产酸克雷伯氏菌

各有关单位及专家：根据广东省动物学会团体标准制修订计划安排，由华南农业大学负责起草的《产酸克雷伯杆菌 PCR 检测方法》和《奇异变形杆菌 PCR 检测方法》、由中山大学等担负负责起草的《鸡内金渣水产饲料添加剂原料》3项团体标准已完成了征求意见稿的编写。按照《广东省动物学会团体标准管理办法（试行）》相关规定，现印发给你们，请研究提出修改意见，并填写《广东省动物学会团体标准征求意见反馈表》，于2023年4月17日前通过邮件反馈至gdsdongwuxuehui@163.com。附件下载鸡内金渣水产饲料添加剂原料（征求意见稿）.pdf产酸克雷伯杆菌PCR检测方法（征求意见稿）.pdf奇异变形杆菌PCR检测方法（征求意见稿）.pdf广东省动物学会团体标准征求意见反馈表.doc

导读在新型冠状病毒感染咳嗽的诊断与治疗专家共识（2023，46）中针对咳黄脓痰或外周血白细胞增高提示可能存在细菌感染，在2021年发表的95例COVID-19患者合并细菌及真菌感染的临床分析中，结果表明，COVID-19危重型患者易合并鲍曼不动杆菌和肺炎克雷伯菌等细菌和真菌的感染，肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae)属于肠杆菌科克雷伯菌属，是一类重要的医源性感染革兰氏阴性条件致病菌，对多数抗菌药物易产生耐药性，占临床分离菌的13%，成为仅次于大肠埃希菌 (19%)的院内感染第二大致病菌。上海交通大学生命科学技术学院微生物代谢国重实验室科学家基于naica® 微滴芯片数字PCR系统建立了肺炎克雷伯菌的数字PCR检测方法。数字PCR检测灵敏度最低检出限可达到3.37copies/μL；方法的相对标准偏差(relative standard deviation，RSD)均小于25%；本研究利用优化后的数字PCR方法共检测了28 株临床菌株，检测到14株为肺炎克雷伯菌，14株为其他种属，该方法特异性好、灵敏度高、准确度高，适合肺炎克雷伯菌的核酸检测和定量分析，也为其他临床病原菌的分子检测提供了新的技术参考。应用亮点：▶ 数字PCR (digital PCR，dPCR)作为第3代 PCR技术，具有简便快速、灵敏度高、精确度高的特点，可检出微量的细菌核酸分子。▶ 与传统的qPCR 相比，dPCR不受扩增效率的影响，无需依赖扩增曲线、无需标准曲线即可进行绝对定量，同时对低浓度的核酸定量更加准确可靠。实验结果：１、通过数字PCR的检测范围和灵敏性实验得到，cdPCR样品后续可在S5&minus S9样本检测范围内进行。▲图１.数字PCR对不同稀释度标准品灵敏度测试结果。蓝色：阳性微滴；灰色：阴性微滴；NTC：阴性对照２、数字PCR与荧光定量PCR的检出范围和灵敏性实验，得到cdPCR对低浓度样品的检测更准确。此外，cdPCR的最低检出限(3.37copies/μL)，较qPCR (194.9 copies/μL) 有更高的检测灵敏度。▲图2: pUC57-16S的数字PCR (A)和荧光定量PCR (B)的标准曲线图 2B不同稀释倍数标准品检测的Ct值：S1：9.84；S2：12.89；S3：16.21；S4：19.74；S5：22.34；S6：25.69；S7：28.11；S8：32.56；S9：35.42３、同时对3株肺炎克雷伯菌和4株其他菌株进行特异性评估验证，cdPCR方法对肺炎克雷伯菌的特异性检测有效。