格氏李斯特氏菌

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  • 【分享】加拿大即食食品将执行新李斯特菌政策

    自2004年以来,加拿大首个新的即食食品李斯特菌政策将于2011年4月1日生效。该政策是加拿大政府应对韦瑟里尔报告所采取的又一措施,该报告是对加拿大2008年李斯特菌感染事件的独立调查。2008年,加拿大共发生57起李斯特菌感染,造成23人死亡,死者大部分为老年人。 国际上公认的李斯特菌共有7个菌株:其中单核细胞增生李斯特氏菌是一种人畜共患病的病原菌。它能引起人、畜的李斯特菌病,感染后主要表现为败血症、脑膜炎和单核细胞增多。单核细胞增生李斯特菌广泛存在于自然界中,肉类、蛋类、禽类、海产品、乳制品、蔬菜等都已被证实是李斯特菌的感染源。食品中存在的单增李氏菌对人类的安全具有危险,该菌在4℃的环境中仍可生长繁殖,是冷藏食品威胁人类健康的主要病原菌之一,很多国家都已经采取措施来控制食品中的李斯特菌,并制定了相应的标准。 此次的新政策主要有6处重大修改:制定了与国际标准类似的、新的最终产品符合性标准;针对能否造成李斯特菌生长,对即食食品的定义作了修改或制定,更新了李斯特菌暴发涉及的食品列表;鼓励使用后灭活处理和/或李斯特菌生长抑制剂;规定了从环境到最终产品检测的具体抽样;要求所有即食食品厂实施环境监督;加强对高风险人群的调查。 新政策将适用于在加拿大销售的所有即食食品,包括国内产品和进口产品。因此,检验检疫部门提醒出口食品加工企业:密切关注国外信息,及时调整产品结构,确保出口产品的安全卫生。

  • 单增李斯特菌检测

    单核细胞增生李斯特氏菌及检验单核细胞增生李斯特氏菌是一种人畜共患病的病原菌。它能引起人畜李氏菌的疾病,感染后主要表现为败血症、脑膜炎和单核细胞增多。它广泛存在于自然界中,食品中存在的单增李氏菌对人类的安全具有危险,该菌在4℃的环境中仍可生长繁殖,是冷藏食品威胁人类健康的主要病原菌之一,因此,在食品卫生微生物检验中,必须加以重视。一、生物学特性1、形态与染色该菌为革兰氏阳性短杆菌,大小约为0.5μmх1.0-2.0μm,直或稍弯,两端钝圆,常呈V字型排列,偶有球状、双球状,兼性厌氧、无芽胞,一般不形成荚膜,但在营养丰富的环境中可形成荚膜,在陈旧培养中的菌体可呈丝状及革兰氏阴性,该菌有4根周毛和1根端毛,但周毛易脱落。2、培养特性该菌营养要求不高,在20--25℃培养有动力,穿刺培养2--5天可见倒立伞状生长,肉汤培养物在显微镜下可见翻跟斗运动。该菌的生长范围为2--42℃(也有报道在0℃能缓慢生长),最适培养温度为35--37℃,在pH中性至弱碱性(pH9.6)、氧分压略低、二氧化碳张力略高的条件下该菌生长良好,在pH3.8--4.4能缓慢生长,在6.5% NaCl 肉汤中生长良好。在固体培养基上,菌落初始很小,透明,边缘整齐,呈露滴状,但随着菌落的增大,变得不透明。在5-7%的血平板上,菌落通常也不大,灰白色,刺种血平板培养后可产生窄小的β-溶血环。在0.6%酵母浸膏胰酪大豆琼脂(TSAYE)和改良Mc Bride(MMA)琼脂上,用45°角入射光照射菌落,通过解剖镜垂直观察,菌落呈兰色、灰色或兰灰色。3、生化反应该菌触酶阳性,氧化酶阴性,能发酵多种糖类,产酸不产气,如发酵葡萄糖、乳糖、水杨素、麦芽糖、鼠李糖、七叶苷、蔗糖(迟发酵)、山梨醇、海藻糖、果糖,不发酵木糖、甘露醇、肌醇、侧金盏花醇、棉子糖、卫矛醇和纤维二糖,不利用枸橼酸盐,40%胆汁不溶解,吲哚、硫化氢、尿素、明胶液化、硝酸盐还原、赖氨酸、鸟氨酸均阴性,VP、甲基红试验和精氨酸水解阳性。4、血清型根据菌体(O)抗原和鞭毛(H)抗原,将单增李氏菌分成13个血清型,分别是1/2a、1/2b、1/2c、3a、3b、3c、4a、4b、4ab、4c、4d、4e 和“7”13 个血清型。致病菌株的血清型一般为1/2b、1/2c、3a、3b、3c、4a、1/2a和4b,后两型尤多。5、抵抗力该菌对理化因素抵抗力较强,在土壤、粪便、青储饲料和干草内能长期存活,对碱和盐抵抗力强,60-70℃经5-20min可杀死,70%酒精5min、2.5%石炭酸、2.5%氢氧化钠、2.5%福尔马林20min 可杀死此菌。