[b][url=http://www.f-lab.cn/cell-analyzers/puncher.html][b]单细胞转移分离系统[/b][/url]是可用于单细胞转移,单细胞分离和单细胞隔离,单细胞成像应用的多功能单细胞分离操作仪器,它可以实现从微孔芯片转移单细胞到细胞收集管中。单细胞转移分离系统[/b][color=#666666]集单细胞成像,单细胞隔离,单细胞选择功能于一体,自动聚焦成像。[/color][b]单细胞转移分离系统转移单细胞到Eppendorf微管,PCR微孔板或其它反应微管中,[/b][color=#666666]在隔离单细胞后,它可以对选定收集的细胞进行扫描并成像。[/color][b]单细胞转移分离系统[/b][color=#666666]采用Nikon Ti-2倒置荧光显微镜,配备自动扫描显微镜载物台,自动聚焦器件,高灵敏度荧光CCD相机和LED激发光源组建而成。[/color][img=单细胞转移分离系统]http://www.f-lab.cn/Upload/single-cell-isolation.JPG[/img][b]单细胞转移分离系统[/b]特点完全自动化,步进系统高质量单细胞荧光成像单细胞分离的效率超过90% 超过70%分离的细胞增殖 分离后兼容所有的单细胞的WGA工具包(放大器的‐1,picoplex,复制‐G)实惠微Wells基于硅微孔微腔。由薄膜封闭70µ m,井底直径(1µ m),包含一个单孔。样品流体进入威尔斯并从底部的孔隙中流出。单个细胞被拖着走。一旦单个细胞降落到孔隙上,流动停止,其他细胞就不会进入井内。有用的细胞被识别出来。选定的细胞穿孔从微孔到384孔PCR板或离心管等等。单细胞转移分离系统:[url]http://www.f-lab.cn/cell-analyzers/puncher.html[/url]
[url=http://www.f-lab.cn/cell-analyzers/punch-needle.html]细胞钻孔针[/url],punch needle是为细胞转移和细胞分离应用而设计的细胞打孔针,用于细胞打孔和细胞钻孔应用。细胞钻孔针作为细胞转移分离系统的重要配件,方便用户把细胞从微孔芯片转移到各种微管中。细胞钻孔针经过精密设计,它可以精密在微孔板上钻孔而不接触到细胞,经过酒精消毒后可重复使用。[img=细胞钻孔针]http://www.f-lab.cn/Upload/punch-needle.JPG[/img]细胞钻孔针:[url]http://www.f-lab.cn/cell-analyzers/punch-needle.html[/url]
[align=center][img=压力驱动分选进样系统,690,371]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/06/202206231002395286_2664_3384_3.png!w690x371.jpg[/img][/align][color=#000099]摘要:在循环肿瘤细胞等细胞分选进样系统中,需要在一个标准大气压附近很小的正负压范围对压力进行精密控制,这就对控制方法、气体流量调节阀、压力传感器和控制器提出了更高的要求。本文将针对这些技术问题,提出高精度正负压精密控制解决方案,并详细介绍控制方法和其中软硬件的功能和技术指标,由此可实现0.5%的控制精度。[/color][align=center]~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~[/align][size=18px][color=#000099]一、问题的提出[/color][/size]循环肿瘤细胞(Circulating Tumor Cells,CTC)分选已被认为是癌症诊断和预后的有效工具,要求相应的检测装置能够执行所有实验过程而无需任何人工干预的自动、快速且灵敏。对于一些基于压力驱动液体流动原理的进样系统,要求通过精确控制气体的压力, 确保进样过程中流量稳定并实现自动反馈调节,并需要气压供应装置提供正压和负压以使检测装置中的泵及阀门动作。但在目前的CTC检测装置进样系统中,气压的精密控制还存在以下几方面的问题需要解决:(1)现有的气压供应装置无法提供微小的气压,常会导致泵的薄膜破损而无法使用,且现有的气压供应装置亦无法提供常压,使泵的薄膜在检测过程中无法回到平坦状态,造成细胞破损,故需要有可以提供微气压及常压至检测装置的气压供应装置。为了解决此问题,给微流道芯片提供正压、负压或常压,专利CN 216499436U“气压供应装置”中提出了一种非常复杂的概念性解决方案,标称正压气体的压力大小调节至 1~6psi,负压气体的压力大小调节至?1~6psi,正负压微调节阀可以精密至±0 .01psi。但这些指标恰恰是微压力调节阀的关键,如果没有能达到这种技术指标的调节阀,所述方案根本无法实现。(2)上海理工大学王固兵等人在2020年发表的“基于气压驱动的循环肿瘤细胞分选进样系统的设计与实现“一文中,提出了一种采用德国tecno PS120000 比例电磁阀的技术方案。但这种工业用比例阀主要是用于高压气体的压力控制,口径也较大,控制精度显然不能满足微小正负压的精密控制,而且无法外接高精度压力传感器来提升控制精度,根本无法实现文中提出的达到压力输出精度为1mbar(0.015psi)的指标,相对于1bar大气压这相当于达到0.1%的控制精度,这个指标显然不切合实际。从上述报道可以看出,细胞分选进样系统的压力控制需要在一个标准大气压附近很小的正负压范围对真空压力进行精密控制,这就对控制方法、气体流量调节阀、压力传感器和控制器提出了更高的要求。本文将针对这些技术问题,提出高精度正负压精密控制解决方案,并详细介绍控制方法和其中软硬件的功能和技术指标,由此可实现0.5%的控制精度。[size=18px][color=#000099]二、解决方案[/color][/size]本文所提出的解决方案是实现在一个标准大气压附近±10psi(或±700mbar)范围内的正负压精密控制,控制精度达到0.5%。即提供一个可控气压源解决方案,采用双向控制模式的动态平衡法,结合高精度步进电机和微小流量电动针阀、高精度压力传感器和双通道PID控制器,气压源可进行高精度的正压、负压和一个大气压的可编程输出。微小正负压精密控制的基本原理如图1所示,具体内容为:[align=center][img=气压驱动分选进样系统,690,377]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/06/202206231005336655_4666_3384_3.png!w690x377.jpg[/img][/align][align=center]图1 微小正负压精密控制原理框图[/align](1)控制原理基于密闭空腔进气和出气的动态平衡法。这是一个典型闭环控制回路,2通道PID控制器采集真空压力传感器信号并与设定值进行比较,然后调节进气和抽气调节阀的开度,最终使传感器测量值与设定值相等而实现真空压力的准确控制。(2)控制回路分别配备了抽气泵(负压源)和气源(正压源),以提供足够的负压和正压能力。(3)为了覆盖负压到正压的所要求的真空压力范围(如-10psi至+10psi),配置一个测试量程覆盖要求范围内的高精度绝对压力传感器,绝对压力传感器对应上述真空压力范围输出数值从小到大的直流模拟信号(如0~10VDC)。此模拟信号输入给PID控制器,由PID控制器调节进气阀和排气阀的开度而实现压力精确控制。采用绝对压力传感器的优势是不受当地大气气压变化的影响,无需采取气压修正,更能保证测试的准确性和重复性。(4)当控制是从负压到正压进行变化时,一开始的进气调节阀开度(进气流量)要远小于抽气调节阀开度(抽气流量),通过自动调节进出气流量达到不同的平衡状态来实现不同的负压控制,最终进气调节阀开度逐渐要远大于抽气调节阀开度,由此实现负压到正压范围内一系列设定点或斜线的连续精密控制。对于从正压到负压压的变化控制,上述过程正好相反。[size=18px][color=#000099]三、方案具体内容[/color][/size]解决方案中所涉及的微小正负压力发生器的具体结构如图2所示,主要包括高压气源、电动针阀、密闭空腔、压力传感器、高精度PID控制器和抽气泵。[align=center][img=气压驱动分选进样系统,690,465]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/06/202206231006045409_5247_3384_3.png!w690x465.jpg[/img][/align][align=center]图2 微小正负压精密控制的压力发生器结构示意图[/align]在图2所示的微小正负压控制系统中,密闭空腔上的工作压力出口连接检测仪器,密闭空腔左右安装两个NCNV系列的步进电机电动针阀,此电动针阀本身就是正负压两用调节阀,其绝对真空压力范围为0.0001mbar~7bar,最大流量为40mL/min,步进电机单步长为12.7微米,完全能满足小空腔的正负压精密控制。