海泥黄杆菌

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  • 革兰氏阳性芽孢杆菌和球菌

    革兰氏阳性芽孢杆菌和球菌,该类群中与食品关系密切的菌属如下。1.芽孢杆菌属(Bacillus)该属可形成芽孢,对不良环境条件有很强的抵抗力。需氧或兼性厌氧,绝大多数菌种产生过氧化氢酶。该菌广泛分布于土壤、植物、腐殖质及食品上。其中包括人和动物的病原性细菌炭疽芽孢杆菌(B.anthracis)、食物中毒性细菌蜡样芽孢杆菌(B.cereus)、昆虫的病原菌苏云金芽孢杆菌(B.thuringiensis)、可用于食品工业生产的枯草芽孢杆菌(B.subtilis)。此外,也包括一些可引起食品腐败变质和食物中毒的菌种。(1)蜡样芽孢杆菌(B.ccrcl2S):该菌广泛分布于土壤、水、调味料、乳及咸肉中,污染牛乳后可产生卵磷脂酶,破坏脂肪球膜,使得脂肪不能很好地乳化,还可以产生类似凝乳酶的酶,使乳在酸度不高时即可发生凝固。蜡样芽孢杆菌的生长温度为10~48℃,pH值为4·9~9·3,发芽温度范围为1~59℃。该菌污染食品后,可以引起食品腐败变质,并且产生下痢性毒素、肠毒素、溶血素、呕吐毒素及肠管坏死毒素等,引起人食物中毒。(2)枯草芽孢杆菌(B.subtilis):该菌菌落呈圆形或不规则形状,表面粗糙或有皱纹,呈奶油色或褐色,菌落形态与培养基成分有关。枯草芽孢杆菌污染面粉后,可以使发酵面团产生液化黏丝状现象,使烤制的面包**头出现斑点或斑纹,并且伴有异味。在肉类表面可产生黏液并有异味。在肉类罐头及其他肉制品上经常可以分离到该菌,但在密封的罐头中较少引起变质。在牛乳中生长,可以使牛乳变稠,有时在不变酸时使牛乳凝固,即产生所谓的甜凝乳现象。(3)巨大芽孢杆菌(B.megaterium):该菌可以在含氨的环境中生长,不需要生长因子,无卵磷脂酶活性。在厌氧条件下,于葡萄糖肉汤中不生长,多数菌株可在培养基中产生黄、粉红、褐或黑色色素。适宜生长温度为28~37℃。该菌可以从鲜乳、消毒乳、于酪、肉类等食品中分离到,可使浓缩乳凝固并产生干酪味和气体,使肉类罐头变质胀罐。(4)嗜热脂肪芽孢杆菌(B.stearothermophilus):该菌菌落为圆形或不规则圆形小菌落,表面光滑或粗糙,能在49~65℃范围内生长,对热的抵抗力很强。该菌在pH值5.0以下的培养基上不生长。该菌主要可引起罐藏食品和淀粉类食品的腐败。(5)凝结芽孢杆菌(B.coagulans):该菌菌落为不透明的小菌落,生长温度范围为18~60℃,可在酸性条件下生长。在有氧条件下于葡萄糖肉汤中生长,产生醋酸、乳酸和CO2。在厌氧条件下主要产生乳酸,不产气。该菌能在pH值3.5~**5的食品中生长,引起食品变质,罐头食品变质后外观不膨胀。在炼乳罐头中,通常使乳形成坚实凝结,偶尔呈碎片状凝结,并有乳清析出。此种变质亦常发生于含有蔗糖的乳制品中。2.梭菌属(Clostridium)该属的绝大多数种为厌氧菌,只有少数种可在大气条件下生长,但在大气中不形成芽孢。该属菌形成的芽孢多呈球形,位于菌体中央,使菌体呈梭状。对不良环境条件具有极强的抵抗力。该属菌对营养的需要因菌种不同而异。可耐受2.5%~6.5%NaCl浓度的渗透压,对亚硝酸钠和氯敏感。梭菌广泛分布于土壤、下水污泥、海水沉淀物、腐败植物、食品、人和其他哺乳动物的肠道内。该属中的一些菌种如丁酸梭菌(C.butyricum)可分解碳水化合物产生各种有机酸(乙酸、丙酸、丁酸)和醇类(乙醇、异丙醇、丁醇),在食品加工上可用于生产某些酸、醇和酮类。一些菌种如腐化梭菌(C.putrefaciENs)分解蛋白质和氨基酸,产生H2S、硫醇、甲基吲哚(粪臭素)等具有恶臭味的腐败产物,在乳中生长时可使乳中酪蛋白完全胨化,在熟肉上生长使肉变黑,在罐头中生长时,因产气使罐头发生膨胀。肉毒梭菌(c.botulinum)在食品中增殖时可产生肉毒毒素,当人们食入含有该毒素的食品时,可发生毒素型食物中毒,早期症状为全身无力、头痛、头晕,继而出现眼睑下垂、视力模糊、瞳孔散大、吞咽困难等症状直至死亡。此外某些梭菌如破伤风梭菌(C.terni)是人和动物的破伤风病病原菌。

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  • 乳饮料被“紧急召回” 因肉毒杆菌致病?
