控温精度不一样,前者精度要求很高,大约正负0.1度,后者正负1度! 1.生化培养箱主要用于生化反应的孵化,所以它们的门主要由玻璃组成,用于在特定温度孵化反应,操作者可在不破坏反应条件的前提下在外观察反应的变化;亦可用于细菌霉菌与控制菌的培养. 2.霉菌培养箱与生化培养箱大体相同,其区别在于多了一个灭菌开关,用于杀灭霉菌的孢子; 3.恒温恒湿培养箱主要用于培养细菌和控制菌,正如其名,其密封性好,温度和湿度都是可控恒定的,但不便于在外观察; 使用生化培养箱进行细菌培养,大家都这样的1.生化培养箱主要用于生化反应的孵化,所以它们的门主要由玻璃组成,用于在特定温度孵化反应,操作者可在不破坏反应条件的前提下在外观察反应的变化;亦可用于细菌霉菌与控制菌的培养. 2.霉菌培养箱与生化培养箱大体相同,其区别在于多了一个灭菌开关,用于杀灭霉菌的孢子; 3.恒温恒湿培养箱主要用于培养细菌和控制菌,正如其名,其密封性好,温度和湿度都是可控恒定的,但不便于在外观察;
培养箱是培养微生物的主要设备,可用于细胞培养的细菌传播的主要设备将由发展。一个特定的温度,湿度,气体和控制,护理和细胞,细菌和微生物在人工环境事业发展的原则,人工繁殖的方法将适用。直接电动式保健,儿童保健和二氧化碳培养箱:孵化器是目前使用的是分为三种类型。 (一),电力和水 - 托儿 电力和水 - 通常是石棉或金属外壳喷漆孵化器,由获奖孵化器真皮内饰铜层间水,电,石棉或玻璃棉夹心型孵化器的建立是作为绝缘材料,所以内部温度恒定,自动控制和使用热效应,温度控制器顶部苗圃温度计可以改善。苗圃水被加热方式电加热加热水,电动式护理和空气对流,使用,使导线中的内部温度和热量直接使用。 根据所需的温度电源后,红灯在打击肠道蠕虫在下次战斗中,幼儿,光,于正面温度控制旋钮,转动旋钮到所需的大小,温度和红灯达到要求的温度,内部温度和温度控制器可靠的自动控制已达说。 孵化器的使用和维护: (1)删除从文化或热空气对流,温度波动的项目,因此要避免需要关闭的大门,豆芽不应该放在里面。 (2)电动式孵化器湿度,保持一定量的水,必须放在一个容器。 (3)水 - 一首水,电孵化器,一如既往,水,多余的时间应该指出的是,水位确定。 (4)以风的顶部适当的螺丝应使用电热孵化器,以调整促进箱内温度。 (b)儿童保健 电气孵化器跟踪记录您的加热和冷却压缩机安装。因此,范围更广泛,因为一年四季可以保持在一个恒定的温度,可应用于大。 由于压缩机的安装,使用的幼儿和类似电器维修类型。,在冰箱以使他们保持稳定,以维持电压的考虑,随着时间的推移anha散热器斜坡我会尽量清理灰尘。 (周)的二氧化碳日间护理 碳二氧化碳培养箱培养微生物,主要是为了适应环境,二氧化碳,加盟,改善了一般文化的基础。主要是组织文化和一些特殊微生物的培养使用。 二氧化碳培养箱培养箱1.CO2安装和运行调试前面板,电源开关板,自动调温器(手动和液晶显示面板),二氧化碳注入开关,二氧化碳控制旋钮,旋钮调节湿度和温度显示板,二氧化碳和湿度显示屏显示面板,以及(二氧化碳含量出现在内部显示面板,以确定是否盒用于提取的样品)二氧化碳报警样品孔(或温度警示灯)。 (一)一个被认为是站在这里,除了热源温度相对稳定,防止微生物污染的孵化器。 (2)电力,根据护理的指示这样做,(一定量的水,通过增加消毒剂最好的参考手册)应添加一台机器可以刻录一些水。 (3),一定量的水,警示灯,补充后,如果你想停止增加加热水的温度控制器,电源开关,现在是时候开始。 (4)温度比随温度警示灯及警报会自动停止加热后所需要的温度,达到所需温度。 (5),液体或气体二氧化碳的歌曲不管是管的二氧化碳气体,以确保畅通不能太变量可以不管那种。一般情况下,二氧化碳气瓶,压力控制,可用于连接到表中。 (6)重复超过5分钟调整到0.00显示了传输二氧化碳,因此调节旋钮旋转零下的温度和湿度稳定在会议厅内的二氧化碳含量(通常需要三天)板,显示屏上的读数稳定面板。二氧化碳的浓度(非喷射火),所需浓度达到设定值后,交换机的浓度(光),开放式的二氧化碳至少10分钟值。二氧化碳,控制器自动调整的内容框。 (7),与湿度控制旋钮,则湿度二氧化碳培养箱,然后自动调节湿度,湿度,湿度调节训练和湿度需要转动旋钮,调整第一次发言。 2。孵化器的关注 (1)照顾这对人的管理在开关板负责,操作和内部温度,二氧化碳和湿度的变化影响,一旦扭旋钮不是免费的,安全的这样做,调整,减少灵敏度这台机器。 (2)更多的水必须是蒸馏水或去离子水,以防止腐蚀矿物生产积累的坦克。水每年必须改变。经常检查是否足够的水里面。 (3)框杀菌剂定期,你可以删除架清理作为测试结果的清洗和消毒失败,其他为防止微生物污染的消毒剂。 (4)除日常维护更多 - 温度安全装置,防止过热。方法来监测按下报警按钮,或温度报警声音,然后把螺丝关闭超温安全灯。 (5)如果你不使用这个词,以二氧化碳,二氧化碳,避免错误,您应该把二氧化碳调节器。 (6)不同的是过滤器传感器的灵敏度降低二氧化碳和污染,应使用纯二氧化碳。 (7)中的湿度控制在箱子里没有幼儿园在水在容器底部的二氧化碳,以维持稳定的方块。
培养箱 ...........培养箱是培养微生物的主要设备,培养箱可用于细胞培养的细菌传播的主要设备将由发展。一个特定的温度,湿度,气体和控制,护理和细胞,细菌和微生物在人工环境事业发展的原则,人工繁殖的方法将适用。直接电动式保健,儿童保健和二氧化碳培养箱:孵化器是目前使用的是分为三种类型。 (一),电力和水 - 托儿 电力和水 - 通常是石棉或金属外壳喷漆孵化器,由获奖孵化器真皮内饰铜层间水,电,石棉或玻璃棉夹心型孵化器的建立是作为绝缘材料,所以内部温度恒定,自动控制和使用热效应,温度控制器顶部苗圃温度计可以改善。苗圃水被加热方式电加热加热水,电动式护理和空气对流,使用,使导线中的内部温度和热量直接使用。 根据所需的温度电源后,红灯在打击肠道蠕虫在下次战斗中,幼儿,光,于正面温度控制旋钮,转动旋钮到所需的大小,温度和红灯达到要求的温度,内部温度和温度控制器可靠的自动控制已达说。 孵化器的使用和维护: (1)删除从文化或热空气对流,温度波动的项目,因此要避免需要关闭的大门,豆芽不应该放在里面。 (2)电动式孵化器湿度,保持一定量的水,必须放在一个容器。 (3)水 - 一首水,电孵化器,一如既往,水,多余的时间应该指出的是,水位确定。 (4)以风的顶部适当的螺丝应使用电热孵化器,以调整促进箱内温度。 (b)儿童保健 电气孵化器跟踪记录您的加热和冷却压缩机安装。因此,范围更广泛,因为一年四季可以保持在一个恒定的温度,可应用于大。 由于压缩机的安装,使用的幼儿和类似电器维修类型。,在冰箱以使他们保持稳定,以维持电压的考虑,随着时间的推移anha散热器斜坡我会尽量清理灰尘。 (周)的二氧化碳日间护理 碳二氧化碳培养箱培养微生物,主要是为了适应环境,二氧化碳,加盟,改善了一般文化的基础。主要是组织文化和一些特殊微生物的培养使用。 二氧化碳培养箱培养箱1.CO2安装和运行调试前面板,电源开关板,自动调温器(手动和液晶显示面板),二氧化碳注入开关,二氧化碳控制旋钮,旋钮调节湿度和温度显示板,二氧化碳和湿度显示屏显示面板,以及(二氧化碳含量出现在内部显示面板,以确定是否盒用于提取的样品)二氧化碳报警样品孔(或温度警示灯)。 (一)一个被认为是站在这里,除了热源温度相对稳定,防止微生物污染的孵化器。 (2)电力,根据护理的指示这样做,(一定量的水,通过增加消毒剂最好的参考手册)应添加一台机器可以刻录一些水。 (3),一定量的水,警示灯,补充后,如果你想停止增加加热水的温度控制器,电源开关,现在是时候开始。 (4)温度比随温度警示灯及警报会自动停止加热后所需要的温度,达到所需温度。 (5),液体或气体二氧化碳的歌曲不管是管的二氧化碳气体,以确保畅通不能太变量可以不管那种。一般情况下,二氧化碳气瓶,压力控制,可用于连接到表中。 (6)重复超过5分钟调整到0.00显示了传输二氧化碳,因此调节旋钮旋转零下的温度和湿度稳定在会议厅内的二氧化碳含量(通常需要三天)板,显示屏上的读数稳定面板。二氧化碳的浓度(非喷射火),所需浓度达到设定值后,交换机的浓度(光),开放式的二氧化碳至少10分钟值。二氧化碳,控制器自动调整的内容框。 (7),与湿度控制旋钮,则湿度二氧化碳培养箱,然后自动调节湿度,湿度,湿度调节训练和湿度需要转动旋钮,调整第一次发言。 2。孵化器的关注 (1)照顾这对人的管理在开关板负责,操作和内部温度,二氧化碳和湿度的变化影响,一旦扭旋钮不是免费的,安全的这样做,调整,减少灵敏度这台机器。 (2)更多的水必须是蒸馏水或去离子水,以防止腐蚀矿物生产积累的坦克。水每年必须改变。经常检查是否足够的水里面。 (3)框杀菌剂定期,你可以删除架清理作为测试结果的清洗和消毒失败,其他为防止微生物污染的消毒剂。 (4)除日常维护更多 - 温度安全装置,防止过热。方法来监测按下报警按钮,或温度报警声音,然后把螺丝关闭超温安全灯。 (5)如果你不使用这个词,以二氧化碳,二氧化碳,避免错误,您应该把二氧化碳调节器。 (6)不同的是过滤器传感器的灵敏度降低二氧化碳和污染,应使用纯二氧化碳。 (7)中的湿度控制在箱子里没有幼儿园在水在容器底部的二氧化碳,以维持稳定的方块。
