亚麻木酚素对照品

[align=center][b]亚麻荠种子总多酚含量测定[/b][/align][b]摘要：[/b]亚麻荠是一种环保型油料作物，有很长时间的种植历史，富含人体必需脂肪酸和多种天然活性成分。总多酚不是一种单一的物质，它主要包括黄酮类、单宁类、酚酸类和花色苷等，具有抗氧化、抗衰老、预防癌症等多种生物活性，被誉为“第七类营养素”。经实验发现，亚麻荠种子中含有多酚，为了把其价值最大化，更好地运用到食品、医药、保健品、化妆品等行业当中去，本实验通过对亚麻荠种子总多酚提取条件的比较，筛选出料液比、丙酮体积分数、提取温度和提取时间的最适宜水平，在最适宜水平条件下测定出甘肃、青海、汤阴三个不同产地的亚麻荠种子中的总多酚含量。[b]关键词：[/b]亚麻荠种子；总多酚；含量测定；[b]Abstract: [/b]As an environmentally friendly oilseed crop, camelina has a long history of cultivation and is rich in essential fatty acids and many natural active ingredients. Total polyphenols are not a single substance, and they mainly include flavonoids, tannins, phenolic acids and anthocyanins, etc. They have many biological activities such as antioxidant, anti-aging and cancer prevention, and are praised as "the seventh nutrient". Experiments found that camelina seeds contain polyphenols, in order to maximize its value, to better applied to food, medicine, health products, cosmetics and other industries, the experiment of camelina seeds the comparison of total polyphenol extraction conditions, select material liquid ratio, acetone volume fraction, extraction temperature and extraction time, the most suitable level, under the condition of optimum levels determine the Gansu, Qinghai, Tangyin provinces’ camelina seeds from different regions of three total polyphenol content.[b]Keywords: [/b]Camelina seedsTotal polyphenols Content determination 亚麻荠（Camelina sativa（L.）Crantz）属于十字花科，亚麻荠属一年生草本植物，现在我国东北地区有分布。其种植历史悠久，在青铜器时代就有被种植的痕迹。但尽管气候条件很适宜种植亚麻荠，中世纪以后，也并未在欧洲发现亚麻荠的大面积种植，其原因一直不得而知。到了20世纪50年代，由于油菜的传入与推广，再加上亚麻荠油的氢化作用困难，加工成本较高，导致亚麻荠的种植规模又逐渐减小。近些年来，随着对亚麻荠产品利用的深入研究发现，亚麻荠具有其独特的栽培特性、食用价值和工业价值，人们开始逐渐重视对亚麻荠的开发利用。亚麻荠是一种高油料作物，能利用的部分主要是种子（果实），含油量38%~43%，主要用来榨油。亚麻荠油富含人体必需脂肪酸和多种天然活性成分，甾醇、多酚和生育酚等多种脂质活性成分，能增加油脂的稳定性和亚麻荠油的生物活性，还能帮助人们提高免疫力，预防老年痴呆和癌症等多种疾病的发生。 此外，亚麻荠种子还是油粮、饲料、食品、医药、保健品、化妆品等行业产品的原料。总多酚是一类化学物质的总称，它的主要活性成分是含有多个酚性羟基结构的次生代谢物，即多酚类化合物，主要包括黄酮类、单宁类、酚酸类以及花色苷类，广泛分布于植物根、枝、叶、果实，具有抑菌、抗癌、抗氧化等多种生物活性，被誉为“第七类营养素”。经实验发现，亚麻荠种子中含有多酚[sup][/sup]，但目前关于亚麻荠的研究有很多，关于多分的研究也数不胜数，但关于亚麻荠种子中多酚含量测定及抗氧化方面尚且未见相关报道。除榨油外，亚麻荠的其他价值并未得到很好的开发利用。所以，本实验通过研究亚麻荠种子中总多酚含量及抗氧化活性，以便为将来更好地开发利用亚麻荠这一优良作物奠定基础。