沉香对照药材

这几天实验室一直在做沉香的特征图谱，买了某药店的沉香药材，结果http://simg.instrument.com.cn/bbs/images/default/em09504.gif，居然连主成分，沉香四醇都没有！！！难道是我们买到假药了？？？http://simg.instrument.com.cn/bbs/images/default/emyc1010.gif真是太让人气愤啦！！！http://simg.instrument.com.cn/bbs/images/default/em09504.gifhttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2016/04/201604131621_590251_1987954_3.png

[align=center][b][font=宋体][font=宋体]沉香鉴别注意事项[/font][/font][/b][/align][b][font=宋体][b][font=宋体][font=宋体][/font][/font][/b][/font][/b][align=left][b][font=宋体][font=宋体]参照中国药典[/font]2015年版一部沉香项下[/font][/b][font=宋体][font=宋体][font=宋体]一、材料与设备[/font][/font][/font][/align][align=left][font=宋体][font=宋体]沉香（送检样），沉香对照药材（购自中检院），[/font]95%乙醇，盐酸，香草醛，乙醚，氯仿，薄层扫描仪（上海科哲）。[/font][/align][align=left][font=宋体][font=宋体]二.实验步骤[/font][/font][/align][align=left][font=宋体]1 理化鉴别 [/font][font=宋体][font=宋体]取〔漫出物〕项下醇溶性浸出物，进行微量升华，得黄褐色油状物，香气浓郁；于油状物上加盐酸[/font]1滴与香草醛少量，再滴加乙醇1〜 滴，渐显櫻红色，放置后颜色加深。[/font][/align][align=center][font=宋体][img=,548,736]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2020/09/202009101725538189_8670_1858223_3.jpg!w548x736.jpg[/img][/font][/align][align=center][font=宋体][font=宋体]图[/font]1 加入盐酸1滴香草醛少量樱红色[/font][/align][align=center][font=宋体][img=,690,920]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2020/09/202009101726093298_6848_1858223_3.jpg!w690x920.jpg[/img][/font][/align][align=center][font=宋体][font=宋体]图[/font]2 放置后颜色加深[/font][/align][align=left][font=宋体]2 薄层鉴别 [/font][font=宋体][font=宋体]取本品粉末[/font][/font][font=宋体]0[/font][i][font=宋体].[/font][/i][font=宋体]5g，加乙醚30ml，超声处理60分钟，滤过，滤液蒸干，残[/font][font=宋体][font=宋体]渣[/font][/font][font=宋体][font=宋体]加三氯甲烷[/font]2mL使[/font][font=宋体][font=宋体]溶[/font][/font][font=宋体][font=宋体]解，作为供试品溶液。另取沉香对照药材[/font]0.5g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法（2015年版四部通则0502)试验，吸取上述两种溶液各10μL，分别点于同一硅胶G 薄层板上，以三氯甲烷-乙醚（10 : 1)为展开剂，展开，取出，晾千，在紫外光灯（365nm)下检测，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。[/font][/align][align=center][font=宋体][img=,453,502]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2020/09/202009101728584816_7264_1858223_3.jpg!w453x502.jpg[/img][/font][/align][align=center][font=宋体]图3 薄层色谱鉴别图[/font][/align][align=left][font=宋体][font=宋体][font=宋体]小结：（[/font]1）在取醇溶性浸出物的时候不要取太多的样，因为在进行微量升华的时候，浓度过浓容易变黑，加入盐酸、香草醛和乙醇颜色根本不好观察，少取一些颜色变化才能符合药典标准。[/font][/font][/align][list=1][*][align=left][font=宋体][font=宋体]（[/font]2）薄层鉴别过程中，加入乙醚提取时，一定要封好口，或者超声池里放一个冰袋，因为超声时间很长乙醚容易挥发，展开剂乙醚与氯仿也都容易挥发要现配现用。[/font][/align][/list]

