细胞毒素安全柜

蓝藻（也称蓝细菌）是地球上最早出现的光合自养生物，它们利用水作为电子供体，利用太阳能将二氧化碳还原成有机化合物，并释放出自由氧。蓝藻广泛分布于淡水、咸淡水、海水和陆生环境。蓝藻能产生一系列毒性很强的天然毒素（称为蓝藻毒素,Cyanotoxin），根据化学结构可分为三类：环肽、生物碱和脂多糖内毒素。当湖泊、河流等蓝藻大量繁殖而形成水华时，其中的鞘丝藻、束丝藻、Umezakia、拟柱胞藻，主要是拟柱胞藻(Clindrospermopsis)细胞破裂，产生拟柱胞藻毒素(又称筒胞藻毒素Cylindrosperm opsin)，简称CYN，分子式是C15H21N5O7S，分子量415.4，易溶于水、甲醇、二甲亚砜；是具有细胞毒性、肝毒性、神经毒性和遗传毒性的生物碱毒素，拟柱胞藻毒素是蛋白质合成的抑制剂，可能通过抑制蛋白质合成能导致肠胃炎、肝损伤、肾损伤、肠损伤，可能危及人体的健康。WHO《饮用水水质准则》对拟柱孢藻毒素表示了关注，暂时没有提出健康指导值。 我们已经完成该检测方法的确认，开始进行该藻毒素的检测了。

据外媒报道，英国食品安全局日前调查了婴幼儿食品、谷物食品以及苹果汁中真菌毒素的含量，调查发现超过10%的谷物食品样本含有真菌毒素--麦角生物碱，而且这种生物碱的总浓度从2至169μg/kg不等。据了解，真菌毒素由真菌产生，它是一大类化学物质，其中的麦角生物碱由麦角属真菌产生，尽管麦角生物碱可能会污染谷物食品，然而欧盟地区尚未制定针对这种生物碱的法规。欧盟委员会已要求欧盟食品安全局就麦角生物碱对人畜的健康所构成的风险进行评估，欧盟食品安全局定于2012年5月公布风险评估结果。

【序号】：1【作者】： 苏雪荣甘俊英薛玉英【题名】：银离子产品的含量特性及细胞毒性检测【期刊】：中华烧伤杂志. 【年、卷、期、起止页码】：2019,35(01)【全文链接】：[url]https://kns.cnki.net/kcms/detail/detail.aspx[/url]?dbcode=CJFD&dbname=CJFDZHYX&filename=ZHSA201901005&uniplatform=NZKPT&v=aRLyjURmU2MI64w1r00bButObYbAUMCiTSpVn4pT9LRcy2c66uKiXTQGY7ZDCQRz

霉菌毒素是霉菌在谷物（大豆、玉米、麸皮）中繁殖过程中或者储存过程中产生的有毒代谢产物。正确认识这些毒素，可以帮助我们更好地预防并选择有针对性的脱霉剂。 霉菌毒素常见以下几种： 黄曲霉毒素 这是一种最为常见的毒素，主要是由黄曲霉和寄生曲霉产生的有毒代谢产物。黄曲霉毒素被动物采食后，迅速被胃肠道吸收，它在肝脏中的浓度最高，所以肝脏的受害最严重。肝为机体重要的免疫器官和代谢器官，一旦受损会导致全身性出血、消化机能障碍和神经症状。 玉米赤霉烯酮 又称F-2毒素，主要是禾谷镰刀菌的一种代谢产物，属于镰刀菌毒素类，它主要影响动物的生殖系统。玉米赤霉烯酮可促进子宫DNA、RNA和蛋白质的合成，使动物发生雌激素亢进症，所以又被称为类动情毒素。该毒素可使母猪外阴持续性红肿，这种红肿症状常被误认为是母猪发情，但出现症状的母猪却不接受公猪爬跨配种。其对公猪的影响也很显著，可导致性欲低下、精液量减少、密度降低，精子萎缩、变形，或畸形率增加等。 T-2毒素 它是三线镰刀菌、拟技孢镰刀菌、梨孢镰刀菌等的有毒代谢产物，属于镰刀菌毒素类。T-2毒素有较强的细胞毒性，可破坏组织黏膜的完整性，使免疫细胞的功能下降，引起贫血、出血。由于T-2毒素能刺激肠道黏膜，因此还会引起猪的呕吐和腹泻。 赭曲霉毒素 与黄曲霉毒素有些相似，主要侵害肝脏和肾脏。它可使肠道相关淋巴组织坏死，降低吞噬细胞的吞噬作用，影响细胞免疫和体液免疫。母猪长期过量饲喂赭曲霉毒素污染的饲料，有可能影响后代的免疫机能。 烟曲霉毒素 该毒素常出现于玉米产区，它对机体呼吸道的损伤比较严重。有的猪场呼吸道问题总是反复难以治愈，可考虑是不是烟曲霉毒素在其中作怪。另外该毒素中毒后猪的生产性能和繁殖性能也遭到破坏，明显的症状是胚胎发育受损，免疫机能降低。 呕吐毒素 在早期阶段中，呕吐毒素能导致皮肤刺激，缺乏食欲，呕吐；在后期，则会引起出血、消化道的坏疽、中枢神经系统问题、免疫系统的破坏、骨髓造血功能的衰退以及生殖功能衰

解释毒性效应呕吐毒素（DON，）是单端孢菌素烯烃中的一种，它通常是由生长在谷类物品（如小麦、玉米、大麦和秣草）霉菌镰红菌素生成的。呕吐毒素的毒性效应包括：呕吐、不想进食、胃肠炎、腹泻、免疫抑制和血液病。强制标准研究表明猪对呕吐毒素很敏感，当呕吐毒素含量≥1ppm时，它们就拒绝进食。其毒性也会对其他物种产生毒性效应，各种物种对呕吐毒素的敏感性各不相同。研究表明呕吐毒素会使已加工食物发生问题，包括使可吃的谷类制品产生臭味、对生面团质量产生负面影响。因此，精确测定可能含有呕吐毒素的食物和食品就现得十分重要。美国FDA（美国食品和药品管理局）已经制定了呕吐毒素含量的强制标准。建议限量美国食品和药品管理局已经颁布的呕吐毒素建议限量如图示“建议限量”。概述首次分离脱氧雪腐镰刀菌烯醇主要是由镰刀菌的某些种产生的化学结构和生物活性相似的有毒代谢产物——单端孢霉烯族化合物中的一种。DON的主要产生菌是禾谷镰刀菌(Fusariumgraminearum)，据报道也有其它一些镰刀菌可产生。DON于1972年由日本的Morooka等首次分离，同年，Yoshizawa等阐明了这种新的真菌毒素的结构，并将其命名为4-deoxynivalenol(DON)。细胞毒性DON广泛存在于全球，主要污染小麦、大麦、玉米等谷类作物，也污染粮食制品，人和动物在误食被该毒素污染的粮谷类后可以产生广泛的毒性效应。另外，它还常与其它的霉卤毒素如黄曲霉毒素共同污染农作物，进入人体后可以相互影响。近年来发现DON可能与人类食管癌、IgA肾病有关，对人类及动物的健康构成威胁。DON属于剧毒或中等毒物，研究表明，DON在体内可能有一定的蓄积，但无特殊的靶器官，具有很强的细胞毒性。人畜摄入了被DON污染的食物／饲料后，会导致厌食、呕吐、腹泻、发烧、站立不稳、反应迟钝等急性中毒症状，严重时损害造血系统造成死亡，但不同的动物对DON的敏感程度不一，猪是最敏感的动物。研究表明，DON可能对免疫系统有影响，有明显胚胎毒性和一定致畸作用，可能有遗传毒性，但无致癌、致突变作用。由于DON的危害严重，引起了各国的普遍重视。谷物及饲料中DON的含量有严格的限量标准。我国谷物中DON的限量标准为1．0mg／kg。理化性质DON的化学名为3a，7a，l5一三羟基一l2，l3一环氧单端孢酶一9一烯I8酮，是一种B型单端孢酶烯族化合物，为一种倍半烯衍生物。分子量为296．3，分子式为C15H20O6，结晶为无色针状，熔点为l5l～153℃，α，β一不饱和酮基致使其在短波紫外下有吸收峰。但此紫外吸收与其它许多物质紫外吸收相重叠，并非特征性的。DON易溶于水和极性溶剂甲醇、乙醇、乙腈、丙酮及乙酸乙酯，但不溶于正己烷和乙醚。1988年Shepherd和Gilbert证实DON在有机溶剂中稳定，因此乙酸乙酯和乙腈是最适合的溶剂，长期储存更是如此。DON耐热、耐压，弱酸中不分解，加碱及高压处理可以破坏其部分毒力。DON的耐藏力也很强。据报道病麦经4年的贮藏，其中的DON仍能保留原有的毒性。检测DON的污染常出现于小麦、大麦、玉米和饲料中，因此绝大部分DON检测方法是针对这些物质，而分析谷物及饲料中的DON并非易事，许多因素必须给以良好控制。例如要从大量的原始材料中抽取适当的样品，适当地储备、处理以及恰当地从样品中抽小样。原始材料可能存在的不均一性和在储备、分装过程中可能出现的污染物使分析进一步复杂化；另一方面，分析过程中需要估计精确度、精密性、最低检出限以确保检测得出的数据能具有代表性，尽可能把分析错误减到最

