苦杏仁酸标准品

[b][color=#425085]1[/color][color=#425085]摘要[/color][color=#425085] [/color][/b]本文根据《中国药典》2015版要求，测定中药饮片苦杏仁中苦杏仁苷含量的高效液相色谱方法，按中国药典条件，适当调整柱温，苦杏仁苷保留时间RSD%在0.31%，峰面积RSD%为1.40%。[b][color=#425085]关键词：[/color][/b]中药饮片苦杏仁苦杏仁苷高效液相色谱苦杏仁苷主要存在于苦杏、苦扁桃、桃、油桃(nectarines)、枇杷、李子、苹果、黑樱桃等果仁和叶子中。由龙胆二糖和苦杏仁睛组成的β-型糖苷。可特异性地抑制阿脲所致血糖升高和抗凝血作用。苦杏仁苷中毒非常严重．大都在食入果仁后1～2小时内发作。早期表现为精神不振、烦躁不安、头痛、头晕、流口水、恶心呕吐。症状会逐渐加重．出现呼吸抑制、意识丧失、牙关紧闭、抽搐以及体温．血压下降．常常危及生命。因此检测苦杏仁具体含量，意义重大[align=center][img=,247,151]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/04/201804111702267552_822_3358634_3.jpg!w247x151.jpg[/img][/align][align=center]图1 苦杏仁苷结构式[/align][b][color=#425085]2[/color][color=#425085]检测部分[/color][color=#425085]2.1[/color][color=#425085]仪器[/color][/b]本实验使用赛那尔H6000高效液相色谱仪系统。具体配置为H6000系列的两台输液泵、一台紫外可见光检测器、一台柱温箱溶剂管理器和spark Alias自动进样器；sainaer色谱工作站。[b][color=#425085] [/color][color=#425085]2.2 [/color][color=#425085]分析条件[/color][/b]色谱柱：岛津WondaSilC18 Superb 5um流动相：乙腈：0.1%磷酸=8:92（V/V）流速：1ml/min柱温：35℃检测波长：207nm进样量：10μL等度洗脱[b][color=#425085]2.3 [/color][color=#425085]标准品溶液的配制和样品处理[/color]标准品品溶液的制备[/b] 取苦杏仁苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含40μg的溶液，即得。[b]样品溶液的制备[/b] 取干燥好的山杏种子，粉碎，粉末过二号筛，称取约0.25g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，密塞，称定重量，超声处理（功率250W，频率50kHz）30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，过滤，精密量取续滤液5ml，置50ml量瓶中，加50%甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，制备好样品溶液。[b][color=#425085] [/color][color=#425085]3[/color][color=#425085]结果[/color][color=#425085]3.1 [/color][color=#425085]标样的色谱图[/color][/b][align=center][img=,559,278]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/04/201804111702396081_5945_3358634_3.jpg!w559x278.jpg[/img][/align][align=center]图2 40μg/ml标准品色谱图[/align][b][color=#425085] [/color][color=#425085] [/color][color=#425085] [/color][color=#425085] [/color][color=#425085] [/color][color=#425085] [/color][color=#425085] [/color][color=#425085] [/color][color=#425085] [/color][color=#425085] [/color][color=#425085] [/color][color=#425085] [/color][color=#425085] [/color][color=#425085] [/color][color=#425085] [/color][color=#425085]3.2 [/color][color=#425085]线性关系[/color][/b]将配制浓度为40μg/ml的标准溶液，分别稀释成5μg/ml, 10μg/ml,20μg/ml, 30μg/ml和40μg/ml进样采集数据，以峰面积为横坐标，浓度为纵坐标绘制工作曲线，所得曲线良好，R达到0.999以上。标准品的浓度及峰面积的结果见表1。 [table][tr][td]级别[/td][td]浓度（μg/ml）[/td][td]峰面积[/td][/tr][tr][td]1[/td][td]5[/td][td]112587[/td][/tr][tr][td]2[/td][td]10[/td][td]212458[/td][/tr][tr][td]3[/td][td]20[/td][td]321247[/td][/tr][tr][td]4[/td][td]30[/td][td]433587[/td][/tr][tr][td]5[/td][td]40[/td][td]554228[/td][/tr][/table]表1 苦杏仁苷浓度及峰面积[img=,260,220]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/04/201804111703132501_3119_3358634_3.jpg!w260x220.jpg[/img]图3 苦杏仁苷的标准曲线 [b][color=#425085]3.3 [/color][color=#425085]精密度试验[/color][/b]40μg/ml的苦杏仁苷标准品连续测定6次，考察方法的精密度，保留时间和峰面积的RSD%结果如表2所示：[table][tr][td] [align=center]序号[/align] [/td][td] [align=center]保留[/align] [/td][td] [align=center]峰面积[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]1[/align] [/td][td] [align=center]29.291[/align] [/td][td] [align=center]542152[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]2[/align] [/td][td] [align=center]29.542[/align] [/td][td] [align=center]555212[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]3[/align] [/td][td] [align=center]29.458[/align] [/td][td] [align=center]534879[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]4[/align] [/td][td] [align=center]29.423[/align] [/td][td] [align=center]548721[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