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不同检测器测定乳及乳制品中牛磺酸含量牛磺酸是一种非蛋白结构的含硫氨基酸,在促进中枢神经系统生长发育、提高学习记忆能力及延缓衰老等方面具有重要调节作用,特别是对婴幼儿的生长发育起着重要的作用。目前,牛磺酸的测定方法主要有分光光度计法、薄层层析法、氨基酸自动分析法和高效液相色谱法。高效液相色谱不能直接对牛磺酸进行测定,需对牛磺酸进行衍生,常用的衍生试剂有:邻苯二甲醛、2、4-二硝基氟苯、异硫氰酸苯酯和丹磺酰氯等。丹磺酰氯是一种强荧光剂,可用于测定肽链的氨基末端,与肽的N-端氨基酸反应生成丹磺酰-肽,后者水解得到的丹磺酰-氨基酸具有很强的荧光。丹磺酰氯有多种优点:反应专一;荧光强烈;灵敏度比二硝基氟苯法高;丹磺酰-氨基酸不需提取等。本实验采用丹磺酰氯为衍生试剂,采用柱前衍生高效液相色谱法测定乳及乳制品中牛磺酸的含量,并用二极管阵列和荧光检测器分别进行测定,对测量结果进行分析比较。1 材料与方法1.1实验原理牛磺酸在碱性条件下与丹磺酰氯发生衍生反应,衍生产物经C18反相色谱柱分离后,紫外检测器或荧光检测器检测1.2 实验方法依据GB 5413.26-2010第二法,在此基础上略有改动。1.3 仪器Waterse2695高效液相色谱仪(配有2998型光电二极管阵列检测器及2475多波长荧光检测器),美国Waters公司;pHS-3C型酸度计,上海雷磁仪器厂;恒温水浴锅,上海跃进医疗器械厂;超声波清洗机,宁波新芝生物科技有限公司。1.4 样品预处理准确称取5g样品于100mL容量瓶中,加入80mL温水(50~60℃)溶解,充分混匀后超声10min,冷却至室温。分别加入2mL亚铁氰化钾(质量分数10.6%)和2mL硫酸锌(质量分数30%)溶液,摇匀后用超纯水定容并过滤,滤液备用。吸取1mL上述滤液至5mL具塞玻璃试管中,加入0.5mL碳酸钠(pH9.8),混匀后加入0.5mL丹磺酰氯溶液(2g/L),充分混合,45℃水浴避光反应1h(中间摇晃1次),反应完成后加入0.2mL盐酸(1mol/L)中止反应,并用水定容至刻度。取上清液经0.
有用丹磺酰氯柱前衍生法测牛磺酸的吗? 我做的不是峰宽就是分离不好 牛磺酸很脏吗?柱子是怎么冲洗维护的呢 求助 快被这个整得心力皆悴 ……
用GB 5009.169-2016中的第二法检测奶粉中的牛磺酸,样品的目标峰形差,换了质控样也差,但是标曲的峰形挺好,想知道是什么原因