生物安全柜对于广大的科研实验人员来说是非常熟悉的常规设备，但对其使用维护，特别是在特定条件下的彻底熏蒸消毒却不一定很了解，由于多方面方因，大多数实验室的生物安全柜自投入使用以后，甚至多年，也没有经过必要的的维护，有的甚至已经在不正常状态仍在使用。这给实验室生物安全留下了隐患，特别是在一些特定情况下，如使用3~5年后需要更换排风高效过滤器时，安全柜发生故障需要打开维修之前，生物安全柜受到严重污染时需要进行彻底的熏蒸消毒。 一般常用的熏蒸用消毒剂包括甲醛、过氧化氢、二氧化氯等，甲醛虽然成本最为低廉，但因其致癌作用已经越来越受到使用限制，而且做过甲醛熏蒸的人大多会头痛不已，因为要将整个安全柜用塑料布封闭起来、计算需要的消毒剂用量、布置生物指示剂、中和消毒剂、等待漫长的十几小时等，最担心的恐怕还是甲醛的泄漏，以及生物挑战实验的成败等安全问题。 现在有一种新的方法可完全代替传统的甲醛熏蒸，既采用过氧化氢蒸汽对生物安全柜进行消毒，通常发生器通过一个喷射接口与主舱体连接，已经有部分型号的安全柜提供此接口，同时有门封板将前面的操作口进行密封。如果这两个配置都没有的话，可以使用一个临时的门封板，并且已经预装好了合适的连接接口，将其安装在前面操作口上，通过门封上的接口将过氧化氢蒸汽喷入生物安全柜内。 通常蒸汽回路连接于安全柜排风过滤器的后面，当然确切的连接类型和位置取决于带消毒的生物安全柜的型号。在更换过滤器或对安全柜进行维护时，这种连接会推送过氧化氢蒸汽穿过安全柜的排风过滤器并将其彻底消毒。 只对主舱体进行消毒也是可行的，可以用于准备下一个实验前杀灭舱内及工作台下面的所有微生物，避免交叉污染。这种方案相比对主过滤器消毒循环时间变短，使用的过氧化氢也更少。 所有的生物安全柜都有或多或少的气体泄漏，为了确保过程的安全，过氧化氢发生器可以保持一个不大的负压状态，保证在灭菌过程中过氧化氢蒸汽不会从舱体泄漏到实验室。这个功能是在消毒前通过在门封板上安装连接一个小型压力控制管来获得。 下图所示为典型的生物安全柜消毒配置方法。http://www.bio-equip.com/imgatl/2011/201111816654.jpg对于三级生物安全柜可以将蒸汽通过安装好的传送舱口，通过小型供风高效过滤器喷射进舱内，由排气管连接返回的蒸汽形成闭合回路，将供气和排气过滤器一并消毒。 Bioquell甚至提供更为完整的解决方案，其Mircoflow系列的高级别生物安全或微生物实验用二级生物安全柜，根据BS5726 / EN12469标准设计制造，并通过应用微生物学研究中心CAMR的独立验证，提供操作者和样品最高级别的保护，在软硬件系统整合连接Bioquell Clarus系列过氧化氢蒸汽发生器，包括引入气体进入操作舱体并从排气高效过滤器的下游排出，充分灭菌工作舱及排气HEPA过滤器。 HPV技术简介过氧化氢蒸汽(HPV)消毒技术正迅速成为制药、生物技术和医疗卫生行业生物净化方法的选择，对与高压锅相同的生物指示剂-嗜热脂肪芽孢杆菌达到6-log的杀灭率。在试运行或停工期间可采用广泛的消毒产品和服务对设施进行生物净化。Bioquell采用专利的Clarus双循环技术合并PLC程控将灭菌循环的效果最佳化，当过氧化氢在房间或舱体的表面形成微冷凝时达到生物消毒，这个阶段可以在显微镜下看到一个肉眼不可见的亚微米级的过氧化氢薄层，科学研究证实这个低温、无残留的过程已经在蒸汽发生阶段开始杀灭微生物。微冷凝的形成确保形成了微生物杀灭的最佳条件，当达到凝露点时，减少一个对数级别（1-log）微生物的时间（D值）最短。从灭菌动力学曲线可以看到微生物的数量陡降，伴随着微冷凝的形成，生物指示剂数量曲线从舒缓变得急剧下降。在某些产业一个生物性洁净的环境是非常重要的，Bioquell的HPV技术相比其他消毒方法具有明显的优点。传统的消毒方法和消毒剂如甲醛熏蒸不仅冗长而且也非常危险，甲醛已经被世界卫生组织分类作为对人类致癌的物质，甲醛消毒在房间中通常推荐12小时接触时间，接下来是一个漫长的排气和通风过程(大约24小时)。相比之下,过氧化氢在房间的消毒循环可低至2小时，对于整个约8000m3的设施可以在短至24小时内完成。Bioquell的过氧化氢蒸汽(HPV)消毒过程是快速、无残留和安全的，生成产物只有水和氧气。HPV相比其他消毒剂也具有广泛的材料适应性，意味着对建筑物造成损坏的风险更小, 可作为设施的固定装置和设备。在生命科学和食品行业，HPV消毒过程是一个非常好的消毒方法，被主要监管机构所接受。如需要可提供一个完整的材料兼容性指南。对于影响生命科学、食品等行业的多种微生物，HPV消毒技术已经被证实具有广谱灭菌作用，如需要也可提供一个完整的消毒效果指南。Bioquell的消毒设备和服务可以为用户选择提供多种解决方案, 事实上Bioquell过氧化氢蒸汽发生器就像一台既可以自动也可以手动操作的高档单反相机，当您熟练掌握使用方法以后，可以自行开发更多不同的应用，为您的投资创造更大的价值。

各位老师好，用ELISA法做黄曲霉毒素，可以在生物安全柜里面做吗？还是说在通风橱里做好一些？如果可以在生物安全柜做的话，想把酶标仪也放在阳性间。请各位老师指教

生物安全柜对于广大的科研实验人员来说是非常熟悉的常规设备，但对其使用维护，特别是在特定条件下的彻底熏蒸消毒却不一定很了解，由于多方面方因，大多数实验室的生物安全柜自投入使用以后，甚至多年，也没有经过必要的的维护，有的甚至已经在不正常状态仍在使用。这给实验室生物安全留下了隐患，特别是在一些特定情况下，如使用3~5年后需要更换排风高效过滤器时，安全柜发生故障需要打开维修之前，生物安全柜受到严重污染时需要进行彻底的熏蒸消毒。 一般常用的熏蒸用消毒剂包括甲醛、过氧化氢、二氧化氯等，甲醛虽然成本最为低廉，但因其致癌作用已经越来越受到使用限制，而且做过甲醛熏蒸的人大多会头痛不已，因为要将整个安全柜用塑料布封闭起来、计算需要的消毒剂用量、布置生物指示剂、中和消毒剂、等待漫长的十几小时等，最担心的恐怕还是甲醛的泄漏，以及生物挑战实验的成败等安全问题。 现在有一种新的方法可完全代替传统的甲醛熏蒸，既采用过氧化氢蒸汽对生物安全柜进行消毒，通常发生器通过一个喷射接口与主舱体连接，已经有部分型号的安全柜提供此接口，同时有门封板将前面的操作口进行密封。如果这两个配置都没有的话，可以使用一个临时的门封板，并且已经预装好了合适的连接接口，将其安装在前面操作口上，通过门封上的接口将过氧化氢蒸汽喷入生物安全柜内。 通常蒸汽回路连接于安全柜排风过滤器的后面，当然确切的连接类型和位置取决于带消毒的生物安全柜的型号。在更换过滤器或对安全柜进行维护时，这种连接会推送过氧化氢蒸汽穿过安全柜的排风过滤器并将其彻底消毒。 只对主舱体进行消毒也是可行的，可以用于准备下一个实验前杀灭舱内及工作台下面的所有微生物，避免交叉污染。这种方案相比对主过滤器消毒循环时间变短，使用的过氧化氢也更少。 所有的生物安全柜都有或多或少的气体泄漏，为了确保过程的安全，过氧化氢发生器可以保持一个不大的负压状态，保证在灭菌过程中过氧化氢蒸汽不会从舱体泄漏到实验室。这个功能是在消毒前通过在门封板上安装连接一个小型压力控制管来获得。 下图所示为典型的生物安全柜消毒配置方法。http://www.bio-equip.com/imgatl/2011/201111816654.jpg对于三级生物安全柜可以将蒸汽通过安装好的传送舱口，通过小型供风高效过滤器喷射进舱内，由排气管连接返回的蒸汽形成闭合回路，将供气和排气过滤器一并消毒。 Bioquell甚至提供更为完整的解决方案，其Mircoflow系列的高级别生物安全或微生物实验用二级生物安全柜，根据BS5726 / EN12469标准设计制造，并通过应用微生物学研究中心CAMR的独立验证，提供操作者和样品最高级别的保护，在软硬件系统整合连接Bioquell Clarus系列过氧化氢蒸汽发生器，包括引入气体进入操作舱体并从排气高效过滤器的下游排出，充分灭菌工作舱及排气HEPA过滤器。 HPV技术简介过氧化氢蒸汽(HPV)消毒技术正迅速成为制药、生物技术和医疗卫生行业生物净化方法的选择，对与高压锅相同的生物指示剂-嗜热脂肪芽孢杆菌达到6-log的杀灭率。在试运行或停工期间可采用广泛的消毒产品和服务对设施进行生物净化。Bioquell采用专利的Clarus双循环技术合并PLC程控将灭菌循环的效果最佳化，当过氧化氢在房间或舱体的表面形成微冷凝时达到生物消毒，这个阶段可以在显微镜下看到一个肉眼不可见的亚微米级的过氧化氢薄层，科学研究证实这个低温、无残留的过程已经在蒸汽发生阶段开始杀灭微生物。微冷凝的形成确保形成了微生物杀灭的最佳条件，当达到凝露点时，减少一个对数级别（1-log）微生物的时间（D值）最短。从灭菌动力学曲线可以看到微生物的数量陡降，伴随着微冷凝的形成，生物指示剂数量曲线从舒缓变得急剧下降。在某些产业一个生物性洁净的环境是非常重要的，Bioquell的HPV技术相比其他消毒方法具有明显的优点。传统的消毒方法和消毒剂如甲醛熏蒸不仅冗长而且也非常危险，甲醛已经被世界卫生组织分类作为对人类致癌的物质，甲醛消毒在房间中通常推荐12小时接触时间，接下来是一个漫长的排气和通风过程(大约24小时)。相比之下,过氧化氢在房间的消毒循环可低至2小时，对于整个约8000m3的设施可以在短至24小时内完成。Bioquell的过氧化氢蒸汽(HPV)消毒过程是快速、无残留和安全的，生成产物只有水和氧气。HPV相比其他消毒剂也具有广泛的材料适应性，意味着对建筑物造成损坏的风险更小, 可作为设施的固定装置和设备。在生命科学和食品行业，HPV消毒过程是一个非常好的消毒方法，被主要监管机构所接受。如需要可提供一个完整的材料兼容性指南。对于影响生命科学、食品等行业的多种微生物，HPV消毒技术已经被证实具有广谱灭菌作用，如需要也可提供一个完整的消毒效果指南。Bioquell的消毒设备和服务可以为用户选择提供多种解决方案, 事实上Bioquell过氧化氢蒸汽发生器就像一台既可以自动也可以手动操作的高档单反相机，当您熟练掌握使用方法以后，可以自行开发更多不同的应用，为您的投资创造更大的价值。 来源：倍尔科技（深圳）有限公司

ESCO 在Labculture系列产品产品中(LA2,LB2, 以及细胞毒素安全柜系列 )将采用最新研制的ISOCIDE防菌涂层，这种ISOCIDE防菌涂层较之前采用的防菌涂层具有更好的防菌效果，有效杀灭并抑制微生物在安全柜机体表面附着和繁殖，为工作人员提供了更好的安全防护。由于抑菌材料是混合在安全柜外表面上的粉末涂层中的，因此其抑菌作用是在生物安全柜的产品寿命周期中都有效的，而不会因为表面清洗而被消除。 根据市场的需求，ESCO也将把ISOCIDE防菌涂层应用到其他各款的安全柜和生物科技设备中。您可以联系ESCO或跟本地的ESCO代理商了解最新产品情况。