在图2所示的控制系统中使用了两个电动针阀来实现正负压任意设定点的精确控制,也可以从正压到负压的压力线性变化控制,也可以从负压到正压的压力线性变化控制。对于循环肿瘤细胞(CTCs)检测仪器进样系统中的微小正负压控制,要求是在标准大气压附近的真空压力精确控制,如控制精度为±0.5%甚至更小,一般都需要采用调节抽气阀的双向动态模式,即通过双通道PID控制器,一个通道用来恒定进气口处电动针阀的开度基本不变,另一个通道根据PID算法来调节排气口处的电动针阀开度。除了上述恒定进气流量调节抽气流量的控制方法之外,循环肿瘤细胞(CTCs)检测仪器进样系统中的微小正负压的控制精度,主要由压力传感器、PID控制器和电动针阀的精度决定。本方案中的PID控制器采用的是24位AD和16位的DA,电动针阀则是高精度步进电机,因此本解决方案的测试精度主要取决于压力传感器精度,一般至少要选择0.1%精度的压力传感器。对于进样系统中的微小压力控制,往往会要求密闭容器在正负压范围内进行多次往复变化,因此采用了可存储多个编辑程序的PID控制器,设定程度是一条多个折线段构成的曲线,由此可实现正负压往复变化的自动程序控制。在本文所述的解决方案中,为实现正负压的精密控制,如图2所示,针对负压的形成配置了抽气泵。抽气泵相当于一个负压源,但采用真空发生器同样可以达到负压源的效果,负压源采用真空发生器的优点是整个系统只需配备一个高压气源,减少了整个系统的造价、体积和重量,真空发生器连接高压气源即可达到相同的抽气效果。[size=18px][color=#000099]四、总结[/color][/size]本文所述解决方案,完全可以实现循环肿瘤细胞(CTCs)检测仪器进样系统中微小正负压的任意设定点和连续程序形式的精密控制,并且可以达到很高的控制精度和速度,全程自动化。本方案除了微小正负压的自动精密控制之外,另外一个特点是系统简单,正负压控制范围也可以比较宽泛,整个系统小巧和集成化,便于形成小型化的检测仪器。本文解决方案的技术成熟度很高,方案中所涉及的电动针阀和PID控制器,都是目前上海依阳实业有限公司特有的标准产品,其他的压力传感器、抽气泵、真空发生器和高压气源等也是目前市场上常见的标准产品。本文所述解决方案,同样可以适用于各种其他基于气压驱动的微流控进样系统。[align=center]~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~[/align]
近日,美国麻省理工学院利用造价低廉的激光开发出一种从样品中分离某些细胞的新系统。该系统能在普通的玻璃载玻片上分离出1万多种细胞,这将有助于研究人员轻松完成许多在以前看来不可能的生物实验。而且,与其他细胞分离方法相比,该系统分离速度快、操作简单且价格便宜。这一研究结果刊登在12月15日的《分析化学》(Analytical Chemistry)上。 此前,细胞分离系统都是将样品与可跟特定蛋白质或其他成分反应的标记物混合,然后根据样品是否发出荧光来分离细胞。新系统将根据细胞中某些特定部分的反应来进行更加细致的细胞分离。另外,系统还能根据反应速度的快慢以及持续时间的长短来分离细胞,而用传统分离办法完成这些工作是不可能的。 新系统仅利用一个固定在普通玻璃载玻片上的透明有机硅薄层。硅层中分布了很多小空穴,使样品溶液中的细胞能沉淀在其中。经过如此改装的载玻片就能帮助研究人员分离出上万个细胞。 通过显微镜,研究人员或计算机系统能仔细察看细胞是否在特定区域或时间发出荧光。一旦发现发出荧光的细胞,计算机将自动记录其位置。然后,所有被记录下来的细胞将在激光束的作用下从空穴中浮出,最后这些细胞经液体冲刷后就可收集到容器中。 该系统的研发人员称,用激光束使细胞从空穴中浮出来,就像用消防管的水推动一个充气球。但激光的作用非常轻柔,不会使细胞受到损伤。 与光镊等昂贵的分离技术不同,这个系统的成本仅为几千美元,因此可广泛应用于生物实验室和临床研究机构。研究人员预计,该系统将在临床试验与诊断、基因筛选以及克隆研究等方面发挥重要作用。(来源:科技日报 徐玢) (《分析化学》(Analytical Chemistry),79 (24), 9321 -9330, 2007. 10.1021/ac071366y S0003-2700(07)01366-2,J. R. Kovac and J. Voldman)
[url=http://www.f-lab.cn/microscopes-system/magnetic-tweezers.html][b]细胞单分子操纵磁镊系统[/b][/url],magnetic tweezers是继激光光镊技术仪器后又一种细胞操纵和细胞力学测量仪器.它采用倒置显微镜和电动平移旋转定位台和PicoTwist磁力细胞操纵捕获技术,组成强大的单分子操纵磁镊仪器。细胞单分子操纵磁镊系统是通过梯度分布的磁场对处于其中的可磁化微粒施力,通过显微镜观察并分析微粒运动过程,这套磁镊可同时对40个细胞分子视频采集和跟踪测量。[b]细胞单分子操纵磁镊系统特点[/b]操作稳定—图像漂移很低分辨率高,测力能力强—适合超薄样品可以同时对40个细胞单分子成像和跟踪测量磁铁来控制 DNA拉伸和超螺旋结构[b]细胞单分子操纵磁镊系统应用[/b]细胞单分子,生物单分子,细胞力学,生物力学等,在单分子水平上对生物分子行为(包括构象变化、相互作用、相互识别等)的实时﹑动态检测以及在此基础上的操纵﹑调控等;对单个生物大分子施以力或力矩,并测量它们的物理性质(如DNA弹性、蛋白质的力学变性等);对单个生物大分子施以力或力矩,测量它们的力学生化反应(如分子马达);研究机械力的作用如何影响细胞的生长、分裂、运动、粘附以及信号的传输,基因的表达;在生物大分子上施加力以使之发生构像上的变化,研究生物单分子形成新的结构,以及力学以及动力学之间的相互联系等。研究各种药物可能导致的DNA、蛋白质凝聚、变性过程;给出分子实时行为与性质的分布,有效避免对集群测量苛刻的同步(synchronization)要求,如DNA的解链(unzipping)、蛋白质的折叠(folding)等。[b][img=细胞单分子操纵磁镊系统]http://www.f-lab.cn/Upload/magnetic-tweezers.jpg[/img][/b]细胞单分子操纵磁镊系统:[url]http://www.f-lab.cn/microscopes-system/magnetic-tweezers.html[/url]
自噬是近年来很热门的领域,做一下系统的介绍或讨论,内容:1) 什么是自噬?包括自噬的定义、形态学特征、分子基础、调控等2)自噬的意义自噬与细胞存活、细胞死亡、疾病、衰老等的关系3)怎么研究自噬?主要谈谈怎么证明细胞发生了自噬,即自噬的判断标准和各种研究自噬的方法及局限性。一、自噬的过程——从一张图片开始步骤1:细胞接受自噬诱导信号后,在胞浆的某处形成一个小的类似“脂质体”样的膜结构,然后不断扩张,但它并不呈球形,而是扁平的,就像一个由2层脂双层组成的碗,可在电镜下观察到,被称为Phagophore,是自噬发生的铁证之一。步骤2:Phagophore不断延伸,将胞浆中的任何成分,包括细胞器,全部揽入“碗”中,然后“收口”,成为密闭的球状的autophagosome,我把它翻译为“自噬体”。电镜下观察到自噬体是自噬发生的铁证之二。有2个特征:一是双层膜,二是内含胞浆成分,如线粒体、内质网碎片等。步骤3:自噬体形成后,可与细胞内吞的吞噬泡、吞饮泡和内体融合(加了个“可”字,意思是这种情况不是必然要发生的)。步骤4:自噬体与溶酶体融合形成autolysosome,期间自噬体的内膜被溶酶体酶降解,2者的内容物合为一体,自噬体中的“货物”也被降解,产物(氨基酸、脂肪酸等)被输送到胞浆中,供细胞重新利用,而残渣或被排出细胞外或滞留在胞浆中。 http://img.dxycdn.com/trademd/upload/userfiles/image/2014/02/B1393398804_small.jpg 最详细的介绍:Madame Curie Bioscience Databasehttp://www.ncbi.nlm.nih.gov/books/bv.fcgi?rid=eurekah.chapter.24952透射电镜下自噬的照片:http://img.dxycdn.com/trademd/upload/userfiles/image/2014/02/A1393399018_small.jpg上图的英文说明:http://img.dxycdn.com/trademd/upload/userfiles/image/2014/02/B1393398805_small.jpg