4、利用cdPCR对28株临床菌株进行检测，有14株菌为肺炎克雷伯菌，14株为其他菌株，说明cdPCR具有临床菌株检测应用潜力。综上所述，本研究建立了检测肺炎克雷伯菌的数字PCR方法。与qPCR技术相比，cdPCR可以精准地对核酸进行绝对定量分析，检测下限低至单拷贝，不依赖于标准曲线， 具有较好的数据重现性，在稀有样品或痕量样品的检测方面具有独特的优势。因此，该方法为提高肺炎克雷伯菌的早期核酸检测提供了新方法，也为核酸绝对定量提供了新的数据支持。同时naica® 六通道数字PCR系统为新冠病毒合并细菌感染的多重检测提供可能。naica® 六通道数字PCR系统法国Stilla Technologies公司naica® 六通道数字PCR系统，源于Crystal微滴芯片式数字PCR技术，自动化微滴生成和扩增，每个样本孔可实现6荧光通道的检测，智能化识别微滴并进行质控，3小时内即可获得至少6个靶标基因的绝对拷贝数浓度。

(一) 　　洋奶商“梦”断复验路 　　案件回放： 　　2009年10月22日，厦门检验检疫局签出一份《卫生复验证书》，确认3批15120袋脱脂乳粉复验结果与原检测结果相一致，超出我国标准限量(2mg/kg)的4-5倍，属不合格产品。 　　这是2009年我国检验检疫部门发现的最大的一宗进口不合格奶粉案，也是厦门局近10年来首次受理的复验案。所涉及的3批奶粉系美国一家乳制品企业生产，于当年六七月间分批自厦门东渡口岸进口，共计378吨，货值74.84万美元。经抽样检验均检出亚硝酸盐含量超标，检验检疫部门依照国家相关规定发出了退运处理通知单。 　　但是，美方对检测结果提出异议，并以其产品是在美国检测合格后才出口等理由，委托上海一律师事务所申请复验。厦门检验检疫局果敢应战，专门成立经申请人确认同意的复验工作组，随之制定科学的复验抽样方案，在申请方陪同下，按照不同生产日期分别取样、检测。在严谨的检测报告面前，申请人不得不认同复检结果，21柜不合格货物被依法退出国门。 　　专家解读： 　　亚硝酸盐是一种食品添加剂，在食品生产中用做发色剂和防腐剂。在部分食品生产加工过程，也会产生亚硝酸盐。人体一旦摄入0.3-0.5克即可引起中毒，摄入1-3克则可致死，中毒轻者表现为头痛、头晕、乏力、恶心、呕吐、胸闷、口唇、耳廓、指甲轻度紫绀 重者眼结膜、面部及全身皮肤紫绀，心律加快、呼吸困难 严重者昏迷、大小便失禁，并导致呼吸衰竭而死亡。控制在安全范围内使用的亚硝酸盐不对人体造成危害。对此我国有相应的使用范围和限量标准，要求乳粉不得添加亚硝酸盐。乳粉中的亚硝酸盐的主要来源除了原料乳中人为掺假外，也与牛饲料密切相关。我国卫生标准规定，每千克乳粉中的亚硝酸盐含量不得超过2毫克。受三鹿事件影响，奶粉卫生质量安全问题极其敏感，洋奶粉加速进军中国市场，各地检验检疫部门严阵以待，按照国家卫生标准认真施检，乳及乳制品检验监管措施得以有效落实，捍卫了奶粉质量安全关。 　　(二) 　　阿根廷酒惊现“蓝”毒 　　案件回放： 　　2009年11月2日，厦门检验检疫局对海沧口岸进口的一批336000毫升阿根廷配制酒(蓝色库拉索酒)依法抽样送检，结果发现含有我国食品禁用色素“专利蓝5号”。该局依法实施退运处理。国家质检总局为此发布警示通报，要求全国各口岸加强“专利蓝5号”检测。 　　专家解读： 　　“专利蓝5号”是一种深蓝紫色粉末或颗粒，溶于水，难溶于乙醇。它可能会引起过敏反应、有瘙痒和荨麻疹的恶心、低血压、过敏性休克等症状。