现已查明自然界存在的真菌毒素在200种以上，按真菌毒素的重要性及危害依次排列为：黄曲霉毒素(Aflatoxin,AF)、赭曲霉毒素A(Ochratoxin A,OA)、单端孢霉烯族毒素(Ｔrichothecenes)、玉米赤霉烯酮(Zearalenone，ZEA)。真菌毒素具有两种毒性，一是致DNA损伤，有者可致癌；二是细胞毒性，有破坏质膜和细胞酶的作用。 1、黄曲霉毒素及对人类健康的影响 黄曲霉毒素(Aflatoxin,AF)是由黄曲霉(Aspergillus flavus)、寄生曲霉(A．parasiticus)代谢产生—类结构相似含多环不饱和香豆素的化合物，已分离出17种，其中4种(B1,B2,G1,G2)已完全弄清其特性并从毒物学方面进行了广泛研究，以AFB1毒性最大(大于氰化钾)。 黄曲霉毒素可存在于多种热带或亚热带地区出产的食品内。最常发现含有黄曲霉毒素的是花生。其他食品还有玉米、无花果、果仁及多类谷物中感染黄曲霉毒素都较常见。黄曲霉菌肉眼看来往往是绿色的，而黄曲霉毒素却无臭、无味、无色。 化学上而言，食物中的黄曲霉毒素呈稳定状态，能抵受一般的烹调过程，不易分解。黄曲霉毒素一旦出现，便难以消除。在现今社会里，人类因摄取到黄曲霉毒素而引起急性中毒的个案是很罕见。中毒病征可能包括发烧、呕吐及黄疸病，也可能引致急性肝脏受损，情况严重的会致命。长期摄取黄曲霉毒素与罹患肝癌有关。动物研究结果显示老鼠、仓鼠及猴子等动物经长期口服黄曲霉毒素后，可引致肝部长出肿瘤。

原标题：“纳米海绵疫苗”能“扣留”成孔毒素 可避免耐药性金黄色葡萄球菌感染恶化 科技日报讯 据物理学家组织网近日报道，美国加州大学圣地亚哥分校纳米工程师开发出一种“纳米海绵疫苗”，经小鼠实验证明，其能大量吸收耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）产生的成孔毒素——无论在血管还是在皮肤，因此能预防MRSA放出的alpha-溶血素造成的影响恶化，可作为一种安全高效的抗毒素疫苗。相关论文发表在近日的《自然·纳米技术》上。 纳米海绵是在“类毒素疫苗”平台的基础上开发出来，是一种生物兼容粒子。其内核是高分子聚合物，外面包裹着红血细胞膜，直径约85纳米，1000个疫苗才有一根头发粗细。在注射后2周左右，就能从体内排清。 每个红血细胞膜都能“抓住”并“扣留”金黄色葡萄球菌放出的alpha-溶血素，不需要通过热处理或化学反应破坏毒素结构。嵌入毒素颗粒后，纳米海绵能作为疫苗，引发小鼠免疫系统的抗体与毒素中和，使注射了致死剂量毒素的小鼠免于死亡。 类毒素疫苗对抗的是毒素或毒素组，而不是产生该毒素的细菌。细菌变异会使抗生素抗性下降，而类毒素疫苗提供了一种有前景的方法，不会对抗生素产生依赖。论文高级作者、该校雅各布工程学院纳米工程教授张良方（音译）说：“直接瞄准alpha-溶血素还有另一个好处，因为这些毒素生成了有毒环境作为防御机制，让免疫系统在对抗金黄色葡萄球菌时更加困难。” 除了MRSA和其他金黄色葡萄球菌感染之外，纳米海绵疫苗的方法还能用于生产抗多种毒素的疫苗，包括大肠杆菌（E.coli）和幽门螺杆菌（H.pylori）。而且，纳米海绵疫苗比由热处理金黄色葡萄球菌制成的类毒素疫苗更加安全高效。经一次注射后，使用热处理类毒素疫苗的小鼠仅10%生存下来，而用纳米海绵疫苗的小鼠生存率达50%；经两次加强注射，纳米海绵疫苗小鼠的生存率达到100%，热处理类毒素疫苗小鼠为90%。 本研究是研究小组今年初提出的“吸收体内多种成孔毒素的纳米海绵——从细菌蛋白质到蛇毒”项目的连接。成孔毒素会在细胞膜上造孔，使细胞泄露而死亡。它们非常强大，能杀死免疫细胞，因此大部分候选疫苗只能用加热或经过化学处理的毒素，破坏它的某些蛋白以削弱其毒性，但这也会削弱对抗毒素的免疫反应。 “加热越多，蛋白结构受到的破坏也越多，因为免疫细胞识别的正是这种结构，并制造抗体来对抗它。”张良方解释说，纳米海绵类毒素疫苗避免了这一问题，它的方法是“扣留”而不改变，就像给一个危险的罪犯带上了手铐，而当毒素攻击包裹着红细胞膜的纳米粒子时，“不会产生任何影响，它们只是把毒素锁定在那里。”来源：中国科技网-科技日报 作者：常丽君 2013年12月27日

一、目的流感病毒的MDCK细胞分离方法是流感实验的关键技术，用于流感病毒的分离、培养。本SOP是为确保MDCK细胞分离流感病毒的操作准确、规范和可靠而制定。二、范围适用于实验室所有技术人员进行流感病毒的MDCK细胞分离。三、程序（一）生物安全要求H5,H7亚型高致病性禽流感病毒，H2N2亚型流感病毒的MDCK细胞分离实验室生物安全级别：BSL-3。实验操作人员需进行BSL-3防护，具体详见“生物安全个人防护SOP”。H5,H7亚型高致病性禽流感病毒，H2N2亚型流感病毒的MDCK细胞分离操作必须在BSL-3级实验室的生物安全柜中进行。其余流感病毒的MDCK细胞分离实验室生物安全级别：BSL-2。实验操作人员需进行BSL-2防护，具体详见“生物安全个人防护SOP”。其余流感病毒的MDCK细胞分离操作必须在BSL-2级实验室的生物安全柜中进行。（二）材料1、75％～90％成片的MDCK细胞，选用合适大小的细胞培养瓶和细胞培养板来用做病毒分离2、胰酶（牛胰腺来源Ⅷ型）3、HEPES缓冲液，1M母液 4、D-MEM培养基，Hank's液5、青、链霉素母液（10000U/mL 青霉素G；10000µg/mL硫酸链霉素 6、牛血清白蛋白组分Ⅴ，7.5%溶液7、临床样品0.5mL8、1mL无菌移液管9、10mL无菌移液管10、15mL无菌离心管（三）实验步骤1、准备病毒生长液（1）细胞维持液准备500mL D-MEM液中加入①青、链霉素母液 5mL（终浓度达：100U/mL青霉素；100µg/mL链霉素）②牛血清白蛋白组分Ⅴ 12.5mL（终浓度：0.2%）③HEPES缓冲液 12.5mL（终浓度：25mM）（2）病毒生长液每500mL细胞维持液中加入0.5mL的TPCK-胰酶（母液浓度为2mg/mL）使TPCK-胰酶的终浓度为2µg/mL。2．流感病毒MDCK细胞分离步骤：（1）75％～90％成片细胞的准备，以选取T25细胞瓶为例。①用40×物镜观察细胞生长状态。②轻轻倒出细胞生长液，用10mL的无菌移液管吸取6mL Hank's液分别清洗细胞3遍。（2）细胞培养瓶的接种①用无菌的移液管将清洗细胞的Hank's液从细胞培养瓶中移出。②用无菌的移液管吸取适量临床标本置于细胞培养瓶中，温和摇动数次。③然后放于37℃，5%CO2培养箱中吸附1～2h。④吸出接种物，用10mL的无菌移液管吸取6mL Hank's液分别清洗细胞2遍。然后加入6mL病毒生长液于细胞培养瓶中。⑤放置于33～35℃培养箱培养。⑥每日观察细胞病变情况。（细胞病变的特征是细胞肿胀圆化，细胞间隙增大，细胞核固缩或破裂，严重时细胞部分或全部脱落）。（3）细胞培养物的收获当75%～100%细胞出现病变时进行收获，收获之前可以将细胞放于-70℃冰箱，冻融1～2次，以提高收获标本的病毒滴度。即使无细胞病变也应该于接种后第7天收获。收获病毒液时，先温和摇动细胞瓶数次，然后用10mL的无菌移液管吸取病毒液置于15mL无菌离心管中，混匀病毒。收获的病毒液可以立即进行后续试验，或冻于-80℃冰箱待以后试验使用。

生物安全柜是为操作原代培养物、菌毒株以及诊断性标本等具有感染性的实验材料时，用来保护操作者本人、实验室环境以及实验材料，使其避免暴露于上述操作过程中可能产生的感染性气溶胶和溅出物而设计的。生物安全柜优点　　WHO《实验室生物安全手册》提出，生物安全柜可以有效减少由于气溶胶暴露所造成的实验室感染以及培养物交叉污染。生物安全柜同时也能保护工作环境。 　　事实上，生物安全柜更侧重于保护操作人员和环境，防止操作的病原微生物扩散造成人员伤害和环境污染。 生物安全柜级别　　根据生物安全防护水平的差异，生物安全柜可分为一级、二级和三级三种类型。一级生物安全柜可保护工作人员和环境而不保护样品。其气流原理和实验室通风橱基本相同，不同之处在于排气口安装有HEPA 过滤器，将外排气流过滤进而防止微生物气溶胶扩散造成污染。一级生物安全柜本身无风机，依赖外接通风管中的风机带动气流，由于不能保护柜内产品，目前已较少使用。 　　二级生物安全柜是目前应用最为广泛的柜型。按照《中华人民共和国医药行业标 生物安全柜准YY0569-2005生物安全柜》中的规定，二级生物安全柜依照入口气流风速、排气方式和循环方式可分为4 个级别：A1 型，A2 型，B1 型和B2 型。所有的二级生物安全柜都可提供工作人员、环境和产品的保护。 　　A1 型安全柜前窗气流速度最小量或测量平均值应至少为0.38m/s。无内部循环气流，100%的气体通过排气口过滤排出。 　　A2 型安全柜前窗气流速度最小量或测量平均值应至少为0.5m/s。70%气体通过HEPA 过滤器再循环至工作区，30%的气体通过排气口过滤排出。 　　二级B型生物安全柜均为连接排气系统的安全柜。连接安全柜排气导管的风机连接紧急供应电源，目的在断电下仍可保持安全柜负压，以免危险气体泄漏如实验室。其前窗气流速度最小量或测量平均值应至少为0.5m/s(100fpm)。 　　B1 型70%气体通过排气口HEPA 过滤器排除，30%的气体通过供气口HEPA 过滤器再循环至工作区。 　　B2 型为100%全排型安全柜，无内部循环气流，可同时提供生物性和化学性的安全控制，可以操作挥发性化学品和挥发性核放射物作为添加剂的微生物实验。 　　三级生物安全柜是为生物安全防护等级为4级实验室而设计的，柜体完全气密，工作人员通过连接在柜体的手套进行操作，俗称手套箱(Golve box)，试验品通过双门的传递箱进出安全柜以确保不受污染，适用于高风险的生物试验，如进行SARS、埃博拉病毒相关实验等。 　　根据生物安全柜的强制性行业标准《中华人民共和国医药行业标准YY0569-2005生物安全柜》规定，只有获得国家食品药品监督管理局颁发的三类医疗器械注册证的产品才能真正保护操作人员、实验室环境和操作样本。 　　生物安全柜提供对人\样品和环境的三重保护。

