绿木霉

第二十二届太原煤炭（能源）工业技术与装备展览会（简称“太原煤炭展”）火热开幕，现场人潮涌动，气氛热烈！艾睿光电携最新技术与产品设备惊艳亮相，成为全场焦点，专业观众纷纷驻足交流，共探煤炭能源新未来。煤炭原料堆积防火► 原料存储过程中局部热量堆积容易自燃起火，存在消防隐患。艾睿光电双光谱热成像轻载云台，可固定式安装，远程监测温度变化，一旦温度异常立即报警。也可与机器人搭配实现智能巡检。原料温度范围监测物料传送过程监测► 物料传送带在运作过程中，高温源或者异物的窜入会导致传送带损伤物料损失，造成热分布异常，固定安装双光谱热成像防爆筒机，实时在线监测温度变化，并开放SDK，支持集成开发。传送带热成像画面高炉反应温度监测► 高炉内的反应需要及时补充原料状态避免原料比失常甚至干烧。艾睿光电在线超高温热像仪，支持超高温环境工作。温度测量范围广，高达1500℃。40mK高分辨率，高清细节反映出黑暗状态下的炉内液面情况，方便工艺人员及时补充原料，保持生产高效。高温炉内热成像画面受限空间安全防控► 电气线路的老化、破损等会导致短路、断路等情况发生，严重时起火、宕机会对企业造成不可估量的损失。艾睿光电双光卡片机、双光谱热成像筒机、双光谱热成像半球可对受限空间内的线槽线缆进行实时监控，多点布控，高温报警。多设备支持组网监控、报警联动，助力企业安全生产。电气线路监测后台高温设备运行巡检► 化工企业的生产设备，老化磨损、物理损伤等因素会导致局部缺陷，从而导致设备损坏，穿孔引发事故。需要对高温设备进行定期巡检。艾睿光电手持红外热像仪为重点区域日常巡检提供技术支撑，发现异常之处，及时修补，保障生产安全。高温设备红外热成像画面电力设备故障运维► 电力设备的故障多伴有发热的现象。在电力行业，很早就将红外热像仪运用于设备的安全检修上，常使用热成像技术进行安全检修，艾睿光电无线手持热成像仪体积小巧，但探测灵敏，图像高清，可狭窄空间的设备和线路的热缺陷进行日常巡检维护。电力设备温度监测化工气体泄露检测► 化工厂的生产、存储或运输环节二均存在爆炸性或有毒有害气体泄漏风险，用传统气体检测方式漏洞较多，难以快速定位泄漏位置。气体检测防爆云台固定式监控，基于气体着色算法，可实现24小时、可视化安全监测。热成像防爆气体手持热成像仪便携巡检，镜头选择丰富，可探测20余种VOCs气体。气体着色热成像画面太原煤炭展历经数载春秋，引领着煤炭能源产业的发展趋势，艾睿光电再次携手众多业界同仁，共襄盛举，推动煤炭工业技术与装备地不断升级，助力企业的安全生产、行业的绿色发展！例如 非制冷手持气体红外热像仪天玑G600C 适用场景： 氨气泄漏检查、 六氟化硫泄漏检测 、天然气安全巡检、 制冷剂泄漏检测工业生产过程中气体泄漏，因肉眼不可见，一直是巡检难题，费时费力。艾睿光电高清晰度红外气体成像仪G600系列产品，对于天然气(CH4)、制冷剂（氟利昂）、 氨气（NH3）、六氟化硫（SF6）等气体的泄漏，可以使用红外热成像的非接触的方式，助您快速定位微量的气体泄漏位置。产品特点1、高清晰带通红外探测器，气体探测更清晰拥有定制带通滤波探测器以及近似制冷型探测器的热灵敏度。2、可探测甲烷、六氟化硫、乙 烯、氨气、氟利昂等多种气体3、全能多面手，轻松完成多重任务超清机身搭配3.5寸触摸屏、艾睿云服务以及支持完整分析等功能。4、ⅡC T4防爆等级，危险场合安全应用艾睿光电专注于红外成像技术和产品的研发制造，具有完全自主知识产权，致力于为全球客户提供专业的、有竞争力的红外热成像产品和行业解决方案。主要产品包括红外焦平面探测器芯片、热成像机芯模组和应用终端产品。公司研发人员占比48%， 已获授权及受理知识产权项目共2030件：国内专利及专利申请1299件（包括集成电路芯片、MEMS传感器设计和制造、Matrix IV图像算法、AItemp智能精准测温算法、IR-Pilot 红外AI智驾方案等）；国内商标申请共278件；国外专利及专利申请47件；国外商标申请133件；软件著作权215件；集成电路布图设计58件。公司产品广泛应用于智慧工业、户外观察、人工智能、机器视觉、智能驾驶、无人机、安防消防、物联网、医疗健康等领域。想了解更多产品信息，可通过仪器信息网和我们取得联系！

