促甲状腺素释放因子

甲状腺疾病古已有之，有关甲状腺肿的研究也由来已久，我们熟知的埃及艳后——集美貌与智慧于一身的女子克娄巴特拉(Cleopatra)便是甲状腺疾病患者“大军”中的一位。达芬奇画作《持康乃馨的圣母》(Madonna of the Carnation)(局部)中，人物的颈部有甲状腺肿　　由于古代的医学技术并不发达，在很久以前，人们对甲状腺是否异常的认知，大多停留在“肿不肿”的层面上。在西方医学史上，人们对于甲状腺肿的认知可追溯到公元前，此后，在漫长的摸索中才逐渐理清了甲状腺疾病的特征。　　除了认知上的提升外，还有一个有趣的问题是：在外科手术出现之前，人们是怎么来治疗甲状腺肿的?今天我们通过回溯甲状腺相关研究在历史上主要的“里程碑”事件，一起了解前人对甲状腺的认识、相关疾病的诊断以及治疗的发展历程。　　“未知是我们最强大的敌人”。在一种疾病没被发现之前，人们很难去诊断它、治疗它。　　人们对甲状腺疾病的认知就是在这样的境况中逐步发展起来的。从公元前2700年到近现代，人类一直试图揭晓甲状腺的身世之谜，直至几个世纪之前，人们对甲状腺仍一知半解，是在黑暗中摸索着前行。　　初识，它还不叫甲状腺　　从四千多年前至今，全世界的人们对甲状腺这个能触摸到的颈部小器官一直非常好奇。翻阅历史长河，它一直是人们研究的对象。　　最早认识和研究甲状腺的是我国古人，据美国甲状腺协会(ATA)报道，早在公元前2700年时我国古人就已经知道了“甲状腺肿大”的概念。公元前1600年起，我国古人会食用烧焦的海绵和海藻来治疗甲状腺肿。　　Thyroid History Timeline 图源自美国甲状腺协会　　印度对甲状腺的认识也相对较早。公元前1400年，在印度的阿育吠陀(Ayurvedic)医学系统中，就出现了对甲状腺肿的描述，公元前300年，印度教圣典《阿育吠陀》中也讨论了甲状腺肿，并将其称之为“galaganda”，这个词甚至到了今天依然在使用。　　对于西方世界来说，直到古希腊时期，人类才对甲状腺肿有一些介绍。在当时的著作中有所提及，但在学术上这方面还颇具争议。　　举个例子，西方医学始祖、有“医学之父”美称的希腊医生希波克拉底(Hippocrates)曾在他的著作《腺体》(de Glándulas)中表示，“当颈部腺体自身患病时，它们会变成结核并产生甲状腺肿(struma)......”。有意思的是，“struma”这个术语在欧洲一些国家如奥地利、意大利，至今仍然被用作甲状腺肿的医学术语。　　希波克拉底(Hippocrates，前460年——前370年)　　然而，1984年时，英国医学教授弗兰克默克(Frank Merk)在他的综述性论文《地方性甲状腺肿和克汀病的历史及影像学》(History and Iconography of Endemic Goiter and Cretinism)中指出，希波克拉底的著作或这一时期的任何其他人都没有提到甲状腺肿。　　在亚历山大学派(公元前331-156年)的时代，人们简单地认为甲状腺肿只是一种颈部畸形，并且当时的人大多认为这是饮用雪水导致的。　　喝了雪水会导致甲状腺肿?这个观点看似荒谬，当时却有许多医生前往阿尔卑斯山调查甲状腺肿的情况。据美国甲状腺协会的资料，约公元前40年，罗马时期的医生普林尼(Pliny)、维特鲁威(Vitruvius)和尤维纳尔(Juvenal)都描述了阿尔卑斯山甲状腺肿的流行情况，在当地常常会使用烧焦的海藻来进行治疗。　　图源自https://www.thyroid.org　　到这一时期，世界各国的人们对甲状腺都有了朴素的认识，甲状腺被认为是一种畸形的肿大，有关甲状腺的概念、生理学知识和后续种种疾病的认知，都还未被揭露出来。　　甲状腺切除术的出现　　公元前156年至公元576年的这段时间，西方以及阿拉伯地区有关甲状腺的研究处于相对“停滞”阶段。　　