芸苔素内酯

[b][font='Times New Roman'][font=宋体]背景[/font][/font][/b][font='Times New Roman'] [font=宋体]油菜素甾醇（[/font]BRs[font=宋体]）是一类重要的植物激素，自[/font][font=Times New Roman]20[/font][font=宋体]世纪[/font][font=Times New Roman]70[/font][font=宋体]年代发现以来，人们已鉴定了超过[/font][font=Times New Roman]50[/font][font=宋体]多种天然的油菜素甾醇。[/font][font=Times New Roman]BRs[/font][font=宋体]在植物的生长发育过程中发挥了至关重要的作用，调控着细胞伸长分裂、维管束分化、种子萌发、生根、花粉管形成等多项生理学过程，能显著提高植物对环境胁迫的抵抗能力。目前，油菜素甾醇的合成、代谢路径和信号传导机理还未完全探明，监控植物中油菜素甾醇含量的变化对相关机理研究具有重要的指导意义。然而，内源性油菜素甾醇含量低、植物样品基质复杂，现有分析方法多数难以满足植物学家对[/font][font=Times New Roman]BRs[/font][font=宋体]分析检测的要求。[/font][/font][font='Times New Roman'] [font=宋体]为了实现油菜素甾醇的检测，分析化学工作者开发了基于酶联免疫法、气[/font] [font=宋体]相色谱[/font]-[font=宋体]质谱联用、高效液相色谱与紫外[/font][font=Times New Roman]-[/font][font=宋体]可见检测器[/font][font=Times New Roman]/[/font][font=宋体]荧光检测器或串联质谱联 用的多种分析方法。其中，液相色谱[/font][font=Times New Roman]-[/font][font=宋体]串联质谱联用技术是目前主流的检测手段。虽然油菜素甾醇在大气压化学电离（[/font][font=Times New Roman]APCI[/font][font=宋体]）源和电喷雾电离（[/font][font=Times New Roman]ESI[/font][font=宋体]）源质谱上均可产生响应信号，但检出限较高，不能满足少量植物样品中痕量油菜素甾醇的分析需求。有研究以丹酰[/font][font=Times New Roman]-3-[/font][font=宋体]氨基苯硼酸、[/font][font=Times New Roman]2-[/font][font=宋体]溴[/font][font=Times New Roman]-[/font][font=宋体]吡啶[/font][font=Times New Roman]-5-[/font][font=宋体]硼酸、[/font][font=Times New Roman]3-[/font][font=宋体]氨基苯硼酸、[/font][font=Times New Roman]3-[/font][font=宋体]Ｎ，Ｎ[/font][font=Times New Roman]-[/font][font=宋体]二甲氨基苯硼酸衍生油菜素甾醇，通过引入易电离的氨基或吡啶基团，提高了衍生产物的电喷雾质谱离子化效率，将检出限降低至[/font][font=Times New Roman]pg[/font][font=宋体]级。然而，上述衍生反应需要加入毒性大的吡啶作为催化剂，且反应时间较长。且衍生试剂通常活性 较高难以长期保存。[/font][/font][font='Times New Roman'][font=宋体]本方法基于[/font]QuEChERs[font=宋体]方法，结合高效液相色谱[/font][font=Times New Roman]-[/font][font=宋体]串联质谱快速测定植物组织中芸苔素内酯的方法。样品经乙腈均质提取，通过氯化钠（[/font][font=Times New Roman]NaCI[/font][font=宋体]）和无水硫酸镁（[/font][font=Times New Roman]MgSO4[/font][font=宋体]）混合吸附剂分散萃取，结合[/font][/font][font='Times New Roman'][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]gc[/url]B/PSA[font=宋体]双层固相萃取柱[/font][/font][font='Times New Roman'][font=宋体]前处理，以[/font]ChromCore? C18[font=宋体]色谱柱分离，采用[/font][font=Times New Roman]ESI[/font][font=宋体]正离子扫描和多反应监测模式（[/font][font=Times New Roman]MRM[/font][font=宋体]）检测，基质匹配溶液外标法定量。芸苔素内酯在[/font][font=Times New Roman]1~100 mg/mL[/font][font=宋体]范围内线性良好（[/font][font=Times New Roman]R2 0.999[/font][font=宋体]）。在不同中标准样含量[/font][font=Times New Roman]20[/font][font=宋体]、[/font][font=Times New Roman]40[/font][font=宋体]和[/font][font=Times New Roman]200 μgkg-1 [/font][font=宋体]添加水平下，目标化合物回收率均介于 [/font][font=Times New Roman]75.5%~93.6%[/font][font=宋体]之间，相对标准偏差 [/font][font=Times New Roman]RSD [/font][font=宋体]值在 [/font][font=Times New Roman]0.4%~7.0%[/font][font=宋体]之间（[/font][font=Times New Roman]n=6[/font][font=宋体]），方法定量限（[/font][font=Times New Roman]LOQ[/font][font=宋体]，[/font][font=Times New Roman]S/N=10[/font][font=宋体]）在 [/font][font=Times New Roman]0.55~1.46 μgkg-1 [/font][font=宋体]之间。该方法稳定、准确、灵敏，能够满足各茶类检测需求。[/font][/font][font='Times New Roman'] [/font][b][font='Times New Roman'][font=宋体]实验步骤[/font][/font][font='Times New Roman']1.