]5[/align] [/td][td] [align=center]29.542[/align] [/td][td] [align=center]548524[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]6[/align] [/td][td] [align=center]29.354[/align] [/td][td] [align=center]554258[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]平均[/align] [/td][td] [align=center]29.435[/align] [/td][td] [align=center]547291[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]RSD%[/align] [/td][td] [align=center]0.343[/align] [/td][td] [align=center]1.40[/align] [/td][/tr][/table][align=left]表2 苦杏仁苷重复性数据（n=6）[/align][align=center][/align][b][color=#425085] [/color][color=#425085] [/color][color=#425085] [/color][color=#425085] [/color][color=#425085] [/color][color=#425085] [/color][color=#425085] [/color][color=#425085] [/color][color=#425085] [/color][color=#425085] [/color][color=#425085] [/color][color=#425085]3.4 [/color][color=#425085]样品测试[/color][/b]使用2.3配制好的苦杏仁苷样品溶液得出图4图谱：[align=center][img=,574,207]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/04/201804111704328122_8645_3358634_3.jpg!w574x207.jpg[/img][/align][align=center]图4 苦杏仁样品图谱[/align][color=#425085] [/color][color=#425085] [/color][color=#425085] [/color] [table][tr][td] [align=center]组份名[/align] [/td][td] [align=center]保留时间（min）[/align] [/td][td] [align=center]面积[/align] [/td][td] [align=center]含量（%）[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]苦杏仁苷[/align] [/td][td] [align=center]29.630[/align] [/td][td] [align=center]576392[/align] [/td][td] [align=center]1.6[/align] [/td][/tr][/table][align=left]表3 苦杏仁中苦杏仁苷测定结果[/align][color=#425085] [/color][b][color=#425085] [/color][color=#425085] [/color][color=#425085] [/color][color=#425085] [/color][color=#425085] [/color][color=#425085] [/color][color=#425085] [/color][color=#425085]4[/color][color=#425085]结论[/color][/b]经测试，本方法的工作曲线好R=0.999以上。数据重现性好，保留时间RSD%=0.34%（n=6），小于国家要求0.5%以内，峰面积RSD%=1.40%（n=6），小于国家要求2.0%以内。并且峰形完好，拖尾因子为1.02。说明此方法适用于检测苦杏仁中苦杏仁苷的含量。[color=#425085][/color]

苦杏仁中苦杏仁苷检测 杏大家应该都见过，也应该都吃过，杏仁大家可能也见过，也可能吃过，甚至还可能喝过用杏仁做的杏仁露。杏仁是蔷薇科植物山杏或杏的干燥成熟种子，是除去杏外层果肉和核壳最核心的部分。大家吃杏仁或喝杏仁露都能感觉到它有一股特异的香气，味微苦。一般的杏仁吃时需炒熟，味微苦，微毒，不宜多吃。生杏仁味较苦，而且有较强的毒性，需注意。 作为中药材，苦杏仁具有降气、止咳、抗炎、镇痛、平喘、润肠、通便、抗癌、降血糖、降血脂、美容等药物功效，可用于治疗咳嗽、气喘、胸满痰多、肠燥便秘、消化系统疾病、消解病人疼痛痛苦等。 很普通的东西具有很了不起的药用价值，其中重要成分严格检测是必不可少的，药典中也有很严格的要求。下面就介绍下高效液相色谱检测苦杏仁中苦杏仁苷过程及结果。【实验部分】【原理】 取适量苦杏仁粉碎后经甲醇超声提取，注入色谱系统，经C18色谱柱分离，紫外检测器检测，外标法（保留时间定性，峰面积定量）分析计算，得出结果。【仪器及试剂】 仪器：高效液相色谱仪（紫外检测器+等度泵+柱温箱+在线脱气机等），超声波清洗仪，溶剂过滤器，电子天平（0.0001），药典筛二号筛等。 试剂：甲醇（色谱纯），乙腈（色谱纯），磷酸（分析纯），超纯水等。【样品制备】 对照品溶液制备：精密称取苦杏仁苷对照品2mg于50ml容量瓶中，加甲醇溶解、定容，制成40μg/ml苦杏仁苷对照品溶液，备用。 供试品溶液制备：取苦杏仁样品适量，充分粉碎后过药典筛二号筛，准确称取过筛粉末0.25g于具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，密塞，称定重量，超声处理30分钟，放冷，再次称定重量，用甲醇补足减少的重量，摇匀。 精密量取以上溶液5ml于50ml容量瓶中，加50%甲醇稀释至刻度，摇匀，0.45um有机相微膜滤过，待测。【色谱条件】检测器：紫外检测器检测波长：207nm色谱柱：Promosil C18 ( 250 mm X 4.6mm，5μm )流动相：乙腈：0.1％磷酸溶液=8：92（V：V）流速：1.0ml/min柱温：30℃进样量：20μl【色谱图】对照品色谱图：http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/08/201508221948_562173_2536753_3.png供试品色谱图：http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/08/201508221948_562174_2536753_3.png【计算】计算公式：样品中被测物含量计算公式：http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/08/201508221948_562175_2536753_3.pngD----供试品中被测物含量，以（%）表示V----供试品稀释的总体积，单位（mL）P3----供试品被测物峰面积值P4-----对照品被测物峰面积值ρ2----对照品被测物浓度。单位为mg/mlm2----样品质量，单位（mg）http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/08/201508221948_562176_2536753_3.png【结果】 通过计算，苦杏仁中苦杏仁苷的含量近似为3.54%，高于药典要求的3.0%，该苦杏仁中苦杏仁苷含量满足药典要求，该检测项目合格。【结论】 以上方法检测苦杏仁中苦杏仁苷含量结果准确、可靠，方法简便易操作，该方法适合该类样品检测。