体外神经细胞的培养已成为神经生物学研究中十分有用的技术手段。神经细胞培养的主要优点是:(1)分散培养的神经细胞在体外生长成熟后,能保持结构和功能上的某些特点, 而且长期培养能形成髓鞘和建立突触联系,这就提供了体内生长过程在体外重现的机会。(2)能在较长时间内直接观察活细胞的生长、分化、形态和功能变化,便于使用各种不同的技术方法如相差显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、激光共聚焦显微镜、同位素标记、原位杂交、免疫组化和电生理等手段进行研究。(3)易于施行物理(如缺血、缺氧)、化学和生物因子(如神经营养因子)等实验条件, 观察条件变更对神经细胞的直接或间接作用。(4)便于从细胞和分子水平探讨某些神经疾病的发病机制,药物或各种因素对胚胎或新生动物神经细胞在生长、发育和分化等各方面的影响。 我们实验室从80年代始开展了神经细胞的体外培养工作,取得了一些经验,现将培养细胞分类及方法简要介绍如下:一.鸡胚背根神经节组织块培养 主要用于神经生长因子(NGF)等神经营养因子的生物活性测定。在差倒置显微镜下观察以神经突起的生长长度和密度为指标半定量评估NGF的活性。1. 材料和方法 (1)选正常受精的鸡蛋,置于37℃生化培养箱内孵化,每日翻动鸡蛋一次。 (2)取孵化8-12 d 的鸡蛋, 用70% 酒精消毒蛋壳,从气室端敲开蛋壳,用消毒镊剥除气室部蛋壳。(3)用弯镊钩住鸡胚颈部,无菌条件下取出鸡胚置小平皿内,除去头部后,腹侧向上置 灭菌毛玻璃片上,用眼科弯镊子打开胸腹腔,除去内脏器官。(4)在解剖显微镜下,小心除去腹膜,暴露脊柱及其两侧,在椎间孔旁可见到沿脊柱两侧 排列的背根节(图1),用一对5号微解剖镊小心取出。(5)置背根节于解剖溶液内,用微解剖镊去除附带组织,接种于涂有鼠尾胶的玻璃或塑料 培养瓶中,在DMEM无血清培养液中培养。2. 结果鸡胚背根神经节在含神经生长因子(NGF, 2.5S,20ng/ml)的无血清培养液中培养24 h,神经节长出密集的神经突起。而未加NGF的神经节培养24 h, 未见神经突起生长。二.新生大鼠、新生小鼠及鸡胚背根神经节分散细胞培养背根神经节(DRG)细胞起源于神经嵴,NGF研究先驱Levi-Montalcini的实验表明,外原性NGF能刺激DRG细胞生长发育并形成广泛的神经网络。在体外,分离培养的神经节在NGF存在的情况下,神经突起的生长在一天之内可长达数毫米,因此,利用培养的DRG细胞,进行轴突生长发育的研究,是最为经典而常用的方法之一。
骨髓间充质干细胞总结 2003年8月,为给大家提供一个网上交流干细胞研究经验的平台,我们干细胞版设立了骨髓间充质干细胞培养讨论区,经过近三个月的讨论学习,我们既学习丰富了自己的知识体系,也对间充质干细胞尤其是分离培养方面有了更为详实的认识,为了大家阅读的方便,我们决定把本版中的相关内容,同时参考部分书目和文献,做一总结。一、骨髓间充质干细胞的分离 目前常用的分离MSC的方法有全骨髓法和密度梯度离心法,全骨髓法即根据干细胞贴壁特性,定期换液除去不贴壁细胞,从而达到纯化MSC的目的。密度梯度离心法即根据骨髓中细胞成分比重的不同,提取单核细胞进行贴壁培养。随着对MSC表面抗原认识的深入,有人利用免疫方法如流式细胞仪法、免疫磁珠法等对其进行分离纯化,但经过流式或磁珠分选后的细胞出现了增殖缓慢等一些问题,加之耗费较大和技术的难度,在某种程度上限制了这些方法的广泛应用。1. 直接培养法(全骨髓培养法) 1987年,Friedenstein等发现在塑料培养皿中培养的贴壁的骨髓单个核细胞在一定条件下可分化为成骨细胞、成软骨细胞、脂肪细胞和成肌细胞,而且这些细胞扩增20-30代后仍能保持其多向分化潜能,这类细胞即为骨髓间充质干细胞(BMSC),其工作对今后MSC的研究具有重要意义,不仅证实了骨髓MSC的存在,而且创建了一种体外分离和培养MSC的简便可行的方法,得到了广泛的应用。culture-spirit采用直接贴壁法,24-36小时首次换液,换液时用PBS洗两次,7-10天传第一代,以后2-3天传代。培养基采用Hyclone的DMEM/F-12(1:1),血清是天津TBD的FBS(顶级),得到了较好的培养结果。布兰卡根据自己培养大鼠MSC的经验,详细介绍了实验步骤:(1)接种后60-80分钟,换液去除悬浮细胞(2)原代培养24 h,48 h各换液一次(3)观察细胞情况,在原代培养7天左右时,如观察到成片的典型形态的细胞,在瓶底用Marker笔标记,0.25%胰酶消化,镜下观察控制,约5-10分钟(室温太低时应放置到孵箱中),加入全培养基终止消化,瓶体朝上,吸管轻轻吹打4-8分钟,尤其是标记部位。不要用力吹打,以免把贴壁较牢的成纤维细胞,上皮样细胞吹打下来。(4)传代到新瓶中,加入少量培养基,孵箱静置20-30分钟后,MSC大多牢固贴壁。瓶底朝上,轻轻吹打,丢弃悬浮以及贴壁不牢的细胞(大多是上皮样细胞),加入全培养基开始传代培养,如观察仍有较多杂细胞,可重复上述步骤。(5)经上述处理后,原代的那瓶细胞仍有一些MSC生长,可继续按原代培养,如观察到MSC的克隆,仍可按上述步骤纯化处理。(6)原代或传代的细胞如观察的少量成片的杂细胞,可直接镜下瓶底标记后,超净台里用长吸管尖端机械刮除,吸出去掉。菊花与刀用的是全骨髓培养法,直接用含10%的FBS培养基冲洗大鼠的股骨和胫骨,为了避免冲起许多气泡应缓慢冲,冲的次数不应太多。冲洗后不用离心直接接种在培养瓶里,48 h~72 h后首次换液,一般7~10天可传代。天之饺子介绍的小鼠MSC的分离方法:取6 w小鼠的股骨和胫骨,直接用含培养基冲出骨髓,一定要尽量把干垢端的骨髓冲干净。冲洗后不离心直接接种在培养瓶里,24-48 h后去悬浮,再接下来的每3-4天换液一次,直到需要传代。2. 密度梯度离心法 裴雪涛等用比重为1.073 g/ml的percoll分离(400 g×20 min)人骨髓MSCs,取界面处细胞层,离心后洗涤以2×105/cm2的密度接种,72 h后更换培养液,弃掉未贴壁细胞,以后每3 d换液一次。细胞长到80%汇合时1:1传代。菊花与刀利用PERCOLL密度1.073分离大鼠MSC 时,用2400 rpm×20 mins后可见中间有一层约1~2 mm厚的白色层,仔细用吸管吸取这一层再用PBS离心2遍即可加培养基和胎牛血清培养即rMSCs。周进明等利用密度为1.082的percoll分离小鼠MSCs,500g×30min离心后,取中间的单个核细胞层,PBS洗两次,接种于IMDM培养基,1 d后换液,去掉非贴壁细胞,以后每3-4天换液。jetter用过FICOLL,FERCOLL,上海二分厂的淋巴细胞分离液分离MSC细胞效果都不错,当然所获细胞群的纯度不一,Percoll最纯,而上海二分厂的淋巴细胞分离液所获细胞群的传代能力优秀(35 PASSAGE)。本版的部分园友认为MSC贴壁培养得到的细胞不均一,但是多能分化能力和增殖力好,percoll分离得到的细胞较为均一,多能分化性和增殖力不如贴壁培养的,尤其是增殖力相差很远,有人添加bFGF或/和表皮生长因子发现可以增强增殖能力。二、骨髓间充质干细胞的培养 天之饺子认为,间质干细胞的培养一定要用塑料培养瓶,不能用玻璃的。因为象间质干这类的基质细胞不易贴玻璃,而且现在买的进口好品牌的培养瓶都涂有一层促细胞贴壁的物质,多数园友培养时都添加10-15%胎牛血清。分离培养结果的差异可能是由于各个研究小组标本来源、采用的分离方法不同从而所获得的细胞不同,或者用来检测的细胞代数不同,或者培养过程中用的胎牛血清不同,导致MSCs获得或失去这些表面标记物的表达。三、骨髓间充质干细胞的特性 体外培养的MSC体积小,成梭形,核浆比大。不表达分化相关的细胞标志,如I、II、III型胶原、碱性磷酸酶或Osteopontin;也不表达SH2、SH3、CD29、CD44、CD71、CD90、CD106、CD120a、CD124、CD166和多种表面蛋白,这群细胞特性稳定,扩增一代和两代后的细胞同质性分别达到95%和98%。MSC联系传代培养和冷冻保存后仍能具有多向分化潜能,而且保持正常的核型核端粒酶活性,但不易自发分化,在体外特定的诱导条件下,MSC可以分化为骨、软骨、脂肪、肌腱、肌肉、神经等多种细胞。四、其他相关内容 Jiang将从成人以及成年大鼠和小鼠骨髓分离的间充质干细胞(CD45-TER119-)命名为多潜能成年祖细胞,他们证明,MAPC高表达端粒酶,而且随着细胞的扩增,端粒的长度不变,单个MAPC来源的细胞群不仅能在体外向3个胚层的细胞分化,而且能在体内能够向各种组织细胞分化,相比较而言,形态与MSC相似的体外培养的皮肤成纤维细胞则不具有类似的分化潜能。参考文献 生理学报2003.55(2):153-159 人骨髓间充质干细胞在成年大鼠脑内的迁移及分化中华放射医学与防护杂志.2002,22(3).-167-169 培养小鼠骨髓间充质干细胞及其移植后在体内的定位分布Exp Biol Med Vol. 226:507 520, 2001 Mesenchymal Stem CellsNATURE |VOL 418 | 4 JULY 2002 Pluripotency of mesenchymal stem cells derived from adult marrow干细胞生物学 裴雪涛 主编