    新闻背景:近日微信朋友圈又一条信息疯传 &ldquo 今接妇幼保健院提示,请不要给宝宝喝爽歪歪、旺仔牛奶等牛奶饮料,都含有肉毒杆菌,现在紧急召回。&rdquo &ldquo 喝了会导致白血病&rdquo 。这让很多家长十分担心:什么是肉毒杆菌?乳饮料中会有肉毒杆菌吗?有何危害?   肉毒杆菌没有毒!肉毒毒素才是&ldquo 真凶&rdquo !   说到肉毒杆菌,很多人首先是想到它毒性很强。不过,我还是想说,看到这个消息,首先还是不要太恐慌。   肉毒杆菌的全名叫肉毒梭状杆菌(Clostridiumbotulinum,也叫肉毒梭菌),是自然界广泛存在的一种细菌,比如土壤、动物粪便中经常可以见到它,它们可以随着空气中漂浮的灰尘、小液滴飘散到四面八方,继而污染我们的食品。在食品生产过程,由于很难做到所有生产环境都无菌,乳饮料生产过程中也是可能被肉毒梭菌污染的。   不过,即使存在肉毒杆菌并不意味着一定有毒害。具有卫生学意义的检验在于是否检出肉毒毒素。若只检出肉毒梭菌,但未检出肉毒毒素,不能证明此食物会引起肉毒中毒。   肉毒杆菌家族一共兄弟7个,本身其实没有毒性,但其中有4个能在一定条件下产生肉毒毒素。肉毒毒素是一种毒性很强的物质,不到1微克就可以置人于死地。而且这种毒素具有较强的耐酸性,不但胃液无法破坏其毒性,胃肠道的蛋白酶也对其无计可施。   肉毒毒素不容易&ldquo 被生产&rdquo 且易&ldquo 被杀死&rdquo   但是,要想产生肉毒毒素也不是一件特别容易的事情。肉毒杆菌能够繁殖和产毒条件相当苛刻:要严格隔绝空气,还要适宜的水分活度、营养条件、环境温度。当这些条件有一个不满足的时候,它就不能繁殖,也不能产生毒素。   也正因为肉毒杆菌生存繁殖所需要的苛刻条件,虽然肉毒杆菌它在自然界常见,但食品污染却比较少见,而且主要出现在家庭自制食品。目前还没有因为喝乳饮料导致肉毒杆菌中毒是案例。我国引起中毒的食品大多是家庭自制的发酵食品,如豆瓣酱、豆酱、豆豉、臭豆腐等,有少数发生于各种不新鲜肉、蛋、鱼类食品 在我国的新疆、青海等少数民族地区几乎每年都会出现自制发酵肉制品导致的肉毒中毒、甚至死亡。日本以鱼制品引起中毒者较多 美国以家庭自制罐头、肉和乳制品引起中毒者为多,欧洲多见于腊肠、火腿和保藏的肉类。   而且,虽然肉毒素的毒性很强,但是它自己也有很明显的弱点:怕热。肉毒素对热很不稳定,通常75-85℃,加热30分钟或100℃,10分钟可被破坏,煮开几分钟就破坏掉了。   肉毒素中毒不会导致白血病   还有人问肉毒杆菌会导致白血病吗?其实,肉毒素中毒是神经型食物中毒,中毒时,肉毒素可抑制神经传导介质&mdash 乙酰胆碱的释放,其症状主要是神经系统症状,如视力模糊、眼脸下垂、复视、瞳孔散大、语言障碍、吞咽困难、呼吸困难,继续发展可由于呼吸肌麻痹引起呼吸功能衰竭而死亡,并没有证据认为肉毒中毒会导致白血病。   事实上,这条朋友圈消息已经被证实为谣言。当地的记者向妇幼保健院和食药监部门打电话求证了,都证实没有发布过相关消息,这条消息完全是捏造的,大可不必恐慌。   肉毒杆菌真正的麻烦:&ldquo 芽孢&rdquo   说了这么多也不是想告诉大家完全不用担心肉毒梭菌。肉毒杆菌真正的麻烦在于它的芽孢。肉毒梭菌芽孢抗热性很强,但是有芽孢也不意味着有毒,芽孢还没开始生长就不产生肉毒毒素,因此,通常认为对人是无害的。然而,在儿童体内,由于肠道菌群的缺乏,肉毒梭菌的芽胞在儿童的肠道弱碱厌氧环境中是能够产毒的,也就是说即便将食物中的肉毒素破坏掉,但是对儿童的危害是不容忽视的。因此,被肉毒梭菌污染的食物是不能给小于1岁的孩子吃的。   在食品加工中,人们也采用了一些方法来防止肉毒杆菌。最常用的方法就是添加亚硝酸盐的方法来抑制肉毒梭菌。除了添加亚硝酸盐外,美国FDA提示的方法包括加酸剂(肉毒梭菌在pH 值低于4.5时生长会被抑制)、减少水分含量、加盐、加亚硝酸盐等,或者集中同时使用。另外,还有通过加入发酵剂和发酵基质来抑制咸肉中肉毒梭菌的生长。   如何避免肉毒梭菌中毒?   肉毒中毒最常发生在一些家庭自制食品中。那么,如何避免肉毒梭菌中毒呢?推荐从三个方面做起:   (1)烹调食物尽量熟透,吃熟食。可能受肉毒梭菌污染的食物,如肉制品、罐头等,最好吃熟食,烹调熟透。这个是避免肉毒毒素危害最有效的方法。   (2)平时自己在家做自制食物时,要注意加工卫生,尤其要做一些发酵豆制品、发酵肉类时。如果实在不太会,就不要自制了。   (3)加工后的食品迅速冷却并低温储存。   参考资料:   [1] BAM: Clostridium botulinum. FDA   [2] Merle D. Pierson, Leslie A. Smoot,Michael C. Robach. Nitrite, nitrite alternatives, and the control ofClostridium Botulinum in cured meats. C R C Critical Reviews in Food Scienceand Nutrition. Volume 17, Issue 2, 1983   [3] 刘爱萍.肉毒梭菌的控制.肉类研究,2007.   [4]罗云波. 食品安全导论.   [5]WHO.Clostridium botulinum   注:本文为食品与营养信息交流中心人员阮光锋原创,作者授权转载。
  • 专家:奶粉含肉毒杆菌罕见 不会纳入标准体系