[font=宋体]样本制备：[/font][/font][/b][font='Times New Roman'][font=宋体]样本与液氮中冷冻研磨至粉末状，样品粉碎后过[/font] 200 μm[font=宋体]筛，称取[/font][font=Times New Roman]0.1 g[/font][font=宋体]样本（精确至 [/font][font=Times New Roman]0.01 g[/font][font=宋体]）（转移至[/font][font=Times New Roman]2 mL EP[/font][font=宋体]管中，加入[/font][font=Times New Roman]1 mL[/font][font=宋体]乙腈，涡旋混匀[/font][font=Times New Roman]1 min[/font][font=宋体]，于冰冷中超声[/font][font=Times New Roman]30 min[/font][font=宋体]，粗提液[/font][/font][font='Times New Roman'][font=宋体]以[/font]4[/font][font=宋体] [/font][font='Times New Roman']℃[/font][font=宋体] [/font][font='Times New Roman']12000 r/min[font=宋体]离心[/font][font=Times New Roman]10 min[/font][font=宋体]后，取上清液，备用。[/font][/font][font='Times New Roman'] [/font][b][font='Times New Roman']2.[font=宋体]净化：[/font][/font][/b][font='Times New Roman']SPE[font=宋体]柱：[/font][font=Times New Roman]SelectCore [url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]gc[/url]B/PSA 500mg/500mg/6mL [/font][font=宋体]双层萃取柱；[/font][/font][font='Times New Roman'][font=宋体]活化：[/font]5 [/font][font='Times New Roman']mL[font=宋体]乙腈活化；[/font][/font][font='Times New Roman'][font=宋体]上样：加入步骤[/font]1[font=宋体]中制备好的上清液，并收集上样液；[/font][/font][font='Times New Roman'][font=宋体]洗脱：用[/font]3 mL[font=宋体]乙腈[/font][font=Times New Roman]/[/font][font=宋体]甲醇（[/font][font=Times New Roman]1:1 V:V) ,[/font][font=宋体]收集全部洗脱液；[/font][/font][font='Times New Roman'][font=宋体]洗脱液于[/font]35 [/font][font='Times New Roman']℃[font=宋体]下旋转蒸发至干，待衍生；[/font][/font][font='Times New Roman'] [/font][b][font='Times New Roman']3.[font=宋体]样本衍生：[/font][/font][/b][font='Times New Roman'][font=宋体]用[/font]1 mL([/font][font='Times New Roman']3-[font=宋体]（[/font][font=Times New Roman]N,N-[/font][font=宋体]二甲基氨基）苯基硼酸[/font][font=Times New Roman]/[/font][font=宋体]乙腈 （[/font][font=Times New Roman]1:1[/font][font=宋体]）[/font][font=Times New Roman])[/font][/font][font='Times New Roman'][font=宋体]复溶，在[/font]40 ℃[font=宋体]水浴中加入[/font][font=Times New Roman]1[/font][/font][font=宋体] [/font][font='Times New Roman']h[font=宋体]后，冷却至室温，[/font][/font][font='Times New Roman'][font=宋体]然后用[/font]0.22 [/font][font='Times New Roman']μm[/font][font='Times New Roman'][font=宋体]的针头过滤器待测[/font],[/font][font='Times New Roman'][font=宋体]供液相色谱串联质谱分析[/font][/font][font='Times New Roman'][font=宋体]。[/font][/font][font='Times New Roman'] [/font][b][font='Times New Roman']4.[font=宋体]液相色谱条件：[/font][/font][/b][font='Times New Roman']Column:ChromCore ?C18 5μm[/font][font='Times New Roman']Dimension :2.1×150[/font][font='Times New Roman']Mobile Phase[font=宋体]： [/font][font=Times New Roman]A)0.1%HCOOH water[/font][/font][font='Times New Roman']B)0.1%HCOOH ACN[/font][font='Times New Roman']Gradient[font=宋体]：[/font][/font][table][tr][td][align=center][font='Times New Roman']t[font=宋体]（[/font][font=Times New Roman]min[/font][font=宋体]）[/font][/font][/align][/td][td][align=center][font='Times New Roman']A[/font][/align][/td][td][align=center][font='Times New Roman']B[/font][/align][/td][/tr][tr][td][align=center][font='Times New Roman']0[/font][/align][/td][td][align=center][font='Times New Roman']30[/font][/align][/td][td][align=center][font='Times New Roman']70[/font][/align][/td][/tr][tr][td][align=center][font='Times New Roman']2[/font][/align][/td][td][align=center][font='Times New Roman']15[/font][/align][/td][td][align=center][font='Times New