生物分光光度计

分光光度计的应用常识：分光光度计在分子生物学中的应用

分光光度计已经成为现代分子生物实验室常规仪器。常用于核酸，蛋白定量以及细菌生长浓度的定量。分光光度计采用一个可以产生多个波长的光源，通过系列分光装置，从而产生特定波长的光源，光源透过测试的样品后，部分光源被吸收，计算样品的吸光值，从而转化成样品的浓度。样品的吸光值与样品的浓度成正比。核酸的定量 核酸的定量是分光光度计使用频率最高的功能。可以定量溶于缓冲液的寡核苷酸，单链、双链DNA，以及RNA。核酸的最高吸收峰的吸收波长260 nm。每种核酸的分子构成不一，因此其换算系数不同。定量不同类型的核酸，事先要选择对应的系数。如：1OD 的吸光值分别相当于50μg/ml的dsDNA，37μg/ml的ssDNA，40μg/ml的RNA，30μg/ml的Olig。测试后的吸光值经过上述系数的换算，从而得出相应的样品浓度。测试前，选择正确的程序，输入原液和稀释液的体积，尔后测试空白液和样品液。然而，实验并非一帆风顺。读数不稳定可能是实验者最头痛的问题。灵敏度越高的仪器，表现出的吸光值漂移越大。 事实上，分光光度计的设计原理和工作原理，允许吸光值在一定范围内变化，即仪器有一定的准确度和精确度。如Eppendorf Biophotometer的准确度≤1.0%（1A）。这样多次测试的结果在均值1.0%左右之间变动，都是正常的。另外，还需考虑核酸本身物化性质和溶解核酸的缓冲液的pH值，离子浓度等：在测试时，离子浓度太高，也会导致读数漂移，因此建议使用pH值一定、离子浓度较低的缓冲液，如TE，可大大稳定读数。样品的稀释浓度同样是不可忽视的因素：由于样品中不可避免存在一些细小的颗粒，尤其是核酸样品。这些小颗粒的存在干扰测试效果。为了最大程度减少颗粒对测试结果的影响，要求核酸吸光值至少大于0.1A，吸光值最好在0.1-1.5A。在此范围内，颗粒的干扰相对较小，结果稳定。从而意味着样品的浓度不能过低，或者过高（超过光度计的测试范围）。最后是操作因素，如混合要充分，否则吸光值太低，甚至出现负值；混合液不能存在气泡，空白液无悬浮物，否则读数漂移剧烈；必须使用相同的比色杯测试空白液和样品，否则浓度差异太大；换算系数和样品浓度单位选择一致；不能采用窗口磨损的比色杯；样品的体积必须达到比色杯要求的最小体积等多个操作事项。除了核酸浓度，分光光度计同时显示几个非常重要的比值表示样品的纯度，如A260/A280的比值，用于评估样品的纯度，因为蛋白的吸收峰是280nm。纯净的样品，比值大于1.8（DNA）或者2.0（RNA）。如果比值低于1.8 或者2.0，表示存在蛋白质或者酚类物质的影响。A230表示样品中存在一些污染物，如碳水化合物，多肽，苯酚等，较纯净的核酸A260/A230的比值大于2.0。A320检测溶液的混浊度和其他干扰因子。纯样品，A320一般是0。

用紫外分光光度计测定土壤中微生物生物量N时，已经用空白较零了，吸光度为什么还是负值？

最近一直在讨论这个问题：我个人觉得，对于普通的中低端分光光度计，技术相对已经很成熟了，竞争也比较激烈；但对于专用的分光光度计，能出售一整套的应用方案，再配上相应的试剂，这种行业专用的，小的便携式的分光光度计，其实还是很有市场的。我觉得这也是将来的一块兵家必争之地，对于这块，大家有何感想？是继续在通用的分光光度计市场拼杀呢，还是另辟蹊径，在行业专用这方面做点文章呢？不妨PK一下？

分光光度计已经成为现代分子生物实验室常规仪器。常用于核酸，蛋白定量以及细菌生长浓度的定量。 分光光度计的简单原理 分光光度计采用一个可以产生多个波长的光源，通过系列分光装置，从而产生特定波长的光源，光源透过测试的样品后，部分光源被吸收，计算样品的吸光值，从而转化成样品的浓度。样品的吸光值与样品的浓度成正比。

中空纤维超滤膜测试中涉及到紫外分光光度计与光电分光光度计,这两种分光光度计差异在哪? 是不是紫外是用的紫外光源,那么光电又是什么光源呢?哪种更实用些?谢了!