[b][url=http://www.f-lab.cn/cell-analyzers/ctc-enumeration.html]CTC细胞计数成像系统[/url][/b]集细胞荧光成像和罕见细胞计数功能于一体,自动聚焦成像,能够探测超级罕见细胞,包括[color=#333333]循环肿瘤[/color]细胞(Circulating Tumor Cells, CTCs),CTCs细胞。CTC细胞计数成像系统采用Nikon Ti-2倒置荧光显微镜,配备自动扫描显微镜载物台,自动聚焦器件,高灵敏度荧光CCD相机和LED激发光源组建而成。[img=CTC细胞计数成像系统]http://www.f-lab.cn/Upload/CTCs-enumeration.JPG[/img][img=CTC细胞计数成像系统]http://www.f-lab.cn/Upload/CTC-enumeration.JPG[/img]CTC细胞计数成像系统:[url]http://www.f-lab.cn/cell-analyzers/ctc-enumeration.html[/url][b][/b]
[size=24px][b]课程详情[/b][/size]肿瘤的发生及发展机制是当前生命科学和基础医学的重要研究领域,对应的抗肿瘤药物和细胞治疗方法的研发也是行业研究热点。本次讲座将围绕肿瘤细胞和细胞治疗研究方法,介绍赛多利斯提供的活细胞水平检测方法及整体解决方案。[size=18px][b]讲师简介:[/b][/size]黄雯琪:黄雯琪,女,就职于赛多利斯公司生物分析部门,负责细胞检测产品线的应用支持、产品培训等业务,在细胞生物学检测技术及实验方法方面具有丰富的经验。[size=18px][b]相关领域:[/b][/size](生物产业)-(综合)[size=18px][b]相关仪器:[/b][/size](生命科学仪器及设备)-(细胞生物学仪器)-(高内涵细胞成像分析系统)点击链接立即报名:[url]https://www.instrument.com.cn/webinar/meeting_13888.html[/url]
近日,来自加利福尼亚大学的研究者发现了在人类骨髓干细胞和所有的免疫细胞之间存在一类“环节缺失”(missing link)的细胞。这或许为我们深入理解免疫系统以及免疫系统疾病发生的分子机制提供帮助。相关研究刊登在了9月2日的国际杂志Nature Immunology上。这项研究是在人类骨髓中进行的,因为其包含了产生人类自出生后所需血液的所有的干细胞。理解成人正常血液的形成是揭开白血病发病机制关键的一步。之前的研究中,研究者重点研究了骨髓中的血液干细胞,这种干细胞生存时间比较久,可以再生,而且可以产生所有的血液细胞。在这过程中,干细胞可以分裂产生其发育的中间状态体,称为前体干细胞,前体干细胞可以产生血液的不同谱系,比如产生红细胞或者血小板等。和干细胞一样,祖细胞也非常稀少,因此研究就好比海里捞针一样,研究者Lisa这样说,此前的研究工作中,他们发现了一种具有部分分化能力、相当成熟的淋巴祖细胞。在这项最新的研究中,研究者描述了一种更为原始的可以分化为整个免疫系统所需细胞的祖细胞。
◆产品特点 1、真正高效全自动:全球独家全自动多动能制片染色一体化设备,标本处理、制片、染色一次完成。 2、杜绝拖带污染:使用一次性加样针脱针系统和自动独立滴染湿式染色系统,杜绝了传统染色可能造成的交叉污染。 3、提取黏液包裹细胞:采用梯度离心分离及红细胞处理裂解和黏液消化技术三合一有效提取细胞及诊断成份,富集细胞及诊断成份,保证诊断细胞不丢失。 4、捕获病变细胞:根据人体不同类型细胞比重不同的特点,尤其是病变细胞比重大、沉降速度快,从而最大程度地捕获病变细胞和具诊断价值的成份,提高检出率。 5、薄层细胞均匀分布:基液使细胞均匀悬浮,保证随机性,任意取样涂片都具有代表性,形成均匀分布的真正薄层细胞涂片。 6、无需前处理:直接上机,标本无需前处理,三合一独家技术,细胞结构保存更完好,操作更加方便,省时高效,较国内外同类方法机型自动化程度更高。 7、高品质诊断保障:三合一独家技术有效提取细胞及诊断成份,完全清除黏液、红细胞等干扰成份,有利于病变细胞的鉴别诊断。 8、强大而简捷微机界面:人机对话式中文界面,可选择妇科及非妇科,不同数量及不同染色方法,操作更加方便,功能强大 9、绿色环保:不含一点甲醛,对于临床一线操作人员身体没有损害,无需采取特殊的防护。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/06/201106231242_301156_2324710_3.jpg
原标题 “纳米生物间谍”技术能进入活细胞取样 可用于深入揭示线粒体基因组变异的重要性 科技日报讯 据物理学家组织网近日报道,美国加利福尼亚大学圣克鲁兹分校(UCSC)研究人员开发出一种机器人式的“纳米生物间谍”系统,能从单个活细胞内提取出微量样本,进行RNA或DNA测序,而不会杀死细胞。研究人员表示,这种单细胞“纳米生物间谍”技术是一种了解活细胞内部动态过程的有力工具。相关论文发表在最近出版的美国化学协会《纳米》杂志上。 “我们能从活细胞中拿走一个‘生物间谍’,再把它送回该细胞,在几天内这样重复多次而不会杀死细胞。如果用其他技术,你不得不牺牲这个细胞才能分析它。”该生物传感与生物电技术小组负责人、UCSC巴斯金工程学院生物分子工程教授内德·波曼德说。 “纳米生物间谍”平台是研究小组用纳米吸液管开发的最新设备。纳米吸液管是一种小玻璃管,取液端越来越细,至尖端直径仅50到100纳米。波曼德说:“我能在实验室造出纳米吸液管,这不需要昂贵的纳米制造设备。但要进入一个细胞,问题是即使在高倍显微镜下,你也看不见吸液管尖端,不知道它偏离了细胞有多远。” 实验室博士后研究员亚当·赛格尔解决了这一问题。他基于在一台改造过的扫描离子电导显微镜(SICM),开发出一种反馈控制系统。该系统能利用通过纳米吸液管尖端的离子流作为反馈信号,在尖端接近细胞表面时探测其中的液滴。在尖端进入细胞之前,一种自动控制系统能定位它在细胞上面的位置,然后尖端很快插入穿透细胞膜,通过操控电压有控制地提取一小点细胞内物质。由于吸液管尖端极精细,对细胞造成的损害极微小。 研究小组用这种系统从活细胞中提取的微量细胞物质,估计只有50毫微微升(千万亿分之一升),约一个人体细胞百分之一的量。他们从单个人体癌细胞中提取物质并进行RNA测序,还从人类成纤维细胞中提取了线粒体并对其进行了DNA测序。“人们已经知道,线粒体和多种神经退化疾病有关。该技术可用于深入揭示线粒体基因组变异的重要性。”波曼德说。 该技术应用前景广阔。波曼德希望能与其他研究人员合作,探索其更多用途。“对于癌症生物学家、干细胞生物学家等想要了解细胞内部情况的科学家来说,这是一种多功能的平台。”(常丽君)来源:中国科技网-科技日报 2014年01月20日
液流系统的作用是依次传送待测样本中的细胞到激光照射区,其理想状态是把细胞传送到激光束的中心。而且在特定时间内,应该只有一个细胞或粒子通过激光束。 因此,必须在样品室内把细胞注入鞘液流。样品室是液流系统的核心部件,在样品室内细胞液柱聚焦于鞘液中心,细胞在此与激光相交。样品室内充满鞘液,根据层流原理,在鞘液的约束下,细胞排成单列出样品室喷嘴口,并被鞘液包绕形成细胞液柱。这种同轴流动的设计,使得样品流和鞘液流形成的流束始终保持着一种分层鞘流的状态,这个过程称为流体聚焦。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/12/201412251405_528922_2648817_3.jpg图1 液流系统 单个细胞悬液在液流压力作用下从样品管射出,粒子或细胞在流动室内与激光相交,此交点为测量区。 流动室是仪器核心部件,被测样品在此与激光相交。流动室由石英玻璃钢制成,并在石英玻璃中央开一个孔径为430μm×180μm的长方形孔,供细胞单个流过,检测区在该孔的中心,这种流动室的光学特性良好,流速较慢,因而细胞受照时间长,可收集的细胞信号光通量大,配上广角收集透镜,可获得很高的检测灵敏度和测量精度。 流动室内充满了鞘液,鞘液的作用是将样品流环包,鞘液流是一种稳定的液体流动,鞘液以匀速运动流过流动室,在整个系统运行中流速是不变的,样品流在鞘液的环包下形成流体力学聚焦,使样品流不会脱离液流的轴线方向,并且保证每个细胞通过激光照射区的时间相等,从而得到准确的细胞荧光信息。
新型细胞培养系统研制成功作者:张笑 来源:科学网美国威斯康辛大学麦迪逊分校的科学家们近日开发出一套新细胞培养系统,有望为细胞治疗提供更加一致和安全的细胞培养物。11月14日的《自然—方法学》刊登了这一成果。领导这项研究的Laura Kiessling教授表示这套系统并不昂贵,可承担多能细胞培养中的大量预估工作。这项技术“很简单”,“任何人都能使用”。目前,大部分人类胚胎干细胞的培养都是作为实验室研究用途的,而通常所采用的培养方法又容易造成各种污染。这套新系统采用一种化学合成制得的可与干细胞相结合的蛋白片段底物,并通过与特定培养基结合,可将细胞培养固定在未分化阶段达三个月或者更长时间。据报告显示,该系统亦可用于诱导多功能干细胞培养。“科学家现在普遍采用的培养系统都有着非特定的缺点,并且缺乏一致性,以致出现质量差异”, 领导这项研究的Laura Kiessling教授解释,“我们研发的这套系统特定性很好,而且并不贵”。(科学网 张笑/编译)相关仪器及方法:新型细胞培养系统 IX81显微镜 7500 Fast实时PCR系统 发光光度计
