推荐厂家
暂无
暂无
[b][font=宋体]细胞培养实验室组建的基本要求[/font]:[/b]1[font=宋体]、细胞培养是一种无菌操作技术,要求工作环境和条件必须保证无微生物污染和不受其它有害因素的影响。[/font]2[font=宋体]、细胞培养室和设计原则是防止微生物污染和有害因素影响,要求工作环境清洁、空气清新,干燥和无烟尘。[/font]3[font=宋体]、细胞培养室的设计原则一般是无菌操作区设在室内较少走动的内侧,常规操作和封闭培养于一室,为[/font]10[font=宋体]万级洁净环境的洁净室。而洗刷消毒工作设在洁净室外,避免物品污染洁净室内环境。细胞洁净室需要一个空调系统并对外界保持一定的正压。[/font]4[font=宋体]、解剖实验室主要用于对器官组织的分离,需要有无菌操作台、解剖显微镜、各种手术器材等。[/font] [align=center][url=http://www.hexiyiqi.com/hexi2012chanpinzhongxin/shiyanshilixinji/2018-10-12/301.html][img=实验室离心机]http://www.hexiyiqi.com/d/file/hexi2012chanpinzhongxin/luodishigaosulengdonglixinji/2019-05-14/4b60dacaa256bcc4fe665e2eb3536c0a.jpg[/img][/url][/align][align=center][b]智能台式高速冷冻实验室离心机 3H24RI[/b][/align][font=宋体]组织细胞培养室除一般实验室的普通常规设备外,尚有一些特殊需要的设备。基本可分为两大类:[/font][font=宋体]第一类为常用的基本设备;[/font][font=宋体]第二类为较高级的特殊设备。[/font][b]1. [font=宋体]细胞培养实验室常用的基本仪器设备[/font]1.[font=宋体]显微镜:[/font][/b][font=宋体]倒置显微镜——是组织细胞培养室所必需的日常工作常规使用设备之一,便于掌握细胞的生长情况并观察有无污染等。[/font][b]2.[font=宋体]培养箱:[/font][/b][font=宋体]体外培养的细胞和体内细胞一样,需要在恒定的温度下生存,大多数情况下,最适温度是[/font]37[font=宋体]℃,温差变化一般不应超过±[/font]0.5[font=宋体]℃,细胞在温度升高[/font]2[font=宋体]℃[/font] [font=宋体]时,持续数小时即不能耐受,[/font]40[font=宋体]℃以上将很快死亡。因此需要有能控制温度的培养箱,如具有较高灵敏度的恒温培养箱及[/font]CO2[font=宋体]培养箱。[/font][b]3.[font=宋体]干燥箱:[/font][/b][font=宋体]用于细胞培养箱的有些器械、器皿需要烘干后才能使用,玻璃器皿等须干热消毒。[/font][b]4.[font=宋体]水纯化装置:[/font][/b][font=宋体]细胞培养对水的质量要求较高,细胞培养以及与细胞培养工作相关的液体的配制用水必须事先严格纯化处理。进行细胞培养时配制各种培养液及试剂等均需使用三次蒸馏水:即使是用于玻璃器皿的冲洗,也应使用二次以上蒸馏水。[/font][b]5.[font=宋体]冰箱:[/font][/b][font=宋体]细胞培养室必须配备。[/font]a[font=宋体]、普通冰箱或冷藏柜——储存培养液、生理盐水等培养用的物品及短期保存组织标本。[/font]b[font=宋体]、低温冰箱([/font]-20[font=宋体]℃)——用于储存需要冷冻保存生物活性及较长时期存放的制剂,如酶、血清等。[/font][b]6.[font=宋体]细胞冷冻储存器:[/font][/b][font=宋体]储存器常用的是液氮容器。根据使用需要分为不同的类型及多种规格。选择购置液氮容器时要综合考虑容积大小,取放使用方便及液氮挥发量(经济)三种因素。[/font][b]7.[/b][font=宋体][url=http://www.hexiyiqi.com/][b]离心机[/b][/url][b]:[/b]进行细胞培养时,常规需要进行制备细胞悬液、调整细胞密度、洗涤、收集细胞等工作,通常需要使用[url=http://www.hexiyiqi.com/hexi2012chanpinzhongxin/shiyanshilixinji/]实验室离心机[/url]。一般可常规配置[/font]4000rpm[font=宋体]的国产台式离心机,例如细胞沉降,使用[url=http://www.hexiyiqi.com/hexi2012chanpinzhongxin/taishigaosulengdonglixinji/]低速离心机[/url]即可,离心力过大有时可能引起细胞的损伤。[/font][align=center][url=http://www.hexiyiqi.com/hexi2012chanpinzhongxin/taishigaosulengdonglixinji/2012-10-17/69.html][img=低速离心机]http://www.hexiyiqi.com/d/file/hexi2012chanpinzhongxin/taishigaosulengdonglixinji/2012-10-17/0e080cd46b2ee061b55caabaaee8cbf2.jpg[/img][/url][/align][align=center][b]台式低速离心机TD5A[/b][/align][b]8.