氧自由基测试仪

自由基在化学反应中有着重要的作用，如何测试自由基，是本次培训的主要内容。包括（1）测试自由基需要注意的问题；（2）使用的电子顺磁共振波谱仪测试自由基的八个实验参数；（3）进口和国产电子顺磁共振波谱仪测试

抗氧化剂是如何清除自由基的？抗氧化剂在提供给自由基一个电子后，本身产不产生新的自由基？具体机理是怎么样的？谢谢！

[b][size=5][size=5]请教各位，如何进行抗氧化清除羟自由基和超氧阴离子自由基的实验，因我刚入门，能否提供一些指导和文献。[/size]谢谢[/size][/b]

楼主最近刚收到审稿意见，审稿人说：Moreover, the EPR signals should be normalized using an internal standard (e.g. Mn2+).请问各位大佬，测试羟基自由基（目前测试就是50uL待测液体加5uL DMPO）如何加内标法，这种方法科学吗，锰离子在这种测试条件下出峰吗

先说说什么是自旋捕获吧，EPR是一种波谱学仪器，它是检测未成对电子的一种波谱学方法，自由基即是带有未成对电子的体系。但是既然是仪器，就有其特定的检测限，这个限一个限在样品量，另一个就是时间。样品量的限度不同型号有不同的最低检测限，Bruker的通常在10的9次方量级，基本上可达nMol量级吧，但是这个量级是样品中同一时刻（即检测时刻）的未成对电子量。而检测时间，对于扫场实验来说，一般是在分钟量级，即样品中的未成对电子的寿命起码要在分钟量级。问题就来了，很多氧化性很强的自由基，比如羟基、超氧、碳中心自由基等，它们化学性质都非常活泼，所以同一时刻的寿命会非常短，分钟量级的时间检测限，根本测不到它们的信号。为了实现检测，人们找到了一种自旋捕获剂的化学分子，它们会与这些寿命短的自由基结合，生成一种寿命较长的自旋加合物（spin adduct),加合物的寿命通常在10分钟到2小时不等。[img]https://mmbiz.qpic.cn/mmbiz_png/X8l5lSW5ibxauQAJolLvrTHWBPWDdcibFqh1nPPibMGhTeIm9TXLGicLAhRZRYfibBwtlygwEnURNSyqsOMdhLcT16g/640?wx_fmt=png&wxfrom=5&wx_lazy=1&wx_co=1[/img]商用捕获剂通常有几种，最常见的是PBN和DMPO，PBN由于其自旋加合物谱图没有特异性，因此多用来定量，但是其耐高温，可以接受一定程度的光照。与之对应的DMPO，其谱图具有很好的特异性，因此多用来定性和定量，但是DMPO不能承受高温，有个别用户研究发现，其UV光照也易分解。这两种捕获剂呢都可以从很多商业平台购买，但是通常买来的是纯的（DMPO一般在两千多1ml吧），不纯的会便宜很多，但是需要用户自行再提纯一次。通常一个捕获剂分子能捕获一个分子的自由基基团，不能重复利用，因此需要用户自行对自己体系中可能产生的自由基量进行估计，然后DMPO的加入量需要在自由基量的50-100倍的浓度（以防漏掉一些自由基，以及考虑到反应效率的问题）。新购置的DMPO，用户可以根据自己平时需要的浓度进行初步的稀释，稀释之后平均分成10份或20份，然后每一小份进行除氧处理，之后密封好放入-20摄氏度的冰箱中保存。每次实验使用时，拿出一小份，一次用完，如果用不完，没有污染的情况下，可以考虑再次除氧之后密封保存（建议是小份的量可以做到一次用完，接触氧之后，容易变质，不易再长期保存）。然后先把样品反应物中的一样处理好，之后加入DMPO，再然后加入第二反应物。即有一个要点：在反应开始之前把DMPO加入！至于DMPO的浓度，需要根据不同的反应，评估生成自由基的量，再根据这个量评估DMPO需要加入的量。加入第二反应物之后，尽快取样，进行EPR测量！通常用仪器默认的参数即可测到这些捕获后的自旋加合物的信号，如果一时测不到，可以考虑二维时间实验，等待一段时间，即给体系一些反应时间，让DMPO与自由基充分反应，累积一定的加合物的量之后再进行EPR检测。当然，如果不放心就做二维实验，一般都不会有太大的问题。得到初始信号之后，再进行EPR实验参数优化，调整功率及调制幅度，达到最优，不过，一般文献中DMPO-羟基都是用10dB，即20mW.关于参数优化，将会在EPR实验中再详细讲述。