市场上供应的大多数培养液的配方非常接近,这使得细胞很容易适应新的培养液。这里我将详细介绍一个方法,这个方法是保守的,在大多数情况下可以进行删减一些步骤。最简单最节省时间的情况是把细胞直接分装到新的培养液中,观察几代以保证细胞的生长参数是可以接受的。这个方法适于悬浮细胞,不过也很容易扩展到贴壁细胞。细胞的生长参数1. 翻倍时间( Doubling Time )细胞的翻倍时间在评价昆虫细胞健康程度的参数中是最容易测量的。翻倍时间应该在细胞处于对数期复制时测量,对于 Sf9 和 Sf21 细胞来说通常是介于 16-24 小时之间,不过大多数在 20-22 小时。dt=t × ln2/ln(Ct/Co) ,其中 dt 为翻倍时间, Co 为起始细胞数目, Ct 为经过时间 t 后的细胞数目, t 为 Co 和Ct 两次计数之间的间隔时间,所有的时间都以小时为单位。2. 细胞大小( Cell Size )细胞的大小是监测细胞健康程度的一个非常有用的参数。如果细胞是健康的,细胞的大小均一,都处于该细胞株体积正常变化范围的下限。细胞的大小在不同的细胞株变化是很大的。对于我用过的 Sf9 和 Sf21 ,典型的直径是 16-18 m m ,不过我知道有些细胞株小至 14 m m 或者大至 19 m m 仍然很健康。3. 滞后期( Duration of Lag )当细胞的密度较低时,会有一个滞后期,其长短取决于分装或者传代后细胞的密度。一般说来,该密度越低,滞后期越长。对于一个特定的细胞株来说,当这个密度高出一个阈值时,滞后期的长短与密度无关;而低于一个阈值时,滞后期无限长,细胞不再增殖。4. 低密度分装极限( Low Density Split Tolerance )能够在一个较短的滞后期(小于 12 小时)复苏的细胞形状较好。不过这是细胞株的特性,需要进行实验来确定你的细胞株的密度极限。我的细胞株有些在分装成密度为 5 × 104 细胞 /ml 时仍然可以很好复苏,有些细胞株分装成 5 × 105 细胞 /ml 就不能复苏了。5. 高密度极限( High Density Maximum )这是你的细胞能生长的最大密度,高于这个密度你的细胞将进入平台期。这个指标既和细胞株有关,又和使用的培养液有关。我建议先把你的细胞株培养至平台期,然后把一些分装到新鲜的培养液中以后,使剩下的继续生长至平台期,同时密切监测细胞状况。一般来说,细胞的培养要避免密度超过高密度极限的 80% 。对于我培养的细胞,这个极限值从 2 × 106 至 12 × 106 细胞 /ml 不等。实验步骤第一阶段:1. 准备合适体积的由 25% 体积新培养液和 75% 旧培养液(即细胞原先适应的培养液)组成的混合培养液 I。2. 将细胞以通常分装时使用的最低分装密度的两倍分装到混合培养液 I 中。3. 使细胞生长到通常培养时的较高密度,监测细胞生长参数。4. 继续以步骤 2 中的密度分装细胞到新鲜的混合培养液 I 中,直到生长参数达到可以接受的水平。有时候分装一次就可达到要求。5. 一旦细胞稳定下来,以通常使用的最低分装密度分装细胞至新鲜的混合培养液 I 中,同样监测细胞参数。6. 细胞达到较高密度后,继续以步骤 5 中的分装密度把细胞分装到新鲜的混合培养液 I 中,直到细胞的生长参数达到可以接受的水平。7. 如果细胞恢复到正常状态,进行第二阶段的实验。8. 如果细胞不能达到正常状态,新培养液可能不适于培养这种细胞。9. 如果细胞在新培养液中的生长参数达到平衡状态,虽然与正常状态不同,但是可以为实验接受,也可进行第二阶段的实验。第二阶段:1. 准备适量的由 50% 新培养液和 50% 旧培养液组成的混合培养液 II 。2. 将细胞以两倍最低分装密度分装至混合培养液 II 中。3. 如第一阶段一样,监测细胞生长指数,使细胞达到稳定状态。然后将分装密度降到最低分装密度,再使细胞达到稳定状态。第三阶段:步骤同第一阶段和第二阶段,使细胞适应混合培养液 III ( 75% 新培养液和 25% 旧培养液)。第四阶段:1. 步骤同第一阶段、第二阶段和第三阶段,使细胞适应新培养液。2 . 当细胞在新培养液中达到稳定后,监测细胞的生长指数,看是否波动过大。
这款[b][url=http://www.f-lab.cn/anaerobic-chambers/bactron900.html]厌氧培养箱BACTRON900-2[/url]是美国Shellab专业为[b]临床微生物学[/b]和[b]厌氧微生物检测设计的微生物厌氧[/b]培养箱,[/b]可以进行[b]样品无氧制备[/b]、无氧培养和无氧检验。配有厌氧罐和厌氧袋为实验人员提供完善的[b]厌氧环境[/b],是进口[b]厌氧培养箱品牌中[b][b]厌氧培养箱[/b]价格合理的[b]厌氧培养箱。[/b][/b][/b][img=厌氧培养箱]http://www.f-lab.cn/Upload/BACTRON900-2.jpg[/img][b][url=http://www.f-lab.cn/anaerobic-chambers/bactron900.html][b]厌氧培养箱BACTRON900-2[/b][/url]特色[/b]无结露环境湿度控制系统。由高回弹材料制成的腔室。包括6个培养皿架。舱内压力管理系统和压力计。节省空间的旋转货架设计。[b]厌氧培养箱BACTRON900-2规格[/b]cUL, CE标准.尺寸(WxDxH)(cm):外部,124x82x69.9 内部,83.8x72.4x63.5 气锁(access),22.9x27.9x22.9 孵化箱,68.1x23.5x21.1 体积(L):外部,710.3 内部,346.4 气锁,17.3 固化箱,33.7 重(Kg):218 [color=#636466][b][color=#000000]更多厌氧培养箱:[/color][/b][color=#000000][url]http://www.f-lab.cn/anaerobic-chambers.html[/url][/color][b][/b][/color]
光照培养箱的操作规程1,培养箱电源,强大的电源开关,所有电源,打开电源指示灯。 请,智能数字式温度控制2热设置,请参阅的说明。3,在照明灯的开关。光孵化器|孵化永久性汽车|智能汽车孵化器,保持和发展:1,培养牢固的房屋接地。2,孵化阴凉通风,干燥的地方,远离热源和阳光,应包括在内。固定的地方,以避免震动噪音。3,提供有效的冷却冷凝器,冷凝器应不超过100毫米,墙壁之间的距离。下来的差距方面,50mm的机顶盒必须至少300毫米的空间。使用,维护,4孵化器摇摆振动,避免碰撞,最大坡度45度。5检查车辆的电力供应突然燃烧状况,以及(在我),检查保险丝管,不起作用。6,孵化冷却操作,不高于25环境温度之间的温差度。光孵化器|孵化永久性汽车|智能钥匙功能台灯孵化温度控制1,本周期的关键点:经济周期,目前的经营周期,或显示为展示和国有28-2系列段数出来的关键环节在两秒钟,然后点击按钮来切换。2,设置查询按钮。然后按一下按钮,查询目前的运行,然后在设定的时间,格鲁吉亚的一部分,设定温度设定,按下此按钮退出按钮,28-2状态进入一个选择查询的选定章节在国家完成部分数,点击“进入调整状态决定段,参数的状态设置,按设置和查询关键28-2,国家和出口点(一期,每次运行该程序,设置为0比0)决定三键减少:安装选项,按一下按钮,以指示在一个减号按钮来调整值持续下降的重要性;4,关键不断增长,增加值设置,按一下按钮来设置该值,加上按设定的参数;5,在回(回)选项按一下按钮,在以前的设置(该设置只到同一个点)返回。报警铃,“按下静音键。停止模式可以再次运行的4S控制器按钮的第一段。6,培养箱温度设定(温度)按钮:按一下就在媒体将这个国家重点28-2内部设置的主要参数内部,可以选择退出,然后按一下28-2。7,光按钮:单击此按钮,在室内灯光。8,培养箱电源按钮:单击此按钮,关闭控制器进入或工作。每个州套,30秒内没有按下按钮,程序将自动完成正常。步骤点(晚上)照明控制的12所要求的水平0温度10℃,例如,工作时间,设备,10年4至12小时,20℃温度控制的研究第一(日)第2条光强周期每个周期段应工作。