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凝胶强度测定仪

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凝胶强度测定仪相关的论坛

  • 【求助】果胶凝胶强度测定仪器(SAG)

    求助!!!! 请问这个东东在哪买得到???------果胶强度测定仪请问各位大侠,那里可以买到果胶强度测定义,本人因为需要使用该产品需要购买一台果胶强度测定义,请帮帮忙,告知在何处可以买到有关检测果胶的仪器,如何测定胶凝强度以及时间,急需标准的仪器,国内外均可,只要仪器质量可靠即可?谢谢!!!!

  • 凝胶强度测定

    请问在做凝胶强度测试时,粘度怎么计算?也就是横坐标下面的区域面积怎么计算?

  • 【求购】求购全自动旋光仪、凝胶强度仪

    以前的旋光仪是wzz-2a的,不过已经比较老了,现在想更换一台新的。凝胶强度仪也是,主要用来作卡拉胶等的凝胶强度测定。大家有没有比较好的型号推荐一下。在网上搜索了一下,看见有ap-100、ap-300的全自动旋光仪,不知道价位多少,有知道的能不能告知一下,多谢。

  • 如何提高鱼肉凝胶强度的措施

    [font=-apple-system, BlinkMacSystemFont, &][size=16px][color=#1a1a1a]如何[/color][/size][/font][font=-apple-system, BlinkMacSystemFont, &][size=16px][color=#1a1a1a]提高鱼肉凝胶强度的措施[/color][/size][/font][font=-apple-system, BlinkMacSystemFont, &][size=16px][color=#1a1a1a]利用淡水和海水产低值小杂鱼加工制作的鱼糜制品,是人们获取鱼肉型食物的重要来源,由于食用方便、味美形好、烹调简单等因素,深受消费者的喜爱。 [/color][/size][/font][font=-apple-system, BlinkMacSystemFont, &][size=16px][color=#1a1a1a]不过,目前鱼糜制品品种单调,制品质量有待提高,极大地限制了鱼糜制品的消费量。为此,国内外研究人员在增加鱼糜制品品种和提高鱼糜制品质量方面进行了研究,并取得了大量成果。 [/color][/size][/font][font=-apple-system, BlinkMacSystemFont, &][size=16px][color=#1a1a1a]衡量鱼糜制品质量的主要指标有弹性、口味、质地、形态等( ),其中制品弹性是鱼糜制品质量的重要指标。鱼肉肌肉中盐溶性蛋白质----肌原纤维蛋白质,是鱼肉形成弹性凝胶体的主要成分,是形成制品弹性的重要来源。 [/color][/size][/font][font=-apple-system, BlinkMacSystemFont, &][size=16px][color=#1a1a1a]鱼肉肌肉中肌原纤维蛋白质,是盐溶性蛋白质,在食盐的作用下,肌原纤维的粗丝和细丝开始溶解,其主要成分肌球蛋白和肌动蛋白吸收大量的水分并结合形成肌动球蛋白的溶胶。这种溶胶在低温缓慢地形成富有弹性的凝胶体。 [/color][/size][/font][font=-apple-system, BlinkMacSystemFont, &][size=16px][color=#1a1a1a]鱼肉蛋白弹性凝胶体凝胶强度的高低( ),是决定鱼肉制品质量优劣的关键因素,直接影响着鱼糜制品的组织特性、保水性、粘结性及产品得率等。虽然不同鱼种的凝胶强度有高低之分,但可以采用一些提高凝胶强度的措施来提高鱼糜制品的弹性。 [/color][/size][/font][font=-apple-system, BlinkMacSystemFont, &][size=16px][color=#1a1a1a]鱼糜制品加工过程,可分解为原料鱼采肉过程、添加辅料混合过程和加热成形过程,如果采用冷冻鱼糜为原料,还包括鱼糜的冻藏过程和鱼糜的解冻过程。本文根据鱼糜制品的各个加工过程,介绍提高鱼肉凝胶强度的措施,以期指导鱼糜制品新产品的开发和产品质量的提高。 [/color][/size][/font][font=-apple-system, BlinkMacSystemFont, &][size=16px][color=#1a1a1a]1、鱼肉采取后需要漂洗 [/color][/size][/font][font=-apple-system, BlinkMacSystemFont, &][size=16px][color=#1a1a1a]漂洗是鱼肉采取后一步非常重要的加工工序,通过漂洗不仅能除去鱼肉中的有色物质及腥臭成分,而且能提高鱼肉蛋白凝胶的凝胶强度。漂洗过程除去了鱼肉中的水溶性蛋白质(如肌浆蛋白),这种蛋白质包含着许多蛋白水解酶,它的存在会影响凝胶体的形成。不同漂洗方法对鱼肉蛋白凝胶强度有影响,有时会影响产品得率,如采用低浓度盐水溶液漂洗,除去肌浆蛋白的同时也伴随着部分肌原纤维蛋白的流失,使得率降低。Saeki等认为,用CaCl漂洗液漂洗可较大幅度地提高鱼肉凝胶特性,原因是漂洗液中的Ca2+离子起到增强肌原纤维三维网络结构的作用。 [/color][/size][/font][font=-apple-system, BlinkMacSystemFont, &][size=16px][color=#1a1a1a]2、鱼肉冷冻时需要加抗冻剂 [/color][/size][/font][font=-apple-system, BlinkMacSystemFont, &][size=16px][color=#1a1a1a]鱼肉采肉后到凝胶化之前,一般要经过冷冻或冷藏过程,这样往往会引起鱼肉蛋白质的变性,导致Ca2+ --ATPase的活性和凝胶强度的下降,防止鱼肉蛋白变性的有效措施是加人防止冷冻变性剂(抗冻剂)。抗冻剂有蔗糖、山梨醇、复合磷酸盐和低聚糖。日本学者山口敦子等的研究结果表明,鱼糜中同时添加聚磷酸盐和山梨醇冷藏,能提高凝胶强度,并且比单独使用山梨醇好,如再加入复合磷酸盐(三聚磷酸盐钠、焦磷酸钠、六偏磷酸钠等)可提高鱼糜的持水能力,防止水分及呈味物质的流失。 [/color][/size][/font][font=-apple-system, BlinkMacSystemFont, &][size=16px][color=#1a1a1a]3、在凝胶前期加还原物质 [/color][/size][/font][font=-apple-system, BlinkMacSystemFont, &][size=16px][color=#1a1a1a]在鱼糜凝胶前期加入一些还原物质可以抑制巯基氧化成二硫键,恢复鱼肉冷藏变性蛋白的活性。Shann等的实验结果证实,在鱼糜凝胶前期加入还原剂(如0.08%--0.10%的巯基乙醇、硫酸氢钠等)使冷冻贮藏后鳕鱼和鲐鱼蛋白中已被氧化的一部分巯基恢复活性,恢复水平达83%--98%以上。 [/color][/size][/font][font=-apple-system, BlinkMacSystemFont, &][size=16px][color=#1a1a1a]4、添加凝胶增强剂 [/color][/size][/font][font=-apple-system, BlinkMacSystemFont, &][size=16px][color=#1a1a1a]在鱼肉蛋白凝胶化之前,添加凝胶强度增强剂,是提高凝胶强度的有效途径()Ca2+对鱼肉蛋白凝胶强度有重要的作用,在鱼肉蛋白凝胶过程中由钙离子激活鱼肉中转谷氨酰胺酶(TGase),然后催化谷氨酸残基中的γ-羧基酰胺基团与其它氨基酸残基发生交联作用,通过共价键形成更牢固的网状结构。 [/color][/size][/font][font=-apple-system, BlinkMacSystemFont, &][size=16px][color=#1a1a1a]对于鱼肉内的转谷氨酰胺酶(TGase)含量较少的鱼种,如鲤鱼等淡水鱼,可以添加微生物BTGase进行改良,提高其凝胶形成能。TGase促使鱼肉蛋白质问产生架桥重组作用的机理为:TGase催化谷氨酸Gln残基γ-羧基酰胺基与赖氨酸Lys残基ε-氨基发生交联作用,在分子内或分子间产生ε-(γ-Glu)Lys的架桥粘结作用,形成交叉结合的蛋白质结构,而且凝胶体的凝胶强度随着TGase含量的增加而增加。 [/color][/size][/font][font=-apple-system, BlinkMacSystemFont, &][size=16px][color=#1a1a1a]在鱼肉中添加淀粉等,对凝胶体起到补强作用。淀粉作用机理是在加热糊化时,游离水分被添加的淀粉吸收成为钝化水,由于膨润的糊化粒子机械强度大于鱼肉,起到鱼肉弹性补强作用,提高了凝胶强度。植物蛋白、明胶、蛋清等物质也是鱼糜制品弹性增强剂。 [/color][/size][/font][font=-apple-system, BlinkMacSystemFont, &][size=16px][color=#1a1a1a]5、鱼肉擂溃(斩拌)方式 [/color][/size][/font][font=-apple-system, BlinkMacSystemFont, &][size=16px][color=#1a1a1a]擂溃或斩拌是鱼糜制品生产中重要工序之一,鱼糜擂溃方式对鱼肉蛋白凝胶强度的影响也比较显著。擂溃过程分为空擂、盐擂和调味擂溃3个阶段,空擂使鱼肉的肌肉纤维组织进一步破坏,为盐溶性蛋白的充分溶出创造良好的条件,盐擂使鱼肉在稀盐溶液作用下盐溶性蛋白质充分溶出,形成粘性很强的鱼糜糊溶胶,调味擂溃使加入的辅料、调味料及凝胶增强剂与鱼糜糊溶胶充分混合均匀。擂溃过程应控制擂溃时间、擂溃温度、加盐量等参数,以保证鱼糜制品弹性( )。 [/color][/size][/font][font=-apple-system, BlinkMacSystemFont, &][size=16px][color=#1a1a1a]6、临近擂溃结束时添加氧化剂 [/color][/size][/font][font=-apple-system, BlinkMacSystemFont, &][size=16px][color=#1a1a1a]在鱼糜中加入铬酸钾、过氧化氢、胱氨酸、脱氧抗坏血酸等物质能促进弹性凝胶体的形成,这些物质能使蛋白质的-SH基(巯基)氧化,在其分子之间形成S-S桥键(二硫键),强化网状结构。 [/color][/size][/font][font=-apple-system, BlinkMacSystemFont, &][size=16px][color=#1a1a1a]7、采用多段凝胶化方法 [/color][/size][/font][font=-apple-system, BlinkMacSystemFont, &][size=16px][color=#1a1a1a]在鱼肉蛋白凝胶化过程中,低温凝胶化的效果比高温凝胶化好,但低温凝胶化所需凝胶时间过长,不太适合工业化生产,常采用二段凝胶化法。为避开凝胶劣化温度,低温凝胶化温度常取在30℃--50℃,高温凝胶化温度在75℃--95℃,凝胶过程快速通过凝胶劣化温度区。 [/color][/size][/font][font=-apple-system, BlinkMacSystemFont, &][size=16px][color=#1a1a1a]鱼肉蛋白弹性凝胶体的形成,是鱼糜制品弹性的基础( ),根据鱼肉蛋白凝胶机理,采用多种措施达到提供鱼糜制品质量的目的。鱼肉蛋白凝胶机理还有待于继续探索,提高鱼肉凝胶强度的措施有待于进一步研究。 [/color][/size][/font][font=-apple-system, BlinkMacSystemFont, &][size=16px][color=#1a1a1a]采编中心 文章来源于:《中国水产》 责任编辑:ying[/color][/size][/font]