什么是生物安全柜？生物安全柜是为操作原代培养物、菌毒株以及诊断性标本等具有感染性的实验材料时，用来保护操作者本人、实验室环境以及实验材料，使其避免暴露于上述操作过程中可能产生的感染性气溶胶和溅出物而设计。 作用防止操作者和环境暴露于实验过程中产生的生物气溶胶的负压过滤排风柜，是防止实验室获得性感染的主要设备。 工作原理将柜内空气向外抽吸，使柜内保持负压状态，通过垂直气流来保护工作人员；外界空气经高效空气过滤器过滤后进入安全柜内，以避免样品被污染；柜内的空气也经过过滤器的过滤后再排到大气中，以保护环境。（气溶胶：指悬浮在气体介质中、粒径一般为0.001μm~100μm的固态和液态微粒所形成的胶溶态分散体系） 生物安全柜的分类是什么？我国于2006年正式实施《中华人民共和国医药行业标准：生物安全柜》（YY0569~2005），根据气流及隔离屏障设计结构，将生物安全柜分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级。我科艾滋病初筛实验室为Ⅱ级生物安全实验室。

1 神经毒素神经毒素主要包括：鱼腥藻毒素如鱼腥藻毒素-a (Anatoxin-a)、鱼腥藻毒素-a(s) (Anatoxin-a(s))、高类鱼腥藻毒素-a (Homoanatoxin-a)；麻痹性或瘫痪性贝毒素(Paralytic Shellfish Poisoning, PSP)如石房蛤毒素(Saxitoxin)、新石房蛤毒素(Neosaxitoxin)和膝沟藻毒素(Gonyautoxin)等；腹泻性贝毒素(Diarrhetic Shellfish Poisoning, DSP)如大田软海绵酸(Okadaic acid, OA)和鳍藻毒素1-3(Dinophysistoxin, DTX)等；记忆丧失性贝毒素(Amnesic Shellfish Poisoning, ASP)；神经性贝毒素(Neurotoxic Shellfish Poisoning, NSP)及西加鱼毒素(Ciguatera Fish Poisoning, CFP)( 尹伊伟，2000)。鱼腥藻毒素-a是一种低分子质量的生物碱(图1-2)，相对分子质量为165(Hitzfeld B C, 2000-II)。目前发现鱼腥藻、颤藻、束丝藻(Aphanizomenon)、柱孢藻(Cylindrospermum)和微囊藻可以产生鱼腥藻毒素-a。高类鱼腥藻毒素-a (图1-3)是从美丽颤藻(O. formosa)中分离到的一种鱼腥藻毒素-a的同系物，它用丙酰基替代了鱼腥藻毒素-a中C-2上的乙酰基。鱼腥藻毒素-a是神经递质乙酰胆碱的类似物，它可与乙酰胆碱受体结合，但乙酰胆碱酯酶或真核生物中的任何酶均不能降解它。它与乙酰胆碱受体结合后可使肌肉因过度兴奋而痉挛，如果动物的呼吸系统受到影响，动物会因窒息而死亡。鱼腥藻毒素-a(s)是N-羟基鸟嘌呤的单磷酸酯(图1-4)，到目前为止仅从北美洲发现，由水华鱼腥藻(A.flos-aquae)和A.Lemmermannii产生。鱼腥藻毒素-a(s)可以阻止乙酰胆碱酯酶对乙酰胆碱的降解，使肌肉因过度兴奋而痉挛(Henriksen P, 1997)。 图1-2 鱼腥藻毒素-a分子结构图Figure 1-2 Structure of anatoxin-a 图1-3 高类鱼腥藻毒素-a分子结构图Figure 1-3 Structure of homoanatoxin-a 图1-4 鱼腥藻毒素-a(s)分子结构图Figure 1-4 Structure of anatoxin-a(s)麻痹性贝毒素是一类烷基氢化嘌呤化合物，形似三环化合物，是一种非蛋白质毒素。分子结构如图1-5所示。类似于具有两个胍基(guanidyl)的嘌呤核，为非结晶、水溶性、高极性、不挥发的小分子物质，在酸性条件下稳定，碱性条件下发生氧化，毒性消失；毒素遇热稳定，并不被人的消化酶所破坏。其中毒性最强的为STX、neoSTX、GTX1、GTX3和dcSTX(1300Mu• μmol-1)，但其他几种毒素很容易水解成毒性成份。其来源生物均为甲藻，如有毒膝沟藻(Gonyaulax)、亚历山大藻(Alexandrum)和Pyrodinium等。麻痹性贝毒的强度是通过转换成STX的毒性来表达的。这些毒素主要是由海洋中的赤潮藻甲藻产生的，可在贝类中累积进而危害人类。由于这些毒素最早是从摄食有毒藻类的贝类体内发现，故被称作贝毒。在淡水中PSP主要存在于水华束丝藻(Aph. flos-aquae)、卷曲鱼腥藻(A.circinalis)、Lyngbyawollei和C. raciborskii中(Bialojan C, 1988)。麻痹性贝毒素也是到目前为止赤潮藻毒素中分布最广、危害最大的一类，主要包括石房蛤毒素及其四氢呋喃衍生物，发现的有近三十种(表1-1)，由分子结构中R4基团的不同，可分为四类：氨基甲酸酯类、N-磺酰氨甲酰基类、脱氨甲酰基类和脱氧脱氨甲酰基类。其中石房蛤毒素(STX)已被收入《化学武器公约》中禁止化学品的第二类清单。我国也将PSP毒素列为贝类产品的常规检测指标之一。 图1-5 麻痹性贝毒素分子结构图Figure 1-5 Structures of Paralytic Shellfish Poisons (PSPs)麻痹性贝毒是一类神经肌肉麻痹剂，可以作用于细胞膜上的钠通道使之关闭，抑制动作电位的产生，使乙酰胆碱不能释放，从而导致神经麻痹。其毒理作用为阻断细胞钠离子通道，造成神经系统传输障碍而产生麻痹作用。对人体的中毒量为600~5000Mu，致死量为3000~30000Mu，目前尚无对症解毒剂。PSP的毒性为LD50=3.4×10-9。联合国卫生组织规定，100g贝类可食部分的PSP毒力超过80ug(400Mu)时不得食用(丘建文，1991)。海洋生物中，由于贝类对麻痹性贝毒具有极强的抵抗性，因此这种毒素就在贝类体内储存积累，人类或动物食用这些有毒贝类会产生一系列神经麻痹症状，严重的可能致命。由于其对人类健康造成危害，因此成为赤潮毒素中最受关注的一种，许多国家已在贝类生产、贸易过程中，对此毒素制订了严格的监测和管理条例。与贝类相比，鱼类对这种毒素却极为敏感。腹腔注射时，其对鱼类的半致死剂量(LD50)为(4~12)×10-6，口服为(100~750)×10-6，给药后5~15min，鱼类即失去平衡，0~60min就出现死亡。因此，在此类赤潮发生时，常出现鱼类大量死亡现象，欧洲的北海及北美的东北海岸都曾发生因麻痹性贝毒中毒的大规模死鱼事件，死亡的鱼类有玉筋鱼和鲱鱼等。值得注意的是，本来源于藻类的贝毒，许多是通过浮游动物的摄食而传递给鱼类，从而引起鱼类的死亡。因此，麻痹性贝毒对鱼类的危害，既可通过藻细胞本身的胞外分泌物也可通过摄食染毒的其他动物使鱼类中毒。不过由于麻痹性贝毒对鱼类的毒性很高，毒素不会在鱼体内大量残留，中毒死亡鱼体肌肉内的残留毒素含量很低。我国虽未有因麻痹性贝毒中毒而引起鱼类死亡的报道，但已有产生这类毒素的藻类赤潮发生，而且能产生麻痹性贝毒的藻类在我国海域普遍存在，因此，应高度警惕这类赤潮的发生(尹伊伟，王朝晖等，2000)。2 脂多糖内毒素脂多糖内毒素是蓝藻细胞壁的组成部分，由脂A、核心寡糖和O特异多糖组成，其中脂A分子结构式如图1-6所示。目前已从裂须藻(Schizothrix calcicola)，颤藻，鱼腥藻，微囊藻和Anacystis中分离到。蓝藻脂多糖内毒素的脂A与格兰氏阴性细菌的脂多糖不完全相同，种类更多，而且往往含有少量的磷酸。脂多糖内毒素包括细胞毒性生物碱(Alkaloid)、皮肤毒性生物碱和刺激性毒物——脂多糖(Lipopolysaccharides, LPS) (Metcalf J S, 2004)。

细菌内毒素的概念 　　细菌内毒素，英文称作Endotoxin，是G-菌细胞壁个层上的特有结构，内毒素为外源性致热原，它可激活中性粒细胞等，使之释放出一种内源性热原质，作用于体温调节中枢引起发热。内毒素的主要化学成分为脂多糖中的类脂A 细菌内毒素这个概念在1890年的时候就已被提了出来，它是在研究发热物质过程所引成的，1933年Boivin最先由小鼠伤寒杆菌提取出来，进行化学免疫学方面的研究，到1940年时候，Morgan使用志贺氏痢疾菌阐明了细菌内毒素是由多糖脂质及蛋白质三部分所组成的复合体，到了1950年以后，随着生物学，物理化学，免疫学以及遗传学等的进步发展，细菌内毒素的研究工作，尤其是其化学结构组成及各种生物活性间的关系也更加明确起来。 细菌英文叫Bacteria：为原核生物中的一类单细胞微生物由二分裂法繁殖。若按革兰氏染色法可将细菌分为G+菌和G-菌两大类。这两类细菌细胞壁的结构和化学组成存在很大差异。唯有肽聚糖为其共同成分，但其含量的多少和肽链的性质有所不同，见下表：细胞壁结构革蓝氏阳性菌革蓝氏阴性菌厚度厚，15—50薄，10—15肽聚糖含量多，占胞壁干重50—80%少，占胞壁干重10%左右脂类含量少，约1—4%多，约11—22%磷壁酸有无外膜无有脂蛋白无有脂多糖无有 细胞壁较薄，厚约10－15nm，结构也较复杂。肽聚糖含量低，仅占细胞干生10％左右，层薄又较疏松，因肽聚糖之间仅四肽侧链直接联结，缺乏五肽桥；肽聚糖居于细胞最内层，外面由内向外还有脂蛋白，外膜和脂多糖的三层聚合物。 （1）脂蛋白（lipoprotein） 由类脂和蛋白质构成，联结在外膜与肽聚糖层之间，类脂一端经非共价键联结到外膜的磷脂上，另一端由共价键联结到肽聚糖肽链中的二氧基庚二酸 残基上，使外膜和肽聚糖层构成一个整体。 （2）外膜（outer membrane） 是革兰氏阴性菌细胞壁的重要结构，位于肽聚糖的外侧，其结构类似细胞膜，为液态的磷脂双层，其中镶嵌一些特异蛋白质，穿透外膜的内外双层，呈液态镶嵌体。外膜中间有微小孔道，容许水溶性的小分子通过，以进行细胞内外的物质运输和交换。除此之外，外膜还能防止胰蛋白酶和溶菌酶等进入，起到保护性屏障作用。（3）脂多糖（lipopolysaccharide,LPS） 由多糖O抗原、核心多糖和类脂A(lipid A)组成（图1-8），位于最外层。多糖O抗原向外，由若干个低聚糖的重复单位组成的多糖链，即革兰氏阴性菌的菌体抗原（O抗原），有特异性。核心多糖由庚糖、半乳糖、2-酮基-3-脱氧辛酸（2-keto-3-deoxyoctonic acid, KDO）等组成，所有革兰氏阴性细菌都有此结构。类脂A是以脂化的葡萄胺二糖为单位，通过焦磷酸酯键组成的一种独特的糖脂化合物，具有致热作用，是革兰氏阴性细菌内毒素的毒性成分。 细菌内毒素即：许多病原性细菌所产生的毒素。 一般细菌毒素可分为两类，一类为外毒素（Exotoxin）；它是一种毒性蛋白质，是细菌在生长过程中分泌到菌体外的毒性物质。产生外毒素的细菌主要是革兰氏阳性菌。如白喉杆菌、破伤风杆菌、肉毒杆菌、金黄色葡萄球菌以及少数革兰氏阴性菌。另一类为内毒素（Endotoxin）。是革兰氏阴性菌的细胞壁外壁层上的特有结构。细菌在生活状态时不释放出来，只有当细菌死亡自溶或粘附在其它细胞时，才表现其毒性，内毒素的主要化学成分是脂多糖中的类脂A成分。