作为人工合成着色剂(或者色素)，世界各国均有严格的限用标准(部分国家和地区虽准许在部分食品中添加、但设限极严)。其中，中国、美国、日本等多数国家至今未批准其使用。厦门检验检疫局技术中心具备很强的酒类检测能力，为进口质量把关提供了重要技术保障，2009年以来在进口酒中先后检出金箔、铁等重金属以及偶氮玉红等禁用色素。在上述阿根廷配制酒事件中，该中心成功开发出的“高压液相色谱测定及LC/MS/MS确证法”，对“专利蓝5号”实现了定性检测，填补了国内空白。 　　(三) 　　地毯式清剿致癌“绿”药 　　案件回放： 　　2009年6-7月，厦门检验检疫局连续从4批进口台湾水产品中检出违禁药物――孔雀石绿，涉及冷藏鲈鱼、冷藏午仔鱼及冷冻福鲳，共3000公斤，2100美元，均为台湾养殖类水产品。进口商擅自销售货物被课以重罚，并在检验检疫部门督促下采取召回行动，库存及召回产品被实施严格除害销毁处理。厦门局为此先后发出2份警示通报，并展开地毯式清剿行动：对来自台湾的相关水产品实施连续90天的100%检测把关，对上述不合格货物的相关收货人及发货人进口的所有水产品、实施连续90天的100%检测，对不同发货人的不同品种实施最初3个报检批逐批抽检，启动进口水产品备案管理。 　　专家解读： 　　“孔雀石绿”鱼吃治病、人吃致癌，是种有毒的三苯甲烷类化学物，带有金属光泽的绿色结晶体。既是杀真菌剂，又是染料，易溶于水。具有高毒素、高残留和致癌、致畸、致突变等副作用。许多国家和地区都列为水产养殖禁用药物。大陆于2002年5月将孔雀石绿列入《食品动物禁用的兽药及其化合物清单》中，禁用于所有食品动物。如何肉眼辨别“孔雀石绿”鱼?一是看鱼鳞的创伤是否着色。受创伤的鱼经过浓度大的“孔雀石绿”溶液浸泡后，表面发绿，严重的呈现青草绿色。二是看鱼的鳍条。正常情况下，鱼的鳍条应是白色，而“孔雀石绿”溶液浸泡后的鱼，鳍条易着色。三是若发现通体色泽发亮的鱼应警惕。 　　(四) 　　两致病菌共侵一燕窝 　　案件回放： 　　2009年12月3日，厦门检验检疫局技术中心从一批1000克进口燕窝中检出致病菌沙门氏菌和金黄色葡萄球菌，这也是该局首次从一盏燕窝中同时检出两种致病菌。这批燕窝价值6万多元，由一家知名燕窝进口商自马来西亚空运入境。厦门机场检验检疫局对货物依法实施退运处理。 　　沙门氏菌病是公共卫生学上具有重要意义的人畜共患病之一，人畜感染后可呈无症状带菌状态，也可表现为有临床症状的疾病，它可能加重病态或死亡率，或者降低动物的繁殖生产力。金黄色葡萄球菌是人类化脓感染中最常见的病原菌，可引起局部化脓感染，也可引起肺炎、伪膜性肠炎、心包炎等，甚至败血症、脓毒症等全身感染。 　　燕窝含有丰富的活性醣蛋白、钙、铁、磷、碘及维他命等多种天然营养素和矿物质，不寒不燥，易被人体吸收，男女老少咸宜，市场需求旺盛。越来越多的内地商家瞄准正规进口渠道。2007年厦门口岸进口燕窝实现零的突破，2008年我国对马来西亚燕窝解禁后厦门进口持续增长。2009年，厦门进口燕窝57批、86件、790千克，价值72万美元，涨幅达612.5%、352.6%、356.6%和179.6%。然而进口燕窝不合格问题十分突出。2009年被检出不合格的123批厦门进口食品中，燕窝占8批，共91千克8万余美元，约占总批量的7%，主要表现为包装未注明生产日期和保质期、标签不合格、检出致病菌等。 　　专家解读： 　　近年来，检验检疫部门加大对携带和邮寄入境禽鸟类制品查验，严防东南亚禽流感疫区燕窝非法入境。