直到拜占庭时期(公元330-1453年)，这两个地区才涌现了几位医生，在甲状腺发展史上添上了浓墨重彩的几笔。　　据现有资料介绍，大约550年时，拜占庭时代著名的医生埃蒂奥斯(Aetios)描述了颈部的甲状腺肿大，。更重要的是，他发现了伴有眼球突出症状的甲状腺肿，并将它视为了动脉瘤，而眼突在现在多被视为甲亢的症状。　　961年，甲状腺切除术横空出世——拜占庭医生阿布卡西姆(Abul Kasim)首次描述了甲状腺切除术可以用来治疗甲状腺肿。据美国甲状腺协会介绍，卡西姆还对甲状腺进行了穿刺活检，当然这同我们现代医学上的穿刺活检不一样。　　990年，波斯医生阿里伊布阿巴斯(Ali Ibu Abbas)在他的著作中谈到了甲状腺肿的手术。11世纪时，另一名医生阿尔布卡西斯(Albucasis，1013-1106)成功地为一名患有所谓的喉咙“象皮病”的患者进行了手术，实际上这是一名甲状腺肿患者，这也意味着实际上他可能是第一位经历了甲状腺手术的患者。　　直到12世纪，《班贝格手术》(Bamberg Surgery)一书问世，书中详细描述了手术切除甲状腺肿的过程，一如我们现在的外科手术。　　《班贝格手术》(Bamberg Surgery)封面，图源自耶鲁大学图书馆　　很难想象，在那样一个医疗系统不发达的年代，甲状腺切除术就已经被发明并记载了下来。　　到了1110年，一位名叫尤尔扎尼(Jurzani)的波斯医生将眼球突出与甲状腺肿联系了起来，他发现眼突可能是甲状腺疾病的一种病症(后来我们知道这是甲亢的症状之一)。　　图源自https://www.thyroid.org　　1170年，安条克公国外科医生罗杰奥法萨莱诺(Roger of Salermo)使用海绵和海藻的灰烬作为甲状腺肿的保守治疗方法。但他认为，如果病情严重，在有必要的情况下可以通过手术来切除腺体。　　13世纪，阿拉贡医生阿纳杜斯-德-维拉诺瓦(Arnaldus de Villanova)宣称，海洋里的海绵可用于治疗年轻人新发的甲状腺肿。　　到了14世纪，各国的一些医生，包括中国的名医忽思慧和意大利的维拉诺瓦(A. Villanova)，开始用海绵、海藻和软体动物等海产品来治疗甲状腺肿，有时还会把它们和硝石或锑相混合。　　在同一时期，法国的外科医生盖伊德乔利亚克(Guy de Chaliac，1300-1370)在报告中指出，“甲状腺肿经常被认为是一种局部的遗传性疾病”，他还建议手术切除甲状腺。　　在上述历史中，许多医生和科学家的观点可能有相悖之处。这可能是由于当时甲状腺的生理学(解剖学)结构还未被发现，由此只能在“疑云密布”之下根据自己的经验来判断甲状腺该如何治疗。　　这种蒙眼过河的情形，直到16世纪才有了转机。　　甲状腺之谜逐步被揭开，各种疾病无所遁形　　1500年，知名画家列奥纳多达芬奇(Leonardo da Vinci)绘制了甲状腺的生理学结构，他被认为是世界上第一个识别和绘制出甲状腺生理结构的人。　　达芬奇的画作《蒙娜丽莎》(Mona Lisa)闻名天下，有趣的是，画中的蒙娜丽莎也疑似有甲状腺肿(参见：蒙娜丽莎的微笑：是开心，还是生病了?)。实际上，达芬奇在许多画作中都描绘了甲状腺肿的人物形象，首图中的女性亦然。　　1543年，著名解剖学家、医生安德烈亚斯维萨里(Andreas Vesalius)进一步在书中详细地描述了甲状腺的解剖学结构，并提供了插图。　　安德烈亚斯维萨里(Andreas Vesalius)提供的插图 图源自www.thyroid.org　　随后，1563年，解剖学家巴托洛缪斯尤斯塔修斯(B. Eustachius)首次使用术语“峡部”来表示连接腺体两个叶的部分，这个词沿用至今。　　