[font=幼圆][size=14px]生物安全柜不仅可以保护样品也可以保护操作者，所以才被成为“安全”柜。是一种负压过滤排风柜，用于生物安全实验室和其他实验室的生物安全防护，可以防止操作者和环境暴露于实验过程中产生的生物气溶胶；对操作人员、样品及样品间交叉污染和环境提供安全保护。[/size][/font][font=幼圆][size=14px]随着科学技术的发展和人们对生物安全意识的提高，生物安全柜在实验室、医院及研究单位的应用日益广泛，但是在人们在观念里认为是最简单的排风设备，选型、安装、使用等方面中存在很多问题和误区，给生物安全防护、避免实验室感染带来极大的隐患。[/size][/font][font=幼圆][size=14px] [/size][/font][size=14px][color=#007aaa][b][font=幼圆]误区一：洁净工作台代替生物安全柜[/font][/b][/color][/size][font=幼圆][size=14px]目前有很多医院在大量使用医用洁净工作台，很多操作人员认为这两种设备外形相同，作用大同小异，并认为他们操作的样本都是普通的样本，不具有高致病性。其实，生物安全柜和洁净工作台具有本质的差别，洁净工作台将通过高效过滤器的净化空气向下吹过工作区，用来保护样品，由于工作区是正压区，气流通过操作窗口外溢，只保护样品，而对操作人员和环境不提供保护，如操作含有任何已知或潜在致病气溶胶，都会给操作人员带来极大隐患。[/size][/font][font=幼圆][size=14px]生物安全柜是一种负压净化工作台，可以防止操作者和环境暴露于实验室过程中产生的有害气溶胶，是传染性微生物的牢笼，正确地操作生物安全柜，能够完全保护操作人员、样品、工作环境。因此，医院临床检验、诊断、病理分析、肿瘤药物的配制等工作及相关生物医学研究所、实验室都应使用生物安全柜。[/size][/font][font=幼圆][size=14px]同时，为了安全起见，各医疗单位及相关实验室应重新对实验室微生物危险度进行评估，如有潜在危险，应及时替换原有洁净工作台，并根据需要选配生物安全柜。[/size][/font][font=幼圆][size=14px] [/size][/font][size=14px][b][font=幼圆][color=#007aaa]误区二：超前化 [/color][/font][/b][/size][font=幼圆][size=14px]生物安全柜选型不当，根据结构设计、排风比例和保护对象和程度不同，生物安全柜分为Ⅰ级、Ⅱ级和Ⅲ级，其中Ⅱ级又分为A2、B2型。不同级别的生物安全实验室应选用不同级别的生物安全柜，也可根据要保护、防护的不同类型来选择适当的安全柜。在操作少量挥发性化学试剂或放射性核素时，可选择Ⅱ级B2型生物安全柜；操作大量挥发性化学试剂或放射性核素时，必须使用Ⅱ级B2型生物安全柜。目前全世界应用最广的是Ⅱ级A2型安全柜，它能够满足医院的一般用途，另外，从节能角度也较为经济。在实际工作中，很多单位认为设备选型应具有一定的超前性，常常在A2型能满足应用的情况下选用B2型，造成问题很多。安全柜的选择应主要从安全柜的性能考虑，如高效过滤器、风路设计、报警装置、负压保护等指标比较安全柜的优略。[/size][/font][font=幼圆][size=14px] [/size][/font][size=14px][b][font=幼圆][color=#007aaa]误区三：安全柜安装问题多多[/color][/font][/b][/size][font=幼圆][size=14px]现有实验室购置安全柜，一般在房间腾出一小块空地安放，存在问题很多，安装位置不当，会造成污染。生物安全柜两侧、后侧应留30cm，顶部留出足够30~34cm的空间；为减少气流扰动，保证安全柜正常工作，生物安全柜应放置在远离实验室入口、门窗、暖气、走道，避开送风口，避免外界气流对柜内气流造成扰动。生物安区柜放置的房间必须有足够的送风量，Ⅱ级A2排气量约在700~1200m3/h，B2则在1000~1600 m3/h,有的型号更高，如果没有足够的补充送风，生物安全柜所在房间成为高负压状态，生物安全柜无法正常工作。很多实验室购置Ⅱ级A2生物安全柜后，认为排风管道接到室外比排到室内安全。其实，生物安全柜排风出口带有高效过滤器，所排出的气体被证明是安全的，对室内环境没有影响；另外，将室内舒适工作环境的洁净空气排到室外会大大增加运行成本，因此，除了操作危险度较高的实验对象或能产生化学气味的化学试剂，Ⅱ级A2生物安全柜排风排到室内是安全可行的。[/size][/font][font=幼圆][size=14px]Ⅱ级A2型生物安全柜采用硬连接，这种连接方式以前被广泛使用，A2型生物安全柜使用密闭硬管连接到带抽风机的排风系统时，其安全运行完全依赖于排风系统，如当排风的速度升高或降低，生物安全柜内不平衡发生变化，会产生污染环境、样品的严重后果。在美国NSF49:2002标准中禁止Ⅱ级A2生物安全柜使用密闭硬管连接。如果Ⅱ级A2安全柜外排气体时，建议排风管采用套管连接，套管安装在生物安全柜的排风管上，与安全柜高效过滤器之间保留2.5cm的缝隙，以便让房间的空气也能吸入到建筑物的排风系统中，这种连接方式是最安全的连接方式，柜内的气流平衡独立与排风系统，无论排风系统如何波动柜内气流平衡都不会受到影响。Ⅱ级B2必须通过硬管连接，密封地连接到排风系统上，排风系统的排风量和静压必须与安全柜制定要求一致。在安装有多台Ⅱ级B型生物安全柜时，应各自使用独立的排风管道，不能共用排风管道。[/size][/font][font=幼圆][size=14px] [/size][/font][size=14px][color=#007aaa][b][font=幼圆]误区四：有生物安全柜，就一切“OK”了[/font][/b][/color][/size][font=幼圆][size=14px]安全柜的使用和局限应向每个操作者说明，严格按要求操作，如使用提前开机“自净”、柜内物品的摆放合理、定期保养验证等。当操作失误或发生泄漏、破损时，生物安全柜不能够保护操作者。生物安全柜前的空气幕很脆弱，极易受到干扰而造成污染。实验中不能随意开启前窗的位置，操作动作缓和，手臂避免频繁出入安全柜，以防止打扰气流。在安全柜工作时，开关房门、人员在房间内走动、甚至在操作人员背后咳嗽等都会形成湍流而增加微生物气溶胶溢出量，而造成实验室污染。国外学者Oster曾报道，工作人员在安全柜内用吸管吸取立克次体悬液，另外一人在柜旁与之谈话14分钟后即感染发病。有很多污染事件是因为实验人员违反操作规程、注意力不集中、操作动作不稳定、操作方法或器材不当所致。[/size][/font][font=幼圆][size=14px] [/size][/font][font=幼圆][size=14px]因此，操作人员必须牢固树立安全意识，养成良好操作习惯，杜绝违规操作，严格遵照微生物学标准操作规程和生物安全实验室操作规程，并使用规范的实验器材。个人防护是防止实验室气溶胶感染的最后一道防护，通常由物理防护和疫苗免疫两种，物理防护主要是对呼吸道和眼睛的防护，如防风镜、口罩、防护面罩、正压头盔和正压工作服等。生物安全柜投入使用后，其管理是一项重要的工作，也是一项薄弱的环节，由于设备人员、实验人员责任界限不清，疏于管理，给实验室安全带来极大隐患，必须建立科学的管理制度，严格执行，责任落实到人，并进行监督，确保实验室安全。[/size][/font][b]转载自实验室设计与建设平台，仅供参考，侵权必删[/b]

生物安全柜（Biological safety cabinets，BSCs）是为操作原代培养物、菌毒株以及诊断性标本等具有感染性的实验材料时，用来保护工作人员、实验室环境以及实验品，使其避免暴露于上述操作过程中可能产生的感染性气溶胶和溅出物而设计的。WHO出版的《实验室生物安全手册》中明确说明：“生物安全柜可以有效减少由于气溶胶暴露所造成的实验室感染以及培养物交叉污染，生物安全柜同时也能保护工作环境”。当然，安全柜有效工作的前提是选购合格的安全柜和正确使用安全柜。目前市场上生物安全柜种类繁多，本文介绍了实验室生物安全标准、安全柜分类、认证的基本知识，旨在为采购人员在选购生物安全柜工作中提供参考。

外毒素与内毒素的主要区别： 区别要点 外毒素 内毒素 来源 革兰阳性菌与部分革兰阴性菌 革兰阴性菌存在部位 由活菌分泌到菌外，少数是细菌崩解后释出 细胞壁组分，菌裂解后释出 化学成分 蛋白质 脂多糖 稳定性 60～80℃，30分钟被破坏160℃，2～4小时才被破坏 　　外毒素与内毒素的主要区别：区别要点　　外毒素　　内毒素　　来源　　革兰阳性菌与部分革兰阴性菌　　革兰阴性菌　　存在部位　　由活菌分泌到菌外，少数是细菌崩解后释出　　细胞壁组分，菌裂解后释出　　化学成分　　蛋白质　　脂多糖　　稳定性　　60～80℃，30分钟被破坏　　160℃，2～4小时才被破坏　　作用方式　　与细胞的特异受体结合　　刺激宿主细胞分泌细胞因子、血管活性物质　　毒性作用　　强，对组织器官有选择性毒害效应，引起特殊临床表现　　较弱，各菌的毒性效应大致相同，引起发热、白细胞增多、微循环障碍、休克、DIC等　　抗原性　　强，刺激机体产生抗毒素；甲醛液处理脱毒形成类毒素　　弱，刺激机体产生的中和抗体作用弱；甲醛液处理不形成类毒素