UV分光光度计已经成为现代分子生物实验室常规仪器。UV分光光度计是一种是利用物质对光的选择吸收现象，进行物质的定性和定量分析的光电式分析仪器，也是一种光谱仪器。常用于核酸，蛋白定量以及细菌生长浓度的定量。那么UV分光光度计的应用原理又是怎样呢，其实UV分光光度计的应用原理非常简单。UV分光光度计采用一个可以产生多个波长的光源，通过系列分光装置，从而产生特定波长的光源，光源透过测试的样品后，部分光源被吸收，计算样品的吸光值，从而转化成样品的浓度。样品的吸光值与样品的浓度成正比。

紫外分光光度计根本作业原理和红外光谱仪类似，使用必定频率的紫外可见光照耀被剖析的有机物质，导致分子中价电子的跃迁，它将有挑选地被吸收。一组吸收随波长而改变的光谱，反映了试样的特征。在紫外可见光的范围内，关于一个特定的波长，吸收的程度正比于试样中该成分的浓度，因而测量光谱可以进行定性剖析，而且根据吸收与已知浓度的标样的对比，还能进行定量剖析。　　紫外-可见分光光度计　　紫外-可见分光光度计的类型很多，但可概括为三种类型，即单光束分光光度计、双光束分光光度计和双波长分光光度计。　　1、单光束分光光度计　　经单色器分光后的一束平行光，轮番经过参比溶液和样品溶液，以进行吸光度的测定。这种简便型分光光度计结构简略，操作方便，维修容易，适用于惯例剖析。　　2、双光束分光光度计　　经单色器分光后经反射镜分解为强度持平的两束光，一束经过参比池，一束经过样品池。光度计能主动对比两束光的强度，此比值即为试样的透射比，经对数变换将它变换成吸光度并作为波长的函数记载下来。　　双光束分光光度计通常都能主动记载吸收光谱曲线。由于两束光一起别离经过参比池和样品池，还能主动消除光源强度改变所导致的差错。　　3、双波长分光光度计　　由同一光源宣布的光被分红两束，别离经过两个单色器，得到两束不同波长1和2 的单色光;使用切光器使两束光以必定的频率替换照耀同一吸收池，然后经过光电倍增管和电子控制系统，最后由显示器显示出两个波利益的吸光度差值。关于多组分混合物、混浊试样(如生物组织液)剖析，以及存在布景搅扰或共存组分吸收搅扰的情况下，使用双波长分光光度法，通常能进步办法的灵敏度和挑选性。使用双波长分光光度计，能取得导数光谱。　　经过光学系统变换，使双波长分光光度计能很方便地转化为单波长作业方式。假如能在1和2处别离记载吸光度随时刻改变的曲线，还能进行化学反应动力学研讨.