答:进入2秒钟,建立国家,按周期时间窗口更改关键字“∧”或关键字“∨”可以增加闪烁减少“10”设置,然后按住输出周期。在选定的国家建立分部进入灯光的数量,创造一个集/请求,点击按钮2秒钟。周期窗口:“CH”的,时间窗口在闪烁设置关键字“∧”段数,关键字或“∨”减少是增加的“2”。点击此按钮,进入了国家有关部门的查询参数。串行窗口显示在窗口中加载时间闪烁的“01”的第一段,关键单词“∧”或关键词,更改第一个12后的窗口分钟的提问时间,然后点击设置“∨”增加,减少闪光灯设置按钮,关键字“∧ “光加闪光的查询窗口,点击关键字或”∨“切第一段改变照明,温度窗口,在内存中的第一套控制温度为20℃,按设置按钮,改变4级设置为0分钟为查询设置,第二段,按12小时0分钟,第二个段落,10℃温度设定时间,光照强度设置将继续进入的标志是0。毕业后的热量通过创建第二点,点击查询按钮,然后返回该参数的第一个段落。要退出,按下查询按钮,并设置28-2。控制器我们很抱歉地根据用户的喜好来说,控制器的工作位置参数,包括运行。运行时间周期与指令的窗口希望计数,显示累计时间,以小时,分分钟的时间窗口,显示在第二个窗口,等等闪光,温度显示窗口,显示当前测量了美国的价值,目前的输出窗口,光线照明。当程序会自动运行后,在第二段的第一次工作切换。对于第二点的时间周期,加上一个循环作业,成品。工作周期的创作计划,该计划完成时自动,温度,窗口,“结束”,铃声30年代,running're对不起,但所有的结果了。在这一点上,按返回键或关闭状态控制器,4S的,按电源按钮。
厌氧培养箱简介该培养箱是一种可在无氧环境下进行细菌培养及操作的专用装置,可培养最难生长的厌氧生物,又能避免往厌氧生物在大气中操作时接触氧而死亡的危险性。 结构特点: 该产品由恒温培养室、厌氧操作室、取样室、气路及电路控制系统、箱架、瓶架、熔蜡消毒器等部分组成。设备具有以下主要 特点: ※ 使用科学先进手段达到高精度、恒温的厌氧环境,便于操作者在厌氧环境中进行操作和对厌氧菌培养。 ※ 温控采用微电脑智能控温仪,能准确直观地反映箱内实际温度,加上有效的限温保护装置,安全可靠。 ※ 箱内装有紫外线杀菌灯,气体经过滤后进入箱内,可有效地避免细菌污染。 ※ 气路装置,可任意调节流量,能任意输入各种所需气体。 ※ 操作室均由不锈钢板制成,其前窗采用厚透明耐冲击特种玻璃板制成,操作使用专用手套可靠舒适、灵活,使用方便。 ※ 操作室内备有特殊接种棒灭菌器,并附设有试管架、熔蜡消毒装置,还装有除氧催化器。 技术指标 取样室形成厌氧状态时间 12小时 培养室使用温控范围 室温 +3~50℃ 培养室温度波动 ±0.3℃ 培养室温度均匀性 ±1℃ 电源/功率 220,50Hz/600W 净重/毛重(Kg) 240/320 培养室内尺寸(cm) 25×19×29 操作室尺寸(cm) 90×65×65 外形尺寸(cm) 132×75×140 包装箱尺寸(cm) 145×94×158
微生物培养的仪器问题对于微生物的研究,拥有大量的实验材料是十分必要的,这就需要进行微生物的培养。而且,对于某些微生物病原体的检测,也是需要进行微生物的培养。所以微生物培养用的培养基的制作也就成为了最基本的实验技术。 然而现今培养基已经可以工业化生产,技术也比较成熟,也就对培养基不是那么重视了。常识性的,培养基分为天然的(Defined Media)和合成的(Complex Media) 。天然培养基是提供接近于微生物生长的自然环境的营养物质,然而为此付出的代价是我们并不完全清楚其中的物质的组成或其含量,这种培养基可以用于实验用基本培养基和生产,但在作某些实验时得到的数据会不稳定。合成的培养基是用多种高纯化学试剂配制成的,各种成分和含量都是已知的。虽然制作成本高,也很烦琐,但成分精确,重复性强,用于对于营养、代谢、生理生化特性的研究等要求较高的工作。然而可以在这种微生物培养基上生长的微生物十分有限,原应是许多微生物的生长代谢我们并不完全了解,无法配出微生物满意的营养基质。现在的微生物培养技术已经相当成熟了,然而其中总有令人不满的地方。比如,无论何时空气中总有微生物,无论是制作培养基过程中还是将微生物接种到培养基上时总会和空气接触,很容易想到不久后长出的菌落到底是谁的,样品的?还是空气的?这些也许是无法避免的,但确实会带来很多麻烦。整个过程充满着失败的可能性,没有先进的仪器设备就无法降低这种可能性,对于研究这种时时处处在身边的小东西我们总显得有点力不从心。用铁丝接种环划线就很容易弄坏培养基,更别说分离出单菌落了。这需要经验和技术,对于一个研究微生物的人来说本不该去关心的经验和技术。前人也许是这样的,但我们未必也需要这样。对于无法用肉眼观察的东西,研究和培养是很困难的,尤其是没有先进的仪器设备的时候,那种痛苦是可想而知的。我们现在用的固体培养基大都是用琼脂。在琼脂发现以前,想要做细菌的纯培养是非常困难的,那时候只有液体培养基,根本无法进行纯培养。后来用凝胶培养基,但很多细菌都无法在基质上正常生长,直到琼脂被用来做固体培养基的基质,才解决了这个难题。应为琼脂是多聚糖的硫酸盐,其中主要是D-半乳糖,一般微生物很难分解利用它。这在微生物培养上是一次很大的革新。由于材料容易获得,而且本身的特性又很好,所以至今仍在使用。然而,微生物的培养依旧受到很大限制。我们对微生物的了解还不够多,许多微生物的培养只能用天然培养基,这在要求可重复的实验中会带来很大的麻烦;另外,条件的限制导致很多实验都无法达到无菌环境,实验结果有多少是可靠的,很难说明。微生物的培养只是一种手段,但却是一种很重要的手段。虽然只要能说明研究成果就可以了,但在实际操作中也确实有着非常繁琐,难以操作的地方存在,只要做过微生物培养的实验便可以知道,想要做出漂亮的结果是非常困难的,其中需要改进的地方有很多,比如有没有办法就算再不是无菌的环境下也能尽量减少空气中细菌的干扰,可不可以用更柔软的材料做接种环来划线,有没有其他的方法来给涂布棒灭菌。不然实验失败很难找出其中的原因。虽然实验失败的可能性很多,但我们至少应该减少它发生的可能性。微生物培养基是微生物实验必不可少的组成,它以及与它有关的组成构成了微生物培养的装置,这些仪器和操作中的不确定因素太多,这样做出的实验结果是没有说服力的。这些仪器和操作有待于改进。(因为我的基础太差,所以无法指出其中需要改进的地方到底应该改成怎样,但已经明显体会到了这些仪器以及操作的不足之处。)
在过去的数十年间,细胞生物学、分子生物学、药理学等的研究领域都有了惊人的长足进步,同时,这些领域中的技术应用也不得不跟上“脚步”。虽然典型的生命科学实验室设备有了很大的改变,但培养箱依然是实验室中的主要组成部分,其使用的最终目的也都是维持和促使细胞和组织更好地生长。然而,随着技术的进步,其功能和运作都变得越来越精确、可靠和方便。如今,培养箱已成为实验室最普遍使用的常规仪器之一,已广泛应用于医学、免疫学、遗传学、微生物、农业科学、药物学的研究和生产。除此之外高等院校以及各科研院所只要涉及到需要做低温恒温试验、培养试验、环境试验、储藏菌种、生物培养之用时,培养箱自然是不可缺席的重要设备。 在该行业领域中美国VWR、德国Memmert、美国Shellab、德国宾德BINDER、日本三洋SANYO、以及德国Heraeus贺力氏、瑞士Salvis、美国赛默飞世尔科技等公司的产品在国际市场占很大的比重。但近几年随着国内实验室设备企业的励志自主创新,及在新产开发上的投入,使得国产生化设备的发展也日趋快速,优质品牌不断被孵化诞生,如北京中兴伟业,上海荣华仪器等国产品牌。产品广泛应用于国内各大高校及研究科研院所所使用。一、培养箱类别与原理 (1)生化培养箱 目前应用最为广泛的主要有生化培养箱、二氧化碳培养箱、直接电热式培养箱、隔水电热式培养箱四种类型,每种类型都有其特点和独特的功用,以用于不同的科研及教学领域。其中生化培养箱的应用最为普遍,这种培养箱同时装有电热丝加热和压缩机制冷。可适应范围很大,一年四季均可保持在恒定温度,因而逐渐普及,被广泛应用于细菌、霉菌、微生物、组织细胞的培养保存以及水质分析与BOD测试,适合育种试验、植物栽培等,在高校所开设的如环境保护、卫生防疫、药检、农畜、水产等专业都有使用。
对于微生物培养,大家常用的是恒温培养箱、霉菌培养箱、震荡培养箱、恒温水浴箱、发酵罐等,满足了日常工作需要;当然,这都是针对好氧菌而言。 而对于厌氧菌和兼性好氧菌,则需要考虑选用合适的厌氧、微好氧/低氧培养装置(如厌氧培养盒/袋、厌氧罐以及专业的厌氧培养箱、厌氧工作站、微好氧/低氧培养箱、厌氧发酵罐/反应池等)。 常规的动物细胞培养,一般选用CO2培养箱、滚瓶培养装置、悬浮培养装置、生物反应器/细胞培养罐等。为更接近或模拟体内微环境,三气培养箱(即CO2培养箱加配O2传感器)逐渐为人们所熟知!当然,更专业的Biospherix 系列O2/CO2控制器加培养盒、H35微好氧/低氧细胞培养箱、X vivo 一体化细胞工作站等三气培养装置也给大家提供了更多的选择!