需要明确了解生物安全柜与通风柜/超净工作台的区分。通风柜和超净工作台不属于生物安全柜，不可使用在涉及微生物材料的实验或生产过程中。 生物安全柜（Biological safety cabinets，BSCs）是为操作原代培养物、菌毒株以及诊断性标本等具有感染性的实验材料时，用来保护工作人员、实验室环境以及实验品，使其避免暴露于上述操作过程中可能产生的感染性气溶胶和溅出物而设计的。WHO出版的《实验室生物安全手册》中明确说明：“生物安全柜可以有效减少由于气溶胶暴露所造成的实验室感染以及培养物交*污染，生物安全柜同时也能保护工作环境”。当然，安全柜有效工作的前提是选购合格的安全柜和正确使用安全柜。 通风柜（通风橱）是为在化学实验过程中清除腐蚀性化学气体和有毒烟雾而设计的。由于没有装备HEPA过滤器，通风柜不能有效清除微生物介质。放置在通风柜内微生物样品会散播到柜外，污染实验室环境。 超净工作台（超净台）是为了保护试验品或产品而设计的，通过吹过工作区域的垂直或水平层流空气防止试验品或产品受到工作区域外粉尘或细菌的污染。一旦微生物样品放置于工作区域，层流空气将把带有微生物介质的空气吹向前台工作人员而产生危险。

据英国食品安全局（FSA）消息，近日英国环境、渔业及水生物研究中心 （CEFAS）开发出了一种检测牡蛎、扇贝等贝类毒素的新方法，该方法在检测毒素时无需使用试验老鼠。 据了解，以前的贝类毒素检测方法需要拿老鼠进行生物学鉴定，而新方法将运用高效液相色谱这种化学检测方法，无需试验老鼠即可进行，这反映了英国食品安全局所秉持的原则，即在动物测试时，如果有合理的替代方法存在，那么将减少使用试验动物。 据了解，英国将成为欧盟地区首个使用该方法作为法定检测项目的国家。

Q：我需要购买的是生物安全柜还是超净工作台 　　A：超净工作台提供的是对样品的保护，对操作者和环境是不提供保护的;广义上的生物安全柜同时提供对操作者、环境和样品的保护。所以，从您需要的保护情况上，可以得出正确的选择; 　　Q：我应该购买哪种类型、防护级别的生物安全柜 　　A：一般来说，除非需要做一些未知菌种和病毒和活体的研究需要使用三级生物安全柜，二级生物安全柜已经能基本满足我们的正常工作需要。对于不含有毒、放射性、挥发刺激性溶剂的样品的实验，A1/A2(原B3)型生物安全柜就已经满足使用要求，对于医院系统采购，因为病毒及菌种类别较复杂，而且实验条件变化大，建议使用B2全排型生物安全柜; 　　Q：如何评判一台生物安全柜的好坏 　　A：生物安全柜主要是用来做生物危害性防护的，所以对操作者的保护考虑是评判产品好坏的主要依据。二级生物安全柜最核心的技术是滤膜(包含滤膜材质、滤膜 截留效率、滤膜寿命)、风路设计(包括前操作面的平衡、沉降风速以及风速的均一性、进气风速、风的垂直沉降形态)、报警设置(好的生物安全柜应该包含低风 速报警、前窗错误位置的报警、紫外连锁装置、B2全排机型还需要有外风机连锁装置)和负压保护(包含侧壁负压，背部负压、顶部负压)。所以通过上述指标的 比较可以知道生物安全柜的优劣; 　　Q：为什么前操作面的平衡是一台生物安全柜的重要指标 　　A：二级生物安全柜都存在一个开口的前操作面，便于操作的同时也带来一个污染的可能，如果平衡不好，那么会产生这个区域的污染，就无法做到正常的避免外界进入操作室污染样品以及操作室外泄污染操作者防护，这样就和生物安全柜的设计理念出现了本质的偏差，所以说，二级生物安全柜在前操作面的平衡问题很关键; 　　Q：为什么报警装置里面需要有低风速报警一个内容 　　A：在欧美地区，按照欧美的标准，每一台生物安全柜都推荐做一次主要技术指标的校检。我们买回生物安全柜并使用一段时候以后，生物安全柜是否还处于对操作者、环境和样品的正常保护，作为操作使用人员，我们是没有办法知道的，而一旦由于滤膜堆积而造成沉降风速降低，就会产生样品污染可能，如果进风风速降低， 那么就可能造成人员被污染。在现有的国情下，我们很难做到每年的技术校检，因为存在不小的费用，所以低风速报警很重要 　　Q：生物安全柜具有电动前窗，是不是很方便很好 　　A：错!在欧美地区，一个生物危害性实验室往往需要配置双供电系统，避免一个供电系统出现故障时的生物危害性物质外泄。在国内，这样的实验室配置很难获得。所以电动前窗一旦在实验过程中停电，就会产生很大的危险，造成无法弥补的损失!而且不论是电动前窗还是手动前窗，在操作时都是固定高度的，所以在生物安全柜上，电动前窗意义不大并有危险，可以说百害无一益; 　　Q：生物安全柜的侧壁负压是什么意思 　　A：生物安全柜欧美标准不同，在侧壁要求也不同，美洲产品都是不锈钢侧壁，并要求负压腔来避免侧壁泄漏污染可能，欧洲产品基本都采用玻璃侧壁，没有对侧壁做负压保护。由于柜体内部操作室是正压的，所以如果有壳体破损和泄漏点存在，就会产生向外的泄漏。因此在侧壁和背板形成负压保护可以有效降低泄漏的可能性; 　　Q：负压保护腔如何来避免污染和交叉污染 　　A：好的设计会在结束工作后风机可以进一步进行一段时间的空转来洁净消毒，如果没有这个设计，操作者需要在实验操作结束后，将柜体继续开启一定时间以最大程度排出污染物。 　　Q：我们需要定购一些什么附件 　　A：柜内一般会需要使用一些用电设备，那么柜内的防溅电源插座是需要的，而且由于目前国内使用欧洲仪器比较普及，鉴于欧洲电源线的接地和我国的插座不相容，所以会在欧式仪器上产生一定的静电，静电会影响到生物安全柜内垂直沉降的风流，会有一定吸附作用，因此如果可能最好配置一个欧式防溅电源插座。由于柜体操作室内部污染不是很大，最大的污染在负压保护腔内，所以紫外灯系统可以考虑选配，来达到更好的灭菌消毒功能。分体设计的安全柜需要配支架; 　　除了了解安全柜各项性能指标，最好最快最方便鉴别安全柜安全性能的方法是了解您购买的安全柜是否获得过以下几项主要的国际安全柜认证： 　　EN12469 (欧洲生物安全柜统一标准) 　　NSF49 (美国生物安全柜标准-二级生物安全柜) 　　AS2252.2 (澳洲生物安全柜标准-二级生物安全柜) JIS K3800 (日本生物安全柜标准) 　　在寻求生产商产品认证的同时，用户也许注意以下事项： 　　1. 当生产商声称自己生产的安全柜符合某项国际标准时，可要求其出示证明-合法的认证机构所签署的独立检测报告; 　　2. 一些标准可能与安全柜安全性能无直接关联，例如生物安全柜生产商声称获得ISO9001质量认证，而ISO9001并不会对安全柜性能进行以上国际安全柜标准的检测; 　　3. 认证必须是由独立、合法的安全柜认证机构测试和颁布的;

[font='times new roman'][size=18px][color=#000000] [/color][/size][/font][font='times new roman'][size=18px][color=#000000]顺铂的[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=18px][color=#000000]细胞毒性实验及细胞形态学观察[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]（[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]）当[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]H1299[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]细胞融合到[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]80%-90 %[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]左右，消化处理细胞并计数。将[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]H1299[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]细胞以[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]10[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]5[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]个[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]/[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]孔的比例接种到[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]96[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]孔板中，保证细胞分布均匀，培养过夜使细胞[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]贴[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]壁。[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]（[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]2[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]）分别配置[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]0[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]、[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]、[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]10[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]、[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]100[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]、[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]1000[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000] [/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]μ[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]M[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]的[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]含顺铂[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]培养基，沿着侧壁加入到[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]96[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]孔板中，每孔[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]200[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000] [/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]μ[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]L[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]，每个浓度设置[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]6[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]个复孔。[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]96[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]孔板外围加入[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]100[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000] [/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]μ[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]L[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000] [/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]PBS[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]缓冲液[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]，防止边缘效应[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]。[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]（[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]3[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]）将[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]96[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]孔板放入培养箱培养[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]3[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]天后，用倒置相差显微镜观察细胞形态并拍照。[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]（[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]4[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]）用[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]MTS[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]法测定细胞活力，每孔加入[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]20[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000] [/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]μ[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]L[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000] MTS[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]试剂，全程避光，继续培养[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]3 h[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]。利用酶标仪[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]在[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]490 nm[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]波长检测各孔[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]OD[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]值。用[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]ODtreat[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]/[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]ODcontrol[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]表征细胞活力，计算细胞活力。细胞活力测定数据是基于三次独立的实验。[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px]在细胞迁移过程中，细胞内上皮间充质转化（[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]EMT[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]）相关蛋白的表达量会发生相应的变化。为了检测外[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]泌[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]体与细胞孵育时间对[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]EMT[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]相关蛋白的影响，实验[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]测定了加入[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]1×[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]10[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]10[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]个外[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]泌[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]体颗粒后[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]，[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]细胞[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]在[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]第[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]1[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]、[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]3[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]、[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]4[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]天[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]EMT[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]相关蛋白的表达[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]量[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]变化[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]。如图所示，[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]E-Cad[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]蛋白的表达量在第[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]3[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]天逐渐减少至[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]最初[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]的[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]0.7[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]倍。[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]N-Cad[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]和[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]Vimentin[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]蛋白在第[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]3[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]天的表达量分别增加了[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]1.5[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]倍和[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]1.4[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]倍。[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]以上结果说明[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]外[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]泌[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]体[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]与细胞共培养[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]3[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]天后，细胞内[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]EMT[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]相关蛋白变化更为显著。[/size][/font][table][tr][td][align=center][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2021/08/202108012221112395_9347_5111497_3.jpeg[/img][/align][/td][/tr][/table][align=center][font='times new roman']图[/font][font='times new roman']1[/font][font='times new roman']外[/font][font='times new roman']泌[/font][font='times new roman']体与[/font][font='times new roman']H1299[/font][font='times new roman']细胞孵育时间对[/font][font='times new roman']EMT[/font][font='times new roman']相关蛋白的影响[/font][/align][font='times new roman'][size=16px]为了进一步在蛋白水平上验证外[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]泌[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]体可以促进细胞迁移，我们提取共育[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]3[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]天的细胞蛋白质，检测[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]EMT[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]相关蛋白的表达变化。实验结果显示，[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]随着外[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]泌[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]体浓度的增加，[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]E-Cad[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]蛋白表达降低，而[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]N-Cad[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]蛋白和[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]Vim[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]en[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]tin[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]蛋白表达增加。[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]上述[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]结果可进一步证明捕获的外[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]泌[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]体可以诱导[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]细胞[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]迁移[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]，[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]具有良好的生物活性。[/size][/font]