紫外-可见分光光度计的类型很多，但可归纳为三种类型：单光束分光光度计、双光束分光光度计和双波长分光光度计。　　单光束分光光度计　　其光路示意图如前图(紫外-可见分光光度计的基本结构图)所示，经单色器分光后的一束平行光，轮流通过参比溶液和样品溶掖，以进行吸光度的测定。这种类型的分光光度计结构简单，操作方便，维修容易，适用于常规分析。国产722型，751型、724型、英国SP500型以及BackmanDU-8型等均属于此类光度计。　　双光束分光光度计　　其光路示意如下图所示，经单色器分光后经反射镜(M1)分解为弧度相等的两束光，一束通过参比池，另一束通过样品池。光度计能自动比较两束光的强度，此比值即为试样的透射比，经对数变换将它转换成吸光度并作为波长的函数记录下来。双光束分光光度计一般都能自动记录吸收光谱曲线。由于两束光同时分别通过参比池和样品他，还能自动消除光源强度变化所引起的误差。这类仪器有国产710型、730型和740型，日立220系列，岛津-210，英国UNICAMSP-700等等。　　双波长分光光度计　　其基本光路如下图所示。由同一光源发出的光被分成两束，分别经过两个单色器，得到两束不同波长的单色光;再利用切光器使两束光以一定的频率交替照射同一吸收池，然后经过光电倍增管和电子控制系统，最后由显示器显示出两个波长处的吸光度差值ΔA(ΔA=A1-A2)。　　双波长分光光度计的优点：对于多组分混合物、混浊试样(如生物组织液)的分析，以及存在背景于扰或共存组分吸收干扰的情况下，利用双波长分光光度法，往往能提高方法的灵敏度和选择性。利用双波长分光光度计，能获得导数光谱。通过光学系统转换，使双波长分光光度计能很方便地转化为单波长工作方式。如果能在两波长处分别记录吸光度随时间变化的曲线，还能进行化学反应动力学研究。

1、荧光分光光度计有两个单色器，而一般紫外可见分光光度计只有一个单色器。2、荧光分光光度计的光源和检测器是成直角分布的，而紫外可见分光光度计是成一条直线的。3、荧光分光光度计是以氙灯做为光源，而紫外可见分光光度计是以氘灯作为紫外区光源，钨灯或卤钨灯作为可见光区的光源。4、荧光分光光度计的比色皿是四壁均为光学面，而紫外可见分光光度计仅为两面为光学面。

分光光度定义　　分光光度法则是通过测定被测物质在特定波长处或一定波长范围内光的吸收度，对该物质进行定性和定量分析。常用的波长范围为：(1)200～400nm的紫外光区,(2)400～760nm的可见光区,(3)2.5～25μm（按波数计为4000cm～400cm）的红外光区。所用仪器为紫外分光光度计、可见光分光光度计（或比色计）、红外分光光度计或原子吸收分光光度计。为保证测量的精密度和准确度，所有仪器应按照国家计量检定规程或本附录规定，定期进行校正检定。关系式　　单色光辐射穿过被测物质溶液时，被该物质吸收的量与该物质的浓度和液层的厚度（光路长度）成正比，其关系如下式： 　　A=-log(I/I。)=-lgT=kLc 　　式中 :A 为吸收度； 　　I。为入射的单色光强度； 　　I 为透射的单色光强度； 　　T 为物质的透射比； 　　k 为吸收系数； 　　L 为被分析物质的光程 　　c 为物质的浓度 　　物质对光的选择性吸收波长，以及相应的吸收系数是该物质的物理常数。当已知某纯物质在一定条件下的吸收系数后,可用同样条件将该供试品配成溶液，测定其吸收度,即可由上式计算出供试品中该物质的含量。在可见光区，除某些物质对光有吸收外，很多物质本身并没有吸收,但可在一定条件下加入显色试剂或经过处理使其显色后再测定,故又称比色分析。由于显色时影响呈色深浅的因素较多，且常使用单色光纯度较差的仪器，故测定时应用标准品或对照品同时操作。 结构　　分光光度计已经成为现代分子生物实验室常规仪器。常用于核酸，蛋白定量以及细菌生长浓度的定量。仪器主要由光源、单色器、样品室、检测器、信号处理器和显示与存储系统组成。

[b][color=#444444]722S分光光度计、722N分光光度计、752P分光光度计中字母S、N、P各代表什么[/color][/b]

红外分光光度计：测定波长范围为大于760 nm的红外光区 　　可见光分光光度计：测定波长范围为400~760 nm的可见光区　　紫外分光光度计：测定波长范围为200～400 nm的紫外光区

