推荐厂家
暂无
暂无
【内容摘要】赭曲霉毒素是一种无色结晶化合物,溶于极性溶剂和稀的碳酸氢钠水溶液中,微溶于水。该化合物相当稳定,在乙醇中置冰箱避光保存一年以上而不破坏。有较高的耐热性,制罐头的豆子经漂白、加盐及在番茄酱中加热1h后,仍然能存留56%的赭曲霉毒素。赭曲霉毒素A是一种与人类健康密切相关的霉菌毒素,是人类可能的致癌剂。除了潜在的遗传毒性和致癌性外,赭曲霉毒素A也是一种具有免疫抑制、神经毒性以及致畸性的物质。赭曲霉毒素最初是从南非的赭曲霉毒株中分离出来的,由赭曲霉(Asper—gillus ochracets)、洋葱曲霉(Aspergillus alliaceus)、鲜绿青霉(PencillilJⅡlviridicatum)、徘徊青霉等代谢产生,包括7种结构类似的化合物,赭曲霉毒素A是其中毒性最强的物质,是自然界中的主要天然污染物。在一些国家的食品中,赭曲霉毒素A的污染率可达2%~30%。该化合物主要表现为肾脏毒性。在巴尔干地方性肾病流行区,6%~18%人群的血液中能检出赭曲霉毒素A。(1)结构与性质赭曲霉毒素是分子结构类似的一组化合物,包括赭曲霉毒素A、B、C、D和a等,其中赭曲霉毒素A是主要的污染物。赭曲霉毒素是一种无色结晶化合物,溶于极性溶剂和稀的碳酸氢钠水溶液中,微溶于水。在紫外光下赭曲霉毒素A呈绿色荧光。该化合物相当稳定,在乙醇中置冰箱避光保存一年以上而不破坏。有较高的耐热性,制罐头的豆子经漂白、加盐及在番茄酱中加热1h后,仍然能存留56%的赭曲霉毒素,赭曲霉毒素的化学结构如图4—2所示。(2)食品中赭曲霉霉素的来源与分布赭曲霉毒素是曲霉属和青霉属的某些菌种产生的二次代谢产物,产毒菌种见表4—2。[color=#075
[align=center][img=,600,400]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/09/201909251510100842_6082_932_3.jpg!w690x460.jpg[/img][/align]赭曲霉毒素A (Ochratoxin A)是曲霉属和青霉属的真菌形成的次级代谢产物,属烈性的肾脏毒和肝脏毒,广泛存在于各种食物中,谷物及其副产品是赭曲霉毒素A的主要来源。动物实验表明摄入了被这种毒素污染的饲料后,会发生急性或慢性中毒症。防止污染赭曲霉毒素A的食品和饲料直接或间接地进入人类食物链,加强对赭曲霉毒素A的检测十分重要。我们今天做的就是菜籽油中的赭曲霉毒素A的检测。[b]适用范围[/b]适用于食品中赭曲霉毒素A的测定(本实验用菜籽油为基质)。参考标准:《GB 5009.96-2016 食品安全国家标准食品 中赭曲霉毒素A的测定》[b]提取步骤[/b]1) 称取5.0 g(精确至0.1g)样品于离心管中,加入1g氯化钠,10ml提取液,振荡,超声20min,离心8000r/min 10min,移取上清液;往原先离心管中再加入10ml提取液,再提取一次,移取上清液后;再加入5ml提取液,再提取一次,合并三次上清液。2)准确移取15mL上清液,加入30mL磷酸缓冲液,混匀,并过玻璃纤维滤纸,待净化。[b]SPE净化步骤[/b]SPE柱:月旭赭曲霉毒素A免疫亲和柱 规格: 3mL。活化:将赭曲霉毒素A免疫亲和柱放置到室温,然后将小柱中的缓冲液流出,弃去;上样:取净化液30mL上样,控制流速,不宜过快,弃去;淋洗:10mL磷酸缓冲液,10mL水,弃去,抽干小柱;洗脱:2mL甲醇洗脱,收集于15mL离心管中,抽干将洗脱液置于45℃下氮吹吹干,用乙腈-2%乙酸水溶液复溶并定容到1mL,上机测定。[b]色谱条件[/b]色谱柱:月旭UltimateXB-C18 4.6×150mm,5μm;流动相:A冰乙酸-水(2+100),B-乙腈;等度洗脱条件:A-B(50+50);流速:1.0mL/min;柱温:30℃;进样量:10μL;检测波长:激发波长:333nm;发射波长:460nm。[align=center][b]谱图和加标回收率结果[/b][/align][align=center][img=,600,225]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/09/201909251510131735_1341_932_3.jpg!w690x259.jpg[/img][/align][align=center]图1.