该菌对青霉素、氨苄青霉素、四环素、磺胺均敏感。二、流行病学单增李斯特氏菌广泛存在于自然界中,不易被冻融,能耐受较高的渗透压,在土壤、地表水、污水、废水、植物、青储饲料、烂菜中均有该菌存在,所以动物很容易食入该菌,并通过口腔-粪便的途径进行传播。据报道,健康人粪便中单增李氏菌的携带率为0.6-16%,有70%的人可短期带菌,4-8%的水产品、5-10%的奶及其产品、30%以上的肉制品及15%以上的家禽均被该菌污染。人主要通过食入软奶酪、未充分加热的鸡肉、未再次加热的热狗、鲜牛奶、巴氏消毒奶、冰激凌、生牛排、羊排、卷心菜色拉、芹菜、西红柿、法式馅饼、冻猪舌等而感染,约占85-90%的病例是由被污染的食品引起的。该菌可通过眼及破损皮肤、粘膜进入体内而造成感染,孕妇感染后通过胎盘或产道感染胎儿或新生儿,栖居于子宫颈的该菌也引起感染,性接触也是本病传播的可能途径,且有上升趋势。三、致病性单增李氏菌进入人体后是否发病,与菌的毒力和宿主的年龄、免疫状态有关,因为该菌是一种细胞内寄生菌,宿主对它的清除主要靠细胞免疫功能。因此,易感者为新生儿、孕妇及40岁以上的成人,此外,酗酒者、免疫系统损伤或缺陷者、接受免疫抑制剂和皮质激素治疗的患者及器官移植者也易被该菌感染。该病的临床表现,健康成人个体出现轻微类似流感症状,新生儿、孕妇、免疫缺陷患者表现为呼吸急促、呕吐、出血性皮疹、化脓性结膜炎、发热、抽搐、昏迷、自然流产、脑膜炎、败血症直至死亡。单增李氏菌的抗原结构与毒力无关,它的致病性与毒力机理如下:1、寄生物介导的细胞内增生,使它附着及进入肠细胞与巨噬细胞;2、抗活化的巨噬细胞,单增李氏菌有细菌性过氧化物歧化酶,使它能抗活化巨噬细胞内的过氧物(为杀菌的毒性游离基团)分解;3、溶血素,即李氏杆菌素O,可以从培养物上清液中获得,为活化的细胞溶素,有α和β两种,为毒力因子。四、检验1、增菌培养取回的样品应在4℃下处理、存放和运送,如果是冷冻样品,则在检验前要保持冷冻状态。取25mL液体或25g半固体或固体样品放入含有225mL无选择性试剂增菌肉汤(EB)的均质杯中进行均质,然后转入三角瓶中,30℃培养4h,加入选择性试剂吖啶黄素、萘啶酮酸,继续培养20h和44h.。2、分离共培养24h和48h后,取EB培养物分别在OXA和LPM或加七叶苷/Fe3+LPM琼脂平板上划线。PALCAM琼脂可替代LPM琼脂。将OXA和PALCAM平板置于35℃培养24-48h,LPM平板在30℃培养24-48h。然后,把LPM平板放于解剖镜载物台上,以45°角入射光从平板下面照射平板,通过目镜垂直向下观察寻找可疑菌落。李斯特氏菌在LPM平板上呈有光泽的兰色或灰色。用已知阳性菌和阴性菌划线的平板作对照。加入七叶苷和Fe3+的LPM平板不用斜射光系统,选择可疑菌落的方法与在OXA上选择可疑菌落的方法相同。在OXA平板上李斯特氏菌菌落周围有一个黑色环,其它菌也可形成黑色环,但形成时间要在两天以上。李斯特氏菌在PALCAM和OXA平板上的菌落特征相似。在PALCAM和OXA或LPM平板上挑取5个或更多的典型菌落,分别划线于TSAYE平板上以得到更纯、更典型的单个菌落。食品检验中在TSAYE平板上纯化是必须的,因为在PALCAM和OXA或LPM平板上分离菌落时可能沾有不可见的受抑微生物。挑取5个典型菌落的原因是一个样品中可能分离到一种以上的李斯特氏菌。30℃TSAYE平板培养24-48h,如果不用于动力观察,也可在35℃培养。3、鉴定步骤(1)观察TSAYE平板通过斜射光观察,寻找呈兰灰至兰色菌落。在TSAYE上用已知菌作对照。(2)、从30℃或更低温度下培养的TSAYE平板上挑取典型菌落做成湿玻片在油镜下观察。湿玻片用0.85%生理盐水菌悬液制成。如果菌量太少,菌体黏附于载玻片上而呈现非运动性。李斯特氏菌是细短杆菌,可见轻微的旋转及翻滚。与已知的李斯特氏菌的对照相比,球形、大的杆状且快速泳动的都不是李斯特氏菌。(3)挑取典型菌落进行过氧化氢酶实验,李斯特氏菌呈过氧化氢酶阳性反应。(4)取16-24h的培养物进行革兰氏染色,李斯特氏菌呈革兰氏阳性杆菌。但是陈旧培养物革兰氏染色会发生变化,而且菌体可成球形。