[font=宋体]天平:[/font][/b][font=宋体]常用的有扭力天平、精密天平及各种电子天平。[/font][b]9.[font=宋体]消毒器:[/font][/b][font=宋体]一般为高压蒸汽灭菌锅,直接或间接与细胞接触的物品均需消毒灭菌处理。[/font][b]10.[font=宋体]滤器:[/font][/b][font=宋体]目前细胞培养工作中采用的培养用液,包括人工合成培养液、血清、消化用胰酶等常含有维生素、蛋白、多肽、生长因子等物质,这些物质在高温或射线照射下易发生变性或失去功能,因而上述液体多采用滤过消毒以除去细菌。目前常使用的滤器有玻璃滤器和微孔滤器,各种滤器有其使用原理和特点。[/font][b][font=宋体]常用的培养器皿:[/font][font=宋体]培养用器皿[/font][/b][font=宋体]是[/font][font=宋体]供细胞接种、生长等用的器皿,可由透明度好、无毒的中性硬质玻璃或无毒而透明光滑的特制塑料制成。[/font][font=宋体]细胞培养中需要的各种耗材[/font],[font=宋体]各类细胞培养板,细胞培养瓶,平皿移液管等。[/font][b][font=宋体]培养瓶[/font][/b][font=宋体]:由玻璃或塑料制成。主要用于培养、繁殖细胞。进行培养时培养瓶瓶口加盖螺旋瓶盖或胶塞,胶塞多用于密封培养。国产培养瓶的规格以容量([/font]ml[font=宋体])表示,如[/font]250ml[font=宋体]、[/font]100ml[font=宋体]、[/font]25ml[font=宋体]等;进口培养瓶则多以底面积([/font]cm2[font=宋体])表示。[/font][b][font=宋体]培养皿:[/font][/b][font=宋体]由玻璃或塑料制成,供盛取、分离、处理组织或做细胞毒性、集落形成、单细胞分离、同位素掺入、细胞繁殖等实验使用。常用的培养皿规格有[/font] 10cm[font=宋体]、[/font]9cm[font=宋体]、[/font]6cm[font=宋体]、[/font]3.5cm[font=宋体]等。[/font][font=宋体]多孔培养板:为塑料制品。可供细胞克隆及细胞毒性等各种检测实验使用。其优点是节约样本及试剂,可同时测试大量样本,易于进行无菌操作。培养板分为各种规格,常用的规格有:[/font]96[font=宋体]孔、[/font]24[font=宋体]孔、[/font]12[font=宋体]孔、[/font]6[font=宋体]孔、[/font]4[font=宋体]孔等。[/font][b][font=宋体]培养操作有关的器皿[/font][font=宋体]贮液瓶:[/font][/b][font=宋体]常见的为蓝盖瓶,主要用于存放或配制各种培养用液体如培养液、血清及试剂等。贮液瓶分为各种不同规格,如[/font]1000ml[font=宋体]、[/font]500ml[font=宋体]、[/font]250ml[font=宋体]、[/font] 100ml[font=宋体]、[/font]50ml[font=宋体]、[/font]5ml[font=宋体]等。[/font][b][font=宋体]吸管:[/font][/b][font=宋体]主要分为刻度吸管、无刻度吸管。刻度吸管主要用于吸取、转移液体,常用的有[/font]1ml[font=宋体]、[/font]2ml[font=宋体]、[/font]5ml[font=宋体]、[/font]10ml[font=宋体]等规格。无刻度吸管分为直头吸管及弯头吸管,除可以作吸取、转移液体外,弯头尖吸管还常用于吹打、混匀及传代细胞。[/font][b][font=宋体]加样器([url=https://insevent.instrument.com.cn/t/9p][color=#3333ff][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/9p][color=#3333ff]移液器[/color][/url][/color][/url])[/font][/b][font=宋体]:分为微量[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/9p][color=#3333ff][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/9p][color=#3333ff]移液器[/color][/url][/color][/url]和[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/9p][color=#3333ff]电动[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/9p][color=#3333ff]移液器[/color][/url][/color][/url]。