春节好 求助氮氧自由基哌啶醇含量化验方法 谢谢！

[b][b]韩瑶等，报道了一种新颖的测定羟基自由基的方法，该方法是通过二甲基亚砜（DMSO）捕获羟基自由基生成甲醛,再与衍生试剂2,4-二硝基苯肼（DNPH）反应生成相应的腙（HCHO-DNPH）,并用高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]法进行分析测定。研究了衍生试剂浓度、pH、不同衍生温度和衍生时间对衍生化反应的影响,确定衍生试剂浓度为270μmol/L,pH=4,温度为50℃,时间为30 min的最佳衍生化条件。对羟基自由基的检出限为0.0027 mmol/L,定量限为0.0090 mmol/L,平均回收率范围为102.41%～117.61%,相对标准偏差小于8%，该方法新颖独特，能为相关研究者提供有益借鉴。详见分析科学学报[font=&][size=12px][color=#666666]. [/color][/size][/font]2021,37(02)。[/b][/b]

实验目的:用DMPO捕获Fenton中的羟基自由基实验步骤:按照H2O2与二价铁摩尔比4:1投加（H2O2为100mM，二价铁25mM），调节pH为3，加入DMPO。实验现象:在加入DMPO后溶液由浅黄色(Fenton正常颜色）迅速变为紫黑色。反应5min后用毛细管吸取测量。峰型如下。有一些疑惑:首先可以看到是三线峰，查阅文献单线态氧为三线峰，但文献提出单线态氧的捕获剂是TEMP，与我的捕获剂DMPO不符。那么这又是什么呢？其次，三线峰两边的波浪又是怎么引起的？为什么没有捕捉到羟基自由基？同时做了羟基自由基猝灭实验，发现去除率降低很多，那可以解释羟基自由基为主要的氧化物质。为何EPR没有测出来？DMPO是网上刚买的，低温保存，应该没有问题吧？[img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/03/202203301806101717_7304_5399976_3.png[/img]

在合成高分子时,有时回用到很多稳定存在的自由基,能用NMR测量吗??怎样测量??跟普通的物质一样吗??

请问有没有化学法测气体中的自由基的方法？我想用自由基捕捉剂捕捉非平衡等离子体中的OH自由基，用什么样的捕捉剂较好？

有关油脂抗氧化清除自由基的实验问题请教各位大侠：我最近做某种子油的抗氧化活性实验，采用的是Fenton法测定油脂清除羟自由基的活性，邻苯三酚自氧化法测定油脂清除超氧阴离子的活性，但均未重复出文献中的实验结果。我是用乙醇配制的油脂溶液。不知道我的问题出在哪里，请有经验的大侠支支招。谢谢