  • 【原创】凝胶色谱的应用

    [b]凝胶色谱的应用[/b]:1、[b]分子量的测定[/b]根据凝胶色谱的原理,样品物质在凝胶色谱柱中的洗脱性质与该物质的分子大小有关。因此选用不同的凝胶色谱柱后,能方便地测定物质的分子量。用此法测定分子量时,可以在各种PH值、离子强度和温度条件下进行。所测定的物质可以是天然状态,也可以是变性后的。实际应用中,可先选用一系列已知分子量的标准样品在同一色谱条件下进行色谱分离分析,并以保留体积(或保留时间)对分子量的对数作图,在一定分子量范围内得到一直线(标准曲线),而后根据待测定物在同一条件下的保留体积(或保留时间),从标准曲线上查得/计算出其分子量。目前用本法测定分子量的应用范围非常广泛。[u]高分子物质的分子量及其分布的测定[/u]:特别是近年来,随着各种高分子材料的问世,人们对高分子科学的不断探索,高聚物的分子量及其分布的测定显得尤为重要,成为科研和生产中不可缺少的测试项目之一。例如:常见的聚苯乙烯塑料制品,其分子量为十几万,如果聚苯乙烯的分子量低至几千,就不能成型;相反,当分子量大到几百万,甚至几千万,它又难以加工,失去了实用意义。科研和生产上通过控制高聚物的分子量及其分布宽度指数D(D=Mw/Mn)、分子量微分分布曲线、分子量积分分布曲线来生产出性能最佳的高聚物产品。同样,除了快速测定分子量及其分布以外,凝胶渗透色谱还广泛被用于研究高聚物的支化度,共聚物的组成分布及高聚物中微量添加剂的分析等方面。如果配以在线的绝对分子量检测器(如:LALLS、Multi-Angle LS、Dual-Angle LS等),凝胶渗透色谱可以测定高聚物的绝对分子量。[u]蛋白质分子量的测定[/u]:现代蛋白质药物的研究中,凝胶色谱法测定分子量是蛋白质分子量的快速测定方法之一。一般选用标准分子量蛋白质(如:铁蛋白、醛缩酶、牛血清白蛋白、卵清蛋白、胃蛋白酶、核糖核酸酶,这就是一组分子量从300KD到14KD的标准品)。