在染色过重的玻片上菌体有呈栅状排列的趋势,易误认为白喉菌而错判。(5)挑取典型菌落接种于TSBYE肉汤管中,35℃培养24h用做糖类发酵和其它生化项目实验。TSBYE肉汤管在4℃下可存放几天,也可反复接种。(6)在TSAYE平板上挑取典型菌落刺种到5%的绵羊血或马血琼脂平板上,刺种时避免触到平板底部和使琼脂破裂,同时设阳性对照(单核细胞增生李斯特氏菌和绵羊李斯特氏菌)和阴性对照(英诺克李斯特氏菌),35℃培养48h。单核细胞增生李斯特氏菌呈窄小的β-溶血环。(7)在明亮的光照下,观察经穿刺的血琼脂平板,单核细胞增生李斯特氏菌和西尔李斯特氏菌围绕穿刺点产生较清晰的β-溶血环,英诺克李斯特氏菌不产生溶血现象,而绵羊李斯特氏菌产生界限明显的较大溶血环,在此不要试图进行种间的区分,但要记录下溶血反应的特征,CAMP试验可区分它们间的溶血反应。(8)硝酸盐还原试验(选做)。用TSBYE肉汤培养物接种于硝酸盐肉汤中,35℃培养5天后,加入0.2mL试剂A,再加入0.2mL试剂B,混合,出现紫红色为阳性反应,表明硝酸盐已被还原,如无颜色出现,在试管内再加入少量锌粉,放置1h,如出现紫红色,表明硝酸盐仍存在,未被细菌还原。只有默氏李斯特氏菌还原硝酸盐,因此,从格氏李斯特氏菌中区分出默氏李斯特氏菌就必须进行这唯一的试验。本试验还有一等效试验,即加入0.2mL试剂A后,再加入0.2mL试剂C,出现橙色表明硝酸盐已被还原。如未出现颜色反应,也加入少量锌粉,若出现橙色表明硝酸盐未被还原。(9)将TSBYE培养物穿刺到SIM和MTM试管中,室温培养7天,每日观察,李斯特氏菌呈典型伞状生长。在MTM中伞状生长更典型。同时,30℃的TSBYE培养物在油镜下可见细菌作翻转运动。(10 )将TSAYE肉汤培养物分别接种于0.5%(W/V)葡萄糖、麦芽糖、七叶苷、甘露醇、鼠李糖、木糖发酵管内(可选用倒立发酵管),35℃培养7天,呈阳性反应的李斯特氏菌产酸不产气,李斯特氏菌发酵鼠李糖和木糖的情况见下表。所有李斯特氏菌对葡萄糖、七叶苷、麦芽糖均能发酵,除格氏李斯特氏菌均不能发酵甘露醇。如果在OXA、PALCAM或加七叶苷/Fe3+的LPM分离平板上菌落色素很明显,则七叶苷试验可免做。

  • 【我们不一YOUNG】单增李斯特菌

    [font=微软雅黑][color=#333333]单核细胞增生李斯特氏菌(Listeria monocytogenes)在自然界分布非常广泛,是一种革兰阳性菌,兼性厌氧,不产芽孢,可以运动。它主要以食物为传染媒介,是最致命的食源性病原体之一。[/color][/font][font=微软雅黑][color=#333333][/color][/font][font=微软雅黑][color=#333333]单核细胞增生李斯特氏菌在环境中无处不在,在绝大多数食品中都能找到单核细胞增生李斯特氏菌。乳制品、肉类、蛋类等都已被证实是单核细胞增生李斯特氏菌的感染源。单核细胞增生李斯特氏菌中毒严重的可引起血液和脑组织感染,很多国家都已经采取措施来控制食品中的单核细胞增生李斯特氏菌,并制定了相应的限量要求。[/color][/font][font=微软雅黑][color=#333333][/color][/font][b][font=微软雅黑][color=#333333]单增李斯特属于革兰氏阳性短杆菌,可以在表面形成生物膜,[/color][/font][/b][font=微软雅黑][color=#333333]冰冻温度下存活,具有一定的耐酸性、耐盐性,会引起胃肠炎,严重时会侵袭人的大脑,造成脑膜炎,由于其危害较大,并且还能形成生物膜,食品加工厂一旦感染,很难有效控制,而对于生物膜的降解一般消毒剂也很难去除。[/color][/font][font=微软雅黑][color=#333333][/color][/font][font=微软雅黑][color=#333333]出口食品对于李斯特的要求严格,近期美国和欧盟通报我国出口的金针菇及乳制品被检出李斯特菌超标,实施自动扣留。