羟自由基清除能力方法研究1.实验原理经典的Feton反应是在Fe2+催化下H2O2释放HO·，而HORAC方法是以Feton反应的基础上改进而来，即以Gallic Acid或Trolox为定量标准，根据自由基破坏荧光探针使荧光强度产生变化的原理，以荧光素钠盐（FL）为荧光物质，过氧化氢在金属离子M诱导下释放羟自由基，将荧光素钠盐氧化，荧光强度变化的大小反映自由基破坏的程度。当抗氧化剂存在时，可与金属离子反应，抑制金属离子与过氧化氢反应，减少羟自由基产生，从而减缓其荧光衰退的速度，抑制程度反映了它对自由基的抗氧化能力(图1)。FL+M+H2O2 oxidized FL (loss of fluorescence) M+ L（antioxidant） M(L) http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2013/10/201310311654_474585_1613776_3.gif图1 HORAC检测示意图2.实验方法样品、空白和标准物质(Trolox)各20μL，分别与160μL的荧光素溶液混合均匀，37℃保温10min，然后再加入10μL过氧化氢溶液与10μL金属离子溶液，混匀后迅速利用荧光酶标仪配备软件记录荧光强度，初始荧光强度值记为f0。迅速开始测定，以后每隔一段时间测定一个点，荧光强度分别记为f1, f2, f3 …，抗氧化剂作用下荧光衰减曲线下的积分面积，扣除无抗氧化剂的空白曲线下面积，得出抗氧化剂的曲线下净面积(net area under the curve, net AUC)。抗氧化剂的HORAC值是通过其荧光衰退曲线的net AUC与标准物质Trolox的net AUC相比得出的。HORAC值以Trolox当量μmol Trolox equivalent/g (μmol TE/g)或μmol Trolox equivalent/L (μmol TE/L)表达。3.试剂溶液的制备3.1磷酸盐缓冲溶液3.1.1缓冲溶液储备液0.75 M Na2HPO4：268.6 g Na2HPO4·12H2O溶于1 L ddH2O；0.75 M NaH2PO4：90 g NaH2PO4溶于1 L ddH2O。3.1.2缓冲溶液工作液分别量取Na2HPO4贮备液81 mL，NaH2PO4贮备液19 mL，混合后用ddH2O定容至1000 mL，这样得到75 mM，pH 7.4的缓冲溶液，冰箱下贮存。3.2荧光素钠盐溶液荧光素钠盐贮备液1：称取0.0456g荧光素钠盐定容到100mL磷酸缓冲液，4℃黑暗贮存；荧光素钠盐贮备液2：1000μL贮备液1用磷酸缓冲液定容至100mL，4℃黑暗贮存；荧光素钠盐工作液：800μL贮备液2用磷酸缓冲液定容至100mL，4℃黑暗贮存。3.3 Trolox标准溶液的配制5.00mg Trolox定容到10mL磷酸盐缓冲液中，得到2mM的贮备液，4℃黑暗贮存。然后用磷酸缓冲溶液依次稀释成10，20，40，60，80，100μM的工作液；相同的方法来配制6.25，12.5，25，50，100μM的Trolox工作液。3.4 Gallic Acid标准溶液的配制 0.17012g Gallic Acid定容到100 mL磷酸缓冲液中，得到10mM的贮备液，4℃黑暗贮存。然后用磷酸缓冲溶液依次稀释成100，200，400，600，800μM的工作液。3.5 过氧化氢溶液 30%的过氧化氢溶液（8.8M）用双蒸水稀释至0.53M。3.6 Fe(Ⅲ)-EDTA溶液[f

[font=宋体][font=宋体][font=Calibri]2022[/font][font=宋体]年[/font][font=Calibri]8[/font][font=宋体]月[/font][font=Calibri]20[/font][font=宋体]日，第二十六届高校分析测试中心研究会年会暨第二届中国分析测试协会高校分析测试分会年会在镇江市开幕，在本次年会上主办方宣布了第一届 “信立方杯”[/font][/font][font=宋体][font=宋体]高校分析测试技术培训微课大赛的最终评选结果，并进行了颁奖。清华大学分析中心磁共振实验室杨海军老师团队的作品《如何测试自由基？》在众多优秀参赛作品中脱颖而出，得到了专家们及广大观众的认可，荣获得唯一的一等奖。[/font][/font][font=宋体][font=宋体]详细内容[/font][font=Calibri], [/font][font=宋体]可以查看仪器信息网的报道消息[/font][/font][font=宋体][font=宋体]。[/font][/font][/font]