  • 高强度水凝胶生物传感器的开发及应用

    【序号】:2【作者】: 刘雅铭【题名】:高强度水凝胶生物传感器的开发及应用【期刊】:深圳大学【年、卷、期、起止页码】:2021【全文链接】:https://kns.cnki.net/kcms2/article/abstract?v=3uoqIhG8C475KOm_zrgu4lQARvep2SAkOTSE1G1uB0_um8HHdEYmZsFvNxqBClYiLO4OONXEilDJ30zOuMT0YI4UeYfPVWz_&uniplatform=NZKPT

  • 【原创】凝胶色谱的分类

    一)聚丙烯酰胺凝胶: 是一种人工合成凝胶,是以丙烯酰胺为单位, 由甲叉双丙烯酰胺交联成的,经干燥粉碎或加工成形制成粒状,控制交联剂的用量可制成各种型号的凝胶。交联剂越多,孔隙越小。聚丙烯酰胺凝胶的商品为生物胶-P (Bio-Gel P),由日本tosoh的TSKGEL的pw系列,适合蛋白和多糖的纯化。(二)交联葡聚糖凝胶(Sephadex)⑴Sephadex G交联葡聚糖的商品名为Sephndex,不同规格型号的葡聚糖用英文字母G表示,G后面的阿拉伯数为凝胶得水值的10倍。例如,G-25为每克凝胶膨胀时吸水2.5克,同样G-200克每克千胶吸水20克。交联葡聚糖凝胶的种类有G-10,G-15,G-25,G-50,G-75,G-100,G-150,和G-200。因此,“G”反映,凝胶的交联程度,膨胀程度及分部范围。⑵Sephadex LH-20,是—Sephadex G-25的羧丙基衍生物, 能溶于水及亲脂溶剂,用于分离不溶于水的物质。(三)琼脂糖凝胶: 商品名很多,常见的有,Sepharose(瑞典,pharmacia ),Bio-Gel-A(美国Bio-Rad)等。琼脂糖凝胶是依靠糖链之间的次级链如氢键来维持网状结构,网状结构的疏密依靠琼脂糖的浓度。一般情况下,它的结构是稳定的,可以在许多条件下使用(如水,pH4-9范围内的盐溶液)。琼脂糖凝胶在40℃以上开始融化,也不能高压消毒,可用化学灭菌活处理。(四)聚苯乙烯凝胶 商品为Styrogel , 具有大网孔结构, 可用于分离分子量1600到40,000,000的生物大分子,适用于有机多聚物,分子量测定和脂溶性天然物的分级,凝胶机械强度好,洗脱剂可用甲基亚砜。 [b]8[/b]

  • 气凝胶密度检测|气凝胶含量检测

    [size=16px][color=#333333]点击链接查看更多:[color=#333333][url]https://www.woyaoce.cn/service/info-39756.html[/url][/color]服务背景[/color][/size]气凝胶是指通过溶胶凝胶法,用一定的干燥方式使气体取代凝胶中的[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相[/color][/url]而形成的一种纳米级多孔固态材料。气凝胶检测范围气凝胶粉、气凝胶板、气凝胶毡、气凝胶隔热材料、气凝胶保温材料、气凝胶复合硅酸铝棉等。[size=16px][color=#333333]检测内容[/color][/size]气凝胶检测项目密度检测、憎水率检测、压缩强度检测、拉伸强度检测、导热系数检测、耐火极限检测、导热系数检测、压缩回弹率检测、振动质量损失率检测、热荷重收缩温度检测等。[size=16px][color=#333333]检测标准[/color][/size][table][tr][td]产品名称[/td][td]检测项目[/td][td]检测标准[/td][/tr][tr][td]气凝胶[/td][td]气凝胶绝热材料[/td][td]DB44/T 1455-2014[/td][/tr][tr][td]气凝胶[/td][td]疏水二氧化硅气凝胶粉体[/td][td]JC/T 2518-2019[/td][/tr][/table][size=16px][color=#333333]我们的优势[/color][/size]气凝胶检测流程1、沟通需求:了解待检测项目,确定检测范围;2、报价:根据检测项目及检测需求进行报价;3、签约:签订合同及保密协议,开始检测;4、完成检测:检测周期会根据样品及其检测项目/方法会有所变动,具体可咨询检测顾问;5、出具检测报告,进行后期服务;

  • 凝胶色谱法测定高分子物质

    谁能提供给我一些关于凝胶色谱法测定高分子物质多糖的例子,谢谢了另外凝胶色谱法测定多糖的流动相和凝胶选用什么比较合适,谢谢!

