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万古霉素是由链霉菌产生的、结构复杂的糖肽类抗生素,易溶于水,甲醇中极微溶解,乙醇或丙酮中几乎不溶.万古霉素主要抑制细菌细胞壁合成,由于万古霉素有较强的抗菌作用,在人医临床上也较少使用,而且同氨基糖苷类药物一样,具有严重耳毒性及肾毒性,故只宜在其他抗生素对病菌无效时才会被短期使用于抢救,也就是所谓的最后一线药物. 近年来,一些养殖者和饲料生产企业在动物饲喂过程或加工生产中,为追求利润,将万古霉素添加到饲料中应用,长期使用的后果是使需要万古霉素来治疗的一种能够致死的细菌产生抗药性,变异成万古霉素抗药性肠球菌(VRE),对人类生命安全造成了极大的威胁.因此,建立饲料中万古霉素的测定方法是非常必要的.1、适用范围适用于饲料中万古霉素的检测。2、提取称取1 g 均质样品于15 mL 离心管中,加入8 mL 乙酸提取液* 和4 mL 三氯甲烷;振荡4 min, 4,000 rpm下离心4 min,收集上清液;下层残留物用5 mL、5 mL 乙酸提取液重复提取两次,合并三次提取液;作为上样液,待净化。* 乙酸提取液:10% 乙酸溶液(用50% 甲醇水溶解)3、净化ProElut PXC 500 mg/12 mL (Cat.#68207)a 活化: 依次加入6 mL 甲醇,6 mL 水,流出液弃去;b 上样: 将上样液加入柱中,流出液弃去;c 淋洗: 依次用10 mL 水,3 mL 甲醇淋洗,流出液弃去;d 洗脱: 10 mL 10% 氨水(甲醇/ 水= 3/7)溶液洗脱,收集洗脱液;e 重新溶解:50 oC 下用减压蒸馏将洗脱液浓缩近干,然后用1% 乙酸重新定容至1 mL,上机供HPLC 分析。4、色谱条件色谱柱:Spursil C18 250 x 4.6 mm ID, 5 μm (Cat. #82001)流动相:50 mmol/L 磷酸二氢钾(1 L 磷酸二氢钾溶液需加入300 μL 磷酸)/ 乙腈= 92/8流速:1.0 mL/min 进样量:20 μL 柱温:30 oC 检测器: UV 210 nm5、添加回收结果5.1 添加水平为1.0 mg/kg 饲料中万古霉素检测的液相色谱图http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/08/201508041358_559009_2452211_3.pnghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/08/201508041358_559010_2452211_3.png回收率:71.6%(注:被仪器的logo遮住了)5.2 添加水平为10.0 mg/kg 饲料中万古霉素检测的液相色谱图http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/08/201508041421_559012_2452211_3.png回收率:69.4%(注:被仪器的logo遮住了)5.3 饲料中万古霉素检测(空白样品)的液相色谱图http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/08/201508041422_559013_2452211_3.png5.4 万古霉素标准品10.0 mg/L 的液相色谱图http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/08/201508041423_559014_2452211_3.png5.5 万古霉素标准品1.0 mg/L 的液相色谱图http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/08/201508041424_559015_2452211_3.png
用waters的液质不知如何建立万古霉素的质谱方法?Scanwave模式下能自动优化锥孔电压和碰撞能量吗?Scanwave模式的具体操作过程是怎样的?
【作者中文名】徐兵; 李昕; 张莉;【作者英文名】XU Bin; LI Xin; ZHANG Li(Third Hospital of Changsha; Changsha Hunan 410015);【作者单位】长沙市第三医院;【摘要】目的建立快速测定人血浆中万古霉素的RP-HPLC法。方法采用液-液萃取法对血样进行预处理,以去甲万古霉素为内标。色谱条件:Diamonsil C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-0.05 mol.L-1磷酸二氢钾缓冲液(9.5∶90.5,pH=3.0),流速为1.0 mL.min-1,检测波长为紫外230 nm。结果万古霉素的最低定量浓度为2.07 mg.L-1,线性范围为2.07~132.64 mg.L-1,相对回收率95%,绝对回收率65%,日内、日间RSD均10%。结论该方法方便、经济、无杂质干扰,适用于万古霉素血药浓度监测及药动学研究。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/08/201208061206_381806_2379123_3.jpg