甲状腺峡部(Isthmus of thyroid)位置示意图 图源：wikipedia.org　　在揭开了甲状腺解剖学的结构之谜后，各路科学家开始在这个领域齐发力，不断地探索甲状腺的功能、甲状腺疾病以及对应的症状。　　1656年，著名英国解剖学家托马斯沃顿(Thomas Wharton)发现了甲状腺以及身体其他腺体确切的解剖结构。　　沃顿也首次揭露了腺体的功能——他认为大部分腺体的主要功能是分泌某种物质，其中颈部的这个腺体是负责保持甲状腺软骨的温度，并润滑颈部，为颈部提供圆润的美感。最终，沃顿以古希腊盾牌的形状将这个腺体命名为“甲状腺”。　　1754年，医学家发现甲状腺异常会导致克汀病，也俗称为“白痴症”。当时的医学文献中首次使用了“克汀”(cretin)一词，“cretin”一词源自拉丁语“christianus”(克汀病)。这种疾病在1602年被菲利克斯普拉特(Felix Platter)发现。　　19世纪初，巴黎发生了一件特别的事——1811年，法国化学家伯纳德库尔图瓦(Bernard Courtois)在实验室做实验时，无意中在被硫酸烧焦的海藻里发现了碘。碘是合成甲状腺激素必不可少的重要“原料”，也可以用来预防和治疗甲状腺疾病。这是甲状腺科学史上里程碑式的发现。　　第一个使用碘作为甲状腺肿补救措施的人是瑞士医生让弗朗索瓦科迪恩特(Jean Francois Coindet)，他总结碘的缺乏会导致甲状腺肿，于是从1820年开始用碘治疗甲状腺肿。　　紧接着，越来越多的医生开始细致描绘甲状腺肿相关的病症。1848年，德国医生卡尔阿道夫冯巴塞多(C. von Basedow)，描述了眼球突出性甲状腺肿，也就是后来我们所熟知的巴塞杜氏病。　　罗伯特格雷夫斯(Robert Graves)　　1896年，终于有科学家证明了碘是作为甲状腺的天然成分存在于甲状腺中的——发现这件事的人是德国化学家欧根鲍曼(Eugen Baumann)。　　1910年，美国医生查尔斯梅奥(Charles H. Mayo)上校用术语“甲状腺功能亢进”定义了眼球突出和腺瘤性甲状腺肿以及中毒性腺瘤的临床状况，这就是我们熟悉的“甲亢”。值得一提的是，梅奥医生是后来鼎鼎有名的“梅奥诊所”的创始人之一。　　1914年，美国化学家爱德华卡尔文肯德尔(E.C. Kendall)首次成功地分离出了甲状腺素，这个名称是他从术语“甲状腺吲哚”中缩写创造出的名字。肯德尔是非常有名的化学家，他于1950年获得了诺贝尔生理或医学奖。　　甲状腺疾病治疗的发展史　　最后，我们再简要地来归纳一下甲状腺疾病的手术治疗。　　第一个已知的甲状腺切除术是由来自日内瓦的医生威廉法布里修斯(Wilhelm Fabricius)于1646年描述的。第一个有据可查的甲状腺肿瘤的部分切除术是在1789年由德索(P.S. Dessault)(1744-1795)完成的。　　1808年，法国解剖学家纪尧姆杜普伊特伦(Guillance Dupuytren)对甲状腺腺体肿瘤进行了全甲状腺切除术，1880年Ludwig Rehn进行了第一次成功的甲状腺切除术。　　至此，甲状腺切除术逐渐成熟。　　而关于甲状腺的治疗药物，从最初的海洋生物如海藻、海绵，到后来的19世纪，人们开始用碘治疗甲状腺疾病，如鲍曼当年使用稀硫酸煮沸了1000只羊的甲状腺，收集了沉淀物并命名为“碘甲状腺素”，这种提取物治疗甲状腺疾病也取得了很好的效果。　　当医疗技术逐步发达后，甲状腺素(T4)被肯德尔提取出来，人们也逐渐舍弃了使用动物甲状腺切片晒干后磨成的粉末来治疗甲状腺疾病。　　1973年时，默克公司上市了优甲乐药片，优甲乐是一种人为合成的甲状腺素，是甲状腺疾病的常规用药。近半个世纪过去了，这个药物一直沿用至今。　　