请问,陆桥的培养基是不是质量要好一些?怎样识别培养基的质量?
采用高效液相色谱法测定虫草中的核苷类成分,优化后的色谱条件为YMC-Polyamine 柱(250mm × 4.6mm,5μm);采用梯度洗脱,流动相:乙腈- 水(V/V):0~15min 为90:10,15~20min 为86.5:13.5,20~30min 为75:25,30~35min 为70:30;流速:1mL/min;柱温:30℃;检测波长:259nm;进样量:10μL。结果表明:胸腺嘧啶、虫草素、尿嘧啶、腺苷、腺嘌呤、尿苷、鸟嘌呤、次黄嘌呤均能得到较好分离,该方法稳定性好、精密度高、重现性好,适用于虫草中的核苷类成分的分析。经分析发现,蛹虫草子实体核苷类物质组成大致相似,但含量差异非常显著,同时发现蛹虫草培养基残基及固体发酵产物中虫草素含量较高,其他核苷类成分很少,因此认定蛹虫草培养基残基及固体发酵产物是非常优良的分离纯化虫草素的原料。
请问霉菌培养室和常规培养室需要设置二次更衣和缓冲间吗?有洁净度要求吗?
装于试管瓶内的成品固体培养基,在使用前需将其融化。这一融化过程也同样需要确认,以保证培养基的营养成分不会因过度加热而受影响。 一般培养基应只能进行1次蒸汽灭菌处理,否则,重复高温加热会破坏培养基的营养成分。因此,不宜使用蒸汽灭菌柜融化琼脂培养基,宜选用沸水浴或微波炉融化培养基。因沸水浴的温度始终控制在100℃以内,相当安全,但对装量较大的培养基要使融化均匀充分,则加热的时间较长,微波炉融化培养基具有快速的优点。 至少选择3批具有代表性的不同类型培养基,对其融化前后的质量进行对比检查。确认时,应对不同融化法的运行参数(时间和温度)予以明确设定,确认合格后,将其写入相应的标准操作规程中。如果一台设备可以设定多个参数,建议在其最高和最低设定值下分别进行确认试验,以确定正常的使用范围。有关抗生素效价分析用培养基的融化过程确认方法,要参照有效期的确认试验方法进行。
1培养基中丙酮酸钠的作用是什么?答:丙酮酸钠可以作为细胞培养中的替代碳源,尽管细胞更倾向于以葡萄糖作为碳源,但是,如果没有葡萄糖的话,细胞也可以代谢丙酮酸钠。2GlutaMAX-I是什么?培养细胞如何利用GlutaMAX-I?这个二肽有多稳定?答:GlutaMAX-I 即谷丙氨酸二肽,是一个L-谷氨酰胺的衍生物,其不稳定的alpha-氨基用L-丙氨酸来保护。一种肽酶逐渐裂解二肽,释放L-谷氨酰胺供利用。GlutaMAX-I二肽非常稳定,即使在121磅灭菌20分钟,GlutaMAX-I二肽溶液有最小的降解,如果在相同条件下,L-谷氨酰胺几乎完全降解。3二价离子抑制胰蛋白酶活性吗?使用胰蛋白酶时加入EDTA的目的是什么?答:二价离子的确抑制胰蛋白酶活性。EDTA用来螯合游离的镁离子和钙离子,以便保持胰蛋白酶的活性。建议胰蛋白酶处理细胞前,用EDTA清洗细胞,以消除来自培养基中所有的二价离子。4细胞传代消化时所用胰酶浓度越高越好吗?答:不见得!因为胰蛋白酶溶液的消化能力是和溶液的pH、温度、胰酶浓度及溶液中是否含有Ca++, Mg++离子和血清等因素有关。通常情况下pH8.0、温度37oC其作用能力最强。另外,钙、镁离子及血清均能大大降低其消化能力。我们每次进行传代消化前,一定要用D-Hanks液或PBS液冲洗细胞培养瓶,以便于将含血清的培养基冲洗干净,这样就能大大提高消化液的消化能力。通常使用的消化液浓度为:(1)0.05%胰蛋白酶+0.02%EDTA;(2)0.25% 胰蛋白酶 多数细胞传代消化可使用0.25%胰蛋白酶+0.02%EDTA这种消化液。
用微波炉给培养基灭菌,有没有人做过,是不是所有的微生物培养基都可以用。具体操作步骤是怎么样的?
[align=center]双歧杆菌高密度培养的补料培养基及补料方法[/align][align=center]季学猛[/align][align=center](南开大学 医学院, 天津 300071)[/align]摘 要:双歧杆菌在维护宿主健康方面具有重要作用,因此对其高密度培养条件的探索具有重要意义。目前,双歧杆菌的高密度培养主要受到培养基组分和培养条件的优化的影响。这里报道了一种用于双歧杆菌高密度培养的补料培养基及补料方法。该方法使用补料与碱泵耦合的方法进行补料,通过控制发酵培养基的pH值来调节补料培养基的补入量。此外,本研究还进行了补料培养基的优化实验,通过调整氢氧化钠和葡萄糖浓度的比例,比较了不同补料培养基的发酵性能。实验结果表明该补料培养基及补料方法适用于两歧双歧杆菌、青春双歧杆菌、动物双歧杆菌、长双歧杆菌等多种双歧杆菌,而且能够达到较高的活菌密度。本研究提出的补料培养基及补料方法可为双歧杆菌的高密度培养提供有效的解决方案。关键词:双歧杆菌;高密度培养;补料培养基;补料方法;碱泵耦合中图分类号:G482[color=gray] [/color]文献标识码:A[align=center]A supplementary culture medium and supplementation method for high-density cultivation of Bifidobacterium[/align]JI Xuemeng(School of Medicine, Nankai University, Tianjin 300071, China)Abstract: Bifidobacterium plays a significant role in maintaining host health, making the exploration of high-density cultivation conditions crucial. Currently, the high-density cultivation of Bifidobacterium is mainly influenced by the optimization of culture medium components and cultivation conditions. Here, we report a supplementary culture medium and supplementation method for high-density cultivation of Bifidobacterium. The method utilizes coupling of supplementation with an alkaline pump to control the supplementation rate of the culture medium by adjusting its pH value. Furthermore, optimization experiments of the supplementation culture medium were conducted by varying the ratio of sodium hydroxide to glucose concentrations, comparing the fermentation performance of different supplementation culture media. Experimental results demonstrate that this supplementation culture medium and supplementation method are applicable to various Bifidobacterium strains such as Bifidobacterium bifidum, Bifidobacterium adolescentis, Bifidobacterium animalis, and Bifidobacterium longum, achieving high viable cell densities. The proposed supplementation culture medium and supplementation method in this study offer an effective solution for high-density cultivation of Bifidobacterium.Key words: Bifidobacterium high-density cultivation supplementary culture medium supplementation method alkaline pump coupling双歧杆菌广泛分布于动物和人类的肠道中,已经发现双歧杆菌在维护宿主健康方面起着极其重要的作用,双歧杆菌作为益生菌的功能特性已经引起了越来越多的关注[sup][back=yellow][1-3][/back][/sup]。双歧杆菌的益生菌制剂有潜力通过选择和加强有益菌群来调节肠道微生物群的组成和微生物平衡,从而更有利于人体健康。