赭曲霉毒素A 2ng/mL图谱[/align][align=center][img=,600,226]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/09/201909251510165098_504_932_3.jpg!w690x260.jpg[/img][/align][align=center]图2.赭曲霉毒素A 5ng/mL图谱[/align][align=center][img=,600,225]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/09/201909251510197052_8694_932_3.jpg!w690x259.jpg[/img][/align][align=center]图3.样品加标1μg/kg图谱[/align][align=center][img=,600,224]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/09/201909251510237056_9591_932_3.jpg!w690x258.jpg[/img][/align][align=center][/align][align=center]图4.样品加标2.5μg/kg图谱[/align][align=center][/align][align=center][img=,600,139]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/09/201909251510278360_2018_932_3.png!w479x111.jpg[/img][/align][align=center]表2.加标回收表[/align][align=center][b]相关产品信息[/b][/align][align=center][img=,600,373]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/09/201909251510308133_6112_932_3.jpg!w690x429.jpg[/img][/align]
赭曲霉毒素是继黄曲霉毒素后又一个引起世界广泛关注的霉菌毒素。现已发现有7种曲霉和6种青霉菌能产生赭曲霉毒素A。该毒素主要污染粮谷类农产品如燕麦、大麦、小麦、玉米、动物饲料和动物性食品(如猪肾脏、肝脏)等。赭曲霉毒素主要侵害动物肝脏与肾脏。这种毒素主要是引起肾脏损伤,大量的毒素也可能引起动物的肠黏膜炎症和坏死。还在动物试验中观察到它的致畸作用。其中,赭曲霉毒素的毒性强弱顺序是:OTAOTCOTB,本实验主要针对小麦粉中赭曲霉毒素A的测定。[align=center][img=,473,387]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/10/201910101354410395_842_932_3.jpg!w473x387.jpg[/img][/align][align=center]赭曲霉毒素[/align][b]参考标准[/b]《GB 5009.96-2016 食品安全国家标准 食品中赭曲霉毒素A的测定》第一法[b]实验步骤[/b]甲醇-水(80:20):80mL甲醇+20mL水,混匀磷酸缓冲溶液:称取8.0g氯化钠,1.2g磷酸氢钠,0.2g磷酸二氢钾,0.2g氯化钾溶解于约990mL水中,用浓盐酸调节pH至7.0,用水稀释至1L[b](1)样品提取[/b]称取5g小麦粉试样于50mL离心管中,加20mL甲醇水(80:20)混合溶液,震荡30min:8000r/min离心3min, 移去10mL上清液,加入磷酸缓冲溶液40mL,经过8000r/min离心3min备用。[b](2)样品净化[/b]活化:将赭曲霉毒素A免疫亲和柱放置到室温,然后接上注射器上样:将上述提取液全部转移到注射器上,以1滴/s的速度通过免疫亲和柱,弃流出液淋洗:先用10mL磷酸缓冲溶液淋洗,再用10mL水淋洗,然后将小柱抽干洗脱:准确加入1mL甲醇洗脱至进样瓶中,抽干,待HPLC分析。