分光光度计是用不连续的波长采样反射物体或透射物体的一种测量仪器。由于不同物体分子的结构不同，对不同波长光线的吸收能力也不同，因此，每种物体都具有特定的吸收光谱。能从含有各种波长的混合光中，将每一种单色光分离出来，并测量其强度的仪器叫做分光光度计。分光光度计所使用的波长范围不同，可分为紫外光区，可见光区、红外光区以及全波段分光区。因此，分光光度计可分为可见光分光光度计。紫外／可见光分光光度计、荧光分光光度计、红外分光光度计等。无论是哪一类分光光度计主要都是由光源、单色器、狭缝、吸收器检测器系统5部分组成的。分光光度计通常提供用白光采样的照明光源。以及包括扩散后折射的反射光，而且允许测量在不连续波长时反射的总光量。分光光度计的准确度是由很多因素决定的，但是最重要的因素之一是光谱波段（即在所测量的光谱中每点波长的范围）。使用分光光度计可以绘制吸收光谱曲线，具有尖峰分光光度法曲线的介质要求分光光度计能通过狭窄的波段，典型的波长间隔是5nm，比较便宜的仪器通常能通过1Onm或20nm的波段。

实验室常用的分光光度计可以分为可见分光光度计和紫外－可见光分光光度计。各种类型分光光度计的结构和原理基本相同，一般包括光源、单色器、比色皿、检测器和显示器。台式分光光度计通常在实验室内部使用，不随意挪动位置，利于多种参数的测定。[url=http://www.hach.com.cn/product/dr1900]便携式分光光度计[/url]的原理、结构基本和台式分光光度计一样，只是各组成部分更加精密，大大减小了仪器的体积，便于携带，通常在野外和户外使用。

[color=#444444][font=Verdana, Helvetica, Arial, sans-serif][size=4][b]722S分光光度计、722N分光光度计、752P分光光度计中字母S、N、P各代表什么？求助，谢谢！！！[/b][/size][/font][/color]

分光光度计是用不连续的波长采样反射物体或透射物体的一种测量仪器。由于不同物体分子的结构不同，对不同波长光线的吸收能力也不同，因此，每种物体都具有特定的吸收光谱。能从含有各种波长的混合光中，将每一种单色光分离出来，并测量其强度的仪器叫做分光光度计。分光光度计分类：原子吸收分光光度计、荧光分光光度计、可见分光光度计、红外分光光度计、紫外可见分光光度计 不同的分类有不同的应用领域： 　　原子吸收分光光度计为冶金、地质环保、食品、医疗、化工、农林等行业的材料分析及质量控制部门进行常量、微量金属（半金属）元素分析的有力工具，是生产、教育、科研单位分析实验室的比备常规仪器之一。　　荧光分光光度计是用于扫描液相荧光标记物所发出的荧光光谱的一种仪器。应用于科研、化工、医药、生化、环保以及临床检验、食品检验、教学实验等领域。　　可见分光光度计具有透射比,吸光度,浓度直接测定,有自动调0%τ,100%τ功能.能选配5cm光径比色架及2.3.5cm矩形比色皿扩大测定范围.可选配PC软件包,经RS232C联结PC机,打印机实施功能扩大.广泛应用于治金、治药、食品工业、医药,卫生,化工,学校,生物化学,石油化工, ,质量控制,,环境保护及科研实验室等化学分析等。 　　红外分光光度计. 一般的红外光谱是指2.5-50微米（对应波数4000－－200厘米-1）之间的中红外光谱，这是研究研究有机化合物最常用的光谱区域。红外光谱法的特点是：快速、样品量少（几微克-几毫克），特征性强（各种物质有其特定的红外光谱图）、能分析各种状态（气、液、固）的试样以及不破坏样品。红外光谱仪是化学、物理、地质、生物、医学、纺织、环保及材料科学等的重要研究工具和测试手段，而远红光谱更是研究金属配位化合物的重要手段。　　紫外可见分光光度计该仪器操作简单、功能完善、可靠性高，在国内居领先水平。该仪器操作简单、功能完善、可靠性高，可广泛用于药品检验、药物分析、环境检测、卫生防疫食品、化工、科研等领域对物质进行定性、定量分析。是生产、科研、教学的必备仪器。（选自网络，侵删）

