液相梯度检测

请问液相梯度洗脱，DAD检测为什么会出现倒峰？[img]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/11/201711081204_01_3318616_3.jpeg[/img]

之前的求助液相色谱检测5种增塑剂用甲醇配的标准溶液出现与dehp重叠的干扰峰怎么解决？重叠峰的问题我找到原因了，应该是之前梯度条件t=0 水：甲醇=30:70t=5 水：甲醇=0:100t=10 水：甲醇=0:100t=15 水：甲醇=30:70太高的问题，这回用0 水：甲醇 15:855 水：甲醇 5:9510 水：甲醇 0:10015 水：甲醇 5:95，20 水：甲醇 15:85 波长225，要是波长275峰就会比225的要低 做校正曲线时就不会出现有重叠峰的错误警告了，但是这个梯度在检测2，5,10.20,50，微克每毫升时峰型还理想，0.5和1就基本没型了，从2到50这五个点做的校正曲线相关系数都在0.99858到0.99976之间，还有我用甲醇配的标准溶液，进样时没有用一次性针头和滤膜过滤，要是过滤的话就会在DEHP的位置出现一个很高很高的峰，就连只进甲醇或者丙酮溶剂都会出现，不知道是不是一次性针头和滤膜中有DEHP？难道就这样过滤下就能污染了吗？要是不过滤又怕损坏柱子，还有这个梯度应该怎么计算啊？也不能就随便尝试没个依据的，看那些理论的线性梯度、凹形梯度、凸形梯度和阶梯形梯度也不知道是怎么算的，有没有简单点的算法啊，或者根据我这次的条件怎样来继续优化，我做的5种增塑剂的保留时间：2.215, 2.791. 4.463. 9.421. 10.024，怎样才能让后两个也早点出峰，不要让他们距离这么远啊，改成下面条件时0 水：甲醇 15:854水：甲醇 5:958水：甲醇 0:10010水：甲醇5:95，15 水：甲醇15:85 保留时间为2.218, 2.783, 4,376, 8.625, 9.164要是把时间在改短些最后一个峰结束后基线会有很大波动，要是运行序列的话，是不是必须要把结束时的梯度设的和初始的一样才能不会影响下一个测试啊？不知道大家都是怎么做梯度优化的？我看了一些论文：如：反相高效液相色谱中复杂体系二元多台阶梯度分离条件快速优化方法 单亦初　赵瑞环　张维冰　梁　振　张玉奎　“提出了一种反相高效液相色谱中二元多台阶梯度分离条件快速优化方法。通过数次线性梯度初始实验,求得溶质的保留方程。在此基础上,利用重叠分离区域图(OSRM) 方法,快速求得复杂样品的最佳多台阶梯度分离条件。该方法只需要几个小时就可以完成对复杂样品分离条件的优化,并通过对中药川芎提取物的分离加以验证,获得了较好的预测精度和分离效果”那些基本原理公式太复杂了，而且他那些梯度具体是怎么计算预测的也没写，希望大家帮帮忙谢谢了

岛津双泵液相 梯度分析 32分钟出现鬼峰（以前没有的 最近出现了）排除了柱子 保护住 进样器的问题 鬼峰一直都在 现在怀疑是泵不稳定 谁有检测梯度准确性的方法 用什么标准样品 走个什么标准程序。

各位前辈，请教个梯度的问题。流动相B甲醇；A 10mmol/L的磷酸二氢甲缓冲液（用磷酸调至2）设置梯度：0：A 80% ；B 20% 3：A 80% ；B 20% 8：A 20% ；B 80% 10：A 20% ；B 80% 10.1：A 80% ；B 20% 12：A 80% ；B 20%就是这么个梯度，我的疑问是：缓冲盐遇到大浓度的有机相不会在色谱柱中析出吗，这个梯度没问题吗（来源于某一检测方法）；水相带缓冲盐的与有机相混合的梯度应该怎样设置，有哪些注意事项呢？谢谢各位大神了！

各位前辈，请教个梯度的问题。流动相B甲醇；A 10mmol/L的磷酸二氢甲缓冲液（用磷酸调至2）设置梯度：0：A 80% ；B 20% 3：A 80% ；B 20% 8：A 20% ；B 80% 10：A 20% ；B 80% 10.1：A 80% ；B 20% 12：A 80% ；B 20%就是这么个梯度，我的疑问是：缓冲盐遇到大浓度的有机相不会在色谱柱中析出吗，这个梯度没问题吗（来源于某一检测方法）；水相带缓冲盐的与有机相混合的梯度应该怎样设置，有哪些注意事项呢？谢谢各位大神了！