现代医疗技术虽已十分发达，但这些来自中国古代、印度和西方的医生和科学家们为早期的甲状腺研究作出了不可磨灭的贡献，他们的研究方法和思考方式依然值得我们学习。甲宝玉(西湖欧米) | 撰文　　参考文献　　1. Vignette Thyroid Surgery: A Glimpse Into its History - PMC (nih.gov)　　2. Thyroidology over the ages - PMC (nih.gov)　　3. ThyroidHistory Timeline | American Thyroid Association　　4. http://www.hormones.gr/115/article/article.html　　5. WHO_MONO_44.pdf jsessionid=63818B20FEF4CAE68C0F767DC26B0F60　　6. History of disorders of thyroid dysfunction - PubMed (nih.gov)　　7. 25 History of disorders.pmd (who.int)

2022年7月25日，特朗普的女婿自曝在白宫期间罹患甲状腺癌。 以往我们对“大脖子病”和甲亢比较熟悉，但近些年，甲状腺疾病逐渐走进人们的日常生活，甲状腺癌和甲减我们也不陌生。但甲状腺究竟是个什么器官，你真的了解甲状腺疾病吗？甲状腺是什么，在人体中发挥怎样的作用？甲状腺是脊椎动物体内一个非常重要的内分泌器官，形似蝴蝶和盾甲。在人体内，甲状腺有很重要的调控作用，它可以控制身体耗能速度、制造蛋白质、调节其他身体系统对其他激素的敏感性，对儿童而言，它还和儿童的智力和生长发育息息相关。甲状腺的这些调控作用主要依靠两种激素来完成：三碘甲状腺原氨酸（triiodothyronine，以下简称T3）和四碘甲状腺原氨酸（tetraiodothyronine，即甲状腺素，以下简称T4）。T3和T4是由碘和酪胺酸耦联作用形成的，这也是为什么我们常说需要补碘来预防甲状腺疾病。除了T3和T4之外，甲状腺也生产降钙素（Calcitonin）和少量的反三碘甲状腺原氨酸（rT3），其中降钙素可以调节体内钙的平衡。大约有80%的T4在肝脏、肾脏、脾脏等组织发生化学反应，转换成rT3和T3，在人体内，T3发挥作用时，效力比T4大上好几倍。 T3和T4的作用过程 图片来源：tsu.tw在T4转化为T3的过程中，由于碘离子会转化为碘原子，从而产生过氧化氢（H2O2），此时则需要硒元素来中和自由基，以有效抵御中间产物对甲状腺的伤害，维持甲状腺的正常机能。同时，硒在脱碘酶中也起着关键的作用，这个酶的功能是将T4转换为T3。 简单来说，甲状腺激素的合成和发挥作用都必须经过硒，但实际上很多人体内都严重缺硒，我国72%的地区都处于缺硒或低硒地带。坚果、肉、鱼、贝类等能给人体提供优质的硒元素，需日常适当摄入。了解了甲状腺的工作机理后，让我们来探讨一下甲状腺异常是什么样的情况。甲状腺异常主要分哪些情况？甲状腺是脊椎动物体内一个非常重要的内分泌器官。常见的甲状腺异常有甲状腺功能亢进症（甲亢）、甲状腺功能减退症（甲减）、甲状腺结节等，严重的话，还可能会出现甲状腺癌。如果甲状腺过度活跃，使身体产生的甲状腺激素过多，就会导致甲亢。甲亢的症状包括焦虑或紧张、心跳加快、手抖、出汗过多、体重减轻、失眠等，在极罕见的情况下，甲亢甚至可能会导致突发性瘫痪，这种症状也被称为甲状腺毒性周期性麻痹。甲亢的症状：体重减轻、食欲增加、腹泻、头发细软、心动过速、焦虑紧张等甲减的原因恰恰相反，它是甲状腺不能产生足够的甲状腺激素而导致的。甲减的致病原因往往有两个：甲状腺炎症和服用了影响甲状腺激素生成的药物。甲状腺炎症会导致甲状腺细胞受损或死亡，进而无法产生足够的甲状腺激素。最常见的甲状腺炎症是由自身免疫引起的，比如桥本氏甲状腺炎。