    新西兰恒天然乳品含肉毒杆菌事件备受关注。9日,国家食品安全风险评估中心开展公众开放日活动,相关专家称,婴儿奶粉中含有肉毒杆菌的情况十分罕见,对此的监测不会纳入标准体系中。   国家食品安全风险评估中心微生物实验部研究院郭云昌博士说,肉毒杆菌产生肉毒毒素需要苛刻的条件,其中一条是严格厌氧。而这一条,在非真空包装的奶粉中难以实现。尽管肉毒杆菌在环境中广泛存在,但奶粉中的污染比较罕见。从以往经验来看,我国肉毒杆菌污染多为储藏不当的变质肉类食品或家庭自制发酵豆类、谷类制品。   控制肉毒杆菌污染的关键是工艺设计和过程控制而非标准管理,世界各国和地区并无食品中肉毒杆菌及其毒素的限量规定,一般只对密闭发酵、罐头类食品规定符合商业无菌的要求。尽管本次奶粉污染事件是偶发,消费者不必恐慌,但政府监管部门应该高度重视,要综合国内召回产品检测情况和各贸易国的反馈态度以及CAC动向,确定我国今后的管理方式。   国家食品安全风险评估中心技术顾问刘秀梅研究员说,以往也有婴儿肉毒素中毒事件发生,但其与成人中毒有所不同,不是吃了含有毒素的奶粉,而是因为婴儿免疫力低下,身体发育未完全。如果含有芽孢的食物进入婴儿的胃肠道,会定植于体内,生长繁殖,进而产生毒素。但此类事件十分罕见,目前查到的是2001年英国曾发生过这类案例。   刘秀梅说,其实婴儿奶粉中更值得关注的是阪崎肠杆菌。三次国际专家评估会议,三次都在关注阪崎肠杆菌,而没有关注肉毒杆菌。2004年开始获得国际关注,2008年,国内关于婴儿配方奶粉的标准也对阪崎肠杆菌进行了相关规定,相关部门对此也是必检项目。但由于含肉毒杆菌的情况非常罕见,因此,对于奶粉的管理标准中,加入监测肉毒杆菌一项的可能性几乎为零。   怎么预防婴儿奶粉喂养安全呢?   世界卫生组织曾为此专门设置指南,如何合理喂养婴儿配方奶粉。除了厂家保障产品安全外,孩子的母亲往往承担着重要的工作。刘秀梅认为,首先要购买正规厂家生产的可靠产品。2004年阜阳奶粉大头娃娃事件中,涉事产品很多都是小作坊、黑窝点生产的三无产品。其次,喂养方式也很重要。大头娃娃事件中,也暴露了留守儿童被隔代喂养中存在的问题。老人为省钱,减量喂养奶粉。   现在流入中国的被污染的奶粉原料大约有20吨,大部分原料还没有被加工为产品,已经加工为产品的,根据要求已经被召回。流入中国的产品中,到底有没有肉毒杆菌?刘秀梅认为,产品中如果含有肉毒毒素的话,由于其潜伏期很短,一旦进入人体将会迅速发生中毒事件,而目前尚未这种事件。她建议,不要过分担心肉毒杆菌奶粉对孩子健康的危害,因为发生的可能性还是非常低的。   在9日上午国家卫生计生委召开的新闻发布会上,国家食品安全风险评估中心微生物实验部的主任李凤琴研究员也确认这一观点,她表示,到目前为止还没有接到报告因为吃含有肉毒杆菌的奶粉而有人出现不适的病例。   国家卫生计生委新闻发言人、宣传司副司长邓海华说:“国家卫生计生委的职能是标准制定和风险评估,我们接到国际食品安全当局网络通报新西兰污染乳制品问题的邮件之后,及时把有关信息向质检总局、食品药品监管总局进行了通报,配合相关监管部门做好相应的处置工作。我们还组织国家食品安全风险评估中心的相关专家,通过各种有效途径,包括博客、微博、网站、接受媒体采访等等,对于肉毒杆菌的科普知识进行了大量宣传。”
  • 专家:全世界都没有奶粉中肉毒杆菌的限量标准
    奶粉中肉毒杆菌不是常规检测项目   肉毒杆菌中毒十分罕见   肉毒毒素不耐热,高温加热可破坏   几年前,演艺界有&ldquo 美容大王&rdquo 之称的台湾女明星大S,让一种叫做&ldquo 肉毒毒素&rdquo 的物质平民化了。大S在《揭发女明星》一书中大爆:女明星,其实都使用肉毒毒素瘦脸。虽然这是种毒素,它依旧使无数少男少女趋之若鹜。   而两天前开始,肉毒毒素的风光命运,开始被翻盘了&mdash &mdash 新西兰恒天然乳制品厂出产的恒天然奶粉, 被检测出可能引起食物中毒的肉毒杆菌。   肉毒毒素和肉毒杆菌是什么关系?肉毒杆菌和肉毒毒素的危险性有多大?我们国家的乳品标准或者婴幼儿配方食品标准,对肉毒毒素的要求是怎样的?   本报昨连线中国肉毒毒素培养、提纯发明人,兰州生物制品研究所王荫椿教授、国家食品安全风险评估中心风险交流部钟凯博士来为您解读。   肠道是理想的厌氧环境   1岁以下孩子,要特别小心   全世界,目前只有美国、英国、中国、德国,有用于治疗的肉毒毒素产品的生产资格。   中国肉毒毒素培养、提纯的发明人,是兰州生物制品研究所的王荫椿教授。   昨天,记者致电王教授,他说,&ldquo 肉毒杆菌本身是没有毒性的。有毒的是它的芽孢,经过滋养生成的肉毒毒素,也就是我们培养用作药用的物质。&rdquo   &ldquo 肉毒杆菌在土壤、动物粪便中,比较常见。&rdquo 王教授说,&ldquo 我国西北部,如新疆、青海甚至西藏等地区的土壤,含有肉毒杆菌比率比较高。&rdquo   肉毒杆菌本无毒,当它进入厌氧(缺氧)的环境,便很快滋生成肉毒杆菌毒素。   而厌氧环境,往往是人类&ldquo 提供&rdquo 的&mdash &mdash   比如,人们爱做一些发酵的食物。像臭豆腐、豆瓣酱,可能豆类在生长的时候就已经从土里无意中携带了肉毒杆菌,而这些食物的制作,需要密封发酵,这给肉毒毒素制造了很&ldquo 落位&rdquo 的环境。   而孩子的肠内,可能也是这样的理想环境。   上世纪80年代,王荫椿曾经到美国威斯康星大学食品研究所做访问学者。在一项研究中,美国科学家们发现,1岁以下的孩子,喝了蜂蜜、或者有蜂蜜配方的奶粉,产生了肉毒毒素中毒的症状。   科学界推测,孩子中毒,可能因为蜜蜂采集蜂蜜的过程,携带了带有芽孢的肉毒杆菌 也有可能是孩子到处跑,无意中直接吃到了带有芽孢肉毒杆菌的土壤。   周岁不到的孩子,体内的肠菌丛还没有像成年人那么完备,所以孩子吃了有肉毒杆菌芽孢污染的食品,非常容易发生婴儿肉毒中毒。   