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摘要: 目的 建立复方龙胆泻肝丸中龙胆苦苷和栀子苷的含量测定方法。方法 液相色谱法。色谱柱:Kromasil C18柱(4.6mm×250mm,5µm);流动相:甲醇-0.5%冰醋酸溶液(25:75);流速1.0ml/min;柱温:35℃;检测波长:283nm。结果: 龙胆苦苷在0.2403~1.1214μg 范围内呈线性关系(r=1.0000,n=6),平均加样回收率为98.08 % RSD为0.68 % (n=9)。结论 该方法操作简便,结果可靠,可用于复龙胆泻肝丸中龙胆苦苷和栀子苷的含量测定。关键词:高效液相色谱法;龙胆泻肝丸;龙胆苦苷 栀子苷1仪器与试药1.1仪器岛津LC-20AT高效液相色谱仪,SPD-M20A检测器, LCsolution色谱工作站, Metteler AB265S(0.01mg);Sartorius BS124S(0.1mg)1.2 试药 龙胆苦苷对照品(中国药品生物制品检定所,批号110721-201014);甲醇为色谱纯,冰醋酸为分析纯,水为纯化水。龙胆泻肝丸2 溶液的制备 2.1 对照品溶液的制备:精密称取龙胆苦苷对照品 10.15 mg、 5.35 mg,分别置25 ml、量瓶中,加甲醇使溶解并稀释至刻度,摇匀,作为标准品溶液S1和S2;精密称取栀子苷对照品 10.07 mg、 6.78 mg,分别置25 ml量瓶中,加甲醇使溶解并稀释至刻度,摇匀,作为标准品溶液S3和S4;精密称取黄芩苷对照品 11.03 mg、 10.88 mg,分别置100 ml量瓶中,加甲醇使溶解并稀释至刻度,摇匀,即得;精密吸取对照品溶液S1、S3各 1 ml,置10 ml量瓶中,加甲醇至刻度,制成每1ml含龙胆苦苷39.34 ug 和栀子苷40.28 ug的溶液;精密吸取对照品溶液S2 2 ml,S4 1 ml,置10 ml量瓶中,加甲醇至刻度,制成每1ml含龙胆苦苷41.47 ug 和栀子苷27.12 ug的溶液,即得。2.2 供试品溶液的制备:取本品,研细,取约 0.5 g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入加入甲醇 25 ml,称定重量,超声处理(功率250W,频率33KHZ)超声处理 20 分钟,再称定重量,用甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,即得。4 测定法:照高效液相色谱法(中国药典2010年版一部附录附录Ⅵ D),分别精密吸取对照品溶液 10 μl与供试品溶液 5 μl,注入液相色谱仪,测定,即得。
高效液相色谱法检测中药材栀子中栀子苷含量 《栀子花开》,多么动听的歌声,打动多少人的心怀。《栀子花开》,多么精彩的剧情,吸引着多少人的情哀。 大家都知道栀子花很美丽,却可能不知道栀子的果实还是中药材,还有很多药物功效。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/08/201508262335_563082_2536753_3.pnghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/08/201508262335_563083_2536753_3.png 栀子果实气微,味微酸而苦,是传统中药,属卫生部颁布的第l批药食两用资源。具有泻火、护肝、利胆、清热、除烦、凉血、降压、镇静、止痛、解毒、止血、消肿、消炎等多种药效。在中医临床常用于治疗黄疸型肝炎、扭挫伤、热病心烦,淋证涩痛,血热吐衄,目赤肿痛,火毒疮疡高血压、糖尿病等病症。 栀子中的栀子苷是赋予栀子药物疗效的主要成分,栀子苷的含量从某种意义上决定着栀子品质和价值,检测必不可少。下面我们就迫不及待的介绍高效液相色谱法检测中药材栀子中栀子苷含量。【实验部分】【原理】 取适量栀子样品经甲醇溶解,超声提取后注入高效液相色谱系统,C18色谱柱分离,紫外检测器检测,外标法(保留时间定性,峰面积定量)计算,得出栀子中栀子苷含量。【仪器及试剂】 仪器:高效液相色谱仪(紫外检测器+高压泵+柱温箱等),超声波清洗仪,溶剂过滤器,电子天平(0.001),四号筛(药典筛)等。 试剂:甲醇(色谱纯),乙腈(色谱纯),超纯水等。【样品溶液制备】 对照品溶液制备:精密称取栀子苷对照品1.5mg于50ml容量瓶中,加甲醇溶解定容,制成30μg/ml栀子苷对照品溶液,备用。 供试品溶液制备:取样品栀子成熟、干燥果实适量,充分粉碎后过药典筛四号筛,精密称取过筛粉末0.1g置于具塞锥形瓶中,精密加入甲醇50ml,称定重量,超声处理20分钟后,放冷,再次称定重量,用甲醇补足减少的重量,摇匀,0.45μm有机相微膜滤过,待测。【色谱条件】检测器:紫外检测器检测波长:238nm色谱柱:Promosil C18 ( 250 mm X 4.6mm,5μm )流动相:乙腈:水=15:85(V:V)流速:1.0ml/min柱温:30℃进样量:10μl【色谱图】对照品溶液色谱图:http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/08/201508262336_563084_2536753_3.png供试品溶液色谱图:http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/08/201508262336_563085_2536753_3.png【计算】样品中被测物含量计算公式:http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/08/201508262336_563086_2536753_3.pngD----供试品中被测物百分含量,以(%)表示V----供试品稀释的总体积,单位(mL)P3----供试品中被测物峰面积值P4-----对照品中被测物峰面积值ρ2----对照品被测物浓度。单位为mg/mlm2----样品质量,单位(mg)http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/08/201508262336_563087_2536753_3.png【结果】 通过以上公式计算,栀子中栀子苷的含量近似为4.48%,远高于药典要求的不小于1.8%,该栀子中栀子苷含量满足药典要求,该项目检测合格。【结论】 以上方法检测栀子中栀子苷含量方便、快捷,结果准确、可靠,操作简单、易行,该方法适合该类样品检测。