[font=宋体][font=宋体]无细胞蛋白表达系统([/font][font=Calibri]Cell-Free Protein Expression System[/font][font=宋体])是一种基于原核和真核细胞提取物构建的体外蛋白表达系统。它具有许多优点,例如可以在短时间内生产大量的蛋白质,同时避免了细胞内的复杂调控机制和翻译后修饰等繁琐过程。因此,无细胞蛋白表达系统在生物制药、生物材料、生物燃料等领域具有广泛的应用前景。本文将详细介绍无细胞蛋白表达系统的优缺点。[/font][/font][font=宋体][b]一、无细胞蛋白表达系统的优点[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]1.[/font][font=宋体]高效性:无细胞蛋白表达系统具有高表达效率的优点,这是由于体外体系中不存在靶蛋白累积所需的细胞分裂和细胞复杂代谢反应。此外,由于无细胞蛋白表达系统不受到细胞毒性和免疫反应的限制,可以实现大规模的蛋白质表达。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]2.[/font][font=宋体]灵活性:无细胞蛋白表达系统可以使用一系列不同的原核和真核细胞提取物作为反应体系,例如[/font][font=Calibri]E.coli[/font][font=宋体]、小麦胚芽和人类细胞等。这意味着可以根据不同的实验目的和需求进行合理的选择,以适应多样化的研究需要。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]3.[/font][font=宋体]易操作性:无细胞蛋白表达系统非常容易操作。与传统的细胞表达系统相比,无细胞蛋白表达系统不需要细胞培养、生长和繁殖。此外,无细胞蛋白表达系统可以快速进行,通常只需要数小时至几天即可完成目标蛋白的表达。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]4.[/font][font=宋体]简单纯化:由于无细胞蛋白表达系统可以避免有机溶剂和离子交换剂等复杂的步骤,从而使目标蛋白的纯化工作更加简便和迅速。例如,可以使用亲和柱、凝胶过滤和电泳分析等方法来快速分离和纯化蛋白质。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]二、无细胞蛋白表达系统的缺点[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]1.[/font][font=宋体]成本较高:尽管无细胞蛋白表达系统可以大规模进行蛋白质表达,但是所需的原核和真核细胞提取物通常需要较高的成本。此外,涉及到的一些试剂和设备也比较昂贵,使得无细胞蛋白表达系统在应用过程中存在一定的经济压力。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]2.[/font][font=宋体]表达限制:由于无细胞蛋白表达系统缺乏复杂的代谢反应和细胞分化机制,因此它不适用于某些特定类型的蛋白。例如,它无法表达复杂的膜蛋白和困难的药物蛋白等。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]3.[/font][font=宋体]不稳定性:无细胞蛋白表达系统通常具有一定的稳定性问题。由于缺乏细胞膜的保护,无细胞蛋白表达体系会更容易受到外部条件的影响,如温度、[/font][font=Calibri]pH[/font][font=宋体]、离子浓度等,从而导致蛋白质的不稳定性、聚集和降解等现象。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]4.[/font][font=宋体]不适合复杂蛋白结构:无细胞蛋白表达系统对于复杂蛋白结构的模拟效果不佳。例如,膜蛋白、多肽和糖蛋白等复杂蛋白质可能会被无细胞蛋白表达系统无法很好地复制,从而限制了其应用范围。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]无细胞蛋白表达系统具有高效、灵活、易操作、简单纯化等优点,但同时也存在着成本较高、表达限制、不稳定性和不适合复杂蛋白结构等缺点。在实际应用中,需要根据具体的研究目的和需求进行选择,并结合其他技术手段来弥补其不足之处。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州提供[url=https://cn.sinobiological.com/services/cell-free-protein-synthesis-service][b]无细胞蛋白表达服务[/b][/url],服务优势:[/font][font=宋体]①快速、高效 ②高成功率 ③一致性 ④高难度抗体表达[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]详情可以咨询,具体[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/services/cell-free-protein-synthesis-service[/font][/font]
拟购买新柏氏液基细胞学制备及电脑辅助检测系统,请问型号、配置及参数
Cellscreen系统第一次实现了可重复对细胞培养进行观察。无需染色、无需制样,通过光学图像分析将细胞培养的生长曲线保存;与其它现有测试方法相比,Cellscreen系统对细胞培养无损伤性,独立性。第一次实现了对同一细胞培养区域进行多次测量。Cellscreen技术证明是一种精确的、可靠的、自定义实验条件、操作方便、节省成本的方法。Cellscreen能优化和加速新产品和测试程序的开发。 Cellscreen应用领域 Cellscreen模块化设计能适用于更广范的领域,例如: 制药研究:Cellscreen系统能缩短常规科研究时间,能拍摄细胞生长因子的各种因素,如毒性测试及生物适应性的测试。 生物技术研究:Cellscreen系统适用于增殖研究、过程(培养基)最优化、质量控制。另外,用于拍摄克隆细胞实验的新性质,如应用在新的治疗蛋白和抗体的研究。 Cellscreen系统的优势: l缩短制药研发的时间周期 l对细胞培养无损伤—细胞可再用于其它研究 l可扩展的详细的结果描述,对细胞培养过程的文档和图像存档 l与现有的方法相比,更精确——可靠、重复性、自定义 l很容易融入到日常实验 l很容易操作Multiwellplate l特别低的操作成本-对所有的测量只需要一个培养皿,不需试剂、不需对细胞染色。 l节省时间—不需样品制备 l技术成熟—innovatesAG图像识别技术 l模块化设计—系统可扩展其它分析模块 Cellscreen系统模块化设计: 为满足广泛的分析需求,Cellscreen系统是按模块化设计,能运行不同的软件系统。硬件由一个双处理器电脑及控制单元组成,控制单元通过高精度电机台自动聚焦、自动调光来控制显微镜;不同的软件模块对数码相机获取的图像进行分析,分析所得的图像和数据存储在终端数据库。 软件模块包括: l悬浮细胞的增殖研究模块(PS模块) l贴壁细胞的增殖研究模块(PA) l克隆细胞实验模块(CL) 细胞增殖研究模块(PS和PA)能重复观测细胞培养的生长因子,CL模块观察克隆细胞,并能追随到起源的单克隆细胞。 克隆细胞实验模块(CL) 在整个培养过程中,CL模块自动监控单个克隆细胞到群体的生长过程;为了证明细胞群体的单克隆细胞起源,需要监控整个生长过程。 Cellscreen系统用40倍放大系数抓取容器低部的16幅图像,它能代表整个容器的状态。 所有获得的图像和数据存档到数据库,因此可以跟踪任何生物群体的成长过程,证明生物群体起源的单克隆细胞。 很好的保护—Cellscreen的培养器 Cellscreen的培养器精确的安装在显微镜上,在测量过程中,对您贵重的细胞培养,它保持一个稳定的环境。对温度和CO2的浓度能精确的控制。培养器可以长时间或频繁的监控微量滴定盘,而不需移动它。 贴壁细胞的增殖研究模块(PA) PA模块通过测量细胞覆盖区域,用户可以观察到贴壁细胞的增殖。PA以40放大倍数获得图像。系统可以自由选择培养皿的区域。这系统适用于所有通用的微量滴定盘规格(6-96眼)。结果以图像和曲线的形式表示出来。PA模块将所有的图像和结果存档,输出格式CSV(兼容Excel格式)。 PA模块精确的测量至少80%细胞的生长因子,用于科研、发展、研制新产品。 悬浮细胞的增殖研究模块(PS) PS模块通常应用在对细胞生长因子影响的研究。