p 　　近日，中科院天津工业生物研究所宋诙研究员领先开发了生物纺织酶技术，这一技术在印染材料前处理过程中代替烧碱，将极大减少废水排放，并节水节电，被业界评价为我国印染行业的又一重要技术创新。 /p p 　　你有没有想过你穿的一件件T恤衫、牛仔裤或者连衣裙是在怎样的环境下生产出来的?事实上，色彩绚丽的服装带来的却是对环境的极大破坏。印染行业一直是高污染、高耗能的落后产能代表，近年来，不少地方尤其是一线城市的印染行业逐渐外迁，甚至关停。 /p p 　　与此同时，印染又是纺织行业不可或缺的环节，在政策倒逼下，印染行业也在不断寻求技术创新，朝着绿色印染方向前进。 /p p 　　由中科院天津工业生物研究所宋诙研究员领先开发的生物纺织酶技术，在印染材料前处理过程中代替烧碱，可极大减少废水排放，并节水节电，被业界评价为我国印染行业的又一重要技术创新。 /p p 　　印染行业迫切需要抵制污染 /p p 　　“当前中国纺织产业的污染问题已经到了需要刻不容缓解决的地步。传统纺织生产不仅给环境带来污染，更是产生各种有害化学物质，对我们的身体造成损害。全社会应该共同抵制污染性、消耗性的生产过程??” /p p 　　国际环保地球誓言(EarthPledge)发布的数据显示：“全世界至少有8000种化学品在将原料制成纺织品的过程中，会使用25%的农药用于种植非有机棉。这将导致对人类和环境不可逆转的损害，还有2/3的碳排放量会在服装的购买后继续发生。”在加工服装面料的过程中会耗费几十加仑的水，尤其是面料染色过程，合成材料的染色需要2.4万亿加仑的水。 /p p 　　中国环境统计数据表明，在重点调查工业行业中，纺织业是排污大户。纺织工业废水排放量在全国41个行业废水排放中位居前列，而其中印染加工过程产生的废水排放占纺织废水排放量的七成以上。 /p p 　　此外，作为水污染的重要来源，中国的纺织工业还消耗了巨大的水资源，在水资源利用效率方面远远落后于世界其他地区。根据中国环境科学出版社出版的《全国重点行业工业污染防治报告》，在生产同类单位产品的情况下，我国印染废水中污染物平均含量是国外的2—3倍，用水量则高达3—4倍 同时，印染废水不仅是行业主要污染物，印染废水所产生的污泥处理起来存在问题。 /p p 　　这其中，印染材料的前处理由于使用到大量烧碱，造成的污染尤其严重。“染色前需要用烧碱处理，用蒸汽把它蒸硬，然后，再用盐酸把这些烧碱中和掉，这就排放出大量废水。”曾经在印染企业一线工作多年的河北纺联物资供销有限公司驻津办事处经理高忠强说。 /p p 　　针对这一现状，中国科学院天津工业生物技术研究所宋诙带领团队首先将目标瞄准可代替烧碱的新酶制剂开发。 /p p 　　生物酶制剂解决印染难题 /p p 　　传统的印染前处理工艺流程包括烧毛、退浆、精炼、漂白和丝光五个步骤。虽然此前有国外公司生产用于印染前处理的酶制剂，但仅用于退浆这一环节。 /p p 　　宋诙介绍道，酶制剂是一种高效、低耗、无毒的生物催化剂，基于酶制剂的生物处理方法是解决印染工业高污染和高消耗的理想途径，但是，此前，酶制剂品种单一成本偏高，酶制剂的复配及与纺织助剂的相容性研究缺乏，完整的酶法染前处理工艺尚未形成。 /p p 　　此次，宋诙团队与天津天纺集团、河北纺联物资供销有限公司达成密切合作，历经三年，研发出多种性质优良的纺织用生物酶制剂及其生产工艺，包括淀粉酶、碱性果胶酶、木聚糖酶和过氧化氢酶等，可以将退浆和精炼合并成一步完成，大大提高前处理的效率。 /p p 　　“退浆—精炼复合酶制剂解决了涤棉、纯涤纶坯布混合浆料退浆难的问题。以往的淀粉酶退浆只能解决淀粉上浆的坯布，有PVA混合浆料的坯布只能用高温碱煮去除。”天纺集团总工程师丁学琴说，含阻燃丝、纯涤纶组分的坯布品种不能高温碱煮退浆，否则会皱缩，而使用生物复合酶的退浆效果很好，防止了坯布皱缩，而且退除淀粉、PVA干净，同时处理后布匹手感蓬松、柔软，也为工厂解决了一个技术难题。 /p p 　　节水节电减少污水排放 /p p 　　宋诙介绍道，酶法退浆精炼一次完成，不仅省去了传统处理工艺的高温，并且，酶法处理温度在低温下进行，大大降低了前处理过程中的蒸汽用量，显著节约了蒸汽能耗，与传统工艺相比，节约蒸汽25%—50%，节省电量40%。 /p p 　　生物酶法前处理工艺替代传统工艺中的烧碱退浆和烧碱精炼过程，意味着生物发酵产品可替代烧碱、精炼剂等化学制剂，因此，可大大降低处理后废水的pH值及COD值，精炼剂等化学制剂的有效取代可使前处理废水中得COD值降低60%以上。 /p p 　　“生物复合酶制剂具有处理条件温和、效率高、专一性好等特点，应用生物酶处理对棉纤维几乎没有损伤，而对于坯布上的淀粉浆料及PVA浆料具有高效的降解作用，可达到良好的退浆效果。”宋诙说，经该技术处理的棉纤维质量较传统方法提高许多。 /p p 　　对于印染企业关心的价格问题，宋诙表示，生物复合酶酶活效价高、用量少，价格与一般纺织助剂相当，不会提高处理成本，大多数纺织企业可接受。此外，应用生物酶进行前处理可通过降低蒸汽能耗、省去碱性废水处理成本、以及减少多种化学助剂用量，从而达到显著降低前处理成本的目的，提高纺织行业的经济效益。 /p p 　　“在天纺的酶法前处理工艺应用中，12000米纯棉棉布和11000米芳纶热波卡布的酶法前处理与传统碱法工艺比较，可分别降低成本30%和70%。”丁学琴说。 /p p 　　预计三年内推广到近20家企业 /p p 　　今年3月至6月，河北宁纺集团成功完成了16000米布以上的生物酶法前处理工艺的应用示范和推广。 /p p 　　此前，应用该生物复合酶的生物酶法前处理工艺在天津天纺集团首次试验成功，完成了累计大于300万米布的中试生产实验，实验品种包括军用迷彩、帐篷防水布、芳纶等等。 /p p 　　宋诙表示，接下来将与河北纺联继续合作完善技术推广工作，组成技术服务小组，服务全国印染企业，以及未来三年可完成10—20家纺织企业的推广应用，累计创造新增利润5000万到1亿元人民币。 /p p 　　在近日举办的生物纺织酶成果发布会上，前来参会的福建经销商告诉说，他认为该产品会受到印染企业的欢迎，他已决定代理该产品。 /p p 　　“我们也会进一步完善技术，同时针对印染的其他环节开展研发，开发出更多技术和产品。”宋诙说。 /p

p 　　单克隆抗体的生产方式赋予了它们复杂且具有异质性的分子特点。通常需要借助多种正交分析技术才能全面表征各种变体。 在本应用纪要中，我们使用质谱这种强大的工具对阿达木单抗进行了表征。 /p p 　　 strong span style=" color: rgb(0, 112, 192) " 简介 /span /strong /p p 　　Humira& reg (阿达木单抗)是一种FDA和EMA批准的抗TNFα抗体，被用于治疗多种炎症性疾病，包括类风 湿性关节炎、幼年特发性关节炎、银屑病关节炎、银屑病和克罗恩病。它是2014年销量最高的单克隆抗体产品，全球销售额超过130亿美元。 /p p 　　阿达木单抗是由CHO细胞表达的完全人重组抗体。 和所有通过重组DNA技术制备的蛋白质一样，其最终产品是不同变体的混合物。我们必须全面表征产品的异质性，因为这会影响其安全性和功效。 /p p 　　质谱是目前被广泛使用的生物药物表征技术之一。得益于硬件和软件的创新，该技术现已得到常规应用。在本应用纪要中，我们将使用质谱对Humira& reg 进行不同水平的表征。 /p p 　　 strong span style=" color: rgb(0, 112, 192) " 完整阿达木单抗的表征 /span /strong /p p 　　利用质谱分析单克隆抗体最简单的方式就是测定完整蛋白质的分子量。该检测可提供有关蛋白质鉴定和糖基化谱图的有用信息。 /p p 　　测定时需要对抗体脱盐，去除制剂缓冲液中的非挥发性盐类。脱盐步骤可使用超滤装置离线完成，但该过程非常耗时。配备反相色谱柱的液相色谱是一种替代方法：盐类在死体积内洗脱并被导入废液，然后用乙腈水溶液梯度将单克隆抗体洗脱到质谱仪的离子源中。 /p p 　　典型分析条件如表1所示。应当注意，考虑到传质限制，须采用较高的柱温以改善峰形，进而提高MS灵敏度。 /p p style=" text-align: center " 　　 span style=" color: rgb(0, 112, 192) " 表1：阿达木单抗完整质量数测定的分析条件 /span /p p style=" text-align: center" img src=" http://img1.17img.cn/17img/images/201711/insimg/83d0cd65-f7b9-4177-b0f7-5ff513e8505b.jpg" title=" 1_副本.jpg" / /p p 　　所得电喷雾质谱图为包络迹线，其中包括不同电荷态的蛋白质。使用MaxEnt& reg 算法进行去卷积处理，得到更容易解析的谱图(见图1)。通过去卷积谱图可轻松确定糖基化谱图。 /p p 　　在阿达木单抗上观察到的主要糖型为G0F/G0F和G0F/G1F，质量精度通常低于20 ppm。 /p p 　　如果需要测定不含糖基的蛋白质的分子量，为了简化谱图，可进行去糖基化。通常采用PNGase F酶去糖基化，但反应时间相当长(需要数小时甚至过夜)。为了加快分析速度，我们选用了Rapid PNGase F酶(纽英伦生物技术公司)。在50 ° C下温育10～15 min后， 获得完全去糖基化的抗体。该反应可在大多数制剂缓冲液中直接进行，无需更换缓冲液。对应的质谱图如图2所示。由于质谱图得以简化，我们可轻松观察到其它修饰，例如C端赖氨酸剪裁。 /p p style=" text-align: center" img src=" http://img1.17img.cn/17img/images/201711/insimg/da262e93-2bdb-4c3b-b5df-dfcf6b1eb709.jpg" title=" 2_副本.jpg" / /p p style=" text-align: center " 　　 span style=" color: rgb(0, 112, 192) " 图1：完整阿达木单抗的电喷雾质谱图(A)和MaxEnt& reg 去卷积质谱图(B)。 /span /p p strong span style=" color: rgb(0, 112, 192) " /span /strong /p p style=" text-align: center" img src=" http://img1.17img.cn/17img/images/201711/insimg/175a864c-b84f-4c37-bd2f-de937b179ade.jpg" title=" 3_副本.jpg" / /p p style=" text-align: center " 　 strong 　 span style=" color: rgb(0, 112, 192) " /span /strong span style=" color: rgb(0, 112, 192) " 图2：N-去糖基化阿达木单抗的电喷雾质谱图(A)和MaxEnt& reg 去卷积质谱图(B)。 /span /p p 　　 strong span style=" color: rgb(0, 112, 192) " IdeS酶解后的阿达木单抗亚基分析 /span /strong /p p 　　尽管完整质量数测定(经过或不经过去糖基化处理)已经能够快速简单地鉴定抗体及确定糖基化分布，高分离度对于色谱分离和质谱测定而言通常也很有价值。 /p p 　　完整抗体的大小(约150 kDa)限制了分离度。还原二硫键可得到轻链和重链，但在低丰度变体的测定中，重链(约50 kDa)仍然是一个问题。 /p p 　　IdeS酶(Genovis，商品名FabRICATOR& reg )是采用质谱法表征单克隆抗体时的重要工具。酶解并还原二硫键之后得到的肽段(见图3)分子量约为25 kDa，因此可采用LC/MS分析，而且色谱分离度和质量精度极佳。 此外，样品制备仅需不到一小时。该方法通常被称为 “自中而上”策略。 /p p 　　或者，也可使用IdeS和Rapid PNGase F(后者须在还原条件下反应)进行连续酶解，获得去糖基化的肽段。 /p p style=" text-align: center" img src=" http://img1.17img.cn/17img/images/201711/insimg/b21e335e-8fd8-445a-a855-c340edabcbd1.jpg" title=" 4_副本.jpg" / /p p style=" text-align: center " 　　 span style=" color: rgb(0, 112, 192) " 图3：用IdeS酶解mAb之后还原二硫键 /span /p p 　　为了大限度提高色谱分离度，我们优化了分析条件。 最关键的参数是色谱柱的性质以及流动相中所用的改性剂。 使用不同色谱柱获得的色谱图如图4所示。 /p p style=" text-align: center" img src=" http://img1.17img.cn/17img/images/201711/insimg/d4c71121-5a2b-4cc0-b26d-53ba57dfce8f.jpg" title=" 5_副本.jpg" / /p p style=" text-align: center " 　　 span style=" color: rgb(0, 112, 192) " 图4：使用不同HPLC色谱柱分离经IdeS酶解和二硫键还原所得的阿达木单抗肽段的结果比较 /span /p p 　　由图可观察到明显差异，购自Thermo的MabPac RP色谱柱所得的结果最佳。我们在该色谱柱上测试了两种改性剂： 甲酸(FA)和三氟乙酸(TFA)，以及这两种改性剂的混合物。 /p p 　　最佳分析条件如表2所示。图5展示了用IdeS酶解阿达木单抗之后，还原或不还原二硫键所得的色谱图。测得分子量的质量精度低于1 Da。得益于良好的色谱分离度，我们还可分离并定量各种变体，例如N端焦谷氨 酸、无糖基化变体或氧化物质。 /p p style=" text-align: center " 　　 span style=" color: rgb(0, 112, 192) " 表2：阿达木单抗亚基分析条件 /span /p p style=" text-align: center" br/ /p p style=" text-align: center" img src=" http://img1.17img.cn/17img/images/201711/insimg/6afe117f-4c86-4523-8404-641d94e12497.jpg" title=" 无标题_副本.jpg" / /p p style=" text-align: center " 　　 span style=" color: rgb(0, 112, 192) " 图5：经IdeS酶解和DTT还原的阿达木单抗样品的LC/MS分析结果 /span /p p style=" text-align: left " 　　该方法还可用于研究抗体氧化。我们使用不同浓度的H2O2 进行了强制氧化研究。在20 ° C下温育45分钟后， 用IdeS酶解样品，然后用DTT还原，最后通过LC/MS 进行分析。所得液相色谱图如图6所示。 /p p 　　不同峰的质谱鉴定非常简单直接。可明确测得Fc/2和 F(ab’)2 区域的氧化物质浓度增加。 /p p 　　在稳定性研究中，这种分析方法非常适用于监测单克隆抗体的氧化。亚基水平的分析能够粗略定位氧化位点。更精确的定位可通过肽图分析实现。 /p p style=" text-align: center" img src=" http://img1.17img.cn/17img/images/201711/insimg/e3b20720-c738-41e3-91c0-9912e87e02a5.jpg" title=" 6_副本.jpg" / /p p style=" text-align: center " 　 span style=" color: rgb(0, 112, 192) " 　图6：色谱图随H2O2 浓度增加发生的变化 /span /p p 　　 strong span style=" color: rgb(0, 112, 192) " 通过UPLC-UV-MS sup E /sup 肽图分析对阿达木单抗进行鉴定和目标纯度分析 /span /strong /p p 　　肽图分析策略涉及使用特定的蛋白酶(例如胰蛋白酶) 得到小分子肽，再利用LC与UV和/或MS检测联用的方法分析所得的肽混合物。 /p p 　　随着液相色谱和质谱技术不断进步，采用肽图分析法分析单克隆抗体现在已经能够达到接近100%的序列覆盖率，同时详尽表征翻译后修饰。 如今，人们在常规分析中使用亚2 µ m色谱柱获取高分离度肽图，而借助高分辨率质谱则能够以低于 5 ppm的质量精度实现肽的鉴定。 /p p 　　除了质量测定以外，还可使用MSE模式记录碎片数据。 在MSE采集模式下，仪器每秒交替采集低能量和高能量谱图，因此几乎可以同时获得分子质量和序列信息 (图7)。 /p p style=" text-align: center" img src=" http://img1.17img.cn/17img/images/201711/insimg/fbe321ec-3274-4d6b-acb9-2fe1c51b3e85.jpg" title=" 7_副本.jpg" / /p p style=" text-align: center " 　　 span style=" color: rgb(0, 112, 192) " 图7：MSE采集模式的原理。 /span /p p 　　过去MS检测通常仅用于方法开发，但随着功能强大且经过验证的软件被开发出来，质谱法现在也被应用于常规分析中。 /p p 　　放大后的阿达木单抗肽图分析基峰离子(BPI)色谱图如图9所示。这些数据使用表3所列的分析条件获得。 /p p style=" text-align: center" img src=" http://img1.17img.cn/17img/images/201711/insimg/4fac9c35-d14d-446a-89bb-bbf9abfa6226.jpg" title=" yaji_副本.jpg" / /p p style=" text-align: center " 　　 span style=" color: rgb(0, 112, 192) " 表3：阿达木单抗肽图分析的分析条件 /span /p p style=" text-align: center" img src=" http://img1.17img.cn/17img/images/201711/insimg/d1e374ea-bc16-4db0-a1c8-2da8667c190f.jpg" title=" 8_副本.jpg" / /p p 　　使用UNIFI软件解决方案(沃特世)基于分子量对每个峰进行鉴定(质量数容差5 ppm)，进而计算出序列覆盖率 (图8)。 必要时，可使用碎片数据(MSE)确证胰蛋白酶肽的鉴定结果。图10展示了碎片离子谱图的一个示例(MSE-高 能量)。 /p p style=" text-align: center" img src=" http://img1.17img.cn/17img/images/201711/insimg/b0cc8c39-7298-4968-af6d-87b4ec76d53a.jpg" title=" 9_副本.jpg" / /p p style=" text-align: center " 　　 span style=" color: rgb(0, 112, 192) " 图8：利用UPLC-UV-MSE对阿达木单抗进行肽图分析并采用UNIFI软件解决方案处理数据之后所得的序列覆盖图 /span /p p 　　肽图分析法还可用于评估单克隆抗体的纯度。完整质量数测定和亚基分析能够提供单克隆抗体纯度的大体情况，肽图分析法则能够进行目标纯度分析。可评估的主要修饰包括： /p p 　　■ 脱酰胺化 /p p 　　■ 氧化 /p p 　　■ 糖基化 /p p 　　■ N端焦谷氨酸 /p p 　　■ C端赖氨酸截断 /p p 　　即使UPLC肽图的分离度再高，色谱分离度通常也不足以通过UV检测对修饰进行相对定量。