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简易梯度洗脱器

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简易梯度洗脱器相关的论坛

  • 梯度洗脱的目的

    梯度洗脱的目的是为了去除杂质干扰吗，梯度洗脱设置规律如何呀，本人做化妆品检测，因为不同家的产品配方不一样，导致检测方法不适合所有家的样品，有干扰的一般还得复测，想请问大家有啥好的建议

  • 关于梯度洗脱

    HPLC有等强度(isocratic)和梯度(gradient)洗脱两种方式。等度洗脱是在同一分析周期内流动相组成保持恒定，适合于组分数目较少，性质差别不大的样品。梯度洗脱是在一个分析周期内程序控制流动相的组成，如溶剂的极性、离子强度和pH值等，用于分析组分数目多、性质差异较大的复杂样品。采用梯度洗脱可以缩短分析时间，提高分离度，改善峰形，提高检测灵敏度，但是常常引起基线漂移和降低重现性。 梯度洗脱有两种实现方式：低压梯度（外梯度）和高压梯度（内梯度）。 两种溶剂组成的梯度洗脱可按任意程度混合，即有多种洗脱曲线：线性梯度、凹形梯度、凸形梯度和阶梯形梯度。线性梯度最常用，尤其适合于在反相柱上进行梯度洗脱。 在进行梯度洗脱时，由于多种溶剂混合，而且组成不断变化，因此带来一些特殊问题，必须充分重视： ①要注意溶剂的互溶性，不相混溶的溶剂不能用作梯度洗脱的流动相。有些溶剂在一定比例内混溶，超出范围后就不互溶，使用时更要引起注意。当有机溶剂和缓冲液混合时，还可能析出盐的晶体，尤其使用磷酸盐时需特别小心。 ②梯度洗脱所用的溶剂纯度要求更高，以保证良好的重现性。进行样品分析前必须进行空白梯度洗脱，以辨认溶剂杂质峰，因为弱溶剂中的杂质富集在色谱柱头后会被强溶剂洗脱下来。用于梯度洗脱的溶剂需彻底脱气，以防止混合时产生气泡。 ③混合溶剂的粘度常随组成而变化，因而在梯度洗脱时常出现压力的变化。例如甲醇和水粘度都较小，当二者以相近比例混合时粘度增大很多，此时的柱压大约是甲醇或水为流动相时的两倍。因此要注意防止梯度洗脱过程中压力超过输液泵或色谱柱能承受的最大压力。 ④每次梯度洗脱之后必须对色谱柱进行再生处理，使其恢复到初始状态。需让10~30倍柱容积的初始流动相流经色谱柱，使固定相与初始流动相达到完全平衡。

  • 无法梯度洗脱

    安捷伦LC1100 无法实现梯度洗脱，以前曾重装过一次程序，不是硬件问题，按工程师建议，重新修复软件，依然不能，请各位大侠指教啊

  • 空白梯度洗脱

    [url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]梯度洗脱所用的溶剂纯度要求更高，以保证良好的重现性。进行样品分析前必须进行空白梯度洗脱，以辨认溶剂杂质峰，因为弱溶剂中的杂质富集在色谱柱头后会被强溶剂洗脱下来。用于梯度洗脱的溶剂需彻底脱气，以防止混合时产生气泡。