一、生物安全柜 生物安全柜可提供样品和工作人员的双重保护。过滤后的洁净气流从安全柜顶部吹下，通过工作区域,在到工作人员的呼吸区域前被俘获。气流在放空前将被过滤，一般情况下过滤后的空气将被排回实验室或者通过排气管道排出室外。 生物安全柜可分为一级、二级和三级三大类以满足不同的生物研究和防疫要求。一级生物安全柜可保护工作人员和环境而不保护样品。气流原理和实验室通风橱一样，不同之处在于排气口安装有HEPA过滤器。所有类型的生物安全柜都在排气和进气口使用HEPA过滤器。1 一级生物安全柜本身无风机，依赖外接通风管中的风机带动气流，由于不能保护柜内样品，目前已较少使用。2 二级生物安全柜是目前应用最为广泛的柜型。按照NSF49的中的规定，二级生物安全柜依照入口气流风速、排气方式和循环方式可分为4个不同的型号：A1型，A2(原B3)型,B1和B2型。所有的二级生物安全柜都可提供工作人员、环境和样品的保护。 A1型安全柜前窗气流速度最小量或测量平均值应至少为0.38m/s。70%气体通过HEPA过滤器再循环至工作区，30%的气体通过排气口过滤排除。 A2型安全柜前窗气流速度最小量或测量平均值应至少为0.5m/s。70%气体通过HEPA过滤器再循环至工作区，30%的气体通过排气口过滤排除。 二级B型生物安全柜均为连接排气系统的安全柜。连接安全柜排气导管的风机连接紧急供应电源，目的在断电下仍可保持安全柜负压，以免危险气体泄漏如实验室。其前窗气流速度最小量或测量平均值应至少为0.5m/s(100fpm)。B1型70%气体通过排气口HEPA过滤器排除，30%的气体通过供气口HEPA过滤器再循环至工作区。B2型为100%全排型安全柜，无内部循环气流，可同时提供生物性和化学性的安全控制。3 三级生物安全柜是为4级实验室生物安全等级而设计的，柜体完全气密，工作人员通过连接在柜体的手套进行操作，俗称手套箱(Golve box)，试验品通过双门的传递箱进出安全柜以确保不受污染，适用于高风险的生物试验。 在2000年5月，欧洲标准化委员会(CEN)颁布了生物安全柜欧洲标准EN12469:2000，正式替代了德国DIN 12950、英国BS5726和法国NF X-44-201等欧盟成员国生物安全柜的标准，成为欧盟区域内生物安全柜的统一标准。 NSF49在上世纪70年代就已经出现，被公认为目前生物安全柜领域最完善的标准。在2002年，ANSI/NSF49正式获得了美国国家标准学会（American National Standard Institute, ANSI）的官方认可，成为美国生物安全柜的统一标准。 NSF/ANSI49和EN12469是目前世界上最通用的生物安全柜国际认证，这两种标准对安全柜性能分级、安全性能检测都有详细的说明和要求。安全柜标准对规范安全柜市场，保护研究人员起到重要的作用。二、生物安全等级简介生物安全等级P1 进行试验研究用的物质都是已知的,所有特性都已清楚并且已证明不会导致疾病的多种微生物物质。研究通过日常的程序在公开的实验台面上进行。不需要有特殊需求的安全保护措施。操作人员只需经过基本的实验室实验程序培训并且通常由科研人员指导，在这样的环境下并不需要生物安全柜的存在。生物安全等级P2 进行试验研究用的物质是一些已知的中等程度危险性的并且与人类某些常见疾病相关的物质。操作者必须经过进行相关研究的操作培训并且由专业科研人员指导。对于易于污染的物质或者可能产生污染的情况进行预先的处理准备。一些可能涉及或者产生有害生物物质的操作过程都应该在生物安全柜内进行，在这些条件下最好使用二级的生物安全柜。生物安全等级P3 进行试验研究的物质一般都是本土或者外来的有通过呼吸传染使人们致病或者有生命危险的可能的物质。我们需要保护一切在周围环境中等操作者免于暴露于这些有潜在危险的物质中。通常使用二级或者三级的生物安全柜是必需的。生物安全等级P4 进行试验研究的物质是一些非常高危险性并且可以致命的有毒物质，可以通过空气传播并且现今并没有有效的疫苗或者治疗方法来处理。操作者必须经过熟练的关于进行这种非常高危险性物质研究的培训，并且应该很熟悉一些相关操作，保护设施，等等方面对于这些高危险性物质的预防。同时也必须由在此研究领域非常有经验的科研人员进行指导。对于实验室的进出应当严格的进行控制，实验室一定要单独的建造或者建造在一栋大楼中于其他任何地方都分离开的独立房间内，并且要求有详细的关于研究的操作手册进行参考。在这样的实验研究中三级的生物安全柜是必需的。三、如何选择生物安全柜Q：我需要购买的是生物安全柜还是超净工作台A：超净工作台提供的是对样品的保护，对操作者和环境是不提供保护的；广义上的生物安全柜同时提供对操作者、环境和样品的保护。所以，从您需要的保护情况上，可以得出正确的选择；Q：我应该购买哪种类型、防护级别的生物安全柜A：一般来说，除非需要做一些未知菌种和病毒和活体的研究需要使用三级生物安全柜，二级生物安全柜已经能基本满足我们的正常工作需要。对于不含有毒、放射性、挥发刺激性溶剂的样品的实验，A1/A2(原B3)型生物安全柜就已经满足使用要求，对于医院系统采购，因为病毒及菌种类别较复杂，而且实验条件变化大，建议使用B2全排型生物安全柜；Q：如何评判一台生物安全柜的好坏A：生物安全柜主要是用来做生物危害性防护的，所以对操作者的保护考虑是评判产品好坏的主要依据。二级生物安全柜最核心的技术是滤膜（包含滤膜材质、滤膜截留效率、滤膜寿命）、风路设计（包括前操作面的平衡、沉降风速以及风速的均一性、进气风速、风的垂直沉降形态）、报警设置（好的生物安全柜应该包含低风速报警、前窗错误位置的报警、紫外连锁装置、B2全排机型还需要有外风机连锁装置）和负压保护（包含侧壁负压，背部负压、顶部负压）。所以通过上述指标的比较可以知道生物安全柜的优劣；Q：为什么前操作面的平衡是一台生物安全柜的重要指标A：二级生物安全柜都存在一个开口的前操作面，便于操作的同时也带来一个污染的可能，如果平衡不好，那么会产生这个区域的污染，就无法做到正常的避免外界进入操作室污染样品以及操作室外泄污染操作者防护，这样就和生物安全柜的设计理念出现了本质的偏差，所以说，二级生物安全柜在前操作面的平衡问题很关键；Q：为什么报警装置里面需要有低风速报警一个内容A：在欧美地区，按照欧美的标准，每一台生物安全柜都推荐做一次主要技术指标的校检。我们买回生物安全柜并使用一段时候以后，生物安全柜是否还处于对操作者、环境和样品的正常保护，作为操作使用人员，我们是没有办法知道的，而一旦由于滤膜堆积而造成沉降风速降低，就会产生样品污染可能，如果进风风速降低，那么就可能造成人员被污染。在现有的国情下，我们很难做到每年的技术校检，因为存在不小的费用，所以低风速报警很重要；Q：生物安全柜具有电动前窗，是不是很方便，很好A：错！在欧美地区，一个生物危害性实验室往往需要配置双供电系统，避免一个供电系统出现故障时的生物危害性物质外泄。在国内，这样的实验室配置很难获得。所以电动前窗一旦在实验过程中停电，就会产生很大的危险，造成无法弥补的损失！而且不论是电动前窗还是手动前窗，在操作时都是固定高度的，所以在生物安全柜上，电动前窗意义不大并有危险，可以说百害无一益；Q：生物安全柜的侧壁负压是什么意思A：生物安全柜欧美标准不同，在侧壁要求也不同，美洲产品都是不锈钢侧壁，并要求负压腔来避免侧壁泄漏污染可能，欧洲产品基本都采用玻璃侧壁，没有对侧壁做负压保护。由于柜体内部操作室是正压的，所以如果有壳体破损和泄漏点存在，就会产生向外的泄漏。因此在侧壁和背板形成负压保护可以有效降低泄漏的可能性；Q：负压保护腔如何来避免污染和交叉污染A：好的会在结束工作后风机可以进一步进行一段时间的空转来洁净消毒，如果没有这个设计，操作者需要在实验操作结束后，将柜体继续开启一定时间以最大程度排出污染物。Q：我们需要定购一些什么附件A：柜内一般会需要使用一些用电设备，那么柜内的防溅电源插座是需要的，而且由于目前国内使用欧洲仪器比较普及，鉴于欧洲电源线的接地和我国的插座不相容，所以会在欧式仪器上产生一定的静电，静电会影响到生物安全柜内垂直沉降的风流，会有一定吸附作用，因此如果可能最好配置一个欧式防溅电源插座。由于柜体操作室内部污染不是很大，最大的污染在负压保护腔内，所以紫外灯系统可以考虑选配，来达到更好的灭菌消毒功能。分体设计的安全柜需要配支架； 除了了解安全柜各项性能指标，最好最快最方便鉴别安全柜安全性能的方法是了解您购买的安全柜是否获得过以下几项主要的国际安全柜认证：EN12469 (欧洲生物安全柜统一标准)NSF49 (美国生物安全柜标准-二级生物安全柜)AS2252.2 (澳洲生物安全柜标准-二级生物安全柜) JIS K3800 (日本生物安全柜标准)在寻求生产商产品认证的同时，用户也许注意以下事项：1.当生产商声称自己生产的安全柜符合某项国际标准时，可要求其出示证明-合法的认证机构所签署的独立检测报告；2.一些标准可能与安全柜安全性能无直接关联，例如生物安全柜生产商声称获得ISO9001质