[/color][/font][font=微软雅黑][color=#333333][/color][/font][b][color=#333333]单增李斯特菌高风险污染源食品:熟肉制品及即食生肉制品 ,干酪、再制干酪制品,冷冻饮品,即食鲜切果蔬,即食生物动物性水产制品 其他需要控制的即食食品[font=微软雅黑](转载自[/font][font=system-ui, -apple-system, BlinkMacSystemFont, 'Helvetica Neue', 'PingFang SC', 'Hiragino Sans GB', 'Microsoft YaHei UI', 'Microsoft YaHei', Arial, sans-serif][color=rgba(0, 0, 0, 0.298039)]食品微生物工程师[/color][/font][font=微软雅黑])[/font][/color][/b]

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  • 检测农产品中的单增李斯特菌的前处理方法
    单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes,简称单增李斯特菌)是人畜共患病原菌。李斯特菌在环境中无处不在,在绝大多数食品中都能找到李斯特菌。 其前处理主要分为单曾李斯特菌细菌培养、空白样品制备和人工污染单曾李斯特菌污染样品制备。细菌培养方法简单只需进行摇床24小时培养。将空白样品与单曾李斯特菌混合,稀释不同浓度,选择菌落总数在20-300之间进行计数。整个过程简单易操作,其中采用比例稀释仪可以再稀释浓度步骤节省大量时间和提高稀释准确性,采样自动菌落计数器可以在选择20-300之间的菌落步骤中节省大量时间。
  • 恒奥科技:检测农产品中的单核细胞增生李斯特菌的前处理方法
    单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes,简称单增李斯特菌)是人畜共患病原菌。李斯特菌在环境中无处不在,在绝大多数食品中都能找到李斯特菌。 其前处理主要分为单曾李斯特菌细菌培养、空白样品制备和人工污染单曾李斯特菌污染样品制备。细菌培养方法简单只需进行摇床24小时培养。将空白样品与单曾李斯特菌混合,稀释不同浓度,选择菌落总数在20-300之间进行计数。整个过程简单易操作,其中采用比例稀释仪可以再稀释浓度步骤节省大量时间和提高稀释准确性,采样自动菌落计数器可以在选择20-300之间的菌落步骤中节省大量时间。
  • 人单核细胞增多性李斯特菌素O((LLO)检测试剂盒
    人单核细胞增多性李斯特菌素O((LLO)检测试剂盒人单核细胞增多性李斯特菌素O((LLO)检测试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围: 规格:96T/48T使用目的:本试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中人单核细胞增多性李斯特菌素O((LLO)含量。实 验 原 理 本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中人单核细胞增多性李斯特菌素O((LLO)水平。用纯化的抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入人单核细胞增多性李斯特菌素O((LLO)抗原、生物素化的人单核细胞增多性李斯特菌素O((LLO)抗体、HRP标记的亲和素,经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人单核细胞增多性李斯特菌素O((LLO)呈正相关。 使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),计算样品浓度

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  • EFSA公布即食食品中的李斯特菌水平报告