  • 梯度洗脱（二）梯度的变化

    梯度洗脱（二）梯度的变化

    1 .梯度洗脱等于无限个等度洗脱http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/12/201512131829_577712_3047134_3.jpgfigure 1a所示，条件是60%B的等度洗脱，我们会发现，在色谱的前端，峰并没有很好地分离，而在色谱的尾端，虽然峰分离的很好，但峰变的很宽。如果降低B的比例，前面的峰的可以得到分离，而后端的峰宽将会变的更宽；如果提高B的比例，后端的峰可以快速流出，峰宽也会窄一些，但前端的峰会更加难以分离，所以，遇到这种情况，很难用等度洗脱得到很好的分离。为什么会出现这种情况？通过计算，发现1a中样品的保留因子范围是0.934(34/0.9 ≈ 38),样品的极性差别很大，而通常等度洗脱的保留因子范围是120(20/1=20), 1a中保留因子的范围38远远大于20，所以是不适合用等度洗脱的。figure 1b,梯度洗脱的条件是 50-100% in 5 min，会发现不论是前端还是后端，峰都得到了很好的分离，并且峰宽几乎是一样的Figure 1c做了一个试验，将figure 1中分析的15种物质分成了5组，每组都是等度洗脱，B的比例分别是49%，61%，72%，80%和88%，每组的保留因子大概都是k等于3，峰宽也几乎一样，是不是和figure 1b很相似？如果将c中的等度洗脱的条件叠加，就是一个梯度洗脱，也就是说梯度洗脱可以理解为是有无数个比例变化很小的等度洗脱的叠加。2.梯度洗脱的窄峰宽和等峰宽梯度洗脱的最大好处就是能够窄的峰宽，并且同一梯度内的峰宽都是一样的，为什么呢？http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/12/201512131830_577713_3047134_3.jpg如Figure 2b所示，梯度条件是 5-100% B ，梯度时间是20min，2a显示了梯度变化时，保留因子k（虚线）的变化以及峰宽（实线）的变化。在梯度开始时，有机相比例低，保留因子k最大，峰还停留在柱头，峰宽为0，随着有机相比例的增加，物质开始柱子内移动，有机相比例不断增加，k值也一直下降，物质在柱子中不断移动直到流出。峰1和峰2的保留时间虽然不一样，但其移动的模式是一样的，并且k的变化曲线也是一样的，所以在梯度洗脱条件下，其峰宽也是一样的。1梯度洗脱等于无限个等度洗脱figure 1a所示，条件是60%B的等度洗脱，我们会发现，在色谱的前端，峰并没有很好地分离，而在色谱的尾端，虽然峰分离的很好，但峰变的很宽。如果降低B的比例，前面的峰的可以得到分离，而后端的峰宽将会变的更宽；如果提高B的比例，后端的峰可以快速流出，峰宽也会窄一些，但前端的峰会更加难以分离，所以，遇到这种情况，很难用等度洗脱得到很好的分离。为什么会出现这种情况？通过计算，发现1a中样品的保留因子范围是0.934(34/0.9 ≈ 38),样品的极性差别很大，而通常等度洗脱的保留因子范围是120(20/1=20), 1a中保留因子的范围38远远大于20，所以是不适合用等度洗脱的。figure 1b,梯度洗脱的条件是 50-100% in 5 min，会发现不论是前端还是后端，峰都得到了很好的分离，并且峰宽几乎是一样的Figure 1c做了一个试验，将figure 1中分析的15种物质分成了5组，每组都是等度洗脱，B的比例分别是49%，61%，72%，80%和88%，每组的保留因子大概都是k等于3，峰宽也几乎一样，是不是和figure 1b很相似？如果将c中的等度洗脱的条件叠加，就是一个梯度洗脱，也就是说梯度洗脱可以理解为是有无数个比例变化很小的等度洗脱的叠加。2梯度洗脱的窄峰宽和等峰宽梯度洗脱的最大好处就是能够窄的峰宽，并且同一梯度内的峰宽都是一样的，为什么呢？如Figure 2b所示，梯度条件是 5-100% B ，梯度时间是20min，2a显示了梯度变化时，保留因子k（虚线）的变化以及峰宽（实线）的变化。在梯度开始时，有机相比例低，保留因子k最大，峰还停留在柱头，峰宽为0，随着有机相比例的增加，物质开始柱子内移动，有机相比例不断增加，k值也一直下降，物质在柱子中不断移动直到流出。峰1和峰2的保留时间虽然不一样，但其移动的模式是一样的，并且k的变化曲线也是一样的，所以在梯度洗脱条件下，其峰宽也是一样的。

  • 浅谈梯度洗脱

    HPLC有等强度(isocratic)和梯度(gradient)洗脱两种方式。等度洗脱是在同一分析周期内流动相组成保持恒定，适合于组分数目较少，性质差别不大的样品。梯度洗脱是在一个分析周期内程序控制流动相的组成，如溶剂的极性、离子强度和pH值等，用于分析组分数目多、性质差异较大的复杂样品。采用梯度洗脱可以缩短分析时间，提高分离度，改善峰形，提高检测灵敏度，但是常常引起基线漂移和降低重现性。梯度洗脱有两种实现方式：低压梯度（外梯度）和高压梯度（内梯度）。两种溶剂组成的梯度洗脱可按任意程度混合，即有多种洗脱曲线：线性梯度、凹形梯度、凸形梯度和阶梯形梯度。线性梯度最常用，尤其适合于在反相柱上进行梯度洗脱。在进行梯度洗脱时，由于多种溶剂混合，而且组成不断变化，因此带来一些特殊问题，必须充分重视：①要注意溶剂的互溶性，不相混溶的溶剂不能用作梯度洗脱的流动相。有些溶剂在一定比例内混溶，超出范围后就不互溶，使用时更要引起注意。当有机溶剂和缓冲液混合时，还可能析出盐的晶体，尤其使用磷酸盐时需特别小心。②梯度洗脱所用的溶剂纯度要求更高，以保证良好的重现性。进行样品分析前必须进行空白梯度洗脱，以辨认溶剂杂质峰，因为弱溶剂中的杂质富集在色谱柱头后会被强溶剂洗脱下来。用于梯度洗脱的溶剂需彻底脱气，以防止混合时产生气泡。③混合溶剂的粘度常随组成而变化，因而在梯度洗脱时常出现压力的变化。例如甲醇和水粘度都较小，当二者以相近比例混合时粘度增大很多，此时的柱压大约是甲醇或水为流动相时的两倍。因此要注意防止梯度洗脱过程中压力超过输液泵或色谱柱能承受的最大压力。④每次梯度洗脱之后必须对色谱柱进行再生处理，使其恢复到初始状态。需让10~30倍柱容积的初始流动相流经色谱柱，使固定相与初始流动相达到完全平衡。