除了这两种常见的原因之外，甲减还可能是由于大脑垂体无法产生足够的促甲状腺激素（TSH）、缺碘、先天性甲状腺功能减退症等。甲减的症状因人而异，这取决于激素水平的异常程度和患病时间的长短。在有些情况下，甲减的症状非常轻微，比如疲劳、皮肤干燥、脱发、畏寒、记忆力减退等。这些症状往往在非甲减患者身上也会出现，而有些甲减患者甚至根本没有症状。此外，由于身体处于缺乏甲状腺激素的状态，大脑垂体会分泌过多的TSH，以促进甲状腺分泌更多激素。这种额外的TSH可能导致甲状腺变大，导致代偿性甲状腺肿大，也就是大家俗称的大脖子病的一种。甲减的症状 图片来源wiki.org甲状腺结节是甲状腺组织的异常过度生长导致的，往往为良性，恶性结节的情况相对少见。在患者体内，结节的数目往往是一个到多个不等。实际上，甲状腺结节非常常见，大约有50%以上的人在60岁时都会有甲状腺结节。甲状腺结节，图片来源yxj.org值得庆幸的是，一般情况下甲状腺结节都是良性，不会改变腺体的功能。当甲状腺结节确实产生症状时（最常见的症状是颈部肿块和吞咽困难），也可以采取一些有效的治疗方法。此外，如果结节较大，也可能出现呼吸困难、声音嘶哑和颈部疼痛等症状。在极少数较为严重的情况下，甲状腺结节中可能会分泌过多的T3和T4，这可能导致甲亢。甲状腺疾病更为严重的状况是甲状腺癌。甲状腺癌主要有四种类型：甲状腺乳头状癌、滤泡性甲状腺癌、甲状腺髓样癌、间变性甲状腺癌。其中，乳头状癌和滤泡性甲状腺癌属于分化良好的肿瘤，比较容易治愈。值得庆幸的是，分化不良和未分化的甲状腺肿瘤（间变性甲状腺癌）虽然具有侵袭性，容易发生转移，但是它们不太常见。甲状腺癌早期可能不会有什么症状，但随着肿瘤变大，患者可能会出现呼吸和吞咽困难、声音嘶哑、发烧、厌食、体重减轻等症状。甲状腺癌发病率有升高迹象甲状腺癌是全球范围内十分常见的内分泌癌。在过去的50年里，全球甲状腺癌的发病率一直在上升。自1990年以来，甲状腺癌发病率是所有癌症中发病率上升最快的。2019年的数据显示，全球约有23万例甲状腺癌病例，有4.5万例死亡。从1990年到2013年，全球年龄标准化甲状腺癌患病率增加了20%。当比较不同的全球区域时，发病率似乎有很大的差异，这可能与诊断方式、环境和个人因素的差异有关。此外，也可能受到医疗保健服务和国家统计等因素的影响。美国2022年甲状腺癌发病人数估计，截图来源：cancer.org值得注意的是，女性比男性的患病比例更高，这也许是因为女性的情绪波动比男性更为明显，导致女性的甲状腺负担相对更大。除此之外，随着年龄的增长，人们患甲状腺结节的概率也会升高。甲状腺疾病的诊断和治疗由于碘是T3和T4必须的元素之一，因此可以考虑控制碘的摄入来缓解甲亢，比如少吃鱼、海藻、虾等。此外，钠也和甲状腺的肿胀有关，因此患者也需要注意盐的摄入量。同时，多吃新鲜水果和蔬菜保证身体维生素和矿物质水平的稳定。在生活中，瑜伽、太极拳、自我催眠、冥想等措施也可以帮助患者放慢身体的节奏，缓解甲亢引发的症状。由于甲减的症状不像甲亢那样明显，因此甲减检测往往是依靠测量血液中的激素水平，主要指标是T4和TSH在血液中的含量。前文中也提到，甲减的症状因个体差异而有所不同，甚至有时即使患者感觉良好，他体内的激素水平也可能已经十分不正常。如果不及时治疗，长期的甲减可能会引发一系列的并发症，包括不孕不育、低密度脂蛋白（LDL）胆固醇升高和心理健康问题。在极少数情况下，还可能会导致严重的抑郁症、心力衰竭、骨质疏松、粘液性水肿昏迷等。而甲状腺结节的治疗，需要先判断结节中是否含有癌细胞（恶性甲状腺结节的概率不到5%），或者是否伴有其他症状。如果结节已经引发了颈部不适或者甲状腺激素水平过高，可能才需要治疗。而如果甲状腺结节并无癌细胞，也没有引发其他症状，医生往往会推荐采取定期体检的方案来观察。