肉毒杆菌怎么跑到奶粉里的   买了污染奶粉不建议食用   肉毒杆菌,为什么奶粉里会有?   国家食品安全风险评估中心风险交流部的钟凯博士,昨天在果壳网上发文说,&ldquo 任何食品的生产环境都不可能无菌,奶粉中的肉毒杆菌很可能是随空气中的小颗粒物飞入生产管线,恰巧逃过消毒程序。   至于国家标准是怎么规定的,钟凯说:&ldquo 其实是没有任何规定!(我国婴幼儿配方对金葡、沙门和板岐菌是有规定的)。也许不少人会觉得这是因为我国的标准落后,这么厉害的细菌怎么可能没标准呢?其实,全世界都没有奶粉中肉毒杆菌的限量标准,它也并不是常规检测项目。&rdquo 钟凯解释,肉毒杆菌在乳品中并不是常见的污染物,而标准的管理是要考虑成本的,正因如此,各国都不把它列入标准。但这并不意味着根本不管,比如这次恒天然是在企业的质量控制中发现的问题。   对本次奶粉污染,钟凯认为这仅仅是一次偶发事件,公众无需恐慌,但是监管部门应该严格把关,确保污染批次的产品下架或召回。&rdquo   如果买到的奶粉被肉毒杆菌污染,专家建议家长停止给孩子食用。   临床感染病例罕见   避免中毒只须做到三点   浙医二院感染科主任王选锭认为,&ldquo 理论上,发生肉毒杆菌感染,以及肉毒毒素经过食物引起中毒,都是有可能的,但事实上,这两种情况都十分罕见。&rdquo   &ldquo 可能大部分医生都没有遇到过病例。&rdquo 王选锭从1986年开始在感染科当医生,从事感染研究和临床工作近三十年,但他从未遇到过这两种病例。   资料显示,只有广东省在上世纪90年代初发现过一例肉毒杆菌人体感染的病例。   中毒症状以对称性颅神经损害症状为特征。如视力模糊、眼睑下垂、瞳孔散大、语言障碍、吞咽困难、呼吸困难,继续发展可由于呼吸肌麻痹引起呼吸功能衰竭而死亡。肉毒杆菌致病性是其产生的肉毒毒素。肉毒毒素对酸的抵抗力特别强,胃酸溶液24小时内不能将其破坏,故可被胃肠道吸收。但肉毒毒素不耐热,对于易感染的罐头及密封腌渍食物只要加热5~10分钟,肉毒毒素都会被破坏掉,因此规范生产的罐头等,不应含有有效的肉毒毒素。   避免肉毒杆菌中毒的建议:   (1)吃熟食。肉制品最好吃熟食,彻底加热,肉毒毒素不耐热,75-85℃,加热10分钟,或100℃加热1分钟可被破坏。(2)平时自己做食物时,注意加工卫生。(3)加工后的食品迅速冷却并低温储存。   肉毒毒素,毒性最强   肉毒杆菌的发现,跟19世纪,法国拿破仑政府鼓励发明的肉罐头有关系。   经营蜜饯食品的法国人阿贝尔,找到了一个长期贮存食物的好办法:把肉装入宽口玻璃瓶,用木塞塞住瓶口,放入蒸锅加热,再将木塞塞紧,并用蜡封口。这就是最早的肉罐头。   阿贝尔没有想到,这种受到欢迎的方便食物,如果没有经过严格的消毒环节,很有可能成为肉毒杆菌的&ldquo 逍遥国&rdquo &mdash &mdash 肉毒杆菌进入了诸如罐头这种厌氧(缺氧)的环境,很快滋生成肉毒杆菌毒素。   肉毒毒素,是细菌类毒素中,毒性最强的&ldquo 毒王&rdquo 。上个世纪,战争狂人使用肉毒毒素作生物武器,它能阻断神经信号的传导,使人出现头晕、呼吸困难、肌肉乏力等症状。&ldquo 0.1~1微克(100万分之一克)肉毒毒素,可致人于死地。1克肉毒毒素,足够毒死一百万人。&rdquo 王教授说。

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  • 主要特点:可检测固态、液态、表面、膏状、浆状样本;样本在检测时无需任何的前处理过程,直接丢入检测瓶即可;可自动控制孵育温度和孵育时间检测样本只需1ml/1g;8个检测位各自独立可检测不同的样品;灵敏度高达可检测到1目标微生物;特异性高达99.999%;独立、持续的检测并记录瓶中的微生物数量(CFU)简单三个操作步骤,傻瓜型,无需专业操作人员;仪器便携式,可随时随地进行检测、100%定量分析,并可直接连接电脑出定量分析检测报告。通过ISO 16140:2003 “食品和动物饲料的微生物学 – 代替法的认证”。 RVLM微生物检测仪 检测范围:活细菌总数大肠菌群/大肠杆菌/大肠杆菌O157, O111, O104...等肠道杆菌科金黄色葡萄球菌铜绿假单胞菌;绿脓杆菌 沙门氏菌李斯特菌肠球菌曲霉属真菌;曲霉菌属酵母菌乳酸杆菌 应用范围:卫生控制:-食品(HACCP)-厨房、工具、表面(HACCP)-水质-(CDC)疾病控制、进出口检验检疫-药品及 化妆品 与我们的生活息息相关,例如:咖啡馆、餐厅 水源检测、制水厂分析实验室和HACCP诊断农产品及相关加工公司药厂、药房、化妆品厂环境监测机构水配送公司消费者保护团体、工商管理机构室内空调调节公司 微生物检测瓶尤其能应用于军事、大型展会等等的食品快速检测 集传统检验方法优点于一身:-培养皿法-酶法(β-葡萄糖苷酸酶分析) -免疫法(抗原搜寻)-基因法(基因搜寻) 检验样本无需任何前处理-液态样本,固态样本和表面样本均无需前处理定性和定量分析-搭配检测机:100%的定量分析-肉眼判读:定性或半定量分析简单便捷-简单的三个步骤得到检测结果检验迅速-是传统检验方法速度的2~5倍 高灵敏性-可以检测到1目标微生物(理论极值)高特异性-特异性高达99.999%(理论极值)检测瓶就是实验室-微生物检测瓶随时可用-未受过严格专业训练的检测人员也可随时随地进行检测使用后安全丢弃-和过期药物同样处理 检测步骤:(简单三个步骤得到100%定量检测结果) 第一步:放入样本 -打开瓶盖,加入11ml无菌水-放入液态(固态/表面)样本0.1~1.0ml(0.1~1.0g)-盖紧瓶盖 第二步:摇动瓶子直到溶剂充分溶解或混合(充分溶解或混合如右图所示) -若使用振荡器,需时20秒左右;或用手用力摇,需时2~3分钟左右。 