  • 【分享】凝胶层析法测定蛋白质分子量

    一、实验目的1. 了解凝胶层析的原理及其应用。2. 通过测定蛋白质分子量的训练,初步掌握凝胶层析技术。二、实验原理凝胶层析又称排阻层析,凝胶过滤,渗透层析或分子筛层析等。它广泛地应用于分离、提纯、浓缩生物大分子及脱盐、去热源等,而测定蛋白质的分子量也是它的重要应用之一。凝胶是一种具有立体网状结构且呈多孔的不溶性珠状颗粒物质。用它来分离物质,主要是根据多孔凝胶对不同半径的蛋白质分子(近于球形)具有不同的排阻效应实现的。亦即它是根据分子大小这一物理性质进行分离纯化的。分离原理参见“理论部分的凝胶层析一节”。对于某种型号的凝胶,一些大分子不能进入凝胶颗粒内部而完全被排阻在外,只能沿着颗粒间的缝隙流出柱外;而一些小分子不被排阻,可自由扩散,渗透进入凝胶内部的筛孔,尔后又被流出的洗脱液带走。分子越小,进入凝胶内部越深,所走的路程越多,故小分子最后流出柱外,而大分子先从柱中流出。一些中等大小的分子介于大分子与小分子之间,只能进入一部分凝胶较大的孔隙,亦即部分排阻,因此这些分子从柱中流出的顺序也介于大、小分子之间。这样样品经过凝胶层析后,分子便按照从大到小的顺序依次流出,达到分离的目的。凝胶层析分离原理示意动画。对于任何一种被分离的化合物在凝胶层析柱中被排阻的范围均在0~100%之间,其被排阻的程度可以用有效分配系数Kav(分离化合物在内水和外水体积中的比例关系)表示,Kav值的大小和凝胶柱床的总体积(Vt)、外水体积(V0)以及分离物本身的洗脱体积(Ve)有关:Kav = (Ve-V0)/(Vt-V0) ----------- (1)在限定的层析条件下,Vt和V0都是恒定值,而Ve是随着分离物分子量的变化而改变。分子量大,Ve值小,Kav值也小。反之,分子量小Ve值大,Kav值大。有关凝胶层析柱中凝胶自身(基质)体积(Vg)、外水体积(V0)、内水体积(Vi)及柱床总体积(Vt)的参见示意图。凝胶层析柱中的几种层析峰。有效分配系数Kav是判断分离效果的一个重要参数,同时也是测定蛋白质分子量的一个依据。在相同层析条件下,被分离物质Kav值差异越大,分离效果越好。反之,分离效果差或根本不能分开。在实际的实验中,我们可以实测出Vt、V0及Ve的值,从而计算出Kav的大小。对于某一特定型号的凝胶,在一定的分子量范围内,Kav与logMw (Mw表示物质的分子量) 成线性关系:Kav =-b logMw + C --------- (2)其中 b,C为常数。同样可以得到:Ve =-b'logMw + C' --------- (3)其中 b', C'为常数。即 Ve 与 logMw 也成线性关系。我们可以通过在一凝胶柱上分离多种已知分子量的蛋白质后,并根据上述的线性关系绘出标准曲线,然后用同一凝胶柱测出其它未知蛋白的分子量。三、器材与试剂(一)器材1. 玻璃层析柱((20mm×60cm)2. 恒流泵(或下口恒压贮液瓶)3. 自动部分收集器4. 紫外分光光度计5. 100ml试剂瓶6. 1000ml量筒7. 250ml烧杯8. 50ml、100ml烧杯9. 10ml(或5ml)刻度试管(二)试剂1. 标准蛋白(1)牛血清白蛋白:Mw=67,000(上海生化所)(2)鸡卵清清蛋白:Mw=45,000(美国SIGMA公司)(3)胰凝乳蛋白酶原A:Mw=24,000(美国SIGMA公司)(4)溶菌酶:Mw =14,3002. 未知蛋白质样品:由实验室准备3. 0.025M KCl-0.1M HAC(乙酸)(洗脱液1000ml)4. 蓝色葡聚糖-2000

  • 凝胶过滤填料 分类及性质

    凝胶过滤填料的类型及性质 具有分子筛作用的物质很多,如浮石、琼脂、琼脂糖、聚乙烯醇、聚丙烯酰胺、葡聚糖凝胶等。层析用凝胶都是三维空间的网状高聚物,有一定的孔径和交联度。它们不溶于水,但在水中有较大的膨胀度,具有良好的分子筛功能。它们可分离的分子大小的范围广,相对分子质量在102~108范围之间。在柱层析分离中常用的凝胶有以下几类: 1.交联葡聚糖凝胶 交联葡聚糖凝胶的商品名称为Sephadex,由葡聚糖和3-氯-1.2-环氧丙烷(交联剂)以醚键相互交联而形成具有三维空间多孔网状结构的高分子化合物。交联葡聚糖凝胶,按其交联度大小分成8种型号如表3所示。交联度越大,网状结构越紧密,孔径越小,吸水膨胀就愈小,故只能分离相对分子质量较小的物质;而交联度越小,孔径就越大,吸水膨胀大,则可分离相对分子质量较大的物质。各种型号是以其吸水量(每g干胶所吸收的水的质量)的10倍命名,如,Sephadex G–25表示该凝胶的吸水量为每g干胶能吸2.5克水。在SephadexG–25及G–50中分别引入羟丙基基团,即可构成LH型烷基化葡聚糖凝胶。 表3 Sephadex1的种类与特性型号分离范围(分子量)吸水量(ml/g)最小溶胀时(h)床体积(ml)/(mg)20℃~25℃100℃G10<7001.0±0.1312~3G15<1 5001.5±0.2312.5~3.5G25<5 0002.5±0.2314~6G501500~20 0008.0±0.3319~11G753 000~70 0007.5±0.524112~15G1004 000~15 00010.0±1.072115~20G1505 000~800 00015.0±1.572120~30G2005 000~30 000020.0±2.072130~40 交联葡聚糖凝胶在水溶液、盐溶液、碱溶液、弱酸溶液和有机溶剂中较稳定,但当暴露于强酸或氧化剂溶液中,则易使糖甘键水解断裂。在中性条件下,交联葡聚糖凝胶悬浮液能耐高温,用120℃消毒10分钟而不改变其性质。如要在室温下长期保存,应加入适量防腐剂,如氯仿、叠氮钠等,以免微生物生长。 交联葡聚糖凝胶由于有羧基基团,故能与分离物质中的电荷基团(如碱性蛋白质)发生吸附作用,但可借助提高洗脱液的离子强度得以克服。因此在进行凝胶层析时,常用含有NaCl的缓冲溶液作洗脱液。交联葡聚糖凝胶可用于分离蛋白质、核酸、酶、多糖、多肽、氨基酸、抗菌素,也可用于高分子物质样品的脱盐及测定蛋白质的相对分子质量。 2.琼脂糖凝胶 琼脂糖的商品名称有Sepharose(瑞典)、Bio-gelA(美国)、Segavac(英国)、Gelarose(丹麦)等多种,因生产厂家不同名称各异。琼脂糖是由D-半乳糖和3,6位脱水的L-半乳糖连接构成的多糖链,在温度10O℃时呈液态,当下降至45℃以下时,它们之间相互连接成线性双链单环的琼脂糖;再凝聚即呈琼脂糖凝胶。商品除Segavac外,都制备成珠状琼脂糖凝胶。琼脂糖凝胶按其浓度不同,分为Sepharose 2B(浓度为2%)、4B(浓度为4%)及6B(浓度为6%)。Sepharose与1,3-二溴异丙醇在强碱条件下反应,即生成CL型交联琼脂糖,其热稳定性和化学稳定性均有所提高,可在广泛pH溶液(pH3~14)中使用。通常的Sepharose只能在pH4.5~9.0范围内使用。琼脂糖凝胶在干燥状态下保存易破裂,故一般均存放在含防腐剂的水溶液中。 琼脂糖凝胶的机械强度和筛孔的稳定性均优于交联葡聚糖凝胶。琼脂糖凝胶用于柱层析时,流速较快,因此是一种很好的凝胶层析载体。

  • 【资料】凝胶渗透色谱(GPC)实用资料(共5讲)