求教各位，1液相中等度梯度和二元高压梯度系统是什么意思啊。详细一点 2还有紫外可见检测器中检测池体积是什么概念如果检测池体积是8微升是不是进样量不能超过8微升？ 3紫外可见检测器波长精度和波长重复性是什么概念？ 4.静态波长扫描是个什么意思是不是自动可以筛选波长

求液相梯度调节相关知识的资料，经常要用梯度，但是不会调整，求帮助

方法开发过程中，用液相对最终成品进行纯度检测放行时，是否适用走梯度检测更为合理？情况如下：我们研发出来了一个新产品，这个产品做完后检测纯度，我们用自己的梯度方法检测，主峰在10min左右，其在95%左右的乙腈梯度下还会出1-2个峰，扣除空白后，面积归一法算纯度，大约在98%这样。后来客户给了一个方法，我用客户给的也试了一次，客户的是等梯度方法，梯度中乙腈只有30%。目标峰在6分钟这样就出峰了，之后二十分钟都没有峰出来。用面积归一法算纯度大约有99%这样。那么问题来了，我是否可以怀疑在等梯度下其实还有杂质峰未能出来，所以纯度能达到99.5%？？那么我们用这个等梯度方法测纯度去放行，是否是不合理的？————————再者，我们用面积归一法去计算含量来放行产品时，是否用等梯度比较合理，因为梯度相对影响比较大？问题如题

偶最近做克伦特罗、沙丁胺醇、莱克多巴胺、西马特罗、喷布特罗、非诺特罗、特布他林、妥布特罗的测定，怎么进行分离检测，梯度？流动相选择？。使用的设备为安捷液相-质谱连用G6410B，求大神们帮忙～～

各位前辈：液相梯度+紫外分析苯磺酸、间苯二苯磺酸、间苯二酚钠和间苯二酚，可行吗？请求提供分析方法，多谢！

马上开始要做[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]液质联用[/color][/url]了。因为以前还没有接触过，以后多和大家探讨。有个问题：做[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]液质联用[/color][/url]时，液相可以用梯度吗？还有我要分析得到各个保留时间对应的物质分子量，用EI源可以吗？还是对质谱的检测器有特殊要求？如还是需要四极杆？

液相色谱走梯度时基线漂移是不是大体一致的？是不是也可以从基线判断此次梯度跑的有问题？

我想问下液相梯度的程序设置，我要做的是时间： 流动相A 流动相B0-5 60-30 40-705-15 30-25 70-75。。。。。25-30 10-60 90-40我的液相是这样的设置的0.00 60.0 40.0 0.05.00 30.0 70.0 0.05.01 30.0 70.0 0.015.0 25.0 75.0 0.0。。。。。。25.01 10.0 90.0 0.030.0 60.0 40.0 0.0对吗？还是把带某.01时间去掉呢

仪器型号：Agilent 1260液相色谱配置：四元低压泵（内置在线脱气），自动进样器，进样器恒温器，柱温箱，DAD检测器故障描述：换流动相检测样品，打开排液阀排空气，开泵后泵不上液。维修过程：1、去掉泵上排液阀排废液管路，用注射器往外吸气，吸不动，液体不从梯度泵入泵内，疑为梯度后混合部分堵塞，导致流动相不能进入泵体；2、拧开泵主动阀上进样管路，用注射器抽气，吸不动，样品瓶内液体不往下流，正常情况下应该从管路滴出来；3、将滤头从流动相溶剂瓶中取出，自然垂下，溶液不流出；4、将脱气部分管路旋开，流动相从滤头处流出；5、用注射器抽2中管路，抽不动，依然堵塞；6、将脱气部分管路拧好，将滤头放入溶剂瓶，管路中有空气；7、用注射器网在入主动阀的管路中反复抽气打气，最终管路疏通。反思：流动相配置采用色谱甲醇、乙腈和分析纯的吡啶、乙酸，去离子水，过了4.5的滤膜，为什么堵塞了管路？是不是换用60℃温水冲洗管路也能解决问题呢？故障分析：之前学生用液相做实验，A管路是汗三氟乙酸的水溶液，4月7号做的实验，没有保存在甲醇中，4月17号继续做实验，没有更换流动相，将新配的流动相加在之前的容积凭着接着使用，应该也没啥问题。问题是不是出在我的流动相，我用的是甲醇、水、乙腈、乙酸、吡啶，因为氟化酸可以腐蚀二氧化硅，又是有机溶剂，所以虽然过了滤膜但是依然被氟化硅或其他有机盐堵塞。使用后的液相如果长时间不用，且为了避免交叉污染，4个管路应该是洗了之后保存在甲醇中的。发生了这次故障以后，更确定了以后必须得这么做。