2008-2009年度厦门检验检疫局累计截获违禁携带入境燕窝1431批1.33吨，总价值约达3800多万元，累计截获各类违禁邮寄入境燕窝67批113.9公斤，总价值约达340万元。厦门检验检疫局提醒商家注意，进口燕窝务必办理相关的检疫审批手续。与此同时，应要求生产商在包装上标识产品的详细信息，如：品名、配料、产地、规格、生产日期、保质期等，并且注意在合同中签订有关卫生项目质量索赔条款，以免引起不必要的损失。 　　(五) 　　50万粒奶粉片粘上“败血”菌 　　案件回放： 　　2009年5月26日，一批50.7多万粒进口奶粉片，被厦门机场检验检疫局依法做出退运处理决定。经该局抽样送技术中心实验室检测，这批奶粉片被检出产酸克雷伯氏菌。产酸克雷伯氏菌可能引起败血症、腹泻等疾病。这批货物由深圳一家商贸公司组织自新西兰空运进口，共计506.86千克，拟供儿童食用，如流入市场，后果不堪设想。 　　专家解读： 　　克雷伯氏菌属(Klebsiella)是人类呼吸道的常居菌群，在人类及动物肠道更为常见，是常见的条件致病菌。其中，产酸克雷伯氏菌属于肠杆菌科克雷伯氏菌的一个属种，是抗生素相关性出血性结肠炎的一种病原体，生物学特征不同于其它克雷伯氏菌种，其致病性与肺炎克雷伯氏菌没有差别，可引起输液性败血症。其菌株还可导致人体腹泻。我国食品安全法明确规定：禁止经营含有致病性寄生虫、微生物的，或者微生物毒素含量超过国家限定标准的食品。 　　(六) 　　20吨东瀛蒜香失色大霉变 　　案件回放： 　　2009年9月15日，厦门检验检疫局东渡办事处施检人员在现场查验发现，一批1个货柜的日本进口鲜蒜头柜内，大量鲜蒜头已经霉变发黑，在高温条件下，靠近柜壁的纸箱，也基本上潮湿变形了。这批货物共计20吨，应货主申请，在东办监管下，在更换了潮湿破损的纸箱后被整柜退运出境。已更换下来的破损纸箱一律实施销毁处理。 　　专家解读： 　　霉菌是一种致病菌，它可导致食品腐败、变质。霉菌及其代谢产物(主要是霉菌毒素)在食品中残留可通过食物链而对人类健康构成潜在危害，霉菌毒素主要通过影响细胞和体液免疫功能来降低动物机体的抵抗力，这些毒性物质可引起严重疾病。根据分析，这批日本鲜蒜头的发霉原因，主要是运输过程采用普通货柜装船，未采取任何冷藏措施。新鲜农产品的水分含量普遍较高，特别适宜各种霉菌生长、繁殖，运输选择冷藏柜才能有效实现货物保鲜并防止腐烂变质。厦门检验检疫局提示相关进口商务必关注运输条件，为农产品多一点呵护，让自己少一点不必要的损失。 　　(七) 　　纤维性肠衣不“牢”靠 　　案件回放： 　　2009年5月27日，厦门东渡口岸依法退运一批不合格台湾进口纤维性肠衣，共计2箱42600克。经厦门检验检疫局取样送检，这批货物存在两大问题，包括：蒸发残渣(水浸泡液)达48mg/L，超出国家标准60% 并检出大肠菌群，不符合国家标准不得检出的要求。 　　专家解读： 　　纤维性肠衣是人工合成的肠衣，主要成分有纤维素、甘油和少量水份。纤维性肠衣具有牛、羊肠衣的透气性但不可食用，广泛应用于肉类加工业，用来包装香肠、灌肠等。水浸泡液蒸发残留物超标，意味着纤维性肠衣组成成分在使用中容易析出，检出大肠菌群提示该批纤维性肠衣受到污染，肠衣成分的析出和受污染可能影响所接触食品的品质和卫生，从而危害消费者健康。 　　(八) 　　进口素食首次无缘会展 　　案件回放： 　　2009年11月10日，厦门检验检疫局按规定现场封存一批台湾进口不合格素食，根据不同情况分别实施退运或销毁处理。