为了获得生长曲线,悬浮液里培育的细胞数量被重复的量化——时间、原料、操作的消耗成本。对同一培养皿里的细胞生长,PS模块能重复计数、消除对每次测量都需要更换盘子的影响。 另外,Cellscreen系统对每个细胞进行计数,相对现存的细胞计数方法,它有很高的精确性。PS模块用的是100放大倍数,它获得的图像有很好的分辨率,能提供出细胞直径和细胞形状的一些信息。 Cellscreen系统概述 很容易综合到您的日常工作中——易学易用 实验和测量的标准化 在准备阶段,用户按要求设定实验配置。对实验条件有详细选择和描述,例如:微量滴定盘上的哪个培养皿,培养皿里哪个区域需要检测;另外一些参数需要选定,如:体积、细胞类型、培养方法、细胞直径。因为无需吸液管,其它方法中隐含的误差就很容易避免。 图像清晰、分析准确 现在的测量方法里,用CCD相机拍摄图像,对每一幅图片用相同的技术指标聚焦。 Cellscreen精确的控制技术保证,在每一个测量过程中,准确的拍摄培养皿的同一区域;因此对每一选择的区域,用户可以跟踪细胞的生长过程;PS软件对选定区域的细胞进行计数;CL和PA软件用来测定克隆细胞和悬浮细胞的表面区域。 广泛和详细的结果陈述 用户可以选择结果的描述方式:如照片、生长曲线、细胞浓度曲线图或幻灯片,用来证明细胞生长发育的全过程。所有的信息,如实验设置、图像的获得、处理结果以及一些简单的实验文档都自动保存在终端数据库。
白细胞与红细胞在此重新定向。白细胞(WBC)和红细胞(RBC)是血液中的重要组成部分,在生命体延续发展和生物治疗中具有不同的功能。红细胞,又称红血球,含有一种蛋白质称作血红蛋白。当血红蛋白从肺部吸收氧气时,血液呈红色。随着血液流经全身,血红蛋白向人体组织释放氧气。红细胞的生命周期为4个月,其形如圆盘,中间下凹,边缘较厚,呈圆饼状。白细胞,又称白血球,具有更加复杂的功能。白细胞构成了人体抵抗感染的一种防御机制。有多种不同类型的白细胞,其生命周期和功能各不相同。白细胞还能够产生一种特殊的蛋白质,称作抗体,能够识别并吞噬入侵人体的外来异物。 红细胞白细胞物理特征红细胞呈双凹圆盘状,无核。尺寸大约为6-8 μm。白细胞呈不规则性,但有一个核和外缓冲层。生命周期120天。几天,但在健康人体中可存活数天至数年不等。类型:血液中只有一种红细胞在血液中存在许多类型的白细胞,其功能各不相同:嗜中性粒细胞、T淋巴细胞、B淋巴细胞(巨噬细胞)、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞。循环系统:心血管系统。心血管和淋巴系统总计红细胞700:1白细胞男性每立方毫米460-6200万个;女性每立方毫米4200-5400万个。每立方毫米4000 – 11000个功能:向身体的不同部位提供氧气,并负责运送二氧化碳和其它废物。产生抗体,对感染形成免疫力,有些具有噬菌功能。血液中含量:
[font=宋体]无细胞表达系统是一种在生物制药和基因疗法领域广泛应用的生物技术。尽管它带来了许多优势,如高表达水平和翻译后修饰,但无细胞表达系统也存在一些常见问题和挑战。本文将详细解答这些问题,并提供相应的解决方案。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]Q1:[/font][font=宋体]无细胞合成([/font][font=Calibri]CFPS[/font][font=宋体])体系相对于细胞体系有哪些优势?[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]A1: [/font][font=宋体]无细胞表达系统的优势主要体现在:[/font][/font][font=宋体][font=宋体]? 可自动化操作简便、快捷——成本低(无需培养细胞和细菌相关的场地设施)、表达时间短([/font][font=Calibri]3h[/font][font=宋体])、单位表达量高。[/font][/font][font=宋体][font=宋体]? 蛋白表达工程化([/font][font=Calibri]Cell-free protein engineering[/font][font=宋体])——无细胞合成系统作为一个开放式的系统,可以向体系中自由添加所需的成分以调控蛋白的正确合成。例如可以向系统中加入[/font][font=Calibri]Fe2+[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]Mn2+[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]Cu2+[/font][font=宋体]等金属离子促进含有对应离子蛋白的正确合成;可以有效表达抗菌肽等毒性蛋白并实现规模化目的蛋白的生产。[/font][/font][font=宋体][font=宋体]? 适合原型研究([/font][font=Calibri]cell-free prototyping[/font][font=宋体]),整体原料均为外加,活性物质之间发生的化学酶促反应使整个过程相对可控。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]Q2:[/font][font=宋体]真核来源的蛋白是否必须用真核表达系统?[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]A2:[/font][font=宋体]并非如此,真核来源的蛋白除了传统的哺乳动物表达系统,还可以利用无细胞蛋白合成。无细胞系统是一套酶促级联反应,可以添加很多其他组分甚至是真核来源的提取物来实现真核蛋白的表达。如果某些目标蛋白(比如抗体功能性片段[/font][font=Calibri]scFv[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]VHH[/font][font=宋体])的功能不依赖翻译后修饰,在这种情况下,不管是无细胞系统还是[/font][font=Calibri]HEK293[/font][font=宋体]系统,两者表达的活性无明显差异。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]Q3:[/font][font=宋体]无细胞合成系统是否适用于高通量,表达量如何?少量蛋白的检测是否也适用?[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]A3:[/font][font=宋体]无细胞表达系统非常适合高通量表达,其产量最高可到 [/font][font=Calibri]mg/mL [/font][font=宋体]级别,抗体和抗体功能性片段是 [/font][font=Calibri]100 [/font][font=宋体]μ[/font][font=Calibri]g/mL [/font][font=宋体]级别。对于少量蛋白的检测需要建立相应的检测方法,如您想进一步了解,我们可以协助进行方法学的设计。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]Q4:[/font][font=宋体]对于原核体系难以表达的真核来源蛋白,无细胞表达体系有什么优势吗?[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]A4:[/font][font=宋体]因为其开放式系统可以添加很多其他组分甚至是真核来源的提取物来实现真核蛋白的正确合成。例如我们聚焦的[/font][font=Calibri]VHH[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]VHH-Fc[/font][font=宋体]等都可以实现无细胞系统中上清表达,但是这些蛋白在原核表达中往往以错误的形式存在。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]Q5: [/font][font=宋体]我在无细胞表达系统中进行表达,但蛋白总是以低表达水平出现,如何解决?[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]A5: [/font][font=宋体]低表达可能是由于反应条件不当或蛋白的折叠不完整。您可以尝试优化反应条件,如调整温度、[/font][font=Calibri]pH[/font][font=宋体]值和反应时间,以提高蛋白的表达水平。同时,添加适当的蛋白辅助因子或分子伴侣,有助于促进蛋白的正确折叠和表达。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]Q6: [/font][font=宋体]以不溶性形式表达,该怎么解决?