第三步:在适当时间判读结果(请查右表) -使用RVLM微生物检测仪:-充分溶解混合后立即放入检测仪-得到100%定量分析结果 *若没有RVLM微生物检测仪: -待充分溶解混合后,放入恒温器孵育 (在适当温度下孵育适当时间,请查下表)-肉眼判读定性或半定量分析结果以大肠菌群为例:若菌落数>108CFU/ml:2小时内颜色即变成黄色;若菌落数<102CFU/ml:14小时内颜色不会变成黄色;若菌落不存在:18小时后颜色仍保持开始颜色或其他中间色(不变成黄色) 使用后无菌处理 -按下RVL微生物检测瓶的瓶盖上方-放心安全丢弃(与过期药物同样处理) 微生物快速诊断 RVL@产品 Q&A1. 微生物检测瓶除可以检测活菌外,死菌可以检测么?答:不能检测死菌。2. 微生物检测瓶可以检测厌氧菌么?答:检测瓶的检测范围即包括厌氧菌(亚硫酸盐梭状芽胞杆菌 Sulphite reducing Clostridia,产气荚膜杆菌 Clostridium perfrigens),也包括需氧菌。 检测不同种微类生物的检测瓶中试剂不同。对于厌氧菌,我们有特殊的试剂,如检测产气荚膜杆菌 Clostridium perfrigens。3. 检测瓶的检测原理都分别用到了哪些检测方法?答:培养皿法、酶法、免疫法、基因法。4. 对于第 3 题,你能简要叙述这些方法的优劣势么?答:与传统的培养基法、胶体金、酶免法和 PCR 法不同,德国皇家微生物检测仪是多种方法的集合。单独使用一种检测方法都有自己的缺点:比如, PCR 法需要专业技术人员和昂贵设备; 培养基法操作复杂; 胶体金法灵敏度低; 酶免法特异性捕捉不充分。 德国皇家微生物检测瓶快速检测系列产品是以上多种方法的综合运用,吸收了每种方法的优点,弥补了各种方法的不足。5. 用微生物检测瓶进行微生物检测时,第一步是先放样本还是无菌水?答:都可以。6. 对样本进行微生物接种时,需要在无菌环境下进行么?答:检测瓶是通过捕捉特异性,结合多种检测法进行分析。无菌环境与否均可(临检的场所大都是非无菌环境)。7. 检测瓶可以检测表面样本和固态样本么?答:可以检测固态、液态、表面样本(用所配棉棒沾湿无菌水后涂抹表面)。纸浆等膏状、糊状、粘稠状昂本都可以检测。8. 检测瓶在检测固态样本时需要对进行研磨、稀释等前处理过程么?答:直接将样本放入检测瓶,无需任何前处理。 9. 每次检测的无菌水用量是多少?答:一般是 11ml。如果是检测液态样本或水样本,建议加样 1ml,加无菌水 10ml。 10. 放入样本和无菌水后,“摇匀使其充分溶解和混合”这一操作步骤,无论定性分析还是定量分析,都是必要的步骤么?答:是的,摇匀无论是定性还是定量分析都是必要步骤。11. 不同的微生物对应的孵育温度是一样的么?请举例说明。答:不一样。37 摄氏度居多:活菌总数、沙门氏菌、李斯特菌等,大肠杆菌 44 摄氏度等,详细请参考对照表。12. 若是检测冷菜或者冰欺凌这样的样本,孵育是否应该低温进行?答:对检测样本自身的温度没有限制,检测样本中微生物,请严格遵照所检测微生物对应的孵育温度,依然根据对照表。13. 如果想加快检测时间,孵育温度可以调至高于所检测微生物对应的孵育温度?答:不可以,严格遵照对照表。14. 操作手册规定放入的样本量为多少?答:0.1g‐1.0g 或 0.1ml‐1.0ml。15. 若放入的样本量高于规定的样本量,检测结果会不同,或者检测结果(定量时)增加么?答:样本量多一些或少一些,定量分析结果不会有变化。 原因:传统的微生物学检测方法,包括官方参考方法,即基于固体选择性培养基的菌落计数法内在的统计分散度(统计名词,也称为统计变异,是变量或概率分布蔓延,常见的例子是方差,标准差和四分位距。)大于 50%。很多实验室已经证实皇家生物检测法与其他检测方法比统计分散度低,可信度高。但不管怎样,25‐30%的统计分散度还是有的。另外,由采样产生的统计分散度同样应该考虑在内,尤其是微生物经常容易繁殖的固态的肉制品类。 因此,加样是 0.5g 或 1.5g 所得的结果在统计上是等价的(和其他任何方法获得的结果相等)。16. 对于面粉这类低密度的散装样本,可以照常检测么?答:可以。 17. 对于酱油这样的深色样本,会影响定性检测结果的判读么?您有什么好的建议?答:如果搭配检测仪进行定量分析,不存在这个问题;如果只是通过肉眼观察变色进行定性分析,深色样本如果担心肉眼不能够清晰的辨认,建议进行稀释后再进行检测。还记得第 15 题得答案么?加样是 0.5g 或 1.5g 所得的结果在统计上是等价的和其他任何方法获得的结果相等)。稀释同样的道理。18. 如果是检测水样,还需要加入无菌水么?加多少?答:建议加水样 1ml,无菌水 10ml。19. 不同的微生物对应的开始颜色和呈阳性的颜色都相同么?请举例说明。答:不同。例如,沙门氏菌孵育 10 分钟左右出现的开始颜色为红色,阳性颜色为黄色;李斯特菌,开始颜色为蓝色,阳性颜色为黄色。具体请参考对照表。20.微生物检测仪兼备孵育机的功能么?答:是的。将检测瓶充分摇匀后立即放入检测仪,在软件上进行检测菌类设置后。检测仪会自动进行孵育,并自动给出定量分析检测报告。21. 微生物检测仪兼备振荡器的功能么?答:不具备。需用手用力摇 2‐3 分钟,或振荡器摇 20 秒左右,直至充分溶解或混合。22. 微生物检测仪的判读原理是什么?答:微生物检测仪是一款精密的光学判读仪。通过光学原理精密探测检测瓶中的颜色变化,并给出精确的定量分析检测报告。23. 微生物检测仪是外接电源,还是自带充电电池?