用于吸取、移动液体或滴加样本。可根据需要调节量的大小,吸量准确、方便。可保证实验样品(或试剂)含量精确,重复性良好。[/font][b][font=宋体]其他用品:[/font][/b][font=宋体]尚有收集细胞用的离心管,放置试剂或临时插置吸管用的试管,装放吸管以便消毒的玻璃或不锈钢容器,用于存放小件培养物品便于高压消毒的铝制饭盒或贮槽,套于吸管顶部的橡胶吸头,封闭各种瓶、管的胶塞、盖子、冻存细胞用的安瓿或冻存管、不同规格的注射器、烧杯和量筒以及漏斗,超净工作台使用的酒精灯,供实验人员操作前清洁消毒手使用的盛有酒精或其他消毒液的微型喷壶等。[/font][b][font=宋体]器械[/font][/b][font=宋体]主要用于解剖、取材、剪切组织及操作时持取物件。常用的有:手术刀或解剖刀、手术剪或解剖剪(弯剪及直剪),用于解剖动物、分离及切剪组织,制备原代培养的材料;眼科虹膜小剪(弯剪或直剪),用于将组织材料剪成小块;血管钳及组织镊、眼科镊(弯、直),用于持取无菌物品(如小盖玻片)夹持组织等;口腔科探针或代用品,用以放置原代培养之组织小块。[/font][b]2[font=宋体]、细胞培养实验室特殊设备[/font][/b][font=宋体]细胞培养实验室除了应配备上述的常用基本设备以外,如有条件,可添置一些特殊或先进的设备仪器,以便更有效、更精确、更深入地进行实验室工作。例如:[/font][font=宋体]([/font]1[font=宋体])酶联免疫检测仪——可用于进行免疫学测定及细胞毒性、药物敏感性检测等。[/font][font=宋体]([/font]2[font=宋体])[/font] [font=宋体]超低温冰箱([/font]-80[font=宋体]℃)——便于储存某些试剂及标本。[/font][font=宋体]([/font]3[font=宋体])旋转培养器——用于某些特殊细胞或需要收获大量细胞的培养。[/font][font=宋体]([/font]4[font=宋体])[/font] [font=宋体]荧光显微镜——进行荧光染色样本的观察。[/font][font=宋体]([/font]5[font=宋体])[/font] [font=宋体]流式细胞仪——可更精确及快速检测细胞。[/font][font=宋体]([/font]6[font=宋体])用于检测细胞培养条件的各种仪器,例如专门为快速分析细胞培养基中主要或关键营养成分、代谢产物及气体含量设计的多功能细胞培养分析仪、手提式[/font]CO2[font=宋体]浓度测定仪等。[/font][b][font=宋体]其余仪器[/font][/b][font=宋体]对于细胞实验还可能需要振荡器及磁力搅拌器用于混匀液体;还有一些沾满细胞的难清洗的不锈钢类或玻璃类器皿,则需要超声波清洗机的帮助;如果涉及免疫实验,肯定需要冰浴,碎冰的需求量大的话,则需要购买制冰机;另外破碎细胞可能会需要超声波细胞破碎仪;[/font]
什么是细胞培养? 细胞培养是指从动物或植物中取出细胞,然后使其在合适的人工环境中生长。这些细胞可于培养前直接从组织中取出并采用酶或机械方法进行解离,或者也可来自已经建立的细胞系或细胞株。 原代培养 原代培养是指将细胞从组织中分离后,使其在合适的条件下增殖直到占据所有可用基质(即:达到汇合状态)的培养阶段。在此阶段,必须将细胞转移到新的容器中并更换新鲜培养基,从而对细胞进行传代培养,为其提供更多继续生长的空间。 细胞系 首次传代培养后,原代培养物即被称为细胞系或者亚克隆。来自于原代培养的细胞系寿命有限(即:有限细胞系,见下文),随着细胞的传代,生长能力最强的细胞会占据优势,最终导致细胞群体在基因型和表型上达到一定程度的均一性。 细胞株 如果将细胞系的一个亚群通过克隆或者其他方法从培养物中明确地选择出来,则此细胞系就成为一个细胞株。与亲代细胞系起始时相比,细胞往往会获得其他一些遗传学改变。 培养条件 各种细胞的培养条件相差很大,但是细胞培养的人工环境必须包括合适的容器,容器中含有一定的基质或介质,为细胞提供必需的营养素(氨基酸、碳水化合物、维生素、矿物质)、生长因子、激素和气体 (0,、CO,),并可调节其物理化学环境 (pH、渗透压、温度)。大多数细胞均具有贴壁依赖性,必须贴附在固体或半固体基质上培养(贴壁或者单层培养)而另一些细胞则可在培养基中漂浮生长(悬浮培养)。 有限细胞系与连续细胞系 正常细胞通常只能分裂有限的次数,随后就会丧失增殖的能力,这是一个由遗传决定的事件,被称为衰老 这种细胞系被称为有限细胞系。但是,一些细胞系会通过被称为转化的过程变为永生性细胞系,这一过程可自然发生,也可经化学或病毒诱导发生。有限细胞系发生转化获得无限分裂能力后,就成为连续细胞系。 冻存 如果传代时有多余的细胞,可通过适当的保护剂(例如:DMSO 或甘油)处理细胞,储存在 -130℃ 以下的温度下 (冻存),直到需要使用之时。
细胞培养是细胞和分子生物学中最重要的一项技术。广泛应用于现代医学、农业科学、生物科学、材料科学和环境科学等领域,培养的细胞为上述领域提供研究的模型和实验材料。目前细胞间可以供从事蛋白质表达工作的昆虫细胞培养实验及如HEK293T细胞系,Hela细胞系,CHO细胞系等常用细胞系的培养、传代及其他分子实验的操作条件。