小鼠皮肤黑色素瘤细胞

中国首款针对黑色素瘤、脑癌、神经胶质瘤等恶性肿瘤的硼药完成中试，最快30分钟杀死癌细胞，预计2023年用于临床.

新华社堪培拉10月8日电 （记者王小舒）澳大利亚皇家墨尔本理工大学的研究人员8日说，他们研制的一种肽能杀灭黑色素瘤细胞，将来有望以此为基础开发一种专门治疗皮肤癌的乳霜。 研究人员将这种肽（即氨基酸短链）设计成能模仿黏液瘤病毒蛋白质的活动。此前的研究已表明，黏液瘤病毒能杀灭恶性黑色素瘤细胞。研究人员测试了这种肽的有效性，结果显示，它可以杀灭黑色素瘤细胞而不伤害正常的人类皮肤细胞。 恶性黑色素瘤是致死率最高的皮肤癌。“澳大利亚的黑色素瘤发病率是世界最高的，每年超过1.1万例，”首席研究员塔格丽德·伊斯蒂万博士在声明中说。 目前，治疗恶性黑色素瘤唯一有效的方法是早期诊断，并通过外科手术切除肿瘤及周边可能病变的健康皮肤。研究人员希望随着这项研究的深入，能研发出一种简单有效的治疗黑色素瘤的乳霜。