    [B][center]凝胶渗透色谱(GPC/SEC)技术(一) [/center][/B] 一、 凝胶渗透色谱的概述 1. 凝胶渗透色谱的简单回顾凝胶渗透色谱[GPC(Gel Permeation Chromatography)][也称作体积排斥色谱(Size Exclusion Chromatography)]是三十年前才发展起来的一种新型液相色谱,是色谱中较新的分离技术之一。利用多孔性物质按分子体积大小进行分离,在六十年前就已有报道。Mc Bain用人造沸石成功地分离了气体和低分子量的有机化合物,1953年Wheaton和Bauman用离子交换树脂按分子量大小分离了苷、多元醇和其它非离子物质。1959年Porath和Flodin用交联的缩聚葡糖制成凝胶来分离水溶液中不同分子量的样品。而对于有机溶剂体系的凝胶渗透色谱来说,首先需要解决的是制备出适用于有机溶剂的凝胶。二十世纪60年代J.C.Moore在总结了前人经验的基础上,结合大网状结构离子交换树脂制备的经验,将高交联度聚苯乙烯凝胶用作柱填料,同时配以连续式高灵敏度的示差折光仪,制成了快速且自动化的高聚物分子量及分子量分布的测定仪,从而创立了液相色谱中的凝胶渗透色谱技术。2. 凝胶渗透色谱的应用三十多年来,凝胶渗透色谱的理论、实验技术和仪器的性能等方面有了突飞猛进的发展。尤其是随着新型柱填料的诞生、高效填充柱的出现(目前其理论塔板数已超过10000/米)以及计算机的普及,凝胶渗透色谱在工业、农业、医药、卫生、国防、宇航以及日常生活的各个领域得到了广泛的应用。特别是近年来,随着各种高分子材料的问世,人们对高分子科学的不断探索,高聚物的分子量及其分布的测定显得尤为重要,成为科研和生产中不可缺少的测试项目之一。例如:常见的聚苯乙烯塑料制品,其分子量为十几万,如果聚苯乙烯的分子量低至几千,就不能成型;相反,当分子量大到几百万,甚至几千万,它又难以加工,失去了实用意义。科研和生产上通过控制高聚物的分子量及其分布宽度指数D(D=Mw/Mn)、分子量微分分布曲线、分子量积分分布曲线来生产出性能最佳的高聚物产品。另外,除了快速测定分子量及其分布以外,凝胶渗透色谱还广泛用于研究高聚物的支化度,共聚物的组成分布及高聚物中微量添加剂的分析等方面。如果配以在线的绝对分子量检测器(如:LALLS、Multi-Angle LS、Dual-Angle LS等),凝胶渗透色谱可以测定高聚物的绝对分子量。凝胶渗透色谱作为一门新兴的科学,随着各种新型检测器的出现(如UV、FT-IR、LS、Viscometer等),它的应用范围也逐步从生物化学、高分子化学、无机化学等向其它领域渗透,成为化学领域内必不可少的分析手段。

  • 影响卡波姆凝胶性质的因素

    [font=宋体][color=#222222]1.卡波姆凝胶性质[/color][/font][font=宋体][color=#222222]受到[/color][/font][font=宋体][color=#222222]PH值的影响[/color][/font][font=宋体][color=#222222][font=宋体]因为卡波姆聚合物有大量的游离羧基,所以[/font][font=宋体]pKa值通常很小。如果介质的pH小于4,羧基很少分离,pH大于4,羧基开始分离,聚合物溶解,粘度增加,pH值为8[/font][/color][/font][font=宋体][color=#222222]时[/color][/font][font=宋体][color=#222222],则基本[/color][/font][font=宋体][color=#222222]全部[/color][/font][font=宋体][color=#222222]分离,粘度最大。[/color][/font][font=宋体][color=#222222][font=宋体]介质[/font][font=宋体]pH值也影响卡波姆凝胶的粘附性,当pH值低于pKa时,凝胶的结合能力强,粘附性[/font][/color][/font][font=宋体][color=#222222]就会加大[/color][/font][font=宋体][color=#222222][font=宋体]。同时介质的离子强度可以改变卡波姆凝胶对[/font][font=宋体]pH值的敏感性,当离子强度较高时,卡波姆容易释放质子,其pKa值[/font][/color][/font][font=宋体][color=#222222]降低[/color][/font][font=宋体][color=#222222][font=宋体],因此可以在较低的[/font][font=宋体]pH值下溶解。[/font][/color][/font][font=宋体][color=#222222]2.卡波姆凝胶性质[/color][/font][font=宋体][color=#222222]受到[/color][/font][font=宋体][color=#222222]离子强度的影响[/color][/font][font=宋体][color=#222222][font=宋体]在一些药物中,药物对凝胶周围介质的[/font][font=宋体]pH值和离子强度的影响也不容忽视。药物的酸性也影响凝胶的性质,因此酸性药物的作用更加明显。[/font][/color][/font][font=宋体][color=#222222]3.卡波姆凝胶性质[/color][/font][font=宋体][color=#222222]受到[/color][/font][font=宋体][color=#222222]其他辅料的影响[/color][/font][font=宋体][color=#222222][font=宋体]在卡波姆凝胶中同时使用聚乙烯吡咯烷和聚氧乙烯作为助剂,可以降低卡波姆凝胶的黏膜粘附力,这种减少与共存辅料的浓度和分子量有关,辅料浓度高[/font][font=宋体](5%)可以大大降低卡波姆凝胶的粘附力,浓度降至0.5%的话,影响较小。通常,介质的pH值不会改变聚乙烯吡咯和聚氧乙烯的这一特性。硬脂酸镁具有疏水性,因此也能降低卡波姆凝胶的粘附性。[/font][/color][/font]