[b](3)仪器条件[/b]HPLC条件色谱柱:Welch Ultimate AQ-C18 4.6×150mm,5μm仪器型号:waters2695+FLR2475流动相:A:2%冰乙酸水溶液 B:乙腈 等度洗脱:A:B(50:50)柱温:35℃流速:1.0mL/min检测波长:激发波长333nm 发射波长 460nm 进样体积:10μL[b](4)实验图谱及结果[/b][align=center][img=,600,480]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/10/201910101354467891_1843_932_3.jpg!w640x513.jpg[/img][/align][align=center]图1 赭曲霉毒素A样品加标1μg/kg液相色谱图[/align][align=center][img=,600,482]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/10/201910101354514477_6243_932_3.png!w640x515.jpg[/img][/align][align=center]图2 赭曲霉毒素A样品加标2μg/kg液相色谱色谱图[/align][align=left]由表1可知,采用免疫亲和柱结合液相色谱法检测赭曲霉毒素A,加标量为1μg/kg和2.0μg/kg的样品进行了检测,回收率在85.33%~101.94%,能够满足检测要求。由图1可看出经赭曲霉毒素A免疫亲和柱净化,采用月旭Xtimate C18色谱柱检测峰形良好,保留时间稳定。[/align][align=left][/align][align=center][img=,600,86]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/10/201910101354562430_2197_932_3.jpg!w593x85.jpg[/img][/align][align=center]表1 赭曲霉毒素A加标回收实验结果(n=6)[/align][b](5)实际样品检测[/b]为了保证小麦粉样品的代表性,从多家超市以及菜场选择具有代表性的10个小麦粉样品进行检测,结果均为未检出。[b](6)结论[/b]本实验建立了赭曲霉毒素A检测的HPLC检测方法,对于加标量为1.0和2.0μg/kg的样品进行了检测,回收率在85.33%~101.94%,符合国标要求,免疫亲和柱方法稳定并且色谱柱重现性良好,说明本方法能够用于检测食品中的赭曲霉毒素A的含量。[b](7)订购指南[/b] [table=825][tr][td=1,1,114][b]订货号[/b][/td][td=1,1,221][b]产品名称[/b][/td][td=1,1,490][b]包装规格[/b][/td][/tr][tr][td]01140-06032[/td][td]Welchrom 赭曲霉毒素免疫亲和柱[/td][td]3mL,15支[/td][/tr][tr][td]00207-31041[/td][td]Ultimate AQ-C18[/td][td]5.0μm,4.6×150mm[/td][/tr][tr][td]031888-07[/td][td]赭曲霉毒素A标准品[/td][td]CAS No.:303-47-9,10 mg/l于乙腈:甲醇=1:1,1ml[/td][/tr][tr][td]00000-30016[/td][td]50mL螺口尖底离心管[/td][td]50支/包[/td][/tr][tr][td]00824-31001[/td][td]Welch 固相萃取装置[/td][td]12位方缸[/td][/tr][tr][td]WEL-REX-25A[/td][td]固相萃取配套真空泵[/td][td]抽气流量:25L/min[/td][/tr][tr][td]00802-02201[/td][td]针头式过滤器 Nylon[/td][td]13*0.22 100pk[/td][/tr][tr][td]00824-11101[/td][td]一次性注射器[/td][td]200pk/盒 带针头 橡胶头 1ml[/td][/tr][tr][td]00821-32291[/td][td]盖子+垫片[/td][td]预切口红色特氟龙/白色硅胶隔垫,9mm蓝色短螺纹开口盖 中心孔6mm 100pk[/td][/tr][tr][td]00821-40927[/td][td]样品瓶[/td][td]2ml 透明短螺纹广口样品瓶 带书写处 11.6*32mm 一级水解玻璃 100pk[/td][/tr][tr][td]00814-01010[/td][td]乙腈-HPLC级[/td][td]4L[/td][/tr][tr][td]00814-01008[/td][td]甲醇-HPLC级[/td][td]4L[/td][/tr][/table][align=center][/align][align=center][/align]