    2013年6月27日,据欧洲食品安全局(EFSA)消息,欧洲食品安全局公布了即食食品中的李斯特菌水平报告第一部分内容,对部分即食食品中的李斯特菌状况进行了分析。   调查发现,不符合食品安全标准的即食食品所占的比例较低,然而由于这些食品较为大众化,并且在受到李斯特菌污染后会危及人体健康,总体上还需要对即食食品中的李斯特菌风险保持警惕。   尽管李斯特菌感染不常见,但是人在感染后通常病情较重甚至有生命危险。2011年欧盟地区报告的感染病例为1470,死亡比例为12.7%.   为应对李斯特菌污染风险,欧洲食品安全局专家组建议在食品生产、销售、贮藏环节遵守食品卫生规范。消费者在家中应该把冰箱温度调低,以抑制李斯特菌生长。   更多详情参见:   http://www.efsa.europa.eu/en/press/news/130627.htm
  • 北京将建18个食源性致病菌监测点
    食物中某些致病菌如果超标也会导致人体耐药。11月12日,记者获悉,市卫生局已向各区县卫生局和食品办等部门印发食品安全风险监测方案,拟在超市、集贸市场等地设立18个监测点,对全市消费量大的2500多件食品开展食源性致病菌的监测,并据此耐药趋势建立耐药图谱库。   市卫生局称,食源性致病菌监测采用常规监测与专项监测相结合形式,常规监测是针对本市居民消费量大、流通广的食品,监测重点为即食食品。根据监测方案,食源性致病菌常规监测包括10类食品12种微生物指标。专项监测中耐药监测包括沙门氏菌和金黄色葡萄球菌,溯源分析包括沙门氏菌、副溶血性弧菌、金黄色葡萄球菌和单增李斯特菌。   抽样地点包括餐饮店、农贸市场、超市、专卖店以及农村地区、城乡结合部的超市、集贸市场、小卖部、小餐饮店和农家院。市卫生局表示,开展食源性致病菌监测的目的在于掌握和分析本市消费量大、流通广泛的食品中主要食源性致病菌的污染状况及其变化趋势,确定危害因素的分布和可能来源 及时发现食品安全隐患 为风险评估、食品安全监督管理和制定微生物食品安全标准提供依据。
  • 2846个实验室通过认监委2012实验室能力验证
    2013年3月27日,国家认监委发布公告,公布了获得2012年国家认监委能力验证计划满意结果实验室名单,涉及36个能力验证项目2846个实验室取得国家认监委能力验证计划满意结果。具体名单如下所示: 国家认监委2013年第5号公告 关于发布获得2012年国家认监委能力验证计划满意结果实验室名单的公告   国家认监委2012年实验室能力验证计划所有项目均已顺利实施完毕,并通过专家总结验收。现将参加2012年国家认监委组织的能力验证项目并取得满意结果的实验室名单予以公布。   根据《实验室能力验证实施办法》的规定,对取得满意结果的实验室,计入实验室参加能力验证活动的记录,并在2013至2014年度进行资质认定、实验室认可评审时,可以免除该项目的现场实验。   附件:2012年国家认监委能力验证计划满意结果实验室名单.doc(不印发纸质文件,请从认监委网站下载)。   国家认监委   2013年3月27日   一、 食品中菌落总数、金黄色葡萄球菌(定量)、沙门氏菌、单核细胞增生李斯特氏菌的检测能力验证项目(330家) 编号 机构名称 满意参数 备注 1 安徽出入境检验检疫局生物技术分中心 菌落总数、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、单增李斯特氏菌 2 辽宁出入境检验检疫局检验检疫技术中心鲅鱼圈分中心 菌落总数、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、单增李斯特氏菌 3 西安市食品药品检验所 菌落总数、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、单增李斯特氏菌 4 泰州出入境检验检验局综合技术服务中心农畜食品实验室 菌落总数、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、单增李斯特氏菌 5 舟山市质量技术监督检测院(国家海洋食品质量监督检验中心) 菌落总数、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、单增李斯特氏菌 6 江苏省产品质量监督检验研究院宝应食品中心 