分光光度计的用途之一是鉴定物质。用来测量待测物质对可见光的吸光度并进行定量分析的仪器，称为可见分光光度计；紫外可见分光光度计用来测量待测物质对可见光或紫外光(200～760nm)的吸光度并进行定量分析的仪器。可以测定核酸和蛋白的浓度，也可以测定细菌细胞密度。分光光度计的用途之二待测物质是标准物及标准图谱对照进行分析。分光光度计的用途之三是比较最大吸收波长吸收系数的一致性。分光光度计的用途之四是物质的纯度检验。分光光度计的用途之五是推测化合物的分子结构及构成。分光光度计的用途之六是判定络合物的组成及稳定常数的测定。

由于要建基础化学实验室，请朋友们帮忙推荐性价比较高的紫外分光光度计，可见分光光度计厂家、型号及价格。预购6万元左右的一台紫外分光光度计，对于可见分光光度计的价位在3000元左右，有了解的朋友，麻烦告之。

我们马上要做酶活测定，需要测定时需要保温37或25度5到10分钟，现在我们只有普通分光光度计，但不具备保温功能，需要在旁边做保温，然后再测定。在需要测定变化率的活性测定时，数据波动比终点法的数据波动大多了。大家用分光光度计测定酶活时，都用能保温的分光光度计吗？大家用分光光度计测定酶活时，用的什么牌子的分光光度计？

现在想用荧光分光光度计测量生物发光 可以么 怎么设置仪器 如何测量

做亚硝酸盐检测用的分光光度计是紫外还是可见光？这两个分光光度计有什么区别？够买哪一个比较好？另外，GB/T 5009.27中苯并芘的检测所用的荧光光度计是个啥东西？是原子荧光吗？

国标GBT--9758中有一句话，要求的仪器：分光光度计：适用于波长约在520 nm处测量。我想知道，这是表示要配备什么样的分光光度计？ 我很困惑，为什么有紫外/可见光分光光度计，又有分光光度计？它们是什么关系啊，还有什么原子吸收分光光度计，怎么这么多啊。请懂的人给我梳理一下，我初次接触，感激不尽！

求教：陈列式分光光度计的工作原理（即后分光式分光光度计）好像这种分光计在国内不多见！

荧光分光光度计是用于扫描液相荧光标记物所发出的荧光光谱的一种仪器。其能提供包括激发光谱、发射光谱以及荧光强度、量子产率、荧光寿命、荧光偏振等许多物理参数,从各个角度反映了分子的成键和结构情况。通过对这些参数的测定, 不但可以做一般的定量分析, 而且还可以推断分子在各种环境下的构象变化, 从而阐明分子结构与功能之间的关系。荧光分光光度计的激发波长扫描范围一般是190~650nm，发射波长扫描范围是200~800nm。可用于液体、固体样品（如凝胶条）的光谱扫描。 荧光光谱法具有灵敏度高、选择性强、用样量少、方法简便、工作曲线线形范围宽等优点，可以广泛应用于生命科学、医学、药学和药理学、有机和无机化学等领域。 荧光分光光度计的发展经历了手控式荧光分光光度计，自动记录式荧光分光光度计，计算机控制式荧 　　光分光光度计三个阶段；荧光分光光度计还可分为单光束式荧光分光光度计和双光束式荧光分光光度计两大系列。其他的还有低温激光Sh p ol’skill荧光分光光度计，配有寿命和相分辩测定的荧光分光光度计等。

最近想采购一台分光光度计，用于茶叶中的茶多酚的检测！想请教各位高手，哪种分光光度计比较适合！

721分光光度计百科名片721分光光度计采用经典的光路系统和精良的制造工艺，使仪器的测试精度及稳定性较传统产品有很大的提高；广泛适用于冶金、化工、机械、医学、生物、农业、环保、教学等行业和领域。该仪器也是食品厂、饮用水厂办QS认证中的必备检验设备。主要技术指标有： 波长范围：360∽800nm 波长精度：360∽600±3nm 600∽700±6nm 700∽800±8nm 透射比正确度：±2.5% 透射比重复性：0.5721分光光度计中的“721”是什么意思？！721是分光光度计的型号，除此之外还有721W分光光度计，722N分光光度计，722S分光光度计等。没有什么特殊的意义。这个型号是某个生产厂家制定的，然后被各光度计生产厂家采用，最终成为一个行业标准。721分光光度计故障及其排出:1.保险丝不通,更换新的 0.5A20mm 保险丝（GB×P型） 2.电源开关由于使用时间长接触不良,或开关本身质量不好而失灵,需要更换新的规格为KN×2W2D