  • 请教梯度洗脱？

    请教各位高手，多组分分析时梯度洗脱的作用，相对等度洗脱（的谱图）怎样设置梯度洗脱？

  • 梯度洗脱条件设置

    求助各位大神，刚接触液相，现在有两种物质需要测试，一种物质有机相高时出峰，出峰时间较早，另一种物质水相多时出峰，出峰时间较晚，现在需要同时测定两种物质，老师建议用梯度洗脱，可是我没接触过梯度，按照他们等度出峰的条件评感觉设了几个梯度程序，效果很不好，基本没变化，基线还出现下移现象。不知道建立梯度有没什么流程，什么比较好的方法，或者设置的原则，求解呀~~

  • 离子色谱 梯度洗脱 抑制器电流

    大家好！在[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/3p][color=#3333ff]离子色谱[/color][/url]中，为了尽快把各成分都洗脱出来，我们会使用梯度洗脱的方式进行洗脱。然而，为了抑制基线受到梯度影响而漂移，也为了追求好的信噪比，我们会加一定抑制电流于抑制器。不过，抑制电流的大小选择是个技术活。太大，会损坏抑制器，仪器也会自动停止 报错。太小，就起不到很好的作用。尤其在梯度差距很大时，这种影响特别明显。大家在日常使用中，有什么好的方法来设置抑制电流呢？我用的ADES 600抑制器

  • 梯度洗脱程序

    想用超高效液相--蒸发光散射监测器测二硝托胺及代谢物，用乙腈：0.1%甲酸水（75：25）等度洗脱时，两者出峰时间基本重合了；梯度洗脱还没弄出来，我该怎样设梯度程序呢 大神指导， 注：代谢物极性大

  • 梯度洗脱疑问

    我们有一个产品有关物质检测EP为梯度洗脱。梯度洗脱时间如下0-55-1212-2020-25可是主峰时间为约22分钟，其中一个杂质的相对保留时间为1.3（均为EP要求的），计算一下至少需要运行29分钟以上。梯度只规定了25分钟，该怎么办？

  • 梯度洗脱的安装方案

    实验室有液相色谱，用的是荧光检测器，老师在考虑要装梯度洗脱，但是目前只有一个泵，型号是岛津LC-20AD，还需要配置哪些配件才能使用梯度洗脱呢？一定要两个泵吗？？？之前有一个工程师说可以装四元低压梯度阀就可以了，请教各位有没有比较好的方案~求助！谢谢！

  • 请教：梯度洗脱相关问题！！！

    硅胶柱层析的梯度洗脱各位朋友，我做硅胶柱层析的时候用梯度洗脱，请问下，我的每一个梯度要用多少量啊？或者说我要洗脱到什么程度，才可以换另外一个梯度？

  • 关于梯度洗脱

    液相梯度洗脱中，分线性梯度、凸形梯度、凹形梯度、分段梯度，请教一下，凸形和凹形的程序如何设置呢？这两种梯度是否可以采用分段梯度来达到同样的效果呢？

  • 梯度洗脱问题

    很少用到梯度洗脱，请教个问题，可能没有实际意义只是有点想不明白自动进样，如果样品运行时间和梯度设置的周期不一样的话，比如运行时间10min，而一个周期设了20Min,那么仪器是如何工作的呢，是梯度走一半继续下一针呢，还是进下一针时还在运行上一个余下的梯度呢，相反恩如何运行时间长而周期设短了呢，还有最后一个指令结束后是一直按照最后的条件走吗

  • 【求助】梯度洗脱？

    我用的可做4元梯度，我想问的是，在做多种组分时，怎样根据等度图谱，设梯度洗脱，可使基线不会有太显著飘逸和梯度变化的时间点以及梯度曲线怎样选择？

  • 【讨论】单泵洗脱达到双泵梯度洗脱效果

    我们公司的高效液相是安捷伦1200，配备单泵，但是《中国药典》里面的方法是需要双泵梯度洗脱，因此我公司无法按此法检测，现在老板不愿意再买一台泵，要求我从流动相的配比上面来解决单泵洗脱达到双泵梯度洗脱效果的问题，各位专家有什么高招，在此讨论讨论