  • 【资料】熊猫收集--凝胶渗透色谱(GPC/SEC)技术

    一、 凝胶渗透色谱的概述 1. 凝胶渗透色谱的简单回顾凝胶渗透色谱[GPC(Gel Permeation Chromatography)][也称作体积排斥色谱(Size Exclusion Chromatography)]是三十年前才发展起来的一种新型液相色谱,是色谱中较新的分离技术之一。利用多孔性物质按分子体积大小进行分离,在六十年前就已有报道。Mc Bain用人造沸石成功地分离了气体和低分子量的有机化合物,1953年Wheaton和Bauman用离子交换树脂按分子量大小分离了苷、多元醇和其它非离子物质。1959年Porath和Flodin用交联的缩聚葡糖制成凝胶来分离水溶液中不同分子量的样品。而对于有机溶剂体系的凝胶渗透色谱来说,首先需要解决的是制备出适用于有机溶剂的凝胶。二十世纪60年代J.C.Moore在总结了前人经验的基础上,结合大网状结构离子交换树脂制备的经验,将高交联度聚苯乙烯凝胶用作柱填料,同时配以连续式高灵敏度的示差折光仪,制成了快速且自动化的高聚物分子量及分子量分布的测定仪,从而创立了液相色谱中的凝胶渗透色谱技术。2. 凝胶渗透色谱的应用三十多年来,凝胶渗透色谱的理论、实验技术和仪器的性能等方面有了突飞猛进的发展。尤其是随着新型柱填料的诞生、高效填充柱的出现(目前其理论塔板数已超过10000/米)以及计算机的普及,凝胶渗透色谱在工业、农业、医药、卫生、国防、宇航以及日常生活的各个领域得到了广泛的应用。特别是近年来,随着各种高分子材料的问世,人们对高分子科学的不断探索,高聚物的分子量及其分布的测定显得尤为重要,成为科研和生产中不可缺少的测试项目之一。例如:常见的聚苯乙烯塑料制品,其分子量为十几万,如果聚苯乙烯的分子量低至几千,就不能成型;相反,当分子量大到几百万,甚至几千万,它又难以加工,失去了实用意义。科研和生产上通过控制高聚物的分子量及其分布宽度指数D(D=Mw/Mn)、分子量微分分布曲线、分子量积分分布曲线来生产出性能最佳的高聚物产品。另外,除了快速测定分子量及其分布以外,凝胶渗透色谱还广泛用于研究高聚物的支化度,共聚物的组成分布及高聚物中微量添加剂的分析等方面。如果配以在线的绝对分子量检测器(如:LALLS、Multi-Angle LS、Dual-Angle LS等),凝胶渗透色谱可以测定高聚物的绝对分子量。凝胶渗透色谱作为一门新兴的科学,随着各种新型检测器的出现(如UV、FT-IR、LS、Viscometer等),它的应用范围也逐步从生物化学、高分子化学、无机化学等向其它领域渗透,成为化学领域内必不可少的分析手段。

  • 凝胶中乙醇含量测定求助

    用药典方法测定凝胶中的乙醇含量,但是要排除挥发油对乙醇的干扰,验证特异性。乙醇我用的溶剂是水,挥发油不溶于水,我用了甲醇和丙酮溶,但是单独甲醇或丙酮溶剂出的峰都很不好,应该怎么办?还需要换溶剂吗?

  • 凝胶电泳仪简介

    凝胶电泳(英语:Gel electrophoresis)或称胶体电泳 是一大类技术,被科学工作者用于分离不同物理性质(如大小、形状、等电点等)的分子。凝胶电泳通常用于分析用途,但也可以作为制备技术,在采用某些方法(如质谱(MS)、聚合酶链式反应(PCR)、克隆技术、DNA测序或者免疫印迹)检测之前部分提纯分子。凝胶电泳仪 - 使用方法凝胶电泳被广泛用于分子生物学、遗传学和生物化学:1.大的DNA或者RNA分子通常利用琼脂糖凝胶电泳(agarose gel electrophoresis)分离,也可以使用聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)。2.蛋白质的凝胶电泳通常在加入十二烷基硫酸钠的聚丙烯酰胺凝胶中进行(SDS-PAGE),或者非变性凝胶电泳,或二维电泳。 SDS-PAGE 蛋白质凝胶电泳图。 3.毛细管电泳  4.酶谱法(zymography) 5.变性梯度胶凝电泳(Denaturing Gradient Gel Electrophoresis,DGGE) 琼脂糖和聚丙烯酰胺可以制成各种形状、大小和孔隙度。琼脂糖凝胶分离DNA片度大小范围较广,不同浓度琼脂糖凝胶可分离长度从200bp至近50kb的DNA片段。琼脂糖通常用水平装置在强度和方向恒定的电场下电泳。聚丙烯酰胺分离小片段DNA(5-500bp)效果较好,其分辩力极高,甚至相差1bp的DNA片段就能分开。聚丙烯酰胺凝胶电泳很快,可容纳相对大量的DNA,但制备和操作比琼脂糖凝胶困难。聚丙烯酰胺凝胶采用垂直装置进行电泳。目前,一般实验室多用琼脂糖水平平板凝胶电泳装置进行DNA电泳。 琼脂糖主要在DNA制备电泳中作为一种固体支持基质,其密度取决于琼脂糖的浓度。在电场中,在中性pH值下带负电荷的DNA向阳极迁移,其迁移速率由下列多种因素决定:1、 DNA的分子大小。度琼脂糖凝胶中的迁移速率与DNA分子量对数成反比,分子越大则所受阻力越大,也越难于在凝胶孔隙中蠕行,因而迁移得越慢。 2、 琼脂糖浓度 一个给定大小的线状DNA分子,其迁移速度在不同浓度的琼脂糖凝胶中各不相同。DNA电泳迁移率的对数与凝胶浓度成线性关系。凝胶浓度的选择取决于DNA分子的大小。分离小于0.5kb的DNA片段所需胶浓度是1.2-1.5%,分离大于10kb的DNA分子所需胶浓度为0.3-0.7%, DNA片段大小间于两者之间则所需胶浓度为0.8-1.0%。 3、 DNA分子的构象DNA分子处于不同构象时,它在电场中移动距离不仅和分子量有关,还和它本身构象有关。相同分子量的线状、开环和超螺旋DNA在琼脂糖凝胶中移动速度是不一样的,超螺旋DNA移动最快,而开环双链DNA移动最慢。如在电泳鉴定质粒纯度时发现凝胶上有数条DNA带难以确定是质粒DNA不同构象引起还是因为含有其他DNA引起时,可从琼脂糖凝胶上将DNA带逐个回收,用同一种限制性内切酶分别水解,然后电泳,如在凝胶上出现相同的DNA图谱,则为同一种DNA。

  • 关于水中易成凝胶API的溶解度测定

    现在在做一API的pH溶解度曲线,pKA5左右,水中不易溶,易形成凝胶,测定这种物料的pH溶解度曲线,有几个疑问:1.水中溶解度该怎么做呢?加过量原料就成了果冻样的凝胶状。2.已知该药物具有pH依赖性,Ph1.0溶解度最大,其他pH条件下的溶解度很小,对照是使用各自pH条件下的对照液还是可以使用pH1.0条件的对照液,是否需要考虑到溶剂效应或者是不同pH条件下灵敏度的问题?