[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]A6: [/font][font=宋体]蛋白不溶性表达可能是由于蛋白的折叠不正确或缺乏正确的蛋白折叠因子。您可以尝试添加蛋白折叠辅助因子,如小麦胚芽提取物,有助于促进蛋白的正确折叠和溶解性。此外,优化反应条件和表达条件,如调整温度和反应时间,也可能有助于提高蛋白的溶解性。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]Q7: [/font][font=宋体]形成夹杂物,导致纯化困难,有什么解决办法?[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]A7: [/font][font=宋体]夹杂物的产生可能是由于蛋白的折叠不正确或反应条件不适合。您可以尝试添加蛋白辅助因子或分子伴侣,如[/font][font=Calibri]chaperonin[/font][font=宋体],来帮助蛋白的正确折叠和防止夹杂物的形成。同时,优化反应条件和表达条件,如调整温度和反应时间,也可能有助于减少夹杂物的产生。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]Q8: [/font][font=宋体]出现部分降解,如何解决?[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]A8: [/font][font=宋体]蛋白降解可能是由于蛋白的不稳定性或存在蛋白酶的活性。您可以尝试添加蛋白酶抑制剂,如苯甲酸,来减少蛋白的降解。同时,优化反应条件和表达条件,如调整温度和反应时间,也可能有助于提高蛋白的稳定性。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]Q9: [/font][font=宋体]出现异常修饰,如何解决这个问题?[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]A9: [/font][font=宋体]蛋白异常修饰可能是由于无细胞表达系统中存在的特定修饰酶。您可以尝试选择不同的表达系统或添加特定的修饰酶抑制剂,来减少蛋白的异常修饰。同时,优化反应条件和表达条件,如调整温度和反应时间,也可能有助于减少蛋白的异常修饰。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]Q10: [/font][font=宋体]形成聚集体,导致纯化困难,如何解决?[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]A10: [/font][font=宋体]蛋白聚集体的形成可能是由于蛋白的折叠不正确或反应条件不合适。您可以尝试添加蛋白折叠辅助因子或分子伴侣,如小麦胚芽提取物,有助于促进蛋白的正确折叠和防止聚集体的形成。同时,优化反应条件和表达条件,如调整温度和反应时间,也可能有助于减少聚集体的产生。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]A10: [/font][font=宋体]高背景信号可能是由于蛋白的非特异性结合或存在夹杂物。您可以尝试优化反应条件和表达条件,如调整温度和反应时间,来减少非特异性结合。同时,使用适当的纯化方法,如亲和层析或凝胶过滤,可以帮助减少背景信号。另外,您还可以使用合适的对照实验来验证蛋白的特异性结合,以确保蛋白表达的准确性和可靠性。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州自主研发的[url=https://cn.sinobiological.com/services/cell-free-protein-synthesis-service][b]无细胞表达系统[/b][/url],经过充分验证,可为您提供优质的[/font][font=Calibri]VHH[/font][font=宋体]及[/font][font=Calibri]scFv[/font][font=宋体]快速表达服务,加速您的研发进程。有需求可以来义翘神州网咨询详情[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/services/cell-free-protein-synthesis-service[/font][/font]
据美国物理学家组织网报道,北卡罗莱纳大学科学家的一项最新发现显示,细胞感染人类疱疹病毒(EBV)后,会产生小泡或被称为外体的液囊,从而改变细胞中所含的蛋白质和RNA(核糖核酸)。这种变质的外体一旦进入健康细胞,就能转变细胞的良性生长方式,使之变成不可控的致癌生长。这一发现刊登于美国《国家科学院院刊》网络版。EBV可能是世界上最成功的病毒,它无法被免疫系统彻底清除,几乎每个人终生都被它感染。它们不断进入唾液,在这里进行有效地传播。感染这种病毒很少致病,然而在几种主要的癌症中都发现了它的踪迹,包括淋巴瘤和鼻咽癌,它的蛋白质劫持了细胞生长调控机制,引发不可控的细胞生长,从而导致癌变。研究认为一种名为潜伏膜蛋白质1的蛋白质是EBV的致癌基因。通过外体,它们被传递给未受感染的细胞。研究人员还指出,EBV也彻底改变了外体的内含物,在细胞之间传递能激活癌症的蛋白质,这是值得注意的地方。这些发现表明,通过这种方式,病毒感染细胞能广泛影响并潜在控制全身其他细胞,引发它们的不可测生长。免疫系统不断地监视着外来病毒蛋白质,然而经外体携带的这些蛋白质可以不向免疫系统“报告”感染,并刺激癌细胞生长,由此容许了一种不可测的生长。该研究还显示,细胞能产生血管,这一被称为血管新生的过程很容易接受变质外体并引发潜在生长。北卡罗莱纳大学莱恩伯格综合癌症研究中心微生物与免疫学教授南希·瑞玻-特拉玻说:“外体就像特洛伊木马,EBV通过木马甚至能控制那些还没有感染的细胞。但重要的是,外体的产生可能为我们提供了一种新的治疗标靶,封锁它们就能控制癌症蔓延。”论文第一作者、瑞玻-特拉玻实验室博士后戴维·麦克表示,下一步研究是测定哪些蛋白质被选中进入外体,病毒如何控制了这些蛋白质,以及怎样才能遏制这一过程。
医学研究证明,长期处于高电磁辐射的环境中,会使血液、淋巴液和细胞原生质发生改变。电磁辐射过度还会影响人体的循环系统、免疫、生殖和代谢功能,严重的还会诱发癌症,并加速人体的癌细胞增长。专家提醒消费者——由于电脑产品具有生产组装过程相对简单,市场需求较大的特点,吸引了很多企业加入电脑的生产行业。目前国家信息技术设备电磁兼容性标准要求在生活环境中使用的电脑产品辐射干扰指标要达到《信息技术设备的无线电骚扰限值和测量方法》中B级限值的要求。非生活环境中使用的电脑产品辐射干扰指标要达到A级限值的要求。抽查结果表明,一些企业在批量生产时产品一致性没有很好的控制,致使被抽样品电磁兼容辐射干扰指标达不到B级限值的要求。辐射干扰是台式电脑工作时向空间发射的一种电磁波干扰。医学研究证明,长期处于高电磁辐射的环境中,会使血液、淋巴液和细胞原生质发生改变。此外,电磁辐射过度会影响人体的循环系统、免疫、生殖和代谢功能,严重的还会诱发癌症,并加速人体的癌细胞增长。这种电磁辐射污染已经成为室内环境污染的新威胁。庭用户要尽量避免把家电摆放得过于集中,以免使自己暴露在超限量辐射的危险之中。特别是一些易产生电磁波的家电,如电脑、电视、冰箱、收音机等,最好不要集中摆放在卧室里。要避免长时间使用家用电器、手机等,还要尽量避免同时启用多种家电。与家电保持安全距离很有必要,距离越远,受电磁波侵害就越小。另外,必须长期处于高电磁辐射环境中工作的人需要多食用胡萝卜、豆芽、西红柿、油菜、海带、卷心菜、瘦肉、动物肝脏等富含维生素A、C和蛋白质的食物,以此加强机体抵抗电磁辐射的能力。