双歧杆菌制剂已被报道能改善肥胖相关特征、缓解便秘和增强免疫力[sup][back=yellow][4-6][/back][/sup]。双歧杆菌已经成为国内外正在快速发展的微生态制剂中的主要菌种之一。努力探索双歧杆菌的高密度生长条件,对于提高该菌的生产效率和应用推广具有重要意义。双歧杆菌的高密度培养条件的摸索主要涉及培养基组分和培养条件的优化。目前,MRS培养基是最常用的双歧杆菌等乳酸菌培养基,被广泛地用于双歧杆菌的发酵中[sup][back=yellow][7][/back][/sup]。双歧杆菌的最适生长 pH 值在 6.0-7.0 之间[sup][back=yellow][8][/back][/sup],然而,由于双歧杆菌发酵过程中会产生有机酸等代谢副产物,导致培养过程中培养基的 pH 值不断地降低,限制细菌的生长[sup][back=yellow][9-11][/back][/sup]。为解除酸等代谢副产物对双歧杆菌生长的限制,一些创新型的发酵培养方法已经被提出,比如细胞周期培养、透析培养、细胞固定培养和嵌入法[sup][back=yellow][12-15][/back][/sup]。然而,这些方法在工业应用中受到了各种因素的限制。目前,分批的发酵罐内恒定pH培养方法仍然是主流,在发酵中通过添加碱性溶液来控制培养基的pH值,以减轻酸性生长抑制。在解除酸性生长抑制后,双歧杆菌的生长还受到渗透压和底物不足的限制[sup][back=yellow][16][/back][/sup]。许多营养物在高浓度下导致的高渗透压对细胞有抑制作用,而为了达到高细胞密度,又必须供给大量的营养物质。因此,为了双歧杆菌培养中有效地利用底物,必须优化培养过程以解决底物浓度和渗透压之间的矛盾。将浓缩营养物以与其消耗速率成比例地加入反应器中是一种有效的解决底物浓度和渗透压之间的矛盾的方法,为此产生了多种形式的补料喂养模型:间歇喂养,恒定喂养和指数喂养[sup][back=yellow][17-19][/back][/sup]。在间歇补料喂养中,通过周期性检查并补充生长基质中的葡萄糖含量达到稳定葡萄糖浓度的目的,然而,这种补料模型决定了必然需要大量人力。而且在对数生长阶段,细菌细胞快速消耗葡萄糖,因此在任何两个测量间隔期间可能发生底物缺乏,可能会导致补料不及时,进而影响细菌的生长。在恒定补料喂养中,饲料介质以恒定的流速持续添加到发酵培养基中。这种方法优点是减少了人力需求。但是,益生菌对葡萄糖的消耗速率不是恒定的,这就导致了低喂养速率可能导致细菌生长的底物不足,而高喂养速率会引起过量底物积累,也会抑制细菌生长。对于指数喂养模型,在益生菌前期生长阶段,指数喂养能够很好的耦合细菌对数生长。然而,在细菌对数生长后期,细菌生长速率趋缓,而流加速率继续指数增加会导致底物浓度迅速增加,进而对细菌菌株的生长能力造成不良影响。因此,指数喂养模型也不是合理的方法。综上所述,在益生菌菌株生长期间,这些方法均不能准确控制生长介质中的葡萄糖含量。目前,针对双歧杆菌等厌氧菌发酵过程中产酸,而且产酸与消耗的碳源成正比的特性[sup][back=yellow][20][/back][/sup],通过将补料与碱泵偶联,可实现了补碱的同时补加碳源。然而,补料与碱泵偶联对于发酵罐技术要求高,该技术仍没有在实验室和工厂中得到广泛推广。1? 补料系统的设计为克服现有技术中的缺陷,这里提出了一种用于双歧杆菌高密度培养的补料培养基及补料方法,技术方案如下:一种用于双歧杆菌高密度培养的补料培养基,该补料培养基包括质量比为1:10的氢氧化钠与葡萄糖。其中氢氧化钠浓度小于等于50 g/L,葡萄糖浓度小于等于500g/L。可减少补料培养基中氢氧化钠、葡萄糖和溶氧氧化还原反应产生的副产物浓度。为了减少补料培养基中氢氧化钠、葡萄糖和溶氧的氧化还原反应,配制补料培养基的水应尽可能减少溶氧。可通过高温灭菌、煮沸、通氮气或通二氧化碳的方法减少溶氧。氢氧化钠和葡萄糖溶液应分别进行灭菌后进行混合。使用所述的补料培养基的补料方法,需将补料培养基通过碱泵与发酵培养基连接,根据所述的发酵培养基的pH值控制所述的补料培养基的补入量即成。碱泵的流速为5-10mL/min;碱泵的每次开启时间小于等于30s;发酵培养基的pH值的检测周期为20s。补料培养基补入后发酵培养基的pH值与补入前发酵培养基的pH值之差小于等于0.1。用于双歧杆菌高密度培养的发酵的方法包括如下步骤:(1)将双歧杆菌种子液接种至发酵培养基中进行发酵;(2)将补料培养基通过碱泵与发酵培养基连接,根据所述的发酵培养基的pH值控制所述的补料培养基的补入量;(3)在发酵过程中,间隔1小时对发酵培养基取样,检测580nm-620nm下的吸光度值,并检测葡萄糖浓度与活菌数目,当吸光度值大于0.5且相邻2次取样的吸光度值相等或降低即为发酵结束。2? 补料培养基的优化制备如下5种补料培养基,其中氢氧化钠浓度(g/L)和葡萄糖浓度(g/L)比值分别为1:2、1:5、1:10、1:20、1:40,以比较发酵性能。发酵培养基组成如下:1000mL蒸馏水、14.3g大豆蛋白胨、16.7g酵母粉,10g葡萄糖,0.5g可溶性淀粉,1g氯化钠,1g磷酸氢二钾,1g磷酸二氢钾,0.01g FeSO4?7H2O,0.005g MnSO4,0.2gMgSO4,0.5g L-半胱氨酸,使用50g/L的氢氧化钠溶液调节pH至6.8;其中L-半胱氨酸配制为50g/L浓度,膜过滤除菌,在发酵培养基灭菌结束后再按照1/100(v/v)加入L-半胱氨酸。发酵罐通气孔中接入氮气,使得溶氧降至1mg/L以下;设置发酵参数:发酵温度设为37.0℃范围内,搅拌转速200r/min,培养基温度达到37.0℃后,在火焰圈的无菌环境下按照5%(v/v)的接种量加入种子液,同时,加入3滴消泡剂;开启发酵罐搅拌器,设置种子液加入后的培养基的当前pH值6.6为发酵设定pH值。补料设置参数:将补料培养基中碱泵利用软管连接,设置碱泵最大流速为10mL/min,设置碱液根据pH自动控制加入,设置碱泵启动参数为pH值小于6.55,设置每隔10秒测定一次pH值,设置每次碱泵开启时间15秒;发酵中,每隔3小时测OD,每隔5小时取样监测培养液葡萄糖浓度,检测到15小时。如[back=yellow]图1[/back]所示,发现在发酵前5小时,各补料培养基都可以维持葡萄糖浓度处于适宜双歧杆菌快速生长的浓度(灰色范围),而从发酵10小时开始,氢氧化钠浓度(g/L)和葡萄糖浓度(g/L)比值为1:2的补料出现了葡萄糖浓度的下降,说明该碱碳比例在发酵后期不足以满足双歧杆菌开始生长对碳源的需求。同样的,从发酵10小时开始,氢氧化钠浓度(g/L)和葡萄糖浓度(g/L)比值为1:40的补料出现了葡萄糖浓度的过高,说明该碱碳比例在发酵后期不足可能产生高渗透压,不适合双歧杆菌的生长。而氢氧化钠浓度(g/L)和葡萄糖浓度(g/L)比值1:5至1:20补料可以维持发酵过程中葡萄糖浓度的稳定。综合下来,我们发现了补料培养基中氢氧化钠浓度(C碱,g/L)和葡萄糖浓度(C料,g/L)的合适比值为1:5至1:20。[align=center][back=yellow]图1[/back] 不同配比的补料培养对发酵体系葡萄糖浓度的影响的柱状图[/align]3? 补料系统的应用实践3.1? 两歧双歧杆菌高密度培养如[back=yellow]图2[/back]所示,使用本方法,发酵体系中pH值始终保持在6.6±0.1,葡萄糖浓度始终维持在9-13g/L,发酵结束时,发酵液总体积达到4.9L,吸光度达到OD620 12.8,活菌密度最高达到 8.5±0.2 ×10[sup]9[/sup] cfu/mL。[back=yellow]图2[/back] 两歧双歧杆菌的高密度培养的曲线图3.2? 长双歧杆菌高密度培养如[back=yellow]图3[/back]所示,使用本方法,发酵体系中pH值始终保持在6.9±0.1,葡萄糖浓度始终维持在8.5-13g/L,发酵结束时,发酵液总体积达到4.4L,吸光度达到OD[sub]620[/sub] 9.2,活菌密度最高达到 6.4±0.2 ×10[sup]9[/sup] cfu/mL。[back=yellow]图3[/back] 长双歧杆菌的高密度培养的曲线图3.3? 青春双歧杆菌高密度培养如[back=yellow]图4[/back]所示,使用本方法,发酵体系中pH值始终保持在6.7±0.1,葡萄糖浓度始终维持在7-11g/L,发酵结束时,发酵液总体积达到4.6L,吸光度达到OD[sub]620[/sub] 15.3,活菌密度最高达到 1.2±0.1 ×10[sup]10[/sup] cfu/mL。[back=yellow]图4[/back] 青春双歧杆菌的高密度培养的曲线图3.4? 动物双歧杆菌的高密度培养如[back=yellow]图5[/back]所示,使用本方法,发酵体系中pH值始终保持在6.5±0.1,葡萄糖浓度始终维持在7-12g/L,发酵结束时,发酵液总体积达到4.2L,吸光度达到OD[sub]620[/sub] 20.5,活菌密度最高达到 1.7±0.1 ×10[sup]10[/sup] cfu/mL。