环黄芪宁对照品

[color=#444444]黄芪有机氯类农残色谱法测定时最后一个对照品不出峰，ECD检测器，进样口温度230℃，检测器温度300℃，不分流，程序升温，初始温度100℃，10℃／min到220℃，8℃／min到250℃，保持10分钟。为什么最后一个pp'_DDT不出峰呢？请各位高手指教！[/color]

求助：最近一直咱纳闷，在做黄芪农残有机氯检测，用的是气相ECD检测器，柱子时DB-1701，进样口温度230℃，检测器温度为300℃，不分流进样。程序升温：初始100℃，每分钟10℃升至220℃，每分钟8℃升至250℃，保持10分钟。流速是1s/min,可是做出了九个对照品混合液中只出八个峰，有两个峰即PP'-DDD和PP'-DDT重合分不开，改变流量为2s/min也没见效果，另外进样品中也没见有相应的峰出现，但却在离目标峰不远处有个很大的峰，也是唯一一个峰，请问，大家遇到过此问题是怎么个处理的？

黄芪静脉输液中黄芪甲苷和黄芪多糖的含量测定摘要:建立黄芪静脉输液中黄芪甲苷和黄芪多糖的含量测定方法。方法：用高效液相色谱法测定黄芪甲苷的含量，用碘量法测定黄芪多糖的含量。结果：黄芪甲苷和黄芪多糖的平均回收率分别为9751％、9918％，相对标准差分别为248％、191％。结论：本文建立的方法准确可靠、灵敏度高、重现性好，可作为黄芪静脉输[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]液质[/color][/url]量控制的有效方法。关键词:黄芪甲苷；黄芪多糖；高效液相色谱法；碘量法； 英文摘要:ToestablishthemethodfordeterminationofastragalosideIVandastragaluspolysaccharidesinRadixAstragaliinjectionMETHODS：AstragalosidewasdeterminedbyHPLCandastragaluspolysaccharidesbyiodometryRESULTS：Therecoveriesofastragalosideandastragaluspolysaccharideswere9751％RSD=248％and9918％（RSD=191％）respectivelyCONCLUSION：Thismethodisaccurate，sensitiveandrepeatable，andcanbeusedforqualitycontrolofthepreparation英文关键词:astragaloside；astragaluspolysaccharide；HPLC；iodometry；contentdetermination黄芪为补气药，性甘温，归肺、脾经，具有补气固表、利尿托毒、排脓、敛疮生肌之功效。医疗实践证明，黄芪注射液对心气虚损、血脉瘀阻、病毒性心肌炎、心功能不全、脾虚困湿之肝炎有较好的疗效，也是肿瘤、免疫功能低下等较理想的辅助治疗药物。目前临床所使用的黄芪注射液为小容量针剂，需稀释后滴注，且不含黄芪多糖，所以疗效不够理想。为此，武警四川总队乐山医院和四川省乐山市三民药物研究所共同研制了含黄芪多糖、黄酮、苷类等有效成分的黄芪静脉输液。黄芪注射液的含量检测尽管WS3－β－3335－98执行标准仅要求采用薄层色谱法，但因高效液相色谱法操作更简便，精密度更高，故笔者参照文献以蒸发光散色高效液相色谱法[1]测定黄芪静脉输液中的黄芪甲苷含量；至于黄芪多糖含量的检测则选择采用碘量法。1仪器与试药11仪器美国奥泰公司高效液相色谱仪，包括蒸发光散射（ELSD）500检测器、Alltech426主机泵；电动离心机（江苏金坛公司）；TP－150超声波清洗机（北京天鹏公司）。12试药黄芪甲苷对照品（中国药品生物制品检定所，批号：0781－9908）；甲醇、乙醇、正丁醇、氢氧化钠、硫酸、葡萄糖均为分析纯；乙腈为色谱纯；水为重蒸馏水。2方法和结果21黄芪甲苷含量的测定211色谱条件：色谱柱为ODS柱（250mm×40mm），柱温为40℃，流动相为乙腈－水（36∶64），流速为06ml/min，进样量为20μl。212漂移管温度选择：根据ELDS检测使用手册推荐，设置气体流速为300slpm，漂移管温度为75℃，观察流动相（不进样）进入检测器的基线噪音，不断改变漂移管温度（步长为5℃），根据基线随温度的变化情况，选择95℃为试验最优温度。213载气流速选择：设定漂移管温度为95℃，取黄芪甲苷对照液恒量，得相应峰面积，不断改变气体流速（步长为025slpm）观察峰面积和基线的变化情况，最终选择270slpm为试验最优载气流速。214最低检测限试验：精密称取黄芪甲苷对照品适量，加甲醇溶解并稀释成浓度为1mg/ml的溶液作为贮备液，精密量取适量，逐步稀释测定，直到黄芪甲苷主峰信号为检测器噪声水平的3倍为止。得黄芪甲苷最低检测限为153ng。215线性试验：取“214”项黄芪甲苷对照品贮备液适量，精密量取10、20、30、40、50、60分别置于10ml容量瓶中，加甲醇稀释至刻度（约相当于黄芪甲苷01、02、03、04、05、06mg）。以对照品峰面积的常用对数值为横坐标（X），以进样量的常用对数值（Y）为纵坐标进行线性回归，得回归方程为Y=06001X—34896（r=09991），黄芪甲苷进样量在20μg～120μg范围内线性关系良好。