组织材料若来自血液、羊水、胸水或腹水的悬液材料,最简单的方法是采用1000r/min的低速离心10分钟,若悬液量大,可适当延长离心时间,但速度不能太高,延时也不能太长,以避免挤压或机械损伤细胞,离心沉淀用无钙、镁PBS洗两次,用培养基洗一次后,调整适当细胞浓度后再分瓶培养,若选用悬液中某些细胞,常采用离心后的细胞分层液,因为,经离心后由于各种细胞的比重不同可在分层液中形成不同层,这样可根据需要收获目的细胞。不同比重的分层液的配制和具体分离方法详见淋巴细胞分离培养的章节。 实体组织材料的细胞分离方法 对于实体组织材料,由于细胞间结合紧密,为了使组织中的细胞充分分散,形成细胞悬液,可采用机械分散法(物理裂解)和消化分离法。 (一)机械分散法 所取材料若纤维成分很少,如脑组织,部分胚胎组织可采用剪刀剪切、用吸管吹打分散组织细胞或将已充分剪碎分散的组织放在注射器内(用九号针),使细胞通过针头压出,或在不锈钢纱网内用钝物压挤(常用注射器钝端)使细胞从网孔中压挤出。此法分离细胞虽然简便、快速,但对组织机械损伤大,而且细胞分散效果差。此法仅适用于处理纤维成分少的实验室试剂软组织。 (二)消化分离法 组织消化法是把组织剪切成较小团块(或糊状),应用酶的生化作用和非酶的化学作用进一步使细胞间的桥连结构松动,使团块膨松,由块状变成絮状,此时再采用机械法,用吸管吹打分散或电磁搅拌或在摇珠瓶中振荡,使细胞团块得以较充分的分散,制成少量细胞群团和大量单个细胞的细胞悬液,接种培养后,细胞容易贴壁生长。 1、酶消化分离法 酶消化分离法常采用胰蛋白酶和胶原酶,其分离方法如下: (1)胰蛋白酶分散技术 胰蛋白酶(简称胰酶)是广泛应用的消化剂。胰蛋白酶是一种胰脏制品,对蛋白质有水介作用,主要作用于赖氨酸或精氨酸相连接的肽键,使细胞间质中的蛋白质水介而使细胞分散开,在常用人血清 AB的蛋白酶中由于产品的活力和纯度不同,对细胞的消化能力也不同,胰蛋白酶对细胞的作用,取决于细胞类型、酶的活力、配制的浓度、消化的温度、无机盐离子、pH以及消化时间的长短等。 ①细胞类型胰蛋白酶适于消化细胞间质较少的软组织,能有效地分离肝、肾、甲状腺、羊膜、胚胎组织、上皮组织等。而对含结缔组织较丰富的组织,如乳腺、滑膜、子宫、纤维肉瘤、肿瘤组织等就无效,但若与胶原酶合用,就能增加其对组织的分离作用。 ②酶的活力市售的胰蛋白酶,其活力都经过测定而有效,但配制时必须新鲜,需保存在低温冰箱中,消化时的pH和温度都要适宜,否则会影响活力,细胞的分散直接与酶的活力有关,最终使用活力为1:200或1:250,56℃pH8.0时活力最强。 该酶为粉剂,保藏时要防潮,室内温度不宜过高,保存时间不能太长,若粉剂结团块,说明该部分受潮或失效。 ③酶的浓度胰蛋白酶一般采用的浓度为0.1%-0.25%(活力1:200或1:250),但遇到难消化的组织时,浓度可适当提高,消化时间适当延长。浓度高对细胞有毒性,而较低浓度的胰蛋白酶在培养液中可促进细胞的增殖,若培养液中加入血清,其少量胰蛋白酶可被血清中抗胰蛋白酶因子所清除。 ④温度一般认为胰蛋白酶在56℃时活性最强,但由于对细胞有损害而不能被采用,常使用的温度为37℃,通常在37℃进行消化比室温作用快。 ⑤pHpH8~pH9是胰蛋白酶活力适宜范围,但随碱性的增加其活力也随之减少,活性强分散快,细胞也容易被消化下来,消化分离细胞时PH只能选用7.6~8.0之间,否则对细胞有损伤。 ⑥无机盐离子若用含有钙和镁的盐类溶液来配制胰蛋白酶时,可以发生抑制胰蛋白的消化作用。因此,在配制时应采用无钙镁离子的PBS配制。 ⑦消化时间如果细胞消化时间过长,可以损害细胞的呼吸酶,从而影响细胞的代谢,一般消化时间为20分钟为宜,冷消化时使用低浓度消化液,于4℃过夜也可。 分离方法如下: ①过夜冷消化将取得的组织用Hanks液洗三次,剪成碎块大小为4毫米左右,用Hanks液洗2~3次以除去血球和脂肪组织,再加入0.25%的胰蛋白酶,摇匀后放4℃过夜,次日再用Hanks液洗涤,弃去上清,共洗2~3次,然后,加入少量营养液吹打分散,细胞计数,按适当的浓度分瓶培养。 ②多次提取消化法多次提取消化法有以下三种: 热消化多次提取将剪碎的细胞块加入0.25%胰蛋白酶37℃水浴中消化15~20分钟,然后经洗涤后用营养液分散制成细胞悬液,按合适的浓度分瓶培养,然后将留下的未彻底消化的组织按上述方法操作,再消化提取细胞。 冷消化多次提取方法同上,只是消化温度为4℃。 先热消化后冷消化将组织块先用胰蛋白酶于37℃下消化20分钟经洗涤后用营养液分散,制成悬液,剩余未消化的小组织块经洗涤后用胰酶于4℃下过夜,次日再提取细胞,分散成悬液,分瓶培养。 (2)胶原酶(Collagenase)消化法 胶原酶是一种从细菌中提取出来的酶,对胶原有很强的消化作用。适于消化纤维性组织、上皮组织以及癌组织,它对细胞间质有较好的消化作用,对细胞本身影响不大,可使细胞与胶原成分脱离而不受伤害。该酶分离效果好,即使有钙、镁离子存在仍有活性,故可用PBS和含血清的培养液配制,即操作简便又可提高细胞成活率,最终浓度200u/mL或0.1~0.3mg/mL。细胞培养此酶消化作用缓和,无需机械振荡,但胶原酶价格较高,大量使用将增加实验成本。 经过胶原酶消化后的上皮组织,由于上皮细胞对酶有耐受性,可能有一些上皮细胞团块尚未被完全消化开。成小团块的上皮细胞比分散的单个上皮细胞更易生长,因此不必要再进一步消化处理。 鉴于胰蛋白酶和胶原酶的生物学活性和在不同浓度下消化各种组织小块所需的时间(小时)有差异,以及两者价格不等,有人采用胶原酶与胰蛋白酶并用,同时还可加透明质酸酶(对细胞表面糖基有作用),采用两者的联合消化作用,对分散大鼠和兔肝、癌组织非常有效。 除上述两种最常用的消化酶外,还有链霉蛋白酶、粘蛋白酶、蜗牛酶、弹性蛋白酶、木瓜蛋白酶,近年来,还有一种从灰霉菌中提取的Pronase新酶分散细胞更佳。 2、非酶消化法(EDTA消化法) EDTA是一种非酶消化物,又称螯合剂或Versene,全名为乙烯二胺四乙酸。常用不含钙、镁离子的PBS配成0.02%的工作液,对一些组织,尤其是上皮组织分散效果好,该化学物质能与细胞上的钙、镁离子结合形成螯合物,利用结合后的机械力使细胞变圆而分散细胞或使贴壁细胞从瓶壁上脱离,缺点是细胞易裂解或贴壁细胞从瓶壁上脱离时呈片状,有团块,常不单独使用,但可与胰蛋白酶混合使用(1:1或2:1),不仅利于细胞脱壁又利于细胞分散,可降低胰酶的用量和毒性作用。 消化分离法的操作步骤: (1)剪切把组织块剪碎,呈1~5mm3大小的组织块。 (2)加液漂洗将碎组织块在平皿(或三角烧瓶)中用无钙镁PBS洗2-3次(采用倾斜,自然沉降法)。 (3)消化加入消化液(胰蛋白酶或胶原酶或EDTA)于37℃水浴中作用适当时间(中间可轻摇1~2次),若组织块膨松呈絮状可终止,若变化不大可更换一次消化液,继续消化直至膨松絮状为止。胰蛋白酶消化时间不宜过长。 (4)弃去消化液采用倾斜自然沉降或低速离心法尽量弃去消化液。 (5)漂洗将含有钙、镁离子的培养基沿瓶壁缓缓加入,中止消化反应,采用漂洗法洗2-3次后,加入完全培养基。 (6)机械分散采用吸管吹打或振荡法,使细胞充分散开后用纱网或3~4层无菌纱布过滤后分瓶培养,若要求不高可采用倾斜自然沉降5~10分钟,吸上层细胞悬液进行分瓶培养。
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细胞在体外进行培养,失去了机体的调节和控制。因此,除满足营养的要求外,还必须使细胞生存环境尽量接近活体的环境。外环境的培养条件如温度、渗透压、酸碱度等均能影响细胞的生长。 一、温度 一般哺乳类及禽类细胞体外培养的适宜温度是37~38℃。温度过高或过低都会影响到细胞的生长。细胞耐受低温的能力比抗热的能力强,在低温下,细胞的代谢活力及核分裂降低。温度不低于0℃时,虽影响细胞代谢,但并无伤害作用;把细胞置于25~35℃时,细胞仍能生存和生长,但速度减缓;放在40℃数小时后,再置回37℃培养细胞仍能继续生长。但如果在40℃下暴露时间太长,对细胞生长不利,甚至变圆脱落于瓶壁。若温度过低,在降到冰点以下时,细胞因胞外水和胞质结冰而受损死亡。但若向培养液中加入甘油或二甲亚砜等保护剂,封入安瓿中后,置于液氮中,可起保护作用,此时细胞可耐受-70℃以下温度,能长期储存,解冻后细胞复苏,仍能继续生长增殖,细胞生物性状不受任何影响。此为保存细胞的主要手段。 高温对细胞培养不利。细胞在39~40℃培养1小时,能受到一定损伤,但仍有可能恢复,但不能忍受温度再升高2℃,持续数小时,即在41~42℃中培养1小时,细胞损伤严重,温度至43℃以上时细胞多数被杀死。高温主要引起酶的灭活、类脂质破坏,核分裂的破坏,产生凝固酶使细胞发生凝固,另外使蛋白质变性。因此,体外培养细胞时一定要避免高温。 二、渗透压 细胞在高渗溶液或低渗溶液中,可以立即发生皱缩或肿胀、破裂。所以,渗透压是体外培养细胞的重要条件之一。哺乳动物和其他动物组织细胞体外培养的渗透压的维持主要与NaCl有关,但不能忽视其他电介质渗透压的关系。渗透压与单位体积溶媒内溶质的分子数和离子数成正比。为此,按一定比例控制培养液中离子平衡,维持正常渗透压是很重要的。这不仅是为了维持细胞张力,而且是为了调节细胞的代谢。因为细胞外离子输送和离子浓度改变着其他营养物质的输送(如氨基酸、蔗糖等),直接影响细胞基本合成系统。 理想的渗透压因细胞的类型及种族而异,人血浆渗透压为290mmol/L,被视为是体外培养人类细胞的理想渗透压。哺乳类动物细胞的渗透压一般为290~300mmol/L。人胚肺成纤维细胞为250~325mmol/L,鼠则为310mmol/L左右。在实际应用中,260~320mmol/L的渗透压可适于大多数细胞。