[b][b]1 材料与设备1.1材料[/b]亚麻荠种子：(青海、汤阴、甘肃)；没食子酸、福林-酚；丙酮、无水乙醇、无水碳酸钠：均为国产分析纯；纯净水：娃哈哈纯净水。[b]1.2 仪器与设备[/b][/b]111型二两装高速中药粉碎机；ME204型电子天平；TU-1810型紫外分光光度计；N-1100S-W型旋转蒸发仪；SB-1100型水浴锅；KQ-250DB数控超声波清洗器；L420台式低速离心机DZKW-S-6型电热恒温水浴锅；[b][b]2试验方法2.1亚麻荠种子的预处理 [/b][/b] 将亚麻荠种子充分干燥，去除杂质，用粉碎机粉碎，装密封袋备用。[b][b]2.2标准品溶液的制备 [/b][/b] 精密称取没食子酸对照品适量，加蒸馏水制成57.66 μg/ml对照品溶液。[b][b]2.3亚麻荠种子样品溶液的制备[/b][/b] 精密称取亚麻荠种子样品2g，精密加入75%丙酮溶液30ml于具塞锥形瓶，密塞，称重，60℃超声提取3h，冷却，补重，摇匀，滤过，即得。[b][b]2.4确定检测波长的方法 [/b][/b] 分别精密吸取亚麻荠种子样品溶液1.5mL和对照品溶液1.5mL于25mL容量瓶中，加入1.0mL福林酚试剂，摇匀，加入10%碳酸钠溶液2mL，用蒸馏水定容至刻度，充分摇匀后置于25℃的恒温水浴锅中避光反应30min，冷却至室温，以相应的提取溶剂为空白，在400~850nm下扫描，记录紫外光普图，确定最佳吸收波长。[b][b]2.5单因素试验 [/b][/b] 本实验选取料液比，丙酮体积分数，提取温度，提取时间四个因素来研究对亚麻荠种子中总多酚含量的影响，并确定各个因素适宜的水平。在考虑各因素不同水平的变化时，都以料液比1:15，丙酮质量分数70%，提取温度60℃，提取时间1.5h为不变条件，作参照。单因素实验表如表1所示。[align=center][img=,639,277]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/09/201909101736212274_7213_1858223_3.jpg!w639x277.jpg[/img][/align][b][b]3 结果与讨论3.1最佳检测波长的确定[/b][/b] 由2.4的设计，结果显示，亚麻荠种子多酚提取液和没食子酸标准品溶液均在760nm处有最大吸收，所以得出检测波长为760nm。[b][b]3.2单因素试验结果3.2.1不同料液比对总多酚提取得率的影响[/b][/b] 从亚麻荠种子中提取多酚时，料液比不同，所得到的总多酚含量也有差异。由图1可以看出，在料液比为1：15和1：20时得到最高的多酚含量，但考虑经济价值，选取1:15为最佳料液比。当料液比超过1:20后，多酚含量开始逐渐下降。在超声提取时，传质动力会随着溶剂量的增大而增大，在一定范围内，当丙酮体积分数增大时，传质动力也增大，多酚类化合物能够更好地溶解在丙酮溶剂中，得到的多酚含量不断增加；但到达一定程度后，随着溶剂量的增大，由于产生的热量相同，提取温度相对较低，固液两相存在吸附平衡，从而使得多酚提取得率变低。[align=center][img=,501,300]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/09/201909101737144424_9357_1858223_3.jpg!w501x300.jpg[/img] [/align][align=center]图1 不同料液比对总多酚提取率的影响[/align][b][b]3.2.2 不同丙酮体积分数对总多酚提取得率的影响[/b][/b] 不同浓度的丙酮溶液对亚麻荠种子的多酚提取得率有不同的影响。在一定范围内，丙酮体积分数增大，得到的多酚含量也随之增大，在丙酮体积分数为75%时，多酚含量达到最大值；丙酮体积分数继续增大，多酚含量开始下降。[align=center][img=,494,299]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/09/201909101737308326_4393_1858223_3.jpg!w494x299.jpg[/img] [/align][align=center]图2 不同丙酮体积分数对总多酚提取率的影响[/align][b][b]3.2.3不同提取温度对总多酚提取得率的影响[/b][/b] 不同的提取温度对亚麻荠种子的多酚提取得率有不同的影响。由图3可以得知，在一定范围内，多酚含量随着提取温度的增加而增加，当温度为60℃时多酚含量达到最高峰值；此后当温度继续增加，多酚含量开始逐渐下降，在70℃时达到最低值，此后又开始上升，但并未达到最高值。随着提取温度的升高，多酚能够很好地溶解在丙酮溶液中，但温度过高则会破坏多酚类物质的结构，造成总多酚含量的损失，因此60℃为最佳提取温度。