我的液相条件是：[color=#00FFFF]Waters液相色谱仪，UV检测器，两元双泵，HypercilC18柱子，流速1ml/min,甲醇-水（0.05%磷酸）梯度 0-35min 是40：60，40-50min是60：40，50-60min是40：60。[/color][color=#DC143C]图谱见附件[/color]现在想做[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]液质[/color][/url]指认相关峰，流速需要调到0.4ml/min，柱子没变，磷酸改为甲酸，[color=#6495ED]梯度调整为甲醇-水（0.2%甲酸） 0-80min 是40：60，85-105min是60：40，105-110min是40：60。[/color]在Waters液相色谱仪上测的图谱很好，但是[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]液质[/color][/url]上的液相是Thermo的，PDA检测器，四元单泵，再用上面的色谱条件做时出峰到了换梯度时基线下去的厉害，不知道怎么回事？空针走的也是，我把梯度切换时间调到20min也还是那样，不知道该怎么解决？急切求助！[~119880~]

[b][color=#444444]现用到液相梯度洗脱,但不知梯度洗脱时间怎么设定(两个梯度冲洗时间).哪位高手指点一下?[/color][/b]

液质联用精密度问题在做液质联用定量分析中药中多种成分时，以A：0.3%甲酸水，B：乙腈为流动相，采用梯度洗脱，洗脱程序：0-6min 20%-40% B，6-8min 40%-100% B，8-14 min 100% B，13 min内所定量成分能完全出峰，主要是香豆素和生物碱类，以前的液相条件在质谱上分离挺好，但20 min之后保留时间漂移较大，也曾用等度洗脱试，峰分不开，采用现在的梯度条件，保留时间基本稳定，做好线性关系后，精密度考察出现问题，采用多反应离子监测，每次所测含量呈不规律变化，有时高有时低，进样20多针相同浓度的混标液精密度依然很差，RSD能达到20多，有的成分含量前后能相差1倍，用的是Agilent1200的液相，6410 QQQ-MS色谱柱是2.1×150 mm，1.8u的，流速是0.3 ml/min，混标液是用部分甲醇和部分流动相溶的，仪器也是前段刚检过的，都pass了，不知什么原因，是每次离子化程度不一样吗，请各位高手指教。还有做精密度、重现性、回收率时，每次都要做一次线性关系吗

液相梯度设置要求有什么，具体要求？

求教：液相梯度洗脱流动相是随时变化的还是一下变化的。例如梯度 0-5min A 90% B10%，5-8min A 70% B 30%流动相在5min后A相是一下变成70%的还是0-5minA相是慢慢变化成70%的，我感觉是后一种，求教大神解答

1.液相泵性能检测时，其流量一般是体积流量，想请问，这个体积是指高压压缩后的体积，还是常压时的体积？比如夸张一点，某频率和压力下流量2mL，如果几十兆帕压缩后的体积是0.15mL，那么这个体积是应该标2还是0.15呢？2.梯度问题，还是与上一个问题类似，要求梯度时的流量，是不是指压缩后的体积流量？所以存在一个压缩性补偿问题吧。3.压缩性补偿问题，这个问题一般是在什么情况下解决？是泵自身应有针对压缩系数的补偿措施，还是操作人员输入时，考虑到压缩量，刻意放大流量？刚入行小白，敬请回复为谢。

各位大侠,偶是新手,在做液相准备用梯度洗脱.有一个简单的问题不太清楚: waters 液相带两个高压泵,分别伸向两个流动相瓶子的小管子也有一定长度,如果我在10min内走完一个梯度的话,通过色谱柱的流动相可能还是10min前的流动相,可能梯度流动相还没有真正进入色谱柱呢. 不知道说的对不对? 如何正确的走流动相梯度,还请各位高手多多指教!

梯度洗脱是液相的一个很重要环节，国产液相这方面好像还不行。有几个方面，死体积大，滞后时间长，脉动大，定性、定量、谱图重复性普遍不好。总的来说国产液相与进口液相相比，梯度实验有实验时间长，效果差，准确度低等劣势

安捷伦高效液相，用异丙醇；水=1:1冲反相色谱柱，并过检测限。现在甲醇水梯度洗脱，基线不直是为什么?

本人想要购买一台三元梯度液相，请问哪种牌子好？请用过的朋友帮忙指点一下

岛津液相20A，买的新的C18柱，测甲基丙烯酸苯乙烯酯，用纯甲醇洗脱时基线正常，用甲醇-水(甲醇从10％到90％)洗脱时，基线会出现台阶。因为我想测纯度，这样出来的峰的纯度积分出来很差。同样的东西和条件，我在别人那里用安捷伦的测，就没有台阶。想知道我这是哪里出了问题，反复试过多次都有台阶，用纯甲醇把柱子冲四个小时再走梯度还是有台阶。而且这个峰感觉出来的太早了，在别的地方测，要到十几分钟才出峰。[img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/11/201811051707361387_3301_3503689_3.png[/img]