至于甲状腺癌的治疗也是因人而异，这与癌症阶段、年龄、健康状况等因素有关，常用于治疗甲状腺癌的方法有手术治疗、放射性碘治疗、内分泌抑制治疗、靶向治疗等。总的来说，甲状腺的健康关乎着我们每个人的生活质量，身体是革命的本钱，一定在日常生活中关注自己的甲状腺健康，给自己一个健康的甲状腺。作者：云梦伊（西湖欧米） 参考资料1. Hyperthyroidism: Symptoms, Causes, Treatment and Support .endocrineweb.com.https://www.endocrineweb.com/conditions/hyperthyroidism#symptoms2.What Is Hypothyroidism?.endocrineweb.com https://www.endocrineweb.com/conditions/hypothyroidism3. What Are Thyroid Nodules? .endocrineweb.com.https://www.endocrineweb.com/conditions/thyroid-nodules4.Thyroid Cancer Symptoms.endocrineweb.com.https://www.endocrineweb.com/conditions/thyroid-cancer/thyroid-cancer-symptoms5.National, sub-national, and risk-attributed burden of thyroid cancer in Iran from 1990 to 2019.Nature.https://www.nature.com/articles/s41598-022-17115-0

大鼠甲状腺滤泡上皮细胞的培养操作与应用！ 一、背景 大鼠甲状腺滤泡上皮细胞分离自甲状腺组织；甲状腺是脊椎动物非常重要的腺体，属于内分泌器官。在哺乳动物身体中，它位于颈部甲状软骨下方，气管两旁。甲状腺表面有结缔组织被膜，表面结缔组织深入到腺实质，将实质分为许多不明显的小叶，小叶内有很多甲状腺滤泡和滤泡旁细胞。甲状腺控制使用能量的速度、制造蛋白质、调节机体对其他贺尔蒙的敏感性。 甲状腺依靠制造甲状腺素来调整这些反应，有T3和T4。这两者调控代谢、生长速率还有调解其他的身体系统。T3和T4由碘和酪胺酸合成。甲状腺也生产降钙素，调节体内钙的平衡。其中，甲状腺滤泡上皮细胞（也称为滤泡细胞或主要细胞）是在甲状腺细胞是负责生产和分泌甲状腺激素，甲状腺素（T4）和三碘甲状腺原氨酸（T3）。 二、培养操作 1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。 2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。 1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。 2.加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。 3.按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。 4.将细胞悬液按1：2比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。 3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面T25瓶为类； 1.细胞冻存时，弃去培养基后，PBS清洗一遍后加入1ml胰酶，细胞变圆脱落后，加入1ml含血清的培养基终止消化，可使用血球计数板计数。 