http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/10/2016082816541190_01_3092793_3.jpg YEESPEC智能细胞成像系统已全面升级:强大的配置与功能,高品质成像质量,更方便的显微操作,绝对能带给您眼前一亮的全新体验。 作为新一代的智能细胞成像系统,它比传统显微镜操作要方便许多,所有的操作工程都可以通过前面的触摸控制屏完成。只要轻轻地点几下屏幕,就可以轻松地完成整个细胞成像过程,包括:镜头切换、荧光切换、聚焦。 同时,因为设计的小巧,我们也可以把它放在培养箱或者安全柜里使用,可以边做实验室边观察。 YEESPEC智能细胞成像系统,更是科研的得力助手。与传统活细胞工作站相比,它具有更强大的功能特点。 1、 操作方便,即开即用: 采用全触控屏操作,也可以通过手机端平板端进行操作;荧光光源采用高亮度LED光源,不需要预热。 2、 成像质量好,光路的主要元器件均采用原装进口: 采用顶级CCD芯片、原装进口长工作距离荧光物镜、Omega荧光滤光片、K9光学玻璃载物台,透过率非常高。 3、 没有耗材,使用成本低: 采用高亮度白色LED,荧光光源采用高亮度单色LED。LED的寿命是5万个小时以上,基本上仪器买回去10年都不用更换。 4、保证实验安全: 内部装有两块10000mAh,12V的电池,短时间观察使用时可以不需要接电源,即使停电也可以完成实验,保证了实验安全。
流式细胞胞仪的分析及分选原理流式细胞仪由液流系统、光学与信号转换测试系统和数字信号处理及放大的计算机系统三大基本结构组成。在对细胞悬液中的单个细胞或其超微结构进行多参数快速自动分析过程中,每秒钟能测量数千个至数万个细胞,能在分析过程中按实验设计要求对特定细胞进行分析,带细胞分选系统的流式细胞仪还可按实验设计要求分选出具相同特征的同类型细胞,用于培养或进一步研究。一、工作原理流式细胞仪的工作原理借鉴了荧光显微镜技术,将荧光显微镜的激发光源改为激光,使其具有了更好的单色性与激发[/
利用活细胞成像工作站进行细胞和基因的功能研究,是生物医学研究的最新趋势。固定细胞观察仅能提供固定瞬间细胞的静态信息,无法反映细胞在正常生理生化条件下的状态活细胞观察,对处于正常生理状况下的细胞进行全程扫描和记录,获得其连续、全面、动态过程。由于其显示的正常细胞动态的活动过程,很容易发现和确定细胞间相互作用和信号传导的过程,以及在活细胞水平上的生物分子间的相互作用,不仅可以解决长期以来悬而未解的问题,更为未来的研究提出新的问题,指出新的方向。
来自著名的美国密苏里州斯托瓦斯医学研究所(Stowers Institute for Medical Research),中科院生物物理研究所传染病与免疫学中心,堪萨斯大学医学院,中西大学(Midwestern University)的研究人员揭示了干细胞衰老的奥秘,这一发表在昨天刚刚出版的《Cell Stem Cell》杂志上的文章由中科院海外评审专家解廷(斯托瓦斯医学研究所)领导完成,第一作者是斯托瓦斯医学研究所与中科院生物物理研究所联合培养的博士生潘磊(Lei Pan,音译)。目前普遍认为人类组织衰老与干细胞活性下降和数目减少有关,这些变化在许多譬如皮肤皱纹和器官功能下降等的衰老表现中起着重要的作用。至今为止对于干细胞衰老调控的理解还比较少,但是解廷实验室已经证明了干细胞功能中年龄依赖性得下降有关的特殊因素,以及这些因素的微环境:niche。潘表示,“在这项研究中,我们利用果蝇卵巢生殖干细胞(germline stem cells,GSCs)作为研究模型,证明干细胞功能中年龄依赖性的下降和其niche在干细胞整个衰老过程中扮演着十分重要的角色”,“我们检测了干细胞衰老调控的三个因素,发现并证明衰老过程是受到外在和内在因素调控的”。研究小组首先聚焦在一个称为骨形态发生蛋白(bone morphogenic protein, BMP)的蛋白家族——其在许多组织的发育过程中扮演着重要的角色,他们发现当niche微环境的BMP信号活性随着年龄下降的时候,干细胞增值的能力也会随之降低,干细胞数量也减少了。相反当BMP信号增加,干细胞的寿命以及增值能力也都有所提升。其次研究人员也发现干细胞与niche之间的关联也起到一定作用:强的关联可以延长干细胞的寿命,而降低关联则会增加干细胞衰老。这篇研究报告最后强调了GSCs或者niche中的一个酶(减少自由氧)的过量表达如何延长干细胞的寿命,以及增加干细胞增值的能力。解廷认为,“对成人组织中由于干细胞功能下降导致细胞损耗的长期无效替换也许是人类衰老的一个主要原因”,“如果我们能了解如何通过操纵干细胞和/或niche的功能,来减缓干细胞衰老,我们也许就能够减缓人类衰老,治疗年龄相关性的推行性疾病”。
[b][url=http://www.f-lab.cn/cell-disruptors/sonic-2000wt.html]温控高功率超声波细胞破碎仪SONIC-2000WT[/url][/b]是一种利用超声波探针在液体中产生空化效应的而制成的Sonicator[b]温控型号高功率超声波细胞破碎均质仪器[/b],具有温度显示控制功能避免样品过热,广泛用于细胞均质破碎,由超声波发生器,超声波转换器和超声波探针均质器件构成。用于多种动植物、病毒、细胞、细菌及组织的破碎,可用来乳化、分立、裂解、匀化、提取、消泡、清晰、纳米材料的植被、分散及加速化学反应等。由超声波发生器,转换器和探针组成,具有温度检测器供选配,[img=超声波均质器]http://www.f-lab.cn/Upload/SONIC-1200W.jpg[/img]采用LCD屏清晰显示左右操作参数和选项:温度,时间,输出功率等,具有温度显示控制功能避免样品过热损坏[b]超声波细胞破碎仪:[url]http://www.f-lab.cn/cell-disruptors.html[/url][/b]
RNA可改变细胞转导通路的线路 人们常说,激发改变的最好的方法是从系统内着手。 现在,研究人员基于RNA创建了控制装置,该装置可被用来以合成的方式重新为细胞行为排布线路,使得这些细胞对药物更为敏感而造成其死亡。 这一工作着重显示了RNA作为设计合成系统平台以控制基因表达及用这类技术来治疗疾病的前途,特别是用基因疗法来为癌性或有病细胞设计使其走向死亡的程式的可能性。 Stephanie Culler及其同事应用短片段的RNA来制造可编程式的控制装置,当这些装置在存在某些蛋白的时候可被激发,使得基因表达通路被重新安排并改变了人类细胞的行为。 在该实验中,研究人员将某关键性信号转导通路的刺激与某个基因表达发生关联,而该基因的表达可使细胞对药物甲基鸟嘌呤变得敏感,并诱导程序化细胞死亡。 他们的RNA控制装置可重新安排有关的通路并促使细胞探测到一种与癌症有关联的标志并激活产生一种蛋白质。该蛋白质可令细胞对某种抗癌药物变得敏感。 这些结果显示,这种RNA装置可用来改变细胞转导通路的线路并指引细胞走向某种特定的命运。 一则相关的观点栏目对这一创建一个单一框架结构以建立合成基因调控系统的工作的可能的影响进行了讨论
细胞自噬是机体一种重要的防御和保护机制。但是这种自噬“信号”如何传递给细胞从而使其“执行”自噬过程,则一直是科学界的难题。近期,我校生命科学学院林圣彩教授课题组成功找到高等动物细胞在生长因子缺失条件下,启动自噬的部分“密码”,从而在细胞自噬机制研究方面取得重大突破。 4月27日,最新一期的美国《科学》杂志以研究文章的形式刊发了这项研究成果,并配发专门评述。这也是近三年来,我校生命科学学院第二篇发表在这一世界顶级学术刊物上的论文。2009年6月,该院韩家淮教授的一篇有关细胞选择死亡方式机制的研究文章曾“登上”该杂志。 所谓自噬,是指细胞消化自身蛋白质或细胞内的结构(细胞器)的一种自食现象。通过这种现象,细胞可以降解、消除和消化受损、变性、衰老和失去功能的细胞器和变性蛋白质等生物大分子,为细胞的生存和修复提供必须的能量。 科学家们认为,自噬与细胞凋亡、细胞衰老一样,是一种十分重要的生物学现象。有关实验表明,包括肥胖症、糖尿病、神经退行性疾病、免疫失调及癌症在内的人类许多重大疾病的发生都与该过程的异常有关。为此,自噬也是当前生命科学中最热门的研究领域之一。 据林圣彩介绍,对自噬进行分子机制的研究始于上世纪90年代的以单细胞生物酿酒酵母为模型的研究,目前,一系列构成单细胞生物自噬核心机器的基因已被发现并命名。 然而,对自噬在多细胞生物特别是哺乳动物中的调控机制的研究,科学界至今仍在不断探索中。摆在科学家面前的一个根源性的问题是:在多细胞生物中,诱导自噬的各种信号是如何被传递到细胞内自噬“核心机器”从而启动自噬过程的? 研究表明,与单细胞生物不同,在多细胞生物内,外界营养元素要依赖于生长因子的调控才能被转运到细胞内。一旦细胞外的生长因子匮乏,细胞便能启动自噬以维持能量平衡。那么,生长因子缺失这一信号又是如何“传达”的呢? 这也成为长期致力于细胞信号转导研究的林圣彩教授课题组近年来的研究目标之一。经过多年研究,课题组终于成功“**”这一自噬启动“密码”——即通过一种名为GSK3的激酶活性增高后磷酸化并随之激活乙酰转移酶TIP60,进而导致自噬核心机器中的蛋白激酶ULK1的乙酰化水平增强而启动细胞自噬。简言之,这一发现揭示了多细胞生物在生长因子缺失条件下的细胞自噬过程的新的介导分子及其通路。 林圣彩认为,弄清楚了细胞内到底有哪些蛋白分子“参与”了自噬和它们如何串联在一起,将有益于科学界从“源头”上认识相关疾病,并为这些疾病的诊断和治疗提供新的靶点。