菌落总数、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、单增李斯特氏菌 7 江苏省产品质量监督检验研究院 菌落总数、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、单增李斯特氏菌 8 黑龙江出入境检验检疫局检验检疫技术中心微生物检测实验室 菌落总数、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、单增李斯特氏菌 9 北京铁路疾病预防控制中心 菌落总数、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、单增李斯特氏菌 10 内蒙古自治区产品质量检验研究院 菌落总数、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、单增李斯特氏菌 11 吉林省疾病预防控制中心 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    ATCC 35967 斯氏李斯特氏菌 百欧博伟生物 一、菌种简介平台编号:bio-53040规格:冻干物拉丁属名:Listeria seeligeri菌株名称:斯氏李斯特氏菌其它编号:ATCC 35967培养基编号:114 培养温度:37培养时间:18-24 小时用途:研究、质量控制注意事项:仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的,不可用于人类或动物的临床诊断或治疗,非药用,非食用 二、培养基(血平板琼脂培养基) 三、保藏条件斜面菌种和冻干菌种应在 2-8°C 保存。 四、斯氏李斯特氏菌低温保存法1、简单保存法,将琼脂斜面孢子培养物、菌丝悬浮液以及由麸皮、大米、小米等谷物原料制成的孢子培养物置于4℃冰箱保存,保存时间不超过1~2个月,若将谷物原料制备的孢子瓶抽真空并在棉塞上浸蜡,以隔绝外界空气和水汽,保持时间可达3~4个月。2、液氮超低温保存法,将生长稳定期的细胞悬浮在10%甘油或其他低冰点液体中,密封于安瓿管内,然后控制冷却速度,使安瓿管温度逐步下降至-35℃时,即可置于-150~-196℃的液氮罐中保存。大多数微生物如病毒、噬菌体、多种细菌、放线菌、酵母和原虫、特别是一些用冷冻干燥法有困难的微生物,都可用此法长期保存。 五、注意事项1) 首次活化,干粉粉要全部用完,不能预留,用 0.1-0.2ml 的培养液或无菌水溶解,接种在1-2 个平板上,因冻干粉处于休眠状态,请勿接种多支斜面或平板,以避免因接种量不足而导致复苏不成功;如有不明白之处,请务必先咨询我单位技术人员,避免不必要的损失;二次接种量要多,固体斜面培养基水分要少才能让菌体长得比较明显,液体培养要静止培养;2)微生物菌种应保藏于低温、清洁干燥的地方,室温放置时间过长会导致菌种衰退;3)菌种操作应在无菌条件下进行;转种完毕,应经灭菌再做丢弃处理;4)应根据菌种状况及时转接,冻干菌种保藏时间通常为 2-25 年;5)菌种使用过程中如出现杂菌污染或菌种生产性能下降,应及时和中国微生物菌种查询网联系。 六、单层冻干管打管说明书1、安瓿瓶开封:用浸过 75%酒精的脱脂棉擦净安瓿管,用火焰加热其顶端,滴少量(2-3滴)无菌水至加热顶端使之破裂,用锉刀或者镊子敲下已破裂的安瓿管顶端并将冻干管开口处在火焰上过一遍,并保持在火焰旁操作。2、注意事项:菌种活化前,请将安瓿管保存在 4-10℃的环境下,某些菌种经过冷冻干燥并抽真空保存的,开启后必须一次使用完,不能留菌粉下次使用;另外,安瓿管里大部分是用牛奶作为保护剂,里面菌体为少数,复苏时要全部菌悬液接在新鲜培养基上,否则可能造成复苏不成功;3、冻干菌种经过冷冻干燥保存后处于休眠状态,有时延滞期较长,如在说明书建议的培养时间还未长起来,请继续在相应的环境下多培养 24 小时或者更长时间,直至菌种培养完成;有的菌种需要连续两次继代培养才能正常生长,一般来说菌种稳定后才能用于您的后续实验。4、暂不启开的安瓿管应于 4℃中保藏(特殊除外)。5、冻干管打开后需一次用完,不能留存。6、打管操作需由专业微生物技术人员在相应的防护设备中进行,生物危害程度为三类的菌种应在生物安全柜中操作,打管时冻干管应远离面部,保护眼睛。