做羟基自由基氧化氨氮实验，用氯化铵配水，反应后氨氮浓度测不准，测出的氨氮浓度一直升高是什么原因？用纳氏试剂测的氨氮，依靠催化臭氧产生羟基自由基。

我现在在用荧光法测羟基自由基，捕获剂是对苯二甲酸，但是不知道怎么测羟基自由基的绝对含量，希望大家告诉我。谢谢！

不知各位朋友有没有检测过水中OH自由基的含量，是用什么方法检测的？能不能给点解答，谢谢大侠们了！

各位老师，我想测污染物与自由基反应的二级速率，但是在光源选择和探针方面不是很懂。看过一篇论文，每测一种自由基，就换一种光源，我不大理解，不知道实验室的条件能否满足。延毕的大龄女博士，恳请各位老师的帮助

各位老师好：[font=微软雅黑][color=#444444]我做农药在水中光降解机理，想加入猝灭剂看是什么自由基参加的，求出他们的贡献率[/color][/font][font=微软雅黑][color=#444444]1 异丙醇，苯醌，草酸钠这些猝灭剂的用量问题不知道怎么确定[/color][/font][font=微软雅黑][color=#444444]2 有文献说通氮气，然后密封试管，来排除溶解氧的影响，我做这些猝灭试验的时候，需要先通氮气处理吗[/color][/font]

有做自由基的吗？可以在线讨论.[em09511]

[b][size=4]日本研究人员日前开发出一种用芝麻成分检测人体中有害物质自由基的新方法。 日本东京大学研究人员报告说，芝麻中含有的芝麻酚与自由基接触时，会发出荧光，他们据此开发出了测定自由基的新方法。研究人员说，芝麻酚本身不发光，但与自由基接触后，两个芝麻酚分子会结合 生成二聚物，并发出荧光。 研究人员在人体血浆中加入芝麻酚，然后用荧光亮度检测仪进行测定，结果发现新方法能灵敏地检测出自由基的存在。 自由基是机体细胞新陈代谢的副产物，过多自由基堆积体内，被认为是导致衰老及癌症、心脏病等疾病的重要因素。[/size][/b]

如何用核磁检验自由基存在，证明其机理？

想用激光闪光光解测定水体中的卤素自由基，之前有同学测出来过，但是帮助测样的老师出国后失去联系，并且该仪器坏了，之后学院新买了激光闪光光解仪LP920，就再也测不出来，想问问各位，有人了解怎样测的吗？或是有人知道其他的检测方法吗？求指点

[b][size=3]日本研究人员日前开发出一种用芝麻成分检测人体中有害物质自由基的新方法。 日本东京大学研究人员报告说，芝麻中含有的芝麻酚与自由基接触时，会发出荧光，他们据此开发出了测定自由基的新方法。研究人员说，芝麻酚本身不发光，但与自由基接触后，两个芝麻酚分子会结合 生成二聚物，并发出荧光。 研究人员在人体血浆中加入芝麻酚，然后用荧光亮度检测仪进行测定，结果发现新方法能灵敏地检测出自由基的存在。 自由基是机体细胞新陈代谢的副产物，过多自由基堆积体内，被认为是导致衰老及癌症、心脏病等疾病的重要因素。[/size][/b]

如果得到的样品可能是自由基，如何用NMR进行检测？自由基的谱图有什么不同？

大家看看，多多支持！[img]http://www.instrument.com.cn/bbs/images/affix.gif[/img][url=http://www.instrument.com.cn/bbs/download.asp?ID=25416]自由基化学[R[1].L.Huang][/url]

[color=#444444]常用的羟基自由基淬灭剂有哪些？具体用量是多少？[/color]

我们用水杨酸浸渍膜来捕获羟基自由基，捕获液尝试过用0.05水杨酸溶于500ml 35%乙醇（这是过去师姐总结的方法），但我们现在用这个方法无法检测出2.5-二羟基苯甲酸，只检测出水杨酸，标准样是可以出峰的，所以色谱仪和色谱柱应该是没有问题，那么方法应该怎么改进。问题来了：水杨酸捕获液的浓度应该多少？具体怎么配制？检测波长设定多少？捕获时间要多长？

做的颗粒物，在水中重悬，加DMPO，但对照组（只有水）也测到了羟基自由基，应该怎么避免

气相和液相条件下，氯自由基的寿命是多少？