Roman']85[/font][/align][/td][/tr][tr][td][align=center][font='Times New Roman']7[/font][/align][/td][td][align=center][font='Times New Roman']5[/font][/align][/td][td][align=center][font='Times New Roman']95[/font][/align][/td][/tr][tr][td][align=center][font='Times New Roman']10.5[/font][/align][/td][td][align=center][font='Times New Roman']5[/font][/align][/td][td][align=center][font='Times New Roman']95[/font][/align][/td][/tr][tr][td][align=center][font='Times New Roman']20[/font][/align][/td][td][align=center][font='Times New Roman']30[/font][/align][/td][td][align=center][font='Times New Roman']70[/font][/align][/td][/tr][/table][font='Times New Roman']Flow Rate[font=宋体]：[/font][font=Times New Roman]0.3 mL/min[/font][/font][font='Times New Roman']Temperature[font=宋体]：[/font][font=Times New Roman]30 ℃[/font][/font][font='Times New Roman']Injection Quantity[font=宋体]：[/font][font=Times New Roman]5 μL[/font][/font][font='Times New Roman'] [/font][b][font='Times New Roman'][font=宋体]质谱条件：[/font][/font][/b][font='Times New Roman']ESI in positive ionization mode[/font][font='Times New Roman']Ion Spray voltage[font=宋体]：[/font][font=Times New Roman]5500 V[/font][/font][font='Times New Roman']Souree Temperature[font=宋体]：[/font][font=Times New Roman]200 ℃[/font][/font][font='Times New Roman']Nebulizer Gas[font=宋体]：[/font][font=Times New Roman]40 psi[/font][/font][img=,336,228]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2021/10/202110150911003375_9115_3527267_3.jpg!w336x228.jpg[/img][font='Times New Roman']Figure1[font=宋体]：[/font][font=Times New Roman]MS/MS spectra and proposed fragment pathways of BLDMAPBA[/font][font=宋体]，[/font][font=Times New Roman]Leu-enkephalin was used as lock mass in MS/MS mode (m/z610.4276for positive ion mode) to ensure the accuracy of m/z[/font][font=宋体]。[/font][/font][font='Times New Roman'] [/font][img=,318,253]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2021/10/202110150911144870_9374_3527267_3.jpg!w318x253.jpg[/img][font='Times New Roman']Figure2[font=宋体]：[/font][font=Times New Roman]MS/MS/MS spectra of CS and BL. The MS/MS/MS scan was performed on the MS system. 610.4.190.1. of BL. The excitation energy was 0.11 V, and the ?ll time was 50 ms[/font][font=宋体]。[/font][/font][align=center][/align][img=,460,267]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2021/10/202110150912104425_4582_3527267_3.jpg!w460x267.jpg[/img][font='Times New Roman']Figure3[font=宋体]：[/font][font=Times New Roman]10ng/mL Multi-reaction monitoring of standard solution Mass Spectrogram[/font][font=宋体]（[/font][font=Times New Roman]MRM)[/font][/font][font='Times New Roman'] [/font][font='Times New Roman'][font=宋体]公司名称：苏州格锐思生物技术有限公司[/font][/font][font='Times New Roman'][font=宋体]个人信息：顾[/font]××[font=宋体]老师[/font][/font][font='Times New Roman'][font=宋体]色谱柱信息：[/font][/font][font='Times New Roman'][font=宋体]纳谱分析[/font]ChromCore C18 5μm[/font][font=宋体], [/font][font='Times New Roman']2.1mm×150mm[/font][font=宋体], [/font][font='Times New Roman'][font=宋体]序列号：[/font]21514-001014[/font][font='Times New Roman'][font=宋体]纳谱分析[/font][/font][font='Times New Roman']SelectCore [url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]gc[/url]B/PSA 500mg/500mg/6mL [font=宋体]双层萃取柱[/font][/font]