  • 凝胶渗透色谱GPC学习系列,一

    1、凝胶渗透色谱GPC的概念2、凝胶渗透色谱GPC的原理3、凝胶渗透色谱GPC的用途4、聚合物的各种平均分子量计算 5、凝胶渗透色谱GPC 的仪器组成6、影响凝胶渗透色谱数据置信度的因素分子量的一般定性关系之一: 性质/工艺参数 随MW增加§融化粘度 向上§冲击强度 向上§加工温度 向上§脆性 向上§拉伸能力(纤维) 向下§融流 向下G聚合物的支化度及粘度系数--------------粘度检测器G聚合物的功能基团,如短链支化--------------红外检测器G聚合物的绝对分子量及回转半径------------------激光光散射检测器

  • 凝胶电泳质量的决定因素

    为了使样品分离得快,操作方便,便于记录结果和保存样本,要求凝胶有一定的物理性质,合适的筛孔,一定的机械强度,良好的透明度。这些性质很大程度上是由凝胶浓度和交联度所决定的。1、凝胶度(T%):指100ml凝胶缓冲液中含有的单体和交联剂总克数称为凝胶浓度;2、交联度(C%):交联剂占单体加交联剂总量的百分数为交联度,聚丙烯酰胺凝胶的强度、弹性、透明度、年度和孔径大小均取决于这两个重要参数,当C保持恒定时,凝胶的有效孔径随着T的增加而减少,当T保持恒定,C为4%时,有效孔径最小,C大于或小于4%时,有效孔径变大,C大于5%时凝胶变脆,不宜使用,最常用的为2.6%和3。3、a与b的比例很重要,富有弹性且完全透明的凝胶其比例应在30左右,常用的为29:1T=(a+b)/m*100% C=b/(a+b)*100%a为丙烯酰胺的克数,b为甲叉双丙烯酰胺的棵树,m为缓冲液体积(ml)

  • 凝胶消毒液中乙醇的测定

    [align=right][b]SGLC-GC-054[/b][/align][b]摘要:[/b]本文建立了凝胶消毒液中乙醇的GC测定方法。参照国标GB/T 26373-2020色谱条件并进行优化,采用色谱柱SH-FameWax分析乙醇,乙醇峰形良好,理论塔板数82094,满足检测要求。此方法可为凝胶消毒液中乙醇的含量测定提供参考。[b]关键词:[/b]乙醇 SH-FameWax GC[b]1. 实验部分1.1 实验仪器及耗材[/b]Shimadzu GC-2030[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp][color=#3333ff]气相色谱仪[/color][/url];色谱柱:SH-FameWax(30 m,0.32 mm × 0.25 μm;P/N:R227-36270-01);SHIMSEN Arc Disc HPTFE针式过滤器(P/N:380-00341-05);[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/bp][color=#3333ff]GC-MS[/color][/url]认证样品瓶LabTotal Vial(P/N:227-34002-01);SHIMSEN Pipet[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/9p][color=#3333ff]移液枪[/color][/url]:SHIMSEN Pipet PMII-10(P/N:380-00751-02);SHIMSEN Pipet PMII-100(P/N:380-00751-04);SHIMSEN Pipet PMII-1000(P/N:380-00751-06)。[b]1.2 标准工作溶液的制备[/b]客户提供。[b]1.3 分析条件[/b]色谱柱:SH-FameWax(30 m,0.32 mm × 0.25 μm;P/N:R227-36270-01)升温程序:初始温度35 ℃,保持2分钟,以每分钟5 ℃的速率升温至60 ℃,保持5分钟载气:N2进样口温度:230 ℃分流模式:分流; 分流比:30:1控制模式:恒线速度模式柱流量:1 mL/min检测器:FID,温度:230 ℃进样量:0.2μL[b]2. 实验结果[/b]按照上述色谱条件(1.3)进行采集,标准溶液色谱图如下:[b]供试品溶液[/b][img=SHIMSEN Styra HLB]https://img.shimadzumall.com/Storage//userfiles/images/Img_articles/SGLC-GC-054_01.png[/img][font=arial, &][size=12px][/size][/font][b]重现性[/b]重现性[img=SHIMSEN Styra HLB]https://img.shimadzumall.com/Storage//userfiles/images/Img_articles/SGLC-GC-054_02.png[/img][font=arial, &][size=12px][/size][/font][b]3. 结论[/b]本文建立了凝胶消毒液中乙醇的GC测定方法。参照国标GB/T 26373-2020色谱条件并进行优化,采用色谱柱SH-FameWax分析乙醇,乙醇峰形良好,理论塔板数82094,满足检测要求。此方法可为凝胶消毒液中乙醇的含量测定提供参考

