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求购头孢地尼E-异构体对照品头孢地尼做分析方法验证,其中有关物质头孢地尼E-异构体标准品买不到。很多销售公司都有但是资质不全我不能买他们的。请教各位大侠们,帮个忙吧。急用!!谢谢!!!!
有关物质检查方法参照USP-34:有关物质 取装量差异项下的细粉适量(相当于头孢地尼75mg),置50ml量瓶中,加0.1mol/L磷酸缓冲液30ml溶解,并用0.1%四甲基氢氧化铵溶液稀释至刻度,制成每1ml约含头孢地尼1.5mg的溶液,滤过,取续滤液作为供试品溶液。精密称取头孢地尼对照品适量,加0.1mol/L磷酸缓冲液溶解并定量稀释制成每1ml中约含头孢地尼0.75mg的溶液,精密量取适量,加0.1%四甲基氢氧化铵溶液并定量稀释至每1ml约含头孢地尼15μg的对照品溶液。照高效液相色谱法(中国药典2010版二部附录V D)测定,用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(粒径:5um,规格:4.6mm×250mm);流动相A为0.1%四甲基氢氧化铵溶液(用磷酸调节pH值至5.5)1000ml,加入0.1mol/L乙二胺四醋酸二钠溶液0.4ml,流动相B为0.1%四甲基氢氧化铵溶液(用磷酸调节pH值至5.5)-乙腈-甲醇(500:300:200),加入0.1mol/L乙二胺四醋酸二钠溶液0.4ml;按表Ⅰ进行线性梯度洗脱。柱温为40℃,检测波长为254nm。精密称取头孢地尼对照品约37.5mg,置25ml量瓶中,加0.1mol/L磷酸缓冲液10ml溶解,并加入头孢地尼杂质A对照品溶液(取头孢地尼杂质A对照品适量,加0.1%四甲基氢氧化铵溶液溶解并稀释制成每1ml含0.04mg的溶液)5.0ml、头孢地尼杂质B对照品溶液(取头孢地尼杂质B对照品适量,加0.1%四甲基氢氧化铵溶液溶解并稀释制成每1ml含0.04mg的溶液)5.0ml,用0.1%四甲基氢氧化铵溶液稀释至刻度,摇匀,作为系统适应性溶液,取10μl注入液相色谱仪,记录色谱图;头孢地尼峰保留时间约为20分钟,头孢地尼杂质A有四个峰,相对头孢地尼主峰保留时间分别约为0.85、0.94、1.11和1.14;头孢地尼杂质B峰相对头孢地尼主峰保留时间约为1.28;头孢地尼峰与头孢地尼杂质A第三个峰之间的分离度应不小于1.5;头孢地尼杂质B峰的拖尾因子不大于1.5。取对照品溶液10μl注入液相色谱仪,调节检测灵敏度,使主成分色谱峰的峰高约为满量程的20%,精密量取对照品溶液和供试品溶液各10μl,注入液相色谱仪中,记录色谱图。供试品溶液色谱图中如有杂质峰,均采用以下公式按外标法以峰面积计算,杂质的限度见表Ⅱ。(供试品溶液中任何小于头孢地尼对照品溶液主峰面积0.05倍的峰可忽略不计)。表Ⅰ时间(分钟)流动相A(%)流动相B(%)095529552275253250503750503895548955杂质的含量采用以下公式计算:(rU/rS)×(Cs/CU)×(100/F)Cs为头孢地尼对照品溶液中头孢地尼的浓度(mg/ml);CU为供试溶液中头孢地尼的浓度(mg/ml);rU为供试溶液中杂质峰面积;rS为头孢地尼对照品溶液中头孢地尼峰面积;F为表Ⅱ中各杂质的相对响应因子;表Ⅱ 有关物质相对保留时间相对响应因子限值(%)杂质Ⅷ[/siz
本数据依据2015年版《中国药典》二部头孢地尼项下方法,对头孢地尼原料药进行分析。客户反映主峰前后杂质与主峰分离度较难达到药典标准,需求合适C18柱进行分析以达到药典分离要求;因此分别尝试使用资生堂CAPCELL PAK MGII,SUPERIOREX ODS, AQ, BB等C18色谱柱对客户所提供样品进行分析,最终发现高极性的C18 AQ柱分析结果最佳,如图1。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2016/10/201610250907_615006_2222981_3.jpg头孢地尼主峰保留时间为20.73min,同药典头孢地尼系统适用性溶液的典型色谱图基本相符(如附图 I);药典要求头孢地尼峰与杂质J峰之间分离度不小于1.2,杂质I峰与杂质J峰、头孢地尼峰与杂质K峰及杂质K峰与杂质L峰之间分离度应符合要求,此时头孢地尼峰与杂质J峰分离度为1.21,杂质I峰与杂质J峰分离度为2.19,头孢地尼峰与杂质K峰分离度为2.77,杂质K峰与杂质L峰分离度为1.70,均符合药典规定。 药典要求使头孢地尼保留时间约为22min,因此进一步降低流速进行分析,结果如图2。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2016/10/201610250909_615008_2222981_3.jpghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2016/10/201610250907_615005_2222981_3.jpg此时头孢地尼主峰保留时间为22.18min,符合药典要求;头孢地尼峰与杂质J峰分离度为1.23,杂质I峰与杂质J峰分离度为2.35,头孢地尼峰与杂质K峰分离度为2.68,杂质K峰与杂质L峰分离度为1.84,均符合药典规定。在该分析条件下对按药典方法配制的供试品溶液进行分析,分析结果如图3。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2016/10/201610250907_615007_2222981_3.jpg对供试品分析的结果中,我们发现AQ柱能够使供试品中各杂质均能够得到良好的基线分离。当然,为了有更多的色谱柱选择,在同样的分析条件进一步尝试使用中等极性的MGII柱、高碳载量的SUPERIOREX ODS、强耐碱性的BB柱分别对系统适用性溶液进行分析,但头孢地尼峰与其前杂质J峰的分离度分别为0.95,1.02,0.66,均未能符合药典分离要求。