热原和细菌内毒素 一、热原(progon) 医院临床在使用药品注射剂时，常有发生冷感、寒战、发热、头痛、恶心、呕吐、肤色灰白、休克、严重时导致死亡，这种症状称为热原反应。 为提高药品质量和用药安全，人们对热原进行了广泛的研究，直到1923年Seibert提出了用家兔检测热原的方法。在1942年美国药典首先将家兔热原检查项收入药典成为法定方法，中国药典1953年版开始收载该方法，随后的世界各国药典都以动物热原检查法作为药品质量监测的方法之一。 家兔热原检查法的优点，可在规定时间里观察到家兔的体温变化，相应反应了热原质引起哺乳类动物复杂的体温反应过程。所以，在半个多世纪以来热原检查法，为保障药品质量和用药安全发挥了重要作用。 但随着制药工业的发展和临床用药的要求，该方法的局限性越来越明显。这种热原检查法，只局限于某种药物进入体内（血循环）是否能引起体温变化或热原反应作为判断药品是否污染热原的方法，已不能满足医药工业发展的需要。其缺点： ①标准化程度低，无法判断检查样品中存在的热原质到底是什么或是哪一种物质。 ②由于试验动物家兔是处在被细菌污染的环境中，通过吸入或皮肤感染细菌内毒素而被免疫，导致动物的个体差异较大。 ③试验动物受到药品的药理活性干扰，而影响体温变化（如放射性药品、抗生素、生物制品等），实验结果难以判断。 ④设备及实验费用昂贵（如建设动物房、水电、动物饲料等耗费），做一种药品需要几百元/次，而鲎试剂仅几十元/次。 综上情况分析，鲎试验法可避免以上动物热原检查法的不足，该技术的成功和应用真可谓是药品质量监控一场大革命。 什么是热原？目前国内外仍未有统一的认识，但从国内外文献报道中，一个共同的意见，都普遍认为：它是指细菌内毒素的脂多糖。 欧洲药典委员会副主席J.Van Noordwijk提出：“严格地讲，不是每一种热原都具有脂多糖的结构，但所有已知的细菌内毒素脂多糖都有热原活性”。在药品生产质量管理规范（GMP）条件下，药品生产的质量控制一般可以接受的观点是：不存在细菌内毒素意味着不存在热原。 二、细菌内毒素（Endotoxin） 细菌内毒素是革兰氏阴性菌细胞壁上的一种脂多糖（Lipoply Saccharide）和微量蛋白（Protein）的复合物，它的特殊性不是细菌或细菌的代谢产物，而是细菌死亡或解体后才释放出来的一种具有内毒素生物活性的物质。其化学成分广泛分布于革兰氏阴性菌（如大肠杆菌、布氏杆菌、伤寒杆菌、变形杆菌、沙门氏菌等）及其它微生物（如衣原体、立克次氏体、螺旋体等）的细胞壁层的脂多糖，其化学成份主要是由O-特异性链、核心多糖、类脂A三部分组成。(附图1) 、O—特异性链：位于脂多糖分子最外层的多糖链，是由3—5个单糖（一般不多于25个）连成为一个多糖链。其单糖包括戊糖、氨基戊糖、已糖、氨基已糖、脱氧已糖等，单糖的种类、位置和排列顺序和空间构型，因菌种不同而异。因此，它决定菌体热原的特异性。 核心多糖：核心多糖的变异性较小，位于类脂A和0—特异性链（内层）之间，在结构上分为内核心和外核心。外核心含有数种己糖，包括葡萄糖、半乳糖、乙酰氨基葡萄糖等组成。内核心含有庚糖及特殊的酮糖（3-脱氧-D-甘露糖-辛酮糖KDO）。这部分结构对不同菌株的LPS基本相似，而且KDO是以不耐酸的酮糖链与类脂A的氨基葡萄糖连接，是构成内毒素脂多糖的核心部分。 类脂A：位于LPS分子结构的外层，是由氨基葡萄糖、磷酸和脂肪酸（10—18C）组成，故称之为糖磷脂，也是细菌外膜的一种，形成单体聚合物。具有疏水性（强）和亲水性（弱）的双相性。但是，类脂A可从O-特异链及核心多糖分离出来，游离的类脂A可自身凝聚成大分子的复合体而难溶于水，并具有生物活性。所以，类脂A（Lipida）是内毒素多种生物活性或毒性反应的主要基团。该基团没有种属特异性，所以各属细菌的类脂A结构相似，其毒性反应相似。如发热、血液流动力学改变、弥漫性血管内凝血，并导致休克等。 由于类脂A有4条主链和2条支链的脂肪酸与内酰胺连接组成，所以提纯的内毒素LPS是极为不稳定的。这就要求内毒素应在低温条件下保存，在工作中内毒素稀释应尽可能地缩短时间，并要现配现用。 三、内毒素的生物活性与疾病的相关性 据文献报道，在很早期（约19世纪末）的意大利学者Centanne通过菌属自溶的方法，从革兰氏阴性杆菌中提取出一种类似毒素的物质，因为这种物质对动物体产生致热活性的同时，亦产生出一种病理学病性反应，而被命名为致热毒素（Pyrotoxina）。同时由德国的Buchner也从多种细菌中提取到相似的致热毒素，并证实了这种毒素在导致白细胞数目的改变同时，具有增强机体对细菌感染时的免疫能力。因此建立了“发热疗法”。 在美国纽约的临床医师，William B• Coley用加热法杀死录杆菌和化脓性链球菌，将上清滤液用于各种恶性肿瘤（特别是肉瘤）的治疗，取得较好的疗效。他将这种细菌上清液命名为Coley氏毒素。此后murrayJ.Shear 证实Coley氏毒素中具有抗肿瘤作用的物质为内毒素。 直到1933年Boivin等学者在研究鼠伤寒杆菌的致病机理时，从鼠伤寒杆菌中提取出内毒素。在50年代以后，对内毒素的化学成分和化学结构的研究得到迅速发展。经过大量实验表明，内毒素具有极强的生物学活性，特别是革兰氏阴性菌感染和静脉注射提取的内毒素溶液时，可导致动物体发生内毒素休克和死亡。 内毒素的致病机理，主要是由于革兰氏阴性杆菌（如大肠杆菌、沙门氏杆菌、伤寒杆菌，布氏杆菌、变形杆菌金黄色葡萄球菌等）和其它微生物（病毒、立克次氏体、衣原体螺旋体等）感染时，这类菌属随病灶渗液进入血液循环，并扩散到各种组织器官和体液细胞内繁殖，这类菌属在体内死亡和解体后，才稀放出大量的细菌内毒素脂多糖（LPS），据初步实验表明，当机体内毒素浓度國值 0.005ng/ml时,可诱生内源性热原质如肿瘤坏死因子、白细胞介素和β2—干扰素等。这些因子刺激体温调节中枢导致机体发热，细菌内毒素直接或间接作用于肝脏和胰腺时，可使肝细胞损伤，使糖原异生酶（如葡萄糖—6—6磷酸酶、糖原合成酶）的活性降低，抑制糖原的异生和分解。同时内毒素作用于胰腺导致胰腺功能障碍，并形成胰岛素抵抗，造成血糖升高致使并发心肌炎和心肌肿大的系列高血糖症状。所以，革兰氏阴性菌属感染或在病灶中的细菌进入体液细胞繁殖，当其死亡或解体后产生的内毒素，可多次进入血液，引起反复发作，其病理变化极为广泛，几乎所有的器官和组织都可被侵犯，而引起各器官的功能障碍。其中以网状内皮系统最常见，淋巴、脾、肝、肾、骨髓中均有上皮细胞增生，形成肉芽肿，以肝脏有肉芽肿外，还可发生冲血、水肿和肝细胞坏死，最终导致肝硬化的发生。其它器官亦有相似的毒性反应。

(细菌毒素）属细菌的代谢产物，种类很多：①白喉毒素,分子量为60000的蛋白质。其毒性表现为抑制哺乳动物的细胞内的蛋白质合成。该毒素是个酶原，经蛋白酶水解后，释放出分子量为21000具酶活力的片段A后，余下的片段B才发挥毒性。其作用方式类似蓖麻毒素。②霍乱毒素，与小肠粘膜上的受体结合，不可逆激活膜上腺苷酸环化酶而导致分泌性腹泻（见环化酶）。③肉毒素，是肉毒杆菌产生的神经毒素，作用于神经-肌肉接头,阻遏神经冲动的传递。A型肉毒素包括一个毒性成分和一个血凝成分，前者的分子量约为150000，这种毒素对热不稳定。

目前世界上生物安全柜领域执行的最重要的标准是欧洲标准EN12469和美国国家卫生基金会的第49号标准。按此标准可将生物安全柜分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级。可适用于不同生物安全等级的媒质的操作。 按照美国1992年版NSF49标准，生物安全等级1级(P1)的媒质是指普通无害细菌、病毒等微生物；生物安全等级2级(P2)的媒质是指一般性可致病细菌、病毒等微生物；生物安全等级3级(P3)的媒质是指烈性/致命细菌、病毒等微生物，但感染后可治愈；生物安全等级4级(P4)的媒质是指烈性/致命细菌、病毒等微生物，感染后不可治愈。 Ⅰ级生物安全柜是指用于保护操作人员与环境安全、而不保护样品安全的通风安全柜。适用于对处理样品安全性无要求且生物危险度等级为1、2、3的媒质的操作。因为不考虑处理样品是否会被进入柜内的空气污染，故对进入柜内的空气洁净度要求不高；空气的流动为单向、非循环式，空气流经HEPA过滤器后进入柜内，通过工作台面后又被过滤、经排气口排出；为了保护操作人员安全和保护环境，其向内的非循环吸入气流必须远离操作者；安全柜中的气体在外排到大气以前必须先经过HEPA过滤器过滤。 Ⅱ级生物安全柜是指用于保护操作人员、处理样品安全与环境安全的通风安全柜，柜内保持负压状态，适用于生物危险度等级为1、2、3的媒质的操作。

生物安全柜、通风柜、超净工作台三者区分需要明确了解生物安全柜与通风柜/超净工作台的区分。通风柜和超净工作台不属于生物安全柜，不可使用在涉及微生物材料的实验或生产过程中。　　生物安全柜(Biological safety cabinets，BSCs)是为操作原代培养物、菌毒株以及诊断性标本等具有感染性的实验材料时，用来保护工作人员、实验室环境以及实验品，使其避免暴露于上述操作过程中可能产生的感染性气溶胶和溅出物而设计的。WHO出版的《实验室生物安全手册》中明确说明：“生物安全柜可以有效减少由于气溶胶暴露所造成的实验室感染以及培养物交*污染，生物安全柜同时也能保护工作环境”。当然，安全柜有效工作的前提是选购合格的安全柜和正确使用安全柜。　　通风柜(通风橱)是为在化学实验过程中清除腐蚀性化学气体和有毒烟雾而设计的。由于没有装备HEPA过滤器，通风柜不能有效清除微生物介质。放置在通风柜内微生物样品会散播到柜外，污染实验室环境。　　超净工作台(超净台)是为了保护试验品或产品而设计的，通过吹过工作区域的垂直或水平层流空气防止试验品或产品受到工作区域外粉尘或细菌的污染。一旦微生物样品放置于工作区域，层流空气将把带有微生物介质的空气吹向前台工作人员而产生危险。　　附：生物安全柜和超净台基本认证知识　　由于大多数用户对安全柜和超净台的性能、测试及检测不是很了解，所以造成了对这些仪器了解的盲区。可是往往有时候这些盲区会造成致命伤害，比如最近新加坡、台湾和北京的实验室病毒泄漏情况。　　无论超净台还是安全柜只是依靠风速来测量是否安全是不充分的。标准的检测和认证规则保证在进行检测时的可信度和保证安全柜的安全性能。　　目前国际上超净台的标准是：　　空气洁净等级符合ISO14644.1;　　澳大利亚标准AS 1807;　　IEST-RP-CC002.2标准。　　生物安全柜标准：　　美国ANSI/NSF49 (二级安全柜);　　欧洲标准 EN12469：2000(一，二，三级安全柜);　　超净台只能保护样品，不能保护操作人员，其认证合格包括下述步骤：　　1)用旋转叶轮风速表和热量风速表测超净台气流速率。安全气流平均值：0.4-0.5m/s，最大偏差20%。　　2)测量超净台过滤器整体性：利用自然湿剂检测仪。　　3)测量超净台内部光强，噪声。　　生物安全柜目前与科研密切相关的就是二级生物安全柜和三级生物安全柜。其中二级生物安全柜又可以分好几类，但是实验室经常使用的就是30%气体外排，70%气体循环的A/B3型和100%气体外排的B2型。生物安全柜不仅可以保护样品也可以保护操作者，所以才被成为“安全”柜。其检测步骤如下：　　1)测量流入气流量(前进气量)：利用热量风速表或者DIM气流罩。　　2)测量向下气流量：根据NSF49和EN12469标准不同，有两种方式。但都是使用的热量风速表来测定向下气流速率。　　3)ULPA过滤器检测：湿剂光度计，湿剂发生器，压力测量仪，PAO测量仪。　　4)还有噪音，光强，震动的强度测量。　　5)最后利用烟雾发生器进行气流形象话测试。