[back=yellow]图5[/back] 动物双歧杆菌的高密度培养的曲线图4? 结语该研究提供了一种用于双歧杆菌高密度培养的补料培养基及补料方法,补料方法包括如下步骤:将补料培养基通过碱泵与发酵培养基连接,根据发酵培养基的pH值控制补料培养基的补入量即成。通过优化补料培养基及补料方法,无需发酵罐补料偶联技术便实现了根据pH值变化,利用碱泵自动补充碳源和碱液,实现了保持pH值和碳源浓度的稳定;该补料方法对发酵罐的设备技术要求低,操作简单,降低了发酵成本。参考文献(References):[1]杨硕,唐宗馨,段勃帆,陈禹含,郭欢新,孟祥晨.双歧杆菌及其制剂对炎症性肠病作用机制研究进展[J].食品科学,2023,44(05):275-281.[2]马岩,王中江,杨靖瑜,李哲,彭霞,单秀峰,李柏良,马微微.动物双歧杆菌乳亚种XLTG11对克林霉素诱导的抗生素相关性腹泻的改善作用[J].食品科学,2023,44(03):170-178.[3]李虔全,罗京,周江,刘亭,陈于彪,彭霞,杨建,胡闵山.孟鲁司特钠联合双歧杆菌四联活菌治疗儿童过敏性紫癜有效性Meta分析[J].海峡药学,2023,35(01):127-133.[4]石英,拉巴普尺,张丹瑛,翁书强,刘心怡,汪皓琪.双歧杆菌对高脂饮食诱导的C57BL/6小鼠非酒精性脂肪肝的影响[J].中国临床医学,2022,29(03):473-480.[5]陆敏,袁琳,胡娜,钟霄毓,姜逸,林敏,陆雄.双歧杆菌三联活菌对肥胖小鼠慢性低度炎症的影响[J].卫生研究,2022,51(05):797-802.DOI:10.19813/j.cnki.weishengyanjiu.2022.05.020.[6]李亦汉,王琳琳,赵建新,张灏,王刚,陈卫.两歧双歧杆菌CCFM1167通过提升肠道中乙酸水平以抑制炎症从而缓解便秘[J].食品与发酵工业,2023,49(06):35-41.DOI:10.13995/j.cnki.11-1802/ts.031238.[7]Umar Farooq. 小米膳食纤维作为主要碳源对益生菌生长和发酵过程中短链脂肪酸产量的影响研究[D].江南大学,2013.[8]杨玲,张栋,齐世华,马新颖,周帅康,艾连中,王世杰.两歧双歧杆菌TMC3115冻干菌粉生产工艺优化[J].乳业科学与技术,2021,44(05):12-17.DOI:10.15922/j.cnki.jdst.2021.05.003.[9]熊三玉. 两歧双歧杆菌驯化及培养条件优化的研究[D].中国海洋大学,2007.[10]冯诗诗. 长双歧杆菌F16的益生特性及其在酸浆豆腐制备中的应用[D].河南工业大学,2022.DOI:10.27791/d.cnki.ghegy.2022.000088.[11]武婷,郭帅,杨阳等. 动物双歧杆菌乳亚种Probio-M8在发酵山羊乳中的应用[C]//中国食品科学技术学会.第十七届益生菌与健康国际研讨会摘要集.[出版者不详],2022:149-150.DOI:10.26914/c.cnkihy.2022.018592.[12]赵春燕,张颖,王丹,刘臻.乳酸菌细胞固定化发酵的研究进展[J].中国酿造,2009(05):11-14.[13]李秀凉,雷虹,张龙丰,周东坡,平文祥.从L-乳酸菌酸菜发酵液中初步分离肽类抑菌物质[J].食品工业科技,2008(07):91-93.DOI:10.13386/j.issn1002-0306.2008.07.022.[14]邓鹏超. 乳酸菌的高密度培养及酸奶冻干发酵剂的研究[D].华中农业大学,2008.[15]于修鑑. 乳酸菌高密度培养及浓缩型发酵剂研究[D].南京工业大学,2004.[16]黄晓英. 传统发酵食品中具有抑菌特性乳酸菌的筛选、抑菌机理及其在泡菜发酵中的应用[D].西南民族大学,2022.DOI:10.27417/d.cnki.gxnmc.2022.000050.[17]彭海芬. 阿维拉霉素高产菌株的选育及其发酵条件优化[D].河南工业大学,2022.DOI:10.27791/d.cnki.ghegy.2022.000511.[18]吴斌.罗非鱼无乳链球菌SIP-pET32a基因工程菌高密度发酵工艺及SIP蛋白提取方及SIP蛋白提取方法研究[J].中国水产,2022(11):73-78.[19]熊华仪,陈曦,刘月锋,陈雄,李沛,王志.补料策略优化促进乳球菌HB03发酵合成Nisin[J/OL].食品科学:1-11[2023-05-18].http://kns.cnki.net/kcms/detail/11.2206.ts.20230428.1620.026.html[20]孙东霞,周子安,冯志合,胡修玉,祁光霞,董黎明.pH值调控柠檬酸污泥厌氧发酵产酸及碳源潜力研究[J].中国环境科学,2022,42(11):5198-5207.DOI:10.19674/j.cnki.issn1000-6923.20220620.001.收稿日期:2023-10-19 修改日期:第一作者简历:季学猛,硕士,实验师,研究方向为生物化工、机器学习;生物信息学。E-mail:jixuemeng@nankai.edu.cn。
企业里做沉降菌一般培养皿暴露多久
1.分批培养(batchculture)将微生物置于一定容积的培养基中,经培养,最后一次收获,谓分批培养。在分批培养中,培养基一次加入,不予补充,不再更换。由于营养消耗,代谢产物积累,对数生长期不能长期维持。2.连续培养(continuous culture)在培养器中不断补充新鲜营养物质,并不断排出部分培养物(包括菌体和代谢产物),以保持长时间生长状态的一种培养方式。主要有恒浊连续培养和恒化连续培养两类。恒浊连续培养通过不断调节流速,使培养液浊度保持恒定,因而可不断提供具有一定生理状态的细胞,并可得到以最高生长速率进行生长的培养物。恒化连续培养通过控制恒定的流速使营养物浓度基本恒定,从而使微生物保持恒定的生长速率。用不同浓度的限制性营养物进行恒化培养,可得到不同生长速率的培养物。3.半连续培养(semi-continuous culture)在发酵罐中的一部分发酵液保留下来作为菌种液,放出其余部分进入提练加工工序,在剩余的培养液中加满新的未接种的培养液,继续培养,如此反复,谓之半连续培养。4.补料分批培养(fed-batch culture)补料分批培养又称半分批培养,是指在分批培养过程中,间歇或连续地补加新鲜培养液,但不取出培养物。待培养到适当时期,将其从反应器中放出,从中提取目的生成物(菌体或代谢产物)。若放出大部分培养物后,继续进行补料培养,如此反复进行,则称为重复补料分批培养(repeated fed-batch culture)。与传统分批发酵相比,补料分批发酵的优点在于使发酵系统中的基质浓度维持在低水平,这有以下优点:①可除去快速利用碳源的阻遏效应,并维持适当的菌体浓度,以减轻供氧矛盾;②避免有毒代谢物的抑菌作用;③大为减少了无菌操作要求十分严格的接种的次数。与连续发酵相比,补料分批培养不会产生菌种老化和变异等问题。故其应用范围十分广泛。5.同步培养 能使培养的微生物处于较一致的,生长发育在同一阶段上的培养方法叫同步培养法。利用同步培养法控制细胞的生长,使它们处于同一生长阶段,所有细胞都能同时分裂,这种生长方式叫同步生长(图3—4)。用同步培养法得到的培养物叫同步培养物(synchronous culture)。这样,群体和个体行为一致,即可用研究群体的方法来研究个体水平上的问题。由于同步群体的个体差异,同步生长往往最多维持2个~3个世代,然后又逐步变为随机生长。
各位老师,大家好。培养后未长菌的培养基如何处理?121℃30分钟灭活后的培养基是趁热倒掉还是冷了凝固后丢弃
霉菌培养箱一般应用于植物发芽、育苗、微生物培养、昆虫 及小动物的饲养、产品老化实验及使用寿命测试(可做30段程控或联计算机控制)。 使用霉菌培养箱应注意以下事项:1.插上电源插座(电源应有良好接地),按下电源开关,显示屏亮,此时显示屏所显示的是培养箱室内的实际温度和湿度。2.用霉菌培养箱底部调节螺钉调节高度,使箱体安置平稳。3.温度调节:按下温度设定按钮,数字显示即为设定值,旋转温度调节电位器到所需温度值,松开按钮,数字显示即为培养室内的实际温度。此时如培养箱内的实际温度比设定温度小,加热指示灯亮,加热器开始加热 如培养箱内的实际温度比设定温度大,制冷指示灯亮,制冷系统开始制冷 如加热指示灯与制冷指示灯均暗,则培养箱处于恒温状态马弗炉。4.湿度调节:按下湿度设定按钮,数字显示即为设定值,旋转湿度调节电位器到所需湿度值,松开按钮,数字显示即为霉菌培养箱内的实际湿度。当培养室内的实际湿度比设定的湿度小时,此时加湿对培养室内加湿,加湿指示灯亮 当培养室内的实际湿度比设定的湿度值大时,此时加湿器停止工作,加湿指示灯灭。5.加湿器的安装:将加湿器的电源插头插在仪器背面的电源插座上,再将仪器的加湿管与加湿器相连,相连处一定要紧密连接。加湿器水箱里加水一定要按说明书上正确操作。6.当使用温度较低时,应定期倒掉位于箱内底部积水盘内的积水。7.搬运时必须小心,搬运时与水平面的夹角不得小于45°。8.当温度设定好之后,不能随便将控温旋钮来回多次旋转,以免压缩机启动频繁,造成压缩机出现过载现象,影响压缩机的使用寿命。9.如箱内不需杀菌时,应将面板上的杀菌开关置于“关”的位置。10、本机背部装有二组保险盒,2A?为制冷加热负载保险丝盒,8A?为控制电源保险丝盒,若机器运转出现故障,例如控温失灵,不加热或不制冷,须切断电源,分别检查保险丝是否完好,再检查相应部位11.加湿器若有故障,请按加湿器使用说明书上的保修点,就近修理。12.当仪器在停止使用时,应拔掉电源插头。请各位客户在使用霉菌培养箱过程中,能注意以上几点,做好霉菌培养箱日常维护。13.当湿度传感器长时间处于高湿状态,会形成结露即湿度显示值会居高不下,若需要准确的湿度显示值,则应关机后,将培养箱箱门打开,让湿度传感器处于室温中,自然干燥后,即可继续使用。14.为了保持设备的美观,不准用酸或碱及其它腐蚀性物品来擦表面,箱内可以用干布定期擦干。