2.4 min 1000rpm离心去掉上清。加1ml血清重悬细胞，根据细胞数量加入血清和DMSO，轻轻混匀，DMSO终浓度为10%，细胞密度不低于1x106/ml，每支冻存管冻存1ml细胞悬液，注意冻存管做好标识。 3.将冻存管置于程序降温盒中，放入-80度冰箱，2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。 三、应用 用于RCCS模拟微重力影响大鼠甲状腺滤泡上皮细胞生长特性和分泌功能的研究： 釆用微重力细胞培养系统（the rotary cell culture system,RCCS）,研究模拟微重力对大鼠甲状腺滤泡上皮细胞生长特性和相关分泌功能的影响,为航天员在失重环境中甲状腺应激和病理性改变的防治提供理论依据。 研究方法应用RCCS技术构建FRTL-5细胞模拟微重力培养系统。将大鼠甲状腺滤泡上皮细胞FRTL-5细胞株随机分为模拟微重力组（simulated microgravity group,SMG）和正常重力对照组（normal gravity group,NG）,分别于培养第6h、12 h、24 h、36 h取细胞及上清液,MTT检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期,化学发光免疫分析法检测T3、T4、FT3、FT4,ELISA检测上清液中Tg和TPO水平 应用倒置相差显微镜观察培养第6 h、12 h、24 h、36 h后细胞表面形态 透射电镜观察培养12 h和36 h的细胞超微结构 激光共聚焦显微镜观察培养36 h的细胞微丝骨架荧光强度变化。 结果：（1）MTT结果显示,SMG组FRTL-5细胞经6 h、12 h、24 h、36 h培养后,各时相细胞增殖均较NG组受到明显抑制（P0.05）,其中24 h最为明显（P0.01） 36 h表现为两种情况,一是SMG组的细胞增殖恢复,二是NG组的细胞增殖速度快速提升。 （2）流式细胞仪测细胞周期显示,与NG相比,FRTL-5细胞微重力培养6 h、12 h、24 h、36 h后G1期细胞比例显著增高 除6 h外,S期细胞比例明显降低 而各时相的G2/M期细胞比例表现为模拟失重早期（6-12 h）降低,其中12 h出现低谷值,24 h一过性显著增高,36 h回落。研究结果提示,SMG组FRTL-5细胞培养6-12 h阶段DNA合成下降,24 h的DNA合成趋活跃,而36 h的DNA合成后期比例又呈现下降趋势并向NG组的比例靠近。 （3）化学发光免疫分析法检测结果显示,RCCS培养6 h组FRTL-5细胞上清液中FT3、T4和FT4水平显著降低（P（4）ELISA测细胞上清液结果显示,与NG相比,SMG组FRTL-5细胞Tg和TPO分泌均明显升高（P0.01）,表现为6 h即显著升高,随后呈下降趋势,24-36 h阶段又趋上升,其中SMG组的6 h与24 h以及24 h与36 h之间有显著差异（P0.01）。 （5）倒置相差显微镜观察结果显示,模拟失重环境下FRTL-5细胞形态发生显著变化,实验早期细胞逐渐趋于死亡状态,24 h后细胞数量又有所增长。 （6）透射电镜结果显示,模拟失重第12 h,36 h的FRTL-5细胞超微结构发生显著变化。 （7）模拟微重力培养36 h后,激光共聚焦显微镜观察荧光素FITC标记的FRTL-5细胞,发现细胞微丝骨架局部解聚,张力纤维减少,结构和排列紊乱,细胞伪足少见,细胞形状呈不规则。 微生物菌种查询网自设细胞系板块，是细胞株提供中心,专业提供代次低、周期短、活性好的细胞株。与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！