摘要: 目的 建立茵栀黄颗粒中栀子苷和绿原酸的含量测定方法。方法 采用高效液相色谱法。色谱柱:Kromasil C18柱(4.6mm×250mm,5μm);流动相:乙腈-0.1%甲酸(10:90);流速1.0ml/min;柱温:35℃;检测波长:238nm、325nm。结果:对茵栀黄颗粒中栀子苷和绿原酸进行含量测定。 栀子苷在10.43~52.15μg范围内呈线性关系(r=0.9999 ,n=6),线性方程为y=123721821.7x-6951.8(r=0.9999)。平均加样回收率为97.21% RSD为1.62% (n=6) 绿原酸在10.74~53.70μg范围内呈线性关系(r=0.9999 ,n=6),线性方程为y=29447356x-25436(r=0.9999)。平均加样回收率为96.61% RSD为1.35% (n=6)结论 该方法操作简便,结果可靠,可用于茵栀黄颗粒中栀子苷和绿原酸的含量测定。 清茵栀黄颗粒,清热解毒,利湿退黄。有退黄疸和降低谷丙转氨酶的作用。用于湿热毒邪内蕴所致急性、慢性肝炎和重症肝炎(I型)。也可用于其他型重症肝炎的综合治疗。由陈提取物、栀子提取物、黄芩苷、金银花提取物组成。为了进一步控制药品质量,我们对其中的进行了栀子苷和绿原酸含量测定,以期为后续进一步研究奠定基础!关键词:HPLC;DAD;茵栀黄颗粒;栀子苷 ;绿原酸1 仪器与试药1.1 仪器 岛津LC-20AT高效液相色谱仪,SPD-M20A检测器, LCsolution色谱工作站, Metteler AB265S(0.01mg);Sartorius BS124S(0.1mg)),必能信超声波清洗器(必能信超声有限公司)1.2 试药 绿原酸对照品(批号110753-201314)、栀子苷对照品(批号:110749-201115),均购自中国食品药品检定研究院;乙腈(色谱纯);其它试剂均为国产分析纯,蒸馏水自制。2 实验方法与结果2.1 色谱条件与图谱 色谱柱: Kromasil C18柱(4.6mmx250mm,5um); 检测波长:238nm;325nm 流速:1.0ml.min-1; 流动相:乙腈-0.1%甲酸(10:90); 柱温:35℃。2.2 溶液制备2.2.1对照品溶液 取栀子苷和绿原酸对照品适量,精密称定,加甲醇制成每1ml 分别含0.1043mg和0.1074mg 的混合溶液,即得。2.2.2供试品溶液 取本品,研细,取约0.5g,精密称定置50ml量瓶中,精密加入甲醇40ml,称定重量,超声处理30min ,再称定重量,用甲醇补足减失的重量,定容至50ml,摇匀,滤过,即得。2.3 线性关系考察 精密量取各对照品溶液,制得5个系列不同浓度的对照品溶液,各取10微升依次进样,按上述色谱条件测定峰面积,以对照品峰面积Y为纵坐标,浓度X(mg·mL )为横坐标,绘制标准曲线,结果栀子苷在10.43~52.15μg范围内呈线性关系(r=0.9999 ,n=6),线性方程为y=123721821.7x-6951.8(r=0.9999)。绿原酸在10.74~53.70μg范围内呈线性关系(r=0.9999 ,n=6),线性方程为y=58134683.4x-7988.3(r=0.9999) http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/10/201510020006_569010_1839779_3.pnghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/10/2015100200003568_01_1839779_3.png2.4精密度试验 精密吸取同一供试品溶液,重复进样6次,计算栀子苷和绿原酸对照品 峰面积的RSD分别为0.4% 和1.4% 。2.5 稳定性试验 精密吸取同一供试品溶液,分别于0,2,4,8,16,24 h测定,结果表明:栀子苷和绿原酸对照品在24 h内稳定,RSD分别为1.1% 和1.5% 。2.6 重复性实验 取同一批次的茵栀黄颗粒平行6份,制成供试品溶液,在上述色谱条件下分别进行HPLC分析,计算栀子苷和绿原酸对照品峰面积的RSD分别为1.2%和1.4% 。2.7 回收试验 取同一批茵栀黄颗粒,约取0.25g,共计6份,精密称定,按上述色谱条件进样测定,用回归方程计算回收率。2.8 样品含量测定 取3个批号的茵栀黄颗粒,配制成供试品溶液,在上述色谱条件下进行测定,栀子苷和绿原酸对照品的含量,结果见表。样品编号栀子苷(mg/g)20150729 2.54201410032.61201502162.65样品编号绿原酸(mg/g)20150729 1.04201410031.16201502161.12http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/10/2015100111035245_01_1839779_3.bmp 图1 茵栀黄颗粒的HPLC图谱(238nm)http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/10/2015100111125995_01_1839779_3.bmp 图2 栀子苷的HPLC图谱(238nm)http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/10/2015100111105517_01_1839779_3.png 图3 茵栀黄颗粒的HPLC图谱(325nm)http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/10/2015100111150072_01_1839779_3.bmp 图4 绿原酸的HPLC图谱(325