答:外接电源。24. 微生物检测仪可以同时、独立地检测多少个检测瓶?答:8 个。同时、独立的探测,并分别给出定量分析报告。25. 微生物检测仪定量分析,需要在电脑上安装分析软件么?答:需要按照配套分析软件。26. 怎样的计算机操作系统对该分析软件兼容?答:XP, Vista, Windows 727. 如果检测仪是初次开机,接通电源后需要稍等多少时间再进行下一步操作?答:若初次开机,开机后停留 40 秒左右继续操作为宜。28. 检测仪进行定量分析时,充分混合后的检测瓶是应该立即放入检测仪,还是稍等片刻后再放入?答:充分混合后立即放入检测仪。29. 检测瓶放入检测仪后,在检测仪分析软件点击开始,软件界面上对应检测孔的灯会变成什么颜色?答:在所检测检测瓶对应的操作界面上点击“Start”(开始),对应孔的指示灯由绿色变为红色。表明检测开始并进行中。30. 当检测结束后,分析软件界面对应孔的灯光会恢复为什么颜色,说明检测结束,可以放入新样本?答:在检测进行时,指示灯为红色。当检测结束后,指示灯变为绿色。此时在对应的检测仪检测孔放入新的检测瓶开始下一轮检测是可以的。检测时间由细菌的存在量决定(当微生物含量较高时),或由对照表对应的检测时长决定(当微生物含量很低时,应超过对照表中检测 1CFU 对应的检测时间)。31. 微生物检测瓶的分析时间和检测瓶中微生物含量之间是什么关系?答:反比关系。即微生物含量越多,对应的检测时间越短;微生物含量越少,对应的检测时间越长。 如果样本中微生物含量过高,几分钟甚至几秒钟内检测仪的定量分析结果就会显著变动;如果微生物含量很低,(由于 RVLM 是非常精密灵敏的仪器)有经验的使用中可以通过几小时甚至几分钟的数据变化初步判断微生物目标含量是否达到规定要求。32. 分析检测前是否应该有明确的实验目的以确定你要检测的微生物含量(根据国家标准规定微生物的存在量。)?答:这样是最好的。例如,根据国家 GB 标准,或根据国际 EC 标准等,都有明确(或部分明确)地注明微生物在不同家禽、畜牧物种中的允许最大存在量。具体地说,在进行微生物检测时,我们首先要明确检测目的。如、国际 EC 2073:2005标准中规定,大肠杆菌在鲜肉中允许的最大存在量为 CFU 10^2/g,即每克鲜肉中大肠杆菌的含量不允许超过 CFU 10^2。此时我们根据对招表,找到大肠杆菌所在列,查 log CFU 10^2=2,即在大肠杆菌行中找到数字 2 所对应第一列的数字为 14。无论是肉眼进行定性分析,还是检测仪进行定量分析,要检测样本中大肠杆菌含量是否超过 CFU 10^2,最长在 14 小时即可得到严格精准的分析结果。如果是检测瓶进行定量分析,有经验的实验员会在很短时间内(譬如十几分钟)根据定量分析数据的动态变化情况,初步判断出检测瓶中的微生物含量。33. 明确要检测微生物含量的目的是什么,对照表起到什么作用?答:是确定所检测微生物对应的孵育温度、开始颜色、分析时间、阳性颜色的标准对照的依据。具体的使用方法请参考上一题答案。34. 什么是 CFU?答:colony‐forming unit,菌落形成单位。 经培养所得菌簇形成单位的英文缩写。 细菌(可见)和真菌的测量单位。CFU:colony‐forming unit,菌落形成单位,将稀释后的一定量的菌液通过浇注或涂布的方法,让其内的微生物单细胞一一分散在琼脂平板上,待培养后,每一活细胞就形成一个菌落。与常规利用显微镜对微生物数量进行测量不同,主要是对可见(即多数情况下形成菌落)的细菌数量进行测量的单位。 意思就是每毫升菌液中含有多少单细胞! 传统上就叫“个”。但是,我们知道,一个菌落并不一定是一个细菌所生成,也可能是由一簇细菌(一个细菌团)所生成,这时候再叫“个”就不太准确啦,准确的叫法就是“菌落形成单位”,英文缩写“CFU”。就像“公斤”和“千克”,只是叫法不同,数量上没有变化。 CFU 代表“colony forming units”。CFU/mL 指的是每毫升样品中含有的细菌群落总数,也有用 CFU/g 即对应固体培养基。35. 假如我要检测样本中大肠菌群的菌落含量不得超过 106CFU/g 或 106CFU/ml, 用肉眼观察瓶中颜色变化进行定性分析,请对照“孵育温度和比色对照表”详细叙述检测步骤。答:第一步:放入样本 放入所要检测的样本(0.1‐1.0g,或 0.1‐1.0ml),加入 11ml 无菌水(根据检测物情况,若为液体,建议加样 1ml,加无菌水 10ml。差别不大),盖紧瓶盖。 第二步:摇动瓶子直到溶剂充分溶解或混合。 如果用手需有力摇 2‐3 分钟左右;或用振荡器摇,需时 20 秒左右。 第三步:在适当时间判读检测结果 (1)若肉眼定性分析。根据对照表确定大肠菌群对应的孵育温度、开始颜色、检测时间、阳性颜色等信息。 孵育温度:根据对照表为 37℃; 开始颜色:即摇匀后放入 37℃恒温箱孵育 10 分钟左右会呈现的颜色。根据对照表为红色; 检测时间:我们要检测标准为大肠菌群含量不超过 106CFU/g 或 106CFU/ml。根据对照表,对应列log 106=6,找数字 6 对应行的数字为 6,即检测时间为 6 小时。即,观察时间确定为 6 小时。 阳性颜色:根据对照表,大肠菌群的阳性颜色为黄色。 确定了以下信息后,我们把充分混合后的检测瓶放入 37℃恒温箱,这样一直放置。孵育 10 分钟左右,我们观察会发现检测瓶会呈现检测大肠菌群对应的开始颜色——红色。继续放置,到 6 个小时的时候进行观察,如果颜色变为黄色,说明样本中大肠菌群含量超过 106CFU/g 或 106CFU/ml,样本为不合格品;若没有变为黄色,而是始终保持开始颜色红色,或其他中间颜色,说明样本中大肠菌群含量未超过 106CFU/g 或 106CFU/ml,样本为合格品。 (2)若检测仪进行定量分析 此步骤请参见下一题。第四步:无菌处理最后别忘记按下检测瓶的瓶盖上方对检测瓶进行灭菌处理。按下瓶盖后摇一摇,好了,可以安全丢弃了。注意:在进行实验操作时,不要碰到检测瓶的瓶盖顶部,以免在不当的时候进行了无菌处理,影响试验结果。36. 若第 34 题搭配检测仪进行精确的定量分析,请详述操作步骤。答:(2)若检测仪进行定量分析 将充分混合后的检测瓶立即放入检测仪。 启动检测仪软件,点击“Station”(状态)录入相关信息(包括:检验员姓名、检测、检测样本所属客户、检测时间等信息);在软件操作界面“analysis type”(检测种类)下拉菜单中勾选所检测的微生物种类,点击 ok,点击开始,指示灯变红,开始进入分析状态。观察检测仪的定量分析数据变化,进行判断。37. 为什么在检测结束之前,不能按下检测瓶的瓶盖?答:无菌处理。瓶盖中还有无菌处理物质,按下瓶盖,瓶盖中的无菌处理物进入瓶内,与瓶内溶剂进行反应,完成无菌处理。因此,实验过程中请不要轻易触碰检测瓶的瓶盖。 技术人员选答题,销售人员必答题:1. 检测瓶可以检测多少种微生物,分别是什么?答:活菌总数、大肠菌群、大肠杆菌、肠道杆菌科、金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌、沙门氏菌、李斯特菌、肠球菌、亚硫酸盐还原梭状芽孢杆菌、产气荚膜梭菌、曲霉属真菌、曲霉菌、酵母菌。 以后还有陆续有其他微生物菌种的检测瓶相继面世。包括军团菌等。2. 检测瓶在检测大肠杆菌时,可以检测到所有的大肠杆菌菌株么(包括目前流行的 EHEC?)答:是的,可以检测到全部的大肠杆菌菌株,包括 EHEC 肠出血性大肠杆菌(E.coli O104, O111, O157 等)3. 检测瓶的应用范围有哪些?答:卫生控制:食品(HACCP),厨房、工具、表面(HACCP),水质,(CDC)疾病控制、进出口检验检疫、药品及化妆品。 与我们生活息息相关的:环境监测机构,农产品及相关加工公司,水源检测和制水厂,水配送公司,药厂、药房、化妆品厂,分析实验室和 HACCP 诊断,奶制品厂,咖啡馆、餐厅,消费者保护团体、工商管理机构,室内空调调节公司,尤其能应用于军事、大型展会等的食品快速检测。4. 你认为大肠杆菌检测瓶、李斯特菌检测瓶、沙门氏菌检测瓶除了是用于食品安全检测外,适用于医疗么?答:大肠杆菌(EHEC)、李斯特菌、沙门氏菌,这三款检测瓶可用于体外临床检测。 Royal 微生物检测瓶系列的全球定位依然是食品安全。在欧洲,对人体进行微生物的临床体外检测是非常少的,欧洲的各方面安全控制的很好。然而,在发展中国家,以上三款微生物的人体体外临床检测经常发生。而以上三款检测瓶用于体外临床检测的安全性和准确度都可以保证。4 合 1 试纸片和检测瓶市场定位的区别 1)4 合 1 试纸片和检测瓶比较 4 合 1 试纸片配合其分析仪,一台分析仪可以同时检测 48 个试纸片。因此,从经济成本的角度考量,最好一开机就是 48 片同时检查。对于医院,攒够 48个粪便样本后,一次性进行分析。检测瓶,一个样本就可以进行检查。而且更大的优势在于,这款产品会非常受医生的欢迎。因为医生可以不用接触样本,这是目前大多数的医院检测无法做到的。把瓶子给病人,让病人自己将粪便样本放入后送回给医生。医生拿到检测瓶,在医院的振荡器上摇匀后,放入孵育机,等待结果判读即可。2)检测瓶与医院目前传统检测法的比较 ?目前医院的检测方式依然是培养皿法居多。这种方法最令医生反感的地方是医生要接触样本。如果医生处于怀孕期,接触到李斯特菌的后果就是流产。如果检测台没有处理干净,也容易导致微生物的传播。 检测瓶,医生完全不用接触样本。样本放入检测瓶的的这个过程交给病人在卫生间去操作就可以。医生要做的就是简单的摇匀和放入孵育器孵育(振荡器和孵育器都是医院的常规设备)。5. 无论固态、液态还是表面样本,在检测时是否都无需进行前处理?答:是的6. 检测仪的特异性是多少?答:99.999%(理论极限值)7. 检测仪的灵敏度是多少?答:可以检测到 1 个活菌的理论极限值。8. 做定性分析时,检测需要几步,分别是什么?答:三步:加样;摇动瓶子直到充分溶解和混合;在适当时间判读结果(根据对照表)。最后不要忘记按下瓶盖上方进行无菌处理。9. 做定量分析时,检测需要几步,分别是什么?答:同上。具体请参考检测仪操作文档。10. 检测后按下检测瓶瓶盖的目的是什么?答:无菌处理,请参考上第 45 题。11. 检测瓶的储存温度是多少?答:在 20℃-25℃左右既可以储存,这个温度下很方便运输,对于临检来说是有利的。但随着大气温室效应,夏天时还是要注意储存温度不要超过 25℃,负责会影响检测瓶检测的灵敏度。然而,如果可以放到 4℃进行储存,保质期可以延长近一倍。12. 如果预延长检测瓶的有效期,储存温度最好为多少?答:4℃,具体见下表。