  • 美国Hygiena海净纳单增李斯特菌快检拭子
    InSite L.Mono Glo单增李斯特快检拭子李斯特菌属和单增李斯特菌的环境表面筛选试验货号:ILMG050 (50次测试)该测试试剂盒的性能由AOAC研究所进行了审查,许可证号# 061802。AOAC研究所已经验证了该检测拭子对环境表面(塑料、陶瓷、不锈钢)李斯特菌属和单核增生李斯特菌的检测。说明/预期用途:InSite L. mono Glo是一种对李斯特菌和单核增生李斯特菌(L. mono)的筛选试验,旨在用于清洗后的食品加工环境中的环境监测。培养基的颜色从黄色/琥珀色变化到灰色/黑色被认为是李斯特菌种类的假定阳性。在紫外(UV 395 -400nm)光下显示绿色荧光的样品表明单核增生李斯特菌假定为阳性。原理:InSite L. mono Glo含有抗生素、生长增强剂和变色化合物的专有配方。抗生素抑制大多数非李斯特菌微生物,而生长增强剂提供恢复营养,以支持亚致死损伤李斯特菌的生长。指标化合物利用李斯特菌产生的β-葡萄糖苷酶将肉汤由黄色变为黑色。由于诊断酶磷脂酶C的存在,通过紫外光下的绿色荧光来验证单增李斯特菌。预期使用人:经过标准微生物学实践培训的实验室人员有资格使用InSite L. mono Glo。所需材料(未提供):▘ 可提供37±1℃的培养箱▘ 长波(395 -400nm)紫外线检测灯▘ 自密封胶带、塑料膜或石蜡膜▘ 紫外线安全眼镜使用方法:1.采集样品时,请务必采用无菌技术。请勿触摸拭子或拭子内部,紧握拭子管,旋转并将拭子顶部从管中拉出。拭子管的内部若有冷凝液属于正常现象。棉签头是预先润湿的,便于尽可能多的采集样本。对于典型的平坦表面,应充分涂抹 10 x 10 cm (4 x 4 in.) 的标准区域。在采集样本时旋转拭子,以确保最大限度地拾取样本,并施加足够的压力,在拭子轴上产生弯曲。对于不规则表面,请确保每次测试所使用涂抹方法的一致性并涂抹足够大的区域,以采集具有代表性的样本。2.在擦拭完所需的测试区域后,将拭子放回拭子管中旋转拧紧。提示:用胶带或自封膜包裹住接口处,避免意外溢出。3.激活拭子:紧握拭子管并用拇指和食指通过前后弯曲球阀将 Snap-Valve 阀折断。挤压球阀3-4次,将球阀内的液体沿着拭子杆向下全部排出。4.挤压试管3次,轻轻捏试管底,然后摇晃3秒。这将有助于从拭子中释放细胞并取代气泡。5.在37 ± 1°C下孵育24-48小时。观察介质颜色的变化,并参考下面的结果说明。在样品孵育48小时之前,结果不能被认为是阴性的。结果说明:▘ 48小时后培养基颜色无变化,表明样品中李斯特菌种类为阴性。当介质在48小时后保持为琥珀色/黄色时,不应使用紫外线照射。▘ 灰色/黑色的变化表明了李斯特菌的种类。为了验证单核增生李斯特菌的存在,将紫外线直接照射到管底部的侧面。如果可见绿色荧光,则推测单增李斯特菌阳性。提示:◎减少环境光可提高荧光可见性。◎如果荧光不清楚,则翻转拭子。因荧光化合物与管材料结合,当管底部的观察区域没有介质时,荧光不明显。 ▘ 灰色/黑色培养基的变化和绿色荧光的存在都表明样本为单增李斯特菌的假定阳性。 类李斯特菌:某些细菌的数量很高,如肠球菌,会使介质变黑。在环境中检测这些“类似李斯特菌”的微生物可以表明,需要改善清洁和卫生设施,样品现场的条件可能有利于李斯特菌的生长。当测试地板和排水沟等高度污染的表面时,可以预期的假定阳性率更高。为了验证假定阳性样本中是否存在李斯特菌,Hygiena建议用更具体的方法检测Insite装置的培养培养基,如PCR、ELISA或lateral flow。确认: 假定的阳性样本可以通过适当的参考方法来确认,例:▘ 美国FDA细菌学分析手册(BAM)▘ 美国农业部FSIS微生物实验室指南(MLG)▘ 加拿大卫生部的分析方法纲要▘ 国际标准化组织(ISO)假定的阳性样本也可以通过Hygiena的BAX® 系统PCR检测对李斯特菌属或单核增生李斯特菌属进行确认。详情请访问hygiena.com/service-lab.html。任何确认结果都应按照适当的规定进行处理。