因此，我们使用MS数据进行定量分析。该过程可使用UNIFI等软件解决方案完全自动化地完成。 /p p style=" text-align: center" img src=" http://img1.17img.cn/17img/images/201711/insimg/daf3b1a7-ab1b-4c9c-ac80-08dea0ac6ed9.jpg" title=" 10_副本.jpg" / /p p style=" text-align: center " 　　 span style=" color: rgb(0, 112, 192) " 图9：阿达木单抗的肽图(BPI色谱图) /span /p p 　　使用该方法分析阿达木单抗样品，获得了如下结果： /p p 　　■ 序列覆盖率：100%(质量数容差10 ppm)。 /p p 　　■ 使用更苛刻的标准(质量数容差5 ppm， 至少以2b/y碎片离子确证鉴定结果)所得的序列覆盖率仍然非常高(93%)。 /p p 　　■ 重链上2.9%的N端谷氨酸以焦谷氨酸形式存在。 /p p 　　■ 大部分重链都不含C端赖氨酸(89%)。 /p p 　　■ 在轻链的152N上观察到了显著的脱酰胺化。 /p p 　　■ 观察到的主要糖型为G0F、G1F和G2F，相对强度分别为75%、23%和2%(基于糖肽EEQNSTYR)。 /p p style=" text-align: center" img src=" http://img1.17img.cn/17img/images/201711/insimg/93a63c98-dd03-4921-a7cf-236379984a3c.jpg" title=" 11_副本.jpg" / /p p style=" text-align: center " 　　 span style=" color: rgb(0, 112, 192) " 图10：阿达木单抗轻链T1肽的高能量MSE谱图(带标注) /span /p p 　　利用UPLC与荧光检测和高分辨率质谱检测联用的方法对阿达木单抗进行N-糖分析 /p p 　　大多数治疗性单克隆抗体都是IgG类抗体，在重链的Fc 区氨基酸297N处有一个糖基化位点(见图11)。 /p p style=" text-align: center" img src=" http://img1.17img.cn/17img/images/201711/insimg/30b15311-c672-40c6-aa50-920177aaee2e.jpg" title=" 12_副本.jpg" / /p p style=" text-align: center " 　　 span style=" color: rgb(0, 112, 192) " 图11：单克隆抗体中常见的N-糖 /span /p p 　　糖基化是单克隆抗体的一项关键品质属性，因为Fc区 域的N-糖特征可影响抗体与Fc受体的结合，从而调控 ADCC和ADCP活性。末端半乳糖对于补体依赖性细胞毒性(CDC)也很重要。最后，糖基还会影响治疗性抗体的安全性。 /p p 　　因此，必须采用灵敏且可重现的方法来表征单克隆抗体的糖基化以及批次间一致性。得益于优异的分离度和重现性，使用亚2 µ m色谱柱分析2-AB标记的N-糖成为了表征单克隆抗体的首选方法。不同游离寡糖的相对定量通常采用荧光检测法。 /p p 　　该方法的两个缺点是样品制备时间长(通常为2～3天)， 且很难鉴定低丰度游离寡糖。 /p p 　　我们对方案进行了优化，将样品制备时间缩短为不到一天，并结合高灵敏度MS/MSE和荧光检测建立了自动化MS工作流程。包括数据处理和报告在内的整个流程可在24小时内完成(见图12)。表4汇总了分析条件。 /p p 　　阿达木单抗的UPLC/FLUO色谱图如图13所示。 /p p style=" text-align: center" img src=" http://img1.17img.cn/17img/images/201711/insimg/448b85af-dfca-4b58-a3af-3513a8a0c928.jpg" title=" 13_副本.jpg" / /p p style=" text-align: center " 　　 span style=" color: rgb(0, 112, 192) " 图12：N-糖分析工作流程 /span /p p 　　 span style=" color: rgb(0, 112, 192) " 表4：阿达木单抗游离N-糖的分析条件 /span /p p style=" text-align: center" img src=" http://img1.17img.cn/17img/images/201711/insimg/df32e840-8042-4c12-a9a9-bffa7781485a.jpg" title=" Ntang_副本.jpg" / /p p style=" text-align: center" img src=" http://img1.17img.cn/17img/images/201711/insimg/8bd603a8-3e4d-4b31-8107-a23999844b42.jpg" title=" 15_副本.jpg" / /p p style=" text-align: center " 　　 span style=" color: rgb(0, 112, 192) " 图13：阿达木单抗N-糖分析所得的UPLC/FLUO色谱图 /span /p p 　　鉴定不仅基于游离寡糖的分子量，还基于“葡萄糖单元 ”(GU)校准。大多数情况下，将这两种方法相结合都能准确鉴定N-糖。必要时，可使用MSE模式下采集的碎片数据来确证鉴定结果，或者在两个假定结果之间做出选择。GlycoWorkbench应用程序可用于解析碎片谱图。带标注的MSE谱图示例如图14所示。 /p p style=" text-align: center" img src=" http://img1.17img.cn/17img/images/201711/insimg/3092e407-ec1b-42c8-b670-c1ca726e5f52.jpg" title=" 16_副本.jpg" / /p p style=" text-align: center " 　　 span style=" color: rgb(0, 112, 192) " 图14：分析阿达木单抗样品中的2-AB标记G0F游离寡糖所得的高能量MSE谱图(带标注) /span /p p 　　检出的主要N-糖(占所有检出N-糖的95%)列于表5中。 /p p style=" text-align: center " 　　 span style=" color: rgb(0, 112, 192) " 表5：阿达木单抗样品中检出的主要N-糖 /span /p p style=" text-align: center" img src=" http://img1.17img.cn/17img/images/201711/insimg/de10208a-c2b3-41e2-91a2-acf08569e5c8.jpg" title=" 17_副本.jpg" / /p p 　　有趣的是，使用本应用纪要所列的不同方法测得的要糖型比率非常一致(仅考虑所有方法都能检出的糖型，即G0F、G1F和G2F)，如表6所示。 /p p 　　表6：使用不同方法获得的阿达木单抗糖型测定结果比较 /p p style=" text-align: center" img src=" http://img1.17img.cn/17img/images/201711/insimg/753139b8-e6e8-4a94-9a6e-a0411df6303b.jpg" title=" 18_副本.jpg" / /p p 　　 strong 注：本文引自Quality Assistance的应用文章。 /strong /p p br/ /p