  • 凝胶色谱技术原理及应用

    关键词:中检所网站 中检所标准品 中检所对照品 药检所标准品 药检所对照品 中检所标准物 质药检所标准物质摘要:凝胶色谱技术是六十年代初发展起来的一种快速而又简单的分离分技术,由于设备简单、操作方便,不需要有机溶剂,对高分子物质有很高的分离效果。目前已经被生物化学、分子生物学、生物工程学、分子免疫学以及医学等有关领域广泛采用,不但应用于科学实验研究,而且已经大规模地用于工业生产。   一、基本理论  (一)分子筛效益  一个含有各种分子的样品溶液缓慢地流经凝胶色谱柱时,各分子在柱内同时进行着两种不同的运动:垂直向下的移动和无定向的扩散运动。大分子物质由于直径较大,不易进入凝胶颗粒的微孔,而只能分布颗粒之间,所以在洗脱时向下移动的速度较快。小分子物质除了可在凝胶颗粒间隙中扩散外,还可以进入凝胶颗粒的微孔中,即进入凝胶相内,在向下移动的过程中,从一个凝胶内扩散到颗粒间隙后再进入另一凝胶颗粒,如此不断地进入和扩散,小分子物质的下移速度落后于大分子物质,从而使样品中分子大的先流出色谱柱,中等分子的后流出,分子最小的最后流出,这种现象叫分子筛效应。具有多孔的凝胶就是分子筛。各种分子筛的孔隙大小分布有一定范围,有最大极限和最小极限。分子直径比凝胶最大孔隙直径大的,就会全部被排阻在凝胶颗粒之外,这种情况叫全排阻。两种全排阻的分子即使大小不同,也不能有分离效果。直径比凝胶最小孔直径小的分子能进入凝胶的全部孔隙。如果两种分子都能全部进入凝胶孔隙,即使它们的大小有差别,也不会有好的分离效果。因此,一定的分子筛有它一定的使用范围。综上所述,在凝胶色谱中会有三种情况,一是分子很小,能进入分子筛全部的内孔隙;二是分子很大,完全不能进入凝胶的任何内孔隙;三是分子大小适中,能进入凝胶的内孔隙中孔径大小相应的部分。大、中、小三类分子彼此间较易分开,但每种凝胶分离范围之外的分子,在不改变凝胶种类的情况下是很难分离的。对于分子大小不同,但同属于凝胶分离范围内各种分子,在凝胶床中的分布情况是不同的:分子较大的只能进入孔径较大的那一部分凝胶孔隙内,而分子的可进入较多的凝胶颗粒内,这样分子较大的在凝胶床内移动距离较短,分子较小的移动距离较长。于是分子较大的先通过凝胶床而分子较小的后通过凝胶床,这样就利用分子筛可将分子量不同的物质分离。另外,凝胶本身具有三维网状结构,大的分子在通过这种网状结构上的孔隙时阻力较大,小分子通过时阻力较小。分子量大小不同的多种成份在通过凝胶床时,按照分子量大小“排队,凝胶表现分子筛效应。  (二)色谱柱的重要参数  ⑴柱体积:柱体积是指凝胶装柱后,从柱的底板到凝胶沉积表面的体积。在色谱柱中充满凝胶的部分称为凝胶床,因引柱体积又称“床”体积,常用Vt 表示。  ⑵外水体积:色谱柱内凝胶颗粒间隙,这部分体积称外水体积,亦称间隙体积,常用Vo表示。  ⑶内水体积:因为凝胶为三维网状结构,颗粒内部仍有空间,液体可进入颗粒内部,这就分间隙的总和为内水体积,又称定相体积,常用Vi表示。 不包括固体支持物的体积(Vg)。  ⑷峰洗脱体积:是指被分离物质通过凝胶柱所需洗脱液有体积,常用Ve 表示。当使用样品的体积很少时,(与洗脱体积比较可以忽略不计),在洗脱图中,从加样到峰顶位置所用洗脱液体积为Ve。 当样品体积与洗脱体积比较不能忽略时,洗脱体积计算可以从样品体积的一半到峰顶位置。当样品很大时,洗脱体积计算可以从应用样品开始到洗脱峰升高的弯曲点(或半高处)。  二、凝胶的种类及性质  (一)交联葡聚糖凝胶(Sephadex)  ⑴Sephadex G交联葡聚糖的商品名为Sephndex,不同规格型号的葡聚糖用英文字母G表示,G后面的阿拉伯数为凝胶得水值的10倍。例如,G-25为每克凝胶膨胀时吸水2.5克,同样G-200克每克千胶吸水20克。交联葡聚糖凝胶的种类有G-10,G-15,G-25,G-50,G-75,G-100,G- 150,和G-200。因此,“G”反映,凝胶的交联程度,膨胀程度及分部范围。  ⑵Sephadex LH-20,是─Sephadex G-25的羧丙基衍生物, 能溶于水及亲脂溶剂,用于分离不溶于水的物质。  (二)琼脂糖凝胶:  商品名很多,常见的有,Sepharose(瑞典,pharmacia ),Bio-Gel-A(美国Bio-Rad)等。琼脂糖凝胶是依靠糖链之间的次级链如氢键来维持网状结构,网状结构的疏密依靠琼脂糖的浓度。一般情况下,它的结构是稳定的,可以在许多条件下使用(如水,pH4-9范围内的盐溶液)。琼脂糖凝胶在40℃以上开始融化,也不能高压消毒,可用化学灭菌活处理。  (三)聚丙烯酰胺凝胶:  是一种人工合成凝胶,是以丙烯酰胺为单位, 由甲叉双丙烯酰胺交联成的,经干燥粉碎或加工成形制成粒状,控制交联剂的用量可制成各种型号的凝胶。交联剂越多,孔隙越小。聚丙烯酰胺凝胶的商品为生物胶-P (Bio-Gel P),由美国Bio-Rod厂生产,型号很多,从P-2至P-300共10种,P 后面的数字再乘1000就相当于该凝胶的排阻限度。  (四)聚苯乙烯凝胶商品为Styrogel , 具有大网孔结构, 可用于分离分子量1600到40,000,000的生物大分子,适用于有机多聚物,分子量测定和脂溶性天然物的分级,凝胶机械强度好,洗脱剂可用甲基亚砜。  三、实验技术  (一)层析柱 层析柱是凝胶层析技术中的主体,一般用玻璃管或有机玻璃管。层析柱的直径大小不影响分离度,样品用量大,可加大柱的直径,一般制备用凝胶柱,直径大于2厘米,但在加样时应将样品均匀分布于凝胶柱床面上。此外, 直径加大,洗脱液体体积增大,样品稀释度大。分离度取决于柱高,为分离不同组分,凝胶柱床必须有适宜的高度,分离度与柱高的平方根相关,但由于软凝胶柱过高挤压变形阻塞,一般不超过1米。分族分离时用短柱,一般凝胶柱长20-30厘米,柱高与直径的比较5:1─10:1,凝胶床体积为样品溶液体积的 4-10倍。 分级分离时柱高与直径之线为20:1─100:1,常用凝胶柱有50×25厘米,10×25厘米。层析柱滤板下的死体积应尽可能的小,如果支掌滤板下的死体积大,被分离组分之间重新混合的可能性就大,其结果是影响洗脱峰形,出现拖尾出象,降低分辩力。在精确分离时,死体积不能超过总床体积的1/1000。  (二)凝胶的选择 根据所需凝胶体积,估计所需干胶的量。 一般葡聚糖凝胶吸水后的凝胶体积约为其吸水量的2倍,例如Sephadex G-20的吸水量为20,1 克Sephadex G─200吸水后形成的凝胶体积约40ml。凝胶的粒度也可影响层析分离效果。粒度细胞分离效果好,但阻力大,流速慢。一般实验室分离蛋白质采用 100-200号筛目的的Sephadex G-200效果好, 脱盐用Sephadex G-25、G-50,用粗粒,短柱,流速快。  (三)凝胶的制备 商品凝胶是干燥的颗粒使用前需直接在欲使用的洗脱液中膨胀。为了加速膨胀,可用加热法,即在沸水浴中将湿凝胶逐渐升温至近沸,这样可大大中速膨胀,通常在 1-2小时内即可完成。特别是在使用软胶时, 自然膨胀需24小时至数天,而用加热法在几小时内就可完成。这种方法不但节约时间,而且还可消毒,除去凝胶中污染的细菌和排除胶内的空气。  (四)样品溶液的处理 样品溶液如有沉淀应过滤或离心除去,如含脂类可高速离心或通过Sephadex G-15短柱除去。样品的粘度不可大,含蛋白为超过4%,粘度高影响分离效果。上柱样品液的体积根据凝胶床体积的分离要求确定。分离蛋白质样品的体积为凝胶床的1-4%(一般约0.5-2ml),进行分族分离时样品液可为凝胶床的10%,在蛋白质溶液除盐时,样品可达凝胶床的20-30%。 分级分离样品体积要小,使样品层尽可能窄,洗脱出的峰形较好。  (五)防止微生物的污染 交联葡

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