储存条件及有效期: ▘ 冷藏保存(2 - 8 ℃)  ▘ 拭子的保质期为 12 个月。请检查标签上的有效期。废品处置:处置前应进行消毒。拭子可以通过高压灭菌、焚烧灭菌或将未密封的拭子浸泡在20%漂白剂中1小时进行消毒。然后,它们就可以被放在垃圾桶里了。或者,拭子可以丢弃在生物危害废物处置设施中。安全注意事项:当按照本说明中的标准实验室规范和程序使用拭子时,不会造成任何健康风险。使用过的拭子并应按照良好实验室规范和健康和安全法规进行安全处置。▘ InSite L. mono Glo可用于清洗后的生产表面和环境表面。▘ 单核增生李斯特菌(L. mono)是一种人类病原体。在处理可能含有单增李斯特菌的样品时,应格外小心含有InSite设备的孵育样品。免疫功能低下的个体和孕妇特别容易暴露于单核增生李斯特菌,不应允许进行近距离检测。▘ 当使用紫外线灯或手电筒时,请佩戴适当的防护眼镜。Hygiena 的法律责任:与任何培养基一样,InSite的结果并不构成对使用这些设备进行测试的食品、饮料产品或工艺的质量的保证。Hygiena 公司对用户或其他任何人由于使用本拭子而造成的直接或间接的、偶然或从属发生的任何损失或损伤,均不承担责任。若证实此产品存在缺陷,Hygiena 公司的唯一责任是更换产品或酌情退还货款。若发现疑似缺陷请于 5 天内及时通知 Hygiena 公司并将产品退还Hygiena 公司。有关退货授权号码,请联系客户服务部。联系方式: 如需更多信息,请登录 www.hygiena.com 查询或以下列方式联系我们: InSite L.Mono Glo单增李斯特快检拭子 李斯特菌属和单增李斯特菌的环境表面筛选试验货号:ILMG050 (50次测试)
  • 环境李斯特菌(美国3M)
    9.Petrifilm&trade 环境李斯特菌测试片-美国3M 培养时间仅为28± 2小时 无需增菌培养 紫红色菌落便于计数 可作定性、半定量和定量判读 便于室内操作 AOAC RI标准:030601 编号:6448 规格:25片/包,8包/箱 环境李斯特菌测试片3M(EL)测试片是一种预先制备好的培养基,含有选择性试剂,营养成分,冷水可溶性的凝胶和有助于菌落检测的显色指示剂。PetrifilmEL测试片可用于检测或计数环境样本中的李斯特菌数。PetrifilmEL测试片检测的李斯特菌包括单核增生李斯特菌(L.monocytogenes)英诺克李斯特菌(L.innocua),格氏/墨氏李斯特菌(L.grayi/murrayi),威尔李斯特菌(L.welshimeri),但不能区分各种菌。 环境条件和消毒剂可能会抑制或损伤微生物。缓冲蛋白胨缓冲液(BufferedPeptoneWater,BPW)能用作修复肉汤和PetrifilmEL测试片结合使用。但李斯特菌在缓存蛋白胨缓冲液中的修复过程不是增菌步骤。 (贮藏) 1.将未开封的测试片贮藏在=8oC(46oF)的环境下,并在包装上标示的有效期内使用。在高湿度的地方,最好在使用前将测试片回复到室温。 2.已开封的测试片,将开口反折,用胶带封好。 3.为防止暴露于潮湿的环境中,请不要冷藏已开封的测试片。将胶带封好的测试片贮藏在低温干燥的地方,保持时间不超过1个月。请勿将测试片放在温度25oC(77oF)和(或)相对湿度50%的环境中。 (样品制备) 4.用涂抹棒、海棉或其它采样设备收集环境样本。湿润采样设备的液体应=10mL。湿润剂可以是无菌水、缓冲蛋白胨水(BufferedPeptoneWater,BPW),或中和缓冲液,如Letheen肉汤或Dey/Engley(DE)中和肉汤。 5.在无菌环境下在收集的样品中添加5mL,20-30oC,灭过菌的缓冲蛋白胨水(BPW)溶液。不要将PetrifilmEL测试片与Vermont培养基(UVM)、Fraser肉汤、李斯特菌增菌培养基(LEB)或缓冲李斯特菌增菌培养基(BLEB)共用。 6.混合,蠕动或旋转样品与BPW的混合液将近一分钟。将样品置于室温(20-30oC)1h,最久不超过1.5h,以修复损伤的李斯特菌。

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