这批素食拟入境参加第四届中国(厦门)国际素食展览(11月12-15日)，全部共93个品种5.49吨，其中约两成被检出不合格。 　　这也是该局发现的首例进口拟参展素食不合格事件。主要问题：一是微生物超标严重。部分即食食品菌落总数超标达10-400倍，大肠菌群超标2.3倍以上。二是包装标识不符合法规要求，存在生产日期超前和无标注生产日期等现象。三是含有卡德兰胶等大陆禁用食品添加剂。四是部分食品破损、污秽，污染同批产品。 　　专家解读： 　　厦门是海峡西岸最重要的会展口岸，会展业蓬勃发展。2009年涉及检验检疫的国际性会展就有13个之多。厦门检验检疫局率先全国出台入境会展物品检验检疫办法，明确涉展部门职责及会展的备案、展品入境前准备、报检、检验检疫、监督管理等规定，上述拟参展素食同批的合格货物，均在“同等优先、适当放宽”原则下通过检验检疫绿色通道享受便利通关服务并顺利参展。厦门检验检疫局同时提醒进口展商，应做好应检物入境前准备，预先做好应检物入境时间安排、及时报检，主动降低参展风险。 　　(九) 　　检疫犬首次截获神户牛肉 　　案件回放： 　　2009年12月8日，厦门机场检验检疫局检疫犬卡特在NH935航班的旅客携带物中，查获一批自疯牛病疫区日本非法入境的“神户牛肉”4800克。这也是首例由检疫犬截获的日本神户牛肉。涉案牛肉共计16片，检验检疫人员依法予以扣没销毁处理。 　　专家解读： 　　“神户牛肉”是日本神户地区特有的牛肉。据称，“神户牛”听着音乐成长，还经常享用啤酒，饲养成本高，售价高昂。目前在部分高档餐饮店，有店家打出招牌称，来自日本的神户牛肉、神户牛排、美国牛排，“品质优良”，每500克售价卖价高达上千元。不过，日本是疯牛病疫区国家，根据有关规定，中国大陆目前禁止日本牛肉进境。2007年以来厦门检疫犬截获物达5298批次，占总截获量42%，涉及非法进口奶酪、槟榔、冰鲜鱼及疫区牛、猪肉等食品。2009年11月10日，海峡邮轮中心、五通厦金客运码头和高崎机场新投入6只检疫犬，服役犬增至10只，将为减少行邮包开箱率和加速通关时效等发挥新作用。 　　(十) 　　印尼卷心酥微生物超标80倍 　　案件回放： 　　2009年4月24日，厦门口岸自印尼进口一批“卡布奇诺”味卷心酥，共计100箱420千克。厦门检验检疫局东渡办事处取样送检发现，其菌落总数超标25倍(大于50000cfu/g)、大肠菌群超标80倍(达2400MPN/100g),不符合我国有关饼干的卫生标准规定，依法作出退运处理。 　　专家解读： 　　食品中的微生物指标是食品清洁状态的重要标志，可用来预测食品可能的变化、分析食品腐败变质的原因，受微生物污染的食品可能引起急性或慢性中毒，对人体健康产生危害。食品中常见的细菌包括致病菌、非致病菌和条件致病菌。菌落总数、大肠菌群和致病菌等指标广泛应用于我国食品卫生标准。食品中微生物污染来源广，涉及原料、从业人员卫生习惯，产、储、运、销、烹调加工等过程均可能受污染。2009年以来，厦门口岸进口食品微生物超标呈现多发现象，共65批进口食品微生物超标，占不合格食品总批次的53%，主要涉及牛奶巧克力、冰淇淋、春卷、鱼丸、饼干、奶粉、果冻、糕点、果仁等小食品，问题以检出阪崎肠杆菌、金黄色葡萄球菌、肺炎克雷伯氏菌等致病菌，以及菌落总数、大肠菌群指标超标为主。厦门检验检疫局提示食品进口商注意加强对国外食品生产企业预先评估，应妥善选择质量管理规范的生产厂家，务必关注产、储、运、销等环节的卫生条件，避免外部污染。