[align=center][img=,514,312]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/09/201909101738159551_4103_1858223_3.jpg!w514x312.jpg[/img] [/align][align=center]图3 不同提取温度对总多酚含量的影响[/align][b][b]3.2.4 不同提取时间对总多酚提取得率的影响 [/b][/b] 由图4可以得知，不同的提取时间，亚麻荠种子的总多酚提取得率不全相同。随着提取时间的增加，总多酚含量也在增加，从1.5h增加到2h，总多酚含量增长明显；从2h增加到3h时，总多酚含量也呈现增加趋势，在3h时达到最高峰值；但当提取时间延长至4h时，总多酚含量开始下降，与2h时含量相等，分析可能是由于随着提取时间的增长，提取出的多酚被氧化造成总含量下降。[align=center][img=,494,301]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/09/201909101739317344_4177_1858223_3.jpg!w494x301.jpg[/img][/align][align=center]图4 不同提取时间对总多酚提取得率的影响[/align][b][b]3.3总多酚含量测定结果3.3.1 标准曲线的建立及样品的测定[/b][/b] 精密称取没食子酸对照品5.766mg ，加甲醇溶解并定容至100ml，得到质量浓度为57.66μg/ml的没食子酸标准液。分别吸取标准液0.3、0.5、1.0、1.5、2.0mL置于10mL棕色容量瓶中，定容至刻度。从上述各量瓶中分别吸取1.5mL不同浓度标准液于25ml容量瓶中，加入1.0ml福林-酚试剂，摇匀静置30s，加入10%碳酸钠溶液1.0ml，用水定容，25℃水浴30min（避光），于760nm下测定吸光度。以没食子酸标准液的浓度为横坐标，吸光度为纵坐标作图，结果如图5所示。线性关系为 y = 0.0663x + 0.0100，R2 = 0.9997，线性良好。其中，y为标准品的吸光度，x为没食子酸标准液浓度，单位为ug/ml。在测定样品中总多酚含量时，在相同的反应条件下测定样品的吸光度，通过公式算出样品溶液中多酚的浓度，再换算出样品的最终含量。公式为：[align=center][img=,201,56]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/09/201909101745019767_2542_1858223_3.jpg!w201x56.jpg[/img][/align]其中M为总多酚含量，单位是mg/g；V为定容体积，单位是ml；N为稀释倍数；m为称取亚麻荠样品重量，单位为g，y为样品溶液的吸光度。[align=center][img=,485,297]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/09/201909101740167674_8180_1858223_3.jpg!w485x297.jpg[/img][/align][align=center]图5 亚麻荠种子总多酚含量测定的标准曲线[/align][b][b]3.3.2含量测定结果[/b][/b]在单因素实验得出最佳提取工艺条件后，对不同产地的三组样品进行3次重复实验，总多酚提取得率如表3，青海产地的亚麻荠种子中总多酚含量为2.05mg/g，汤阴产地的亚麻荠种子中总多酚含量为1.86mg/g，甘肃产地的亚麻荠种子中总多酚含量为2.66mg/g。因此，通过单因素试实验得到的最佳提取工艺条件比较稳定，具有良好的可重复操作性。[align=center]表2 总多酚含量测定结果[/align][align=center][img=,589,155]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/09/201909101741237654_3695_1858223_3.jpg!w589x155.jpg[/img][/align][b]4. 结论[/b] 本实验研究结果表明，考察不同因素，最后选择75%丙酮，60℃超声3h为最佳条件，甘肃产地的亚麻荠种子的总多酚含量最高，达2.66mg/g；青海产地的亚麻荠种子的总多酚含量次之，为2.05mg/g；汤阴产地的亚麻荠种子的总多酚含量在三者之中最低，仅有1.86mg/g。但总体来说，这三个产地的亚麻荠多酚含量都比较高。[b]参考文献[/b]邓曙东,张青文. 亚麻荠种植和利用的研究现状. 植物学通报,2004,(03):376-382.邓乾春,黄凤洪,黄庆德,谢笔钧,钮琰星,万楚筠,刘昌盛.一种高利用价值油料作物-亚麻荠的研究进展.中国油料作物学报,2009,31(04):551-559.Abram oviH, Abram V. 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