测定亚硝用可见光分光光度计还是紫外分光光度计？如果都可以的话，购买哪一个比较好？ 哪一个的用途更广泛一点？

分光光度计的应用常识分光光度计已经成为现代分子生物实验室常规仪器。常用于核酸，蛋白定量以及细菌生长浓度的定量。分光光度计采用一个可以产生多个波长的光源，通过系列分光装置，从而产生特定波长的光源，光源透过测试的样品后，部分光源被吸收，计算样品的吸光值，从而转化成样品的浓度。样品的吸光值与样品的浓度成正比。核酸的定量 核酸的定量是分光光度计使用频率最高的功能。可以定量溶于缓冲液的寡核苷酸，单链、双链DNA，以及RNA。核酸的最高吸收峰的吸收波长260 nm。每种核酸的分子构成不一，因此其换算系数不同。定量不同类型的核酸，事先要选择对应的系数。如：1OD 的吸光值分别相当于50μg/ml的dsDNA，37μg/ml的ssDNA，40μg/ml的RNA，30μg/ml的Olig。测试后的吸光值经过上述系数的换算，从而得出相应的样品浓度。测试前，选择正确的程序，输入原液和稀释液的体积，尔后测试空白液和样品液。然而，实验并非一帆风顺。读数不稳定可能是实验者最头痛的问题。灵敏度越高的仪器，表现出的吸光值漂移越大。事实上，分光光度计的设计原理和工作原理，允许吸光值在一定范围内变化，即仪器有一定的准确度和精确度。如Eppendorf Biophotometer的准确度≤1.0%（1A）。这样多次测试的结果在均值1.0%左右之间变动，都是正常的。另外，还需考虑核酸本身物化性质和溶解核酸的缓冲液的pH值，离子浓度等：在测试时，离子浓度太高，也会导致读数漂移，因此建议使用pH值一定、离子浓度较低的缓冲液，如TE，可大大稳定读数。样品的稀释浓度同样是不可忽视的因素：由于样品中不可避免存在一些细小的颗粒，尤其是核酸样品。这些小颗粒的存在干扰测试效果。为了最大程度减少颗粒对测试结果的影响，要求核酸吸光值至少大于0.1A，吸光值最好在0.1-1.5A。在此范围内，颗粒的干扰相对较小，结果稳定。从而意味着样品的浓度不能过低，或者过高（超过光度计的测试范围）。最后是操作因素，如混合要充分，否则吸光值太低，甚至出现负值；混合液不能存在气泡，空白液无悬浮物，否则读数漂移剧烈；必须使用相同的比色杯测试空白液和样品，否则浓度差异太大；换算系数和样品浓度单位选择一致；不能采用窗口磨损的比色杯；样品的体积必须达到比色杯要求的最小体积等多个操作事项。除了核酸浓度，分光光度计同时显示几个非常重要的比值表示样品的纯度，如A260/A280的比值，用于评估样品的纯度，因为蛋白的吸收峰是280nm。纯净的样品，比值大于1.8（DNA）或者2.0（RNA）。如果比值低于1.8 或者2.0，表示存在蛋白质或者酚类物质的影响。A230标示样品中存在一些污染物，如碳水化合物，多肽，苯酚等，较纯净的核酸A260/A230的比值大于2.0。A320检测溶液的混浊度和其他干扰因子。纯样品，A320一般是0。

紫外分光光度计、红外分光光度计、可见分光光度计三种，我要测定噻吩要选哪种呀？还有如果要测定水中小于1ppm的氯离子含量又要选哪种呀？ 急用