微生物的种类繁多,这是众所周知的。那么用来培养微生物的培养箱都有哪几种呢?各品名的微生物培养箱主要功能与参数是什么样的呢?以下内容就是就这个问题为大家介绍一下各培养箱的分类与应用:培养箱分类控制温度特点应用电热恒温培养箱/隔水式恒温培养箱RT+5~60℃单制式,只能制热,不能制冷,使用温度必须大于室温。食品、药品微生物实验室,一般实验温度36±1 ℃生化培养箱0~60℃双制式,冷热控温细菌、霉菌、微生物、组织细胞的培养保存以及水质分析与BOD测试等霉菌培养箱0~60℃双制式,冷热控温,紫外杀菌灯,湿度控制(可选)霉菌等真核微生物的培养,培养温度一般在25℃恒温恒湿箱0-65℃双制式,冷热控温,温度、湿度控制植物培养、育种试验以及培养基、血清、药物等物品的储存等二氧化碳培养箱室温+5℃~60℃温度控制,二氧化碳浓度0~20%,紫外消毒,湿度(可选)医院、生物制品等的组织细胞培养厌氧培养箱室温+3℃~60℃温度控制,厌氧操作室,紫外线杀菌灯高校、医院、疾控中心厌氧生物的培养光照培养箱有光照10~50℃温度控制,白天、 黑夜均可单独设量温度、湿度和光照度等,植物生长灯,植物种子发芽、栽培和育苗,昆虫 、小动物的饲养等 无光照5~50℃恒温摇床全温(4~60℃,常温(RT+5~60℃),高温(室温~100℃)温度控制,水浴或气浴,振荡频率分子生物、植物育种等
v1、仪器潮湿时,应先干燥再存放。2、不要在高温、高湿、易燃、易爆和强电磁场环境中存放或者使用培养箱。3、电池指示器批示电能耗尽时,不要使用仪器。若长时间不使用仪器,请将电池取出后存放。4、使用湿布或者清洁剂来清洗仪器外壳,请勿使用磨擦物或溶剂。5、数显光照培养箱150C产品简介 数显光照培养箱150C是具有光照(光照培养箱)培养功能的高精度恒温设备。通常用于植物发芽、育苗、组织培养、微生物培养、昆虫、小 动物的饲养,水体分解的BOD测定等等。是生物遗传工程医学农业林业环境科学畜牧水产等生产和科研部门较理想的试验设备。
1、搅拌式动物细胞培养罐 搅拌式培养罐靠搅拌桨提供液相搅拌的动力,它有较大的操作范围、良好的混合性和浓度均匀性,因此在生物反应中被广泛使用。但由于动物细胞没有细胞壁的保护,因此对剪切作用十分敏感,直接的机械搅拌很容易对其造成损害,传统的用于微生物的搅拌培养罐用作动物细胞的培养显然是不合适的。所以,动物细胞培养中的搅拌式培养罐都是经过改进的,包括改进供氧方式、搅拌桨的形式及在培养罐内加装辅件等。 (1)供氧方式的改进 一般情况下搅拌式培养罐还常伴有鼓泡,为细胞生长提供所需氧分。由于动物细胞对鼓泡的剪胞生长提供所需氧分。由于动物细胞对鼓泡的剪切也很敏感,所以人们在供氧方式的改进上做了许多工作。笼式供氧是搅拌式动物细胞培养罐供氧方式的一种,即气泡用丝网隔开,不与细胞直接接触。培养罐既能保证混合效果又有尽可能小的剪切力,以满足细胞生长的要求。北野昭一报道了一个经过改进的搅拌式动物细胞培养罐,整体呈梨形,搅拌置于培养罐底部,在搅拌轴外装了一个锥形不锈钢丝网与搅拌轴一起转动。轴心处的鼓泡管在丝网内侧鼓泡,丝网外侧的细胞不与气泡直接接触。 (2)搅拌桨的改进 搅拌桨的形式对细胞生长的影响非常大,这方面的改进主要考虑如何减小细胞所受的剪切力。有人对搅拌桨的形式作了改进,并在反应器内加装了辅件,实验证明改进后的反应器适用于对剪切力敏感的细胞进行高密度培养。反应器采用了一个双螺旋带状搅拌桨,顶部的法兰盖上安装了3块表面挡板。每块挡板相对于径向的夹角为30°,垂直插入液面。挡板的存在减小了液面上的旋涡。这个反应器维持了较小的剪切力,实验中用于昆虫细胞的培养,最终的培养密度达到6×106个/mL,成活率在98%以上。 2、非搅拌式动物细胞培养罐 搅拌式细胞培养罐用于动物细胞培养存在的最大缺点是剪切力大,容易损伤细胞,虽然经过各种改进,这个问题仍很难避免。相比之下,非搅拌式培养罐产生的剪切力较小,在动物细胞培养中表现出了较强的优势。 (1)填充床反应器填充是在反应器中填充一定材质的填充物,供细胞贴壁生长。营养液通过循环灌流的方式提供,并可在循环过程中不断补充。细胞生长所需的氧分也可以在反应器外通过循环的营养液携带,因而不会有气泡伤及细胞。这类反应器剪切力小,适合细胞高密度生长。 (2)中空纤维反应器中空纤维培养罐由于剪切力小而广泛用于动物细胞的培养。这类培养罐由中空纤维管组成,每根中空纤维管的内径约为200μm,壁厚为50~70μm。管壁是多孔膜,O2和CO2等小分子可以自由透过膜扩散,动物细胞贴附在中空纤维管外壁生长,可以很方便地获取氧分。 (3)气升式细胞培养罐气升式生物反应器(airliftbioreactor)也是实现动物细胞高密度培养的常用设备之一,其特点是结构简单,操作方便。有人在气升式反应器中利用微载体培养技术,研究了Vero细胞高密度培养的工艺条件。证明气升式反应器中悬浮微载体培养Vero细胞,在加入适量保护剂、营养供应充足的情况下,细胞可以正常生长至长满微载体表面,终密度可达1.13×106个/mL。
培养基配制时需加热溶解或煮沸,大家都用什么仪器设备?微波炉、电磁炉、电阻炉?有什么利弊?
废弃培养基能和待灭菌的培养基一起灭菌吗?如果不能那能用一个高压灭菌锅吗?如果一个星期灭菌一次可以吗?
霉菌培养箱是适合培养霉菌等真核微生物的试验设备,因为大部分霉菌适合在室温(25摄氏度)下生长,且在固体基质上培养时需要保持一定的湿度。霉菌培养箱由制冷系统、制热系统、空气加湿器和培养室、控制电路和操作面板等部分组成,并使用温度传感器和湿度传感器来维持培养室内的温度和湿度的稳定。 霉菌培养箱采用国内首创流线圆弧型设计,外壳采用冷轧钢板制造、表面静电喷塑;工作内腔采用镜面不锈钢材质。霉菌培养箱外表采用烤漆亚光镀层避免光辐射,内胆镜面不锈钢,隔板可以任意调节;观察窗采用独创的复门设计,观察内腔培养物品时可打开复门观察,不用观察时可关闭复门。霉菌培养箱具有因停电、死机状态数据丢失而保护的参数记忆,来电恢复功能;采用微电脑智能控制,液晶显示控制温度、时间,具有超温报警功能。 霉菌培养箱可以设定温度湿度随培养时间变化,是水体分析和 BOD 测定细菌、霉菌、微生物的培养、保存、植物栽培、育种实验的专用恒温、恒温振荡设备,可应用于各种霉菌、组织细胞、微生物、抗生物的培养,也可用于昆虫、小动物的饲养及其它用途的恒温试验。霉菌培养箱广泛应用于环境保护、卫生防疫、农畜、药检、水产等科研、院校实验、生产部门、生物工程、饮料等科研部门、大专院校的理想之选。
问:常用菌种及培养基英文对照答:Bacillus subtilis 枯草芽孢杆菌 Bacillus pumilus 短小芽胞杆菌 Staphylococcus aureus 金黄色葡萄球菌 Micrococcus luteus藤黄微球菌 Escherichia coli 大肠埃希杆菌 Saccharomyces cerevisiae啤酒酵母菌 Candida albicans 白色念珠菌 Aspergillus niger黑曲霉 Salmonella paratyphi B 乙型副伤寒沙门(氏)菌 Pseudomonas aeruginosa铜绿假单胞菌 Coliform 大肠菌群 Clostridium 梭菌 Nutrient agar 营养琼脂培养基 Rose Bengal agar Sodium 玫瑰红钠琼脂培养基 Nutrient broth medium营养肉汤培养基 Thioglycollate medium 硫乙醇酸盐流体培养基 Martin medium modified 改良马丁培养基 Bile salt lactose enrichment 胆盐乳糖培养基 0.1% peptone water medium 0.1% 蛋白胨水 pH 7.0 sodium chloride peptone buffer pH 7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液 Lactose bile salt fermentation medium 乳糖胆盐发酵培养基[