大鼠经口LD50为231~400 mg/kg,兔经口LD50为101~190 mg/kg,按我国农药毒性分级标准,属中等毒性除草剂。敌草快对哺乳动物毒性大,摄入后对生物体的还原-氧化活性影响很大,对肺、心、肝、肾等都有害。经口摄入敌草快时,初期可引进人及动物口腔、食道等消化系统的糜烂、溃疡,被机体吸收后,对肝脏、肾脏等高血流脏器引起很强的毒性,可致多脏器功能不全,以致引起突然死亡。由于敌草快以季胺盐类形式存在,具有很强的极性,难挥发,因而很少直接用气相色谱或气相色谱-质谱测定,需先进行衍生化将其转化为挥发性化合物。本测定方法参考文献及标准中敌草快的检测方法,根据敌草快的物理化学性质,用水提取后,利用硼氢化钠将其还原为部分氢化衍生物,从而降低极性,提高挥发度,再用GC-MS进行定性定量分析。该方法具有操作简便,成本低,分析速度快,结果准确可靠等优点。