216精密度试验：精密称取黄芪甲苷对照品适量，加甲醇溶解并稀释至浓度为025mg/ml的溶液作为对照溶液，注入液相色谱仪，连续重复进样6次，测得黄芪甲苷的相对标准差为179％，精密度符合规定。217重现性试验：精密量取黄芪注射液适量（相当于黄芪甲苷约20mg）5份，按“2110”项下方法制备，测定黄芪甲苷含量。结果黄芪注射液中黄芪甲苷为2390mg，RSD=201％，表明方法重现性良好。218稳定性试验：取“217”项下样品溶液，分别于0、1、2、3、5、8h取样测定峰面积，结果RSD=107％，表明黄芪甲苷溶液在8h内基本稳定。219回收率试验：分别精密量取黄芪注射液适量（约相当于黄芪甲苷10、12、14mg）共3份，每份各精密加入对照溶液（0404mg/ml）25、30、35ml，按“2110”项下方法制备，测定黄芪甲苷含量，结果详见表1。由表1可见，平均回收率为9751％，RSD=248％，符合规定，说明方法具有可行性。2110样品中黄芪甲苷的含量测定：精密量取黄芪注射液100ml，置于烧杯中浓缩至10ml，加无水乙醇40ml沉淀，放置20min，离心，沉淀用80％的乙醇溶液洗涤2次，每次10ml，合并离心液与洗涤液，置水浴上蒸干。残渣加1％NaOH溶液10ml溶解，用饱和的正丁醇水溶液提取3次，每次20ml，合并正丁醇的水溶液，蒸干，残渣再加1％NaOH溶液5ml溶解，通过已处理的D101大孔吸附树脂柱（Φ15×20cm，内装树脂高约10cm）吸附，以1％NaOH溶液50ml洗脱，弃去，用蒸馏水洗至中性，再用30％乙醇溶液50ml洗脱，弃去洗脱液，继续用70％乙醇液50ml洗脱，收集洗脱液并蒸干，残渣加甲醇溶解并定容至10ml，得供试品溶液。精密称取黄芪甲苷对照品适量，加甲醇溶解并稀释成浓度为01、03mg/ml的溶液作为对照溶液。分别精密量取上述溶液各20μl注入液相色谱仪，记录色谱图，并以峰面积和进样量的对数值按二点法计算，详见图1；3批样品按上述方法制备测定，结果详见表2。22黄芪多糖含量的测定[2，3]221线性试验：精密称取105℃干燥至恒重的葡萄糖适量，加水溶解并稀释成浓度为10mg/ml的标准溶液，分别精密量取此标准溶液100、90、80、70、60ml，置于250ml碘量瓶中，分别加水0、10、20、30、40ml，然后精密加入01mol/L碘滴定液25ml，在不断振摇的情况下缓缓滴加01mol/LNaOH40ml，密塞，在暗处放置10min，然后加入05mol/LH2SO4液6ml，摇匀，立即用01mol/LNa2S2O3滴定液滴定，近终点时，加淀粉指示液2ml，继续滴定至蓝色消失，并同时作空白试验校正。以取样量（X）与Na2S2O3的消耗量（Y）进行线性回归，得回归方程为Y=009766X—000244，（r=09999），表明葡萄糖在60mg～100mg的范围内线性关系良好。222重现性试验：精密量取黄芪注射液100ml,按“224”项下方法制备5份，测定黄芪多糖含量，结果为10423mg，RSD=099％，表明方法重现性良好。223回收率试验：分别精密量取黄芪注射液（多糖含量为10423mg/100ml）120、150、180ml，每份各加入葡萄糖标准液（25002mg/ml）50、60、70ml制成80％、100％、120％浓度的溶液。分别浓缩至10ml，加无水乙醇40ml，放置20min，离心。沉淀用80％乙醇洗涤2次，每次10ml，弃去离心液与洗涤液，沉淀加热蒸馏水10ml溶解，并转移至25ml容量瓶中，定容，摇匀。分别精密量取3种不同浓度的溶液80、70、60ml置于250ml碘量瓶中，分别精密加水2、3、4ml，按“224”项方法测定，每个浓度测定3次，共9次，计算得到回收率为9918％，RSD=191％，详见表3。224样品中黄芪多糖的含量测定：精密量取黄芪注射液100ml，浓缩至10ml，加无水乙醇40ml，放置20min，离心。沉淀用80％乙醇洗涤2次，每次10ml，加热蒸馏水3ml使沉淀溶解并定容至10ml，摇匀。移置于250ml碘量瓶中，加入1mol/LH2SO420ml，置于水浴中水解2h，取出，放冷，加入2mol/LNaOH溶液调节pH值=7，冷却至室温。精密加入碘滴定液（01mol/L）25ml，在不断振摇的情况下缓缓滴加01mol/LNaOH40ml，密塞，置暗处放置10min。然后加入05mol/LH2SO46ml，摇匀，立即用Na2S2O3滴定液（01mol/L）滴定，至近终点时，加淀粉指示液2ml，继续滴定至蓝色消失，并同时作空白试验校正，计算即得（每1ml上述碘滴定液相当于9008mg的C6H12O6）。3批黄芪注射液样品，按上述方法测定多糖含量均符合规定，结果详见表4。3讨论测定黄芪甲苷含量时，如将精密量取的黄芪注射液浓缩后仅采用正丁醇的水饱合液提取制得供试品溶液，则所得的样品杂质峰多，基线略有漂移，因此不宜采用。黄芪多糖主要为葡萄糖，因此，可采用以葡萄糖或葡聚糖作对照品的苯酚－浓硫酸法[4]、蒽酮－浓硫酸法[5]或水解后用碘量法等测定其含量，但一般多采用后两种方法。采用蒽酮－浓硫酸法时，由于其线性试验回归方程为C=98481A＋08314（r=09663），浓度线性范围为35～165μg/ml，线性关系不好，故不宜采用。