  • 液相梯度洗脱问题

    [b][color=#444444]现用到液相梯度洗脱,但不知梯度洗脱时间怎么设定(两个梯度冲洗时间).哪位高手指点一下?[/color][/b]

  • 【求助】梯度洗脱设置问题

    1、需要的采用的梯度是：0-12min,磷酸缓冲液从100%降到97%，甲醇从0至3%；12-22min，磷酸缓冲液从97%降到90%，甲醇从3至10%，请问这个梯度程序改怎么设置啊？ 序号 时间 A% B%工作站设置界面是上面那样的2、关于流动相问题。我打算这样操作：流动相开始是乙腈，柱子C8是憎水柱，以乙腈—50%甲醇水—100%磷酸缓冲液（第一梯度）平衡， 结束后以100%纯水—20%甲醇水—乙腈这样的顺序来冲洗管路。请大家看看上面有没有不合适的地方？比如说甲醇水的比例，我查了数据，50%甲醇水粘度是1.6左右，纯乙腈粘度是0.89，平衡时粘度从0.89突然到1.60会不会增加太快？ 以100%磷酸缓冲液来平衡和100%纯水冲洗 会不会有问题（主要是色谱柱的说明书上有这句话：该柱固定相憎水性较强，建议流动相中应有5%以上的可与水互溶的有机溶剂（乙腈或甲醇）？3、采用梯度洗脱，要连续进几次空白样，是指在进了一针后马上再上一针空白样么？还是等一针运行完梯度洗脱后再进？谢谢大家！http://simg.instrument.com.cn/bbs/images/brow/em09511.gif

  • 求助 梯度洗脱

    因刚接触液相仪器，未经任何培训，现请教关于岛津2010液相 梯度洗脱设置问题，做农残的，其中A水 B 乙腈 ，谢谢大虾们

  • 【求助】关于梯度洗脱的问题

    多谢各位大侠指点。但是我做了几个月高效液相实验，发现一般都是中药材用梯度洗脱，西药很少（而目前我还没用过梯度洗脱）是不是因为用梯度的话药材各峰会分的比较开啊？

  • 【原创】对于梯度洗脱的一点总结

    梯度洗脱对于组分复杂的样品，采用一种色谱体系，很难得到理想的分离结果。要么分离时间太长，要么分离度太差。液相色谱中采用梯度洗脱,目的：缩短的时间；提高分离效果。梯度洗脱：流动相由几种不同极性的溶剂组成，通过改变流动相中各溶剂组成的比例改变流动相的极性，使每个流出的组分都有合适的容量因子k'，并使样品种的所有组分可在最短时间内实现最佳分离。梯度洗脱特点：提高柱效改善检测器的灵敏度当样品中的一个峰的k'值和最后一个峰的k'值相差几十倍至几百倍时，使用梯度洗脱效果特别好。梯度洗脱中为保证流速的稳定，必须使用恒流泵，否则难获重复结果。梯度洗脱常用一个弱极性的溶剂A和一个强极性的溶剂B。梯度范围：指流动相中强溶剂分别在起始液和终止液中的浓度。调节梯度范围对得到最佳的梯度分离起重要作用。最佳梯度范围：第一个峰处分时间大约为2倍的t0，梯度结束时把最后一个峰洗脱出来。梯度洗脱的形式线形梯度：在梯度洗脱时，流动相强度的变化梯度时间成线性比例。在一定时间内流动相强度越大，直线斜率越大。指数梯度：在梯度洗脱时，流动相强度岁梯度时间变化称指数关系 。凹形：梯度起始阶段强度变化缓慢，随时间增加强度变化加快。凸形：起始阶段梯度速度变化快，终止阶段梯度速度变化慢。折线形： 选择适当的A,B溶剂强度：A溶剂为低强度；　　　B溶剂为高强度，B溶剂的强度应能够在梯度过程中使所有欲测谱带都能被洗脱，并使各谱带的k’值在2-10之间。初步分离　　选择好A、B两种溶剂，先按中等强度进行配比，在此恒定强度下进行初步分离。A、B混合溶剂强度应使所有谱带的k’值在1-10之间。梯度形式选择经过初步分离，一般可能得到3种分离色谱图：① 前半部峰重叠，后半部峰分离度过大，保留时间太长；　 可选择线形梯度，或凹形梯度。② 前半部分离良好，后半部峰重叠；　 可选择凸形梯度。③ 前后两部分分离良好，中间部分峰重叠。　 可选择折线梯度。

  • 关于梯度洗脱？？？

    这个问题可能很菜我的梯度洗脱是水-甲醇-1.2%的乙酸（文献上看的方法）请问甲醇？乙酸？的作用分别是什么？？怎么样设计梯度与时间？？？我现在有的可以跑出来，有的不可以，这是什么原因？怎么样改？？

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