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    JCM 10556产酸拟杆菌知识解析! 一、菌种简介平台编号:bio-107054规格:冻干粉拉丁属名:Bacteroides acidifaciens中文名称:产酸拟杆菌拉丁名称:Bacteroides acidifaciens来源历史:JCM原始编号:DSM 15896=JCM 10556原产国:日本模式菌株:否主要用途:AB021164生物安全级别:GR1培养基编号:35培养温度:37℃培养时间:24-48h需氧类型:严格厌氧分离基物:小鼠盲肠采集地:日本保存方法:冷冻干燥管保藏注意事项:仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的,不可用于人类或动物的临床诊断或治疗,非药用,非食用 二、培养基(血琼脂平板) 三、保藏条件冻干菌种应在 2-8°C 保存,活化好的菌种要放厌氧环境下保存。 四、注意事项1)冻干首次活化,干粉要全部用完,不能预留,用 0.5-1ml 的培养液或无菌水溶解,接种在 1-2 个平板上,因冻干粉处于休眠状态,请勿接种多支斜面或平板,以避免因接种量不足而导致复苏不成功;如有不明白之处,请务必先咨询我单位技术人员,避免不必要的损失;2)微生物菌种应保藏于低温、清洁干燥的地方,室温放置时间过长会导致菌种衰退;3)菌种操作应在无菌条件下进行;转种完毕,应经灭菌再做丢弃处理;4)应根据菌种状况及时转接,冻干菌种保藏时间通常为 2-25 年;5)菌种使用过程中如出现杂菌污染或菌种生产性能下降,应及时和中国微生物菌种查询网联系。 五、单层冻干管打管说明书1、安瓿瓶开封:用浸过 75%酒精的脱脂棉擦净安瓿管,用火焰加热其顶端,滴少量(2-3滴)无菌水至加热顶端使之破裂,用锉刀或者镊子敲下已破裂的安瓿管顶端并将冻干管开口处在火焰上过一遍,并保持在火焰旁操作。2、注意事项:菌种活化前,请将安瓿管保存在 4-10℃的环境下,某些菌种经过冷冻干燥并抽真空保存的,开启后必须一次使用完,不能留菌粉下次使用;另外,安瓿管里大部分是用牛奶作为保护剂,里面菌体为少数,复苏时要全部菌悬液接在新鲜培养基上,否则可能造成复苏不成功;3、冻干菌种经过冷冻干燥保存后处于休眠状态,有时延滞期较长,如在说明书建议的培养时间还未长起来,请继续在相应的环境下多培养 24 小时或者更长时间,直至菌种培养完成;有的菌种需要连续两次继代培养才能正常生长,一般来说菌种稳定后才能用于您的后续实验。4、暂不启开的安瓿管应于 4℃中保藏(特殊除外)。5、冻干管打开后需一次用完,不能留存。6、打管操作需由专业微生物技术人员在相应的防护设备中进行,生物危害程度为三类的菌种应在生物安全柜中操作,打管时冻干管应远离面部,保护眼睛。
  • 阪崎肠杆菌测试片
    阪崎肠杆菌的测试片检测方法方法编号:5045 1 适用范围:可用于各类食品和原料中阪崎肠杆菌菌的检测以及突发事件应急需要。2 方法原理:测试片是一种预先制备好的一次性培养基产品,由阪崎肠杆菌选择性培养基、吸水凝胶和特异性酶显色剂等组成,一步培养15~24小时就可确定出目标菌的存在。3操作方法3.1样品处理:取样品 25 mL(g)放入含有225 mL灭菌生理盐水的取样罐或均质杯内,充分振摇或置均质器中制成1:10的样品匀液。3.2 接种:将测试片置于平坦实验台面,揭开上层膜,用无菌吸管吸取1mL样品匀液慢慢均匀地滴加到纸片上,然后再将上层膜缓慢盖下,静置5 min使培养基凝固,最后用手轻轻地压一下。每个样品接种2片。3.3 培 养: 将测试片叠在一起放回原自封袋中,透明面朝上水平置于恒温培养箱内,堆叠片数不超过12片。培养温度为36℃±1℃,培养15~24h。3.4 结果判别: 对测试片进行观察,呈蓝绿色的菌落为阪崎肠杆菌。对于出现阳性菌落的样品,最好用其他方法作进一步的鉴定。4 附加说明4.1阪崎肠杆菌纯菌株产生典型的蓝绿色点,接种一些肠道菌如大肠杆菌、肠炎沙门氏菌等时,一加样下去就会出现有紫色的点或晕状,此为产品本身显色剂的原因,不影响产品的使用和结果判读;而金黄色葡萄球菌、大肠杆菌O157和副溶血性弧菌等均被抑制。4.2 本法还可应用于从业人员体检、中毒样品和物体表面的检测,用取样棉签涂抹被测物体表面,放入装有3mL灭菌生理盐水的试管中,摇晃10s,然后取1mL接种到测试片上。4.3注意使用过的测试片上带有活菌,需及时按照生物安全废弃物处理原则进行处理 。
  • 蜡样芽胞杆菌测试片
    蜡样芽胞杆菌的测试片检测方法方法编号:CDC-5046 1 适用范围:用于各类食品以及人体体检样品中蜡样芽胞杆菌的检测。以及突发事件应急检测需要。2 方法原理:采用一种商品化的一次性培养基产品,含有高选择性培养基、吸水凝胶和特异酶指示剂等重要成分,培养15~24小时就可确认是否有目标菌的存在。3操作方法3.1样品处理:取样品 25 mL(g)放入含有225 mL灭菌生理盐水的取样罐或均质杯内,充分振摇或置均质器中制成1:10的样品匀液。3.2接种:将测试片置于平坦实验台面,揭开上层膜,用无菌吸管吸取1mL样品匀液慢慢均匀地滴加到纸片上,然后再将上层膜缓慢盖下,静置5 min使培养基凝固,最后用手轻轻地压一下。每个样品接种2片。3.3 培 养: 将测试片叠在一起放回原自封袋中,透明面朝上水平置于恒温培养箱内,堆叠片数不超过12片。培养温度为36℃±1℃,培养15~24h。3.4结果判别: 对测试片进行观察,蜡样芽胞杆菌产生典型的蓝绿色点,而大部分非目标菌如大肠杆菌、大肠杆菌O157、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、副溶血性弧菌和阪崎肠杆菌等均被抑制。4 附加说明4.1 本法还可应用于从业人员体检、中毒样品和物体表面的检测,用取样棉签涂抹被测物体表面,放入装有3mL灭菌生理盐水的试管中,摇晃10s,然后取1mL接种到测试片上。 4.2注意使用过的测试片上带有活菌,需及时按照生物安全废弃物处理原则进行处理 。4.3出现阳性菌落的样本,最好用其他更为可靠的方法进行验证,没有条件的话至少再取样重复检验一次。

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