[size=15px][font=宋体]传统中药粉防己（[/font][font=&]Stephaniatetrandra S. Moore[/font][font=宋体]）是防己科千金藤属草质藤本植物，汉防己甲素（[/font][font=&]Tetrandrine[/font][font=宋体]，[/font][font=&]TET[/font][font=宋体]）是一种从粉防己中提取的天然双苄基异喹啉生物碱，具有多种药理作用，包括对多种癌症具有抑制活性，然而它对黑色素瘤的影响仍不清楚。[/font][font=&][/font][/size] [size=15px][font=宋体]通过体内和体外测定发现[/font][font=&]TET [/font][font=宋体]对黑色素瘤具有抑制作用，机制上，[/font][font=&]SIRT5[/font][font=宋体]是[/font][font=&]TET[/font][font=宋体]的直接靶标，[/font][font=&]TET [/font][font=宋体]通过泛素[/font][font=&]-[/font][font=宋体]蛋白酶体系统导致[/font][font=&]SIRT5[/font][font=宋体]降解，导致随后的[/font][font=&]ROS[/font][font=宋体]积累，进而导致过度的内质网应激和自噬阻断，而过表达[/font][font=&]SIRT5[/font][font=宋体]减弱[/font][font=&]TET[/font][font=宋体]诱导的[/font][font=&]ROS[/font][font=宋体]积累。[/font][font=&][/font][/size] [size=15px][b][font=&][color=#0070c0]1[/color][/font][font=宋体][color=#0070c0]、[/color][/font][font=&][color=#0070c0]TET[/color][/font][font=宋体][color=#0070c0]抑制黑色素瘤细胞的增殖和活力[/color][/font][font=&][color=#0070c0][/color][/font][/b][/size] [size=15px][font=宋体]作者首先使用多种黑色素瘤细胞系评估了[/font][font=&]TET [/font][font=宋体]的抗黑色素瘤作用，发现[/font][font=&]TET[/font][font=宋体]对黑色素瘤细胞具有显著的抗增殖、周期阻滞、促凋亡作用 [/font][/size] [size=15px][b][font=&][color=#0070c0]2[/color][/font][font=宋体][color=#0070c0]、[/color][/font][font=&][color=#0070c0]TET[/color][/font][font=宋体][color=#0070c0]通过诱导细胞骨架解聚诱导阻断的自噬通量[/color][/font][font=&][color=#0070c0][/color][/font][/b][/size] [size=15px][font=&]TET[/font][font=宋体]处理后，在细胞内观察到可辨别的不规则液泡，表明其可能具有诱导细胞自噬的潜力。进一步免疫荧光和[/font][font=&]WB[/font][font=宋体]验证发现[/font][font=&]TET[/font][font=宋体]处理后，自噬通量受损。考虑到到微管和微丝系统在协调自噬体与溶酶体的形成、运输和融合中的关键作用，作者研究了[/font][font=&]TET[/font][font=宋体]是否扰乱了它们的正常结构。结果表明，[/font][font=&] TET[/font][font=宋体]破坏了它们在黑色素瘤细胞内的结构完整性。这些发现表明[/font][font=&]TET[/font][font=宋体]诱导的细胞骨架解聚有助于阻断自噬通量 [/font][/size] [size=15px][b][font=&][color=#0070c0]3[/color][/font][font=宋体][color=#0070c0]、[/color][/font][font=&][color=#0070c0]TET[/color][/font][font=宋体][color=#0070c0]通过触发[/color][/font][font=&][color=#0070c0]ER[/color][/font][font=宋体][color=#0070c0]应激诱导自噬[/color][/font][font=&][color=#0070c0][/color][/font][/b][/size] [size=15px][font=宋体]基于[/font][font=&]RNA-seq[/font][font=宋体]信号通路富集分析，作者发现[/font][font=&]TET[/font][font=宋体]促进了未折叠蛋白反应（[/font][font=&]UPR[/font][font=宋体]）。鉴于在大量文献中已经确定了自噬与内质网应激之间的关联，作者验证发现[/font][font=&]ATF6[/font][font=宋体]介导的[/font][font=&]ER[/font][font=宋体]应激激活了[/font][font=&]TET[/font][font=宋体]处理的黑色素瘤细胞的自噬 [/font][/size] [size=15px][b][font=&][color=#0070c0]4[/color][/font][font=宋体][color=#0070c0]、[/color][/font][/b][/size][size=15px][b][font=&][color=#0070c0]TET[/color][/font][/b][/size][size=15px][b][font=宋体][color=#0070c0]导致大量[/color][/font][font=&][color=#0070c0]ROS[/color][/font][font=宋体][color=#0070c0]积累[/color][/font][font=&][color=#0070c0][/color][/font][/b][/size] [size=15px][font=&]RNA-seq [/font][font=宋体]结果中[/font][font=&]ROS[/font][font=宋体]响应途径显著富集，为了揭示[/font][font=&]TET[/font][font=宋体]诱导的[/font][font=&]ER[/font][font=宋体]应激和随之而来的自噬阻断的机制，作者研究了其对[/font][font=&]ROS[/font][font=宋体]的影响，发现[/font][font=&]TET [/font][font=宋体]治疗后线粒体自噬的激活，[/font][font=&]ROS[/font][font=宋体]信号激增。且伴随着[/font][font=&] ROS [/font][font=宋体]水平的激增，[/font][font=&]TET[/font][font=宋体]诱导的细胞死亡、细胞增殖和细胞骨架解聚的抑制以及自噬通量的阻断，都通过用[/font][font=&]ROS[/font][font=宋体]清除剂[/font][font=&]NAC[/font][font=宋体]得到有效挽救[/font][font=宋体] [/font][/size] [size=15px][b][font=&][color=#0070c0]5[/color][/font][font=宋体][color=#0070c0]、[/color][/font][font=&][color=#0070c0]SIRT5 [/color][/font][font=宋体][color=#0070c0]被确定为[/color][/font][font=&][color=#0070c0]TET[/color][/font][font=宋体][color=#0070c0]的直接靶标[/color][/font][font=&][color=#0070c0][/color][/font][/b][/size] [size=15px][font=宋体]接着作者采用[/font][font=&]Pulldown+MS[/font][font=宋体]方法确定了[/font][font=&]TET[/font][font=宋体]的直接靶点，通过整合蛋白质亚细胞定位（线粒体）和[/font][font=&]GO[/font][font=宋体]富集分析，[/font][font=&]SIRT5[/font][font=宋体]成为潜在靶标。进一步作者通过竞争性结合实验、[/font][font=&]CETSA[/font][font=宋体]、[/font][font=&]ITC[/font][font=宋体]实验证实[/font][font=&]SIRT5[/font][font=宋体]与[/font][font=&] TET[/font][font=宋体]的直接结合，分子动力学模拟[/font][font=&]1[/font][font=宋体]揭示了[/font][font=&]SIRT5 [/font][font=宋体]和[/font][font=&] TET [/font][font=宋体]之间的结合模式。此外，作者发现[/font][font=&]SIRT5 [/font][font=宋体]在黑色素瘤组织中表现出表达增加，与患者预后不良相关，且[/font][font=&]TET [/font][font=宋体]通过泛素蛋白酶体系统下调了黑色素瘤细胞中[/font][font=&]SIRT5[/font][font=宋体]的表达。 [/font][/size] [size=15px][b][font=&][color=#0070c0]6[/color][/font][font=宋体][color=#0070c0]、[/color][/font][font=&][color=#0070c0]TET [/color][/font][font=宋体][color=#0070c0]以[/color][/font][font=&][color=#0070c0] SIRT5 [/color][/font][font=宋体][color=#0070c0]依赖性方式阻碍体内黑色素瘤的生长[/color][/font][font=&][color=#0070c0][/color][/font][/b][/size] [size=15px][font=宋体]为了验证[/font][font=&] SIRT5 [/font][font=宋体]在[/font][font=&] TET [/font][font=宋体]诱导的黑色素瘤细胞死亡中的作用，作者构建了[/font][font=&] SIRT5 [/font][font=宋体]敲低和过表达细胞，发现[/font][font=&]SIRT5[/font][font=宋体]过表达逆转了[/font][font=&]TET[/font][font=宋体]诱导的黑色素瘤细胞线粒体损伤。最后通过动物模型发现，[/font][font=&]TET[/font][font=宋体]治疗抑制了肿瘤体积和重量，并抑制了[/font][font=&]SIRT5[/font][font=宋体]水平，而在黑色素瘤细胞中过表达[/font][font=&]SIRT5 [/font][font=宋体]后[/font][font=&]TET [/font][font=宋体]未能抑制增殖和致瘤能力[/font][font=宋体] [/font][/size] [size=15px][b][font=宋体][color=#0070c0]总结[/color][/font][font=&][color=#0070c0][/color][/font][/b][/size] [size=15px][font=宋体]研究表明[/font][font=&]TET[/font][font=宋体]有效地靶向[/font][font=&]SIRT5[/font][font=宋体]，诱导[/font][font=&]SIRT5[/font][font=宋体]蛋白降解，进而导致线粒体功能障碍，表现为线粒体肿胀、线粒体自噬和[/font][font=&]ROS[/font][font=宋体]生成。研究表明[/font][font=&]TET [/font][font=宋体]是一种很有前途的治疗黑色素瘤的治疗剂[/font][/size]