[align=center][b]不同液相分析条件沉香四醇峰面积影响[/b][/align] 依据《中国药典》一部对沉香药材中沉香四醇含量测定及特征图谱建立实验中发现：同一台仪器，同一支色谱柱，不同流速对沉香四醇峰面积影响差异较大。具体的实验过程分享如下：[b]1. 仪器[/b] 液相色谱仪-二极管阵列检测器[b]2. 色谱条件[/b]2.1特征图谱色谱条件与系统适用性试验：Phenomenex luna C18 (250*4.6mm*5μm) ；以乙腈为流动相A，以0. 1%甲酸溶液为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱；[b]流速为0.7 mL/min[/b]；柱 温 为30 ℃ ，检 测 波 长 为252nm，进样量10μL。理论板数按沉香四醇峰计算应不低于6000。表1 特征图谱色谱条件[align=left][img=,545,307]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/07/201907041730424038_2796_2613952_3.jpg!w545x307.jpg[/img][/align]2.2 含量测定色谱条件与系统适用性试验：Phenomenex luna C18 (250*4.6mm*5μm) ；以乙腈为流动相A，0. 1%甲酸溶液为流动相B，按 下 表 中 的 规 定 进 行 梯 度 洗 脱 ；柱 温 为30 ℃ ，检测波长为252nm，[b]流速为1.0 mL/min[/b]，进样量10μL；理论板数按沉香四醇峰计算应不低于6000。表2 含量测定色谱条件[img=,588,301]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/07/201907041730595043_3170_2613952_3.jpg!w588x301.jpg[/img][b]3 对照品溶液的制备 [/b] 取沉香四醇对照品适量，精密称定，加乙醇制成每64.07μg/mL的溶液，即得。[b]4 供试品溶液的制备 [/b] 取本品粉末（过三号筛）约0.2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入乙醇10ml，称定重量，浸泡 0 .5小时，超声处理（功 率 250W，频 率 40k HZ ) 1小时，放冷，再称定重量，用乙醇补足减失的重量，摇匀，静置，取上清 液滤过，取续滤液，即得。[b]5 样品测定[/b] 分别在2.1，2.2色谱条件下分析同一浓度沉香四醇对照品溶液和同一样品溶液。[b]6 结果[/b]6.1 特征图谱分析条件下对照品和样品色谱图及沉香四醇峰面积[img=,690,308]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/07/201907041731200208_3906_2613952_3.jpg!w690x308.jpg[/img] 图1 特征图谱分析条件下对照品保留时间及峰面积[img=,690,308]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/07/201907041731376911_2075_2613952_3.jpg!w690x308.jpg[/img] 图2 特征图谱分析条件下样品中沉香四醇保留时间及峰面积6.2 含量测定分析条件下对照品和样品色谱图及沉香四醇峰面积[align=left][img=,690,308]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/07/201907041732022556_453_2613952_3.jpg!w690x308.jpg[/img][/align][align=left]图3 含量测定分析条件下对照品保留时间及峰面积图 [/align][align=left] [img=,690,308]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/07/201907041737491947_8882_2613952_3.jpg!w690x308.jpg[/img][/align][align=left]图4 含量测定分析条件下样品中沉香四醇保留时间及峰面积[/align]6.3 考察沉香四醇在Phenomenex luna C18 和Eclipse C18峰面积差异[img=,690,308]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/07/201907041739105374_2398_2613952_3.jpg!w690x308.jpg[/img]图5 含量测定分析条件下Phenomenex luna C18柱对照品保留时间及峰面积[img=,690,308]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/07/201907041732179722_7450_2613952_3.jpg!w690x308.jpg[/img] 图6 含量测定分析条件下Eclipse C18柱对照品保留时间及峰面积[b]7 讨论[/b] 不同条件下沉香四醇保留时间及峰面积见表3，从表中看出，不同的液相色谱流动相洗脱程序对沉香四醇峰面积影响较大，不同厂家相同填料的色谱柱沉香四醇峰面积无显著差异。可见液相色谱含量测定一定要尊重实验事实，不同洗脱条件下的峰面积没有必然联系，可能对于有的化合物洗脱程序对其峰面积影响不大，但本实验中沉香四醇在不同的流动相洗脱程序下峰面积差异显著，可能是沉香中其他色谱峰对其有干扰，通过与大家分享分析沉香时的经验，切记：中药材含量测定对照品溶液一定要与供试品溶液在完全相同的分析条件下分析，含量测定才准确！！！表3 不同条件下沉香四醇保留时间及峰面积[table][tr][td]分析条件[/td][td]对照品保留时间[/td][td]对照品峰面积[/td][td]样品保留时间[/td][td]样品峰面积[/td][/tr][tr][td]特征图谱[/td][td]20.255[/td][td]2337937[/td][td]20.212[/td][td]11470559[/td][/tr][tr][td]含量测定[/td][td]15.374[/td][td]1632658[/td][td]15.389[/td][td]8031397[/td][/tr][tr][td]Eclipse C18[/td][td]12.962[/td][td]1690579[/td][td]/[/td][td]/[/td][/tr][/table]