异型体

[font=宋体][font=宋体]随着生物制药技术的快速发展，抗体疗法已成为治疗多种疾病的有力手段。特别是双特异性抗体（[/font][font=Calibri]bsAbs[/font][font=宋体]）和多特异性抗体（[/font][font=Calibri]msAbs[/font][font=宋体]），因其能够同时靶向多个生物学标志物，展现出了独特的治疗潜力。然而，这些抗体的开发面临着重重挑战，尤其是在确保正确的重链和轻链配对方面。本文将基于一篇关于[/font][font=Calibri]CrossMAb[/font][font=宋体]技术的综述文章，探讨该技术在构建双特异性及多特异性抗体中的应用及其潜力。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]CrossMAb[/font][font=宋体]技术[/font][/font][font=宋体]最初由[/font][font=宋体][font=Calibri]Roche[/font][/font][font=宋体]等公司开发，[/font][font=宋体]是一种[/font][font=宋体]新型[/font][font=宋体]的抗体工程技术，其核心在于[/font][font=宋体]利用[/font][font=宋体]免疫球蛋白[/font][font=宋体]结构[/font][font=宋体]域交叉来实现正确的轻链配对。[/font][font=宋体]此外，该技术还可与[/font][font=宋体][font=Calibri]knobs-into-holes[/font][/font][font=宋体]（[/font][font=宋体][font=Calibri]KiH[/font][/font][font=宋体]）[/font][font=宋体]技术或静电[/font][font=宋体]转向[/font][font=宋体]等[/font][font=宋体]正确的[/font][font=宋体]重链配对技术相结合，[/font][font=宋体]产生各种不同形式的双特异性抗体，[/font][font=宋体][font=宋体]极大地提高了双特异性[/font][font=Calibri]IgG[/font][font=宋体]抗体的生成效率。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]自[/font][font=Calibri]2011[/font][font=宋体]年[/font][font=Calibri]CrossMAb[/font][font=宋体]技术首次被[/font][/font][font=宋体]提出[/font][font=宋体]以来，它已被证明是一种多功能的抗体工程技术，能够[/font][font=宋体]开发出[/font][font=宋体]多种[/font][font=宋体]形式的[/font][font=宋体][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/bispecific-antibody][b]双特异性抗体[/b][/url]，包括异源二聚体[/font][font=Calibri]/[/font][font=宋体]非对称双价、三价、四价[/font][/font][font=宋体]的[/font][font=宋体]双特异性抗体以[/font][font=宋体]和特异性性[/font][font=宋体][font=宋体]抗体。这些双特异性抗体可以从任何现有的抗体对中通过域交叉获得，无需识别共同的轻链、翻译后加工[/font][font=Calibri]/[/font][font=宋体]体外化学组装或引入一组强制正确轻链配对的突变。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]CrossMAb[/font][font=宋体]技术的一个关键优势在于其能够[/font][/font][font=宋体]开发[/font][font=宋体][font=宋体]针对特定疾病的双特异性抗体。例如，针对肿瘤治疗的双特异性抗体[/font][font=Calibri]vanucizumab[/font][font=宋体]（[/font][font=Calibri]RG7221[/font][font=宋体]），它能够同时靶向血管内皮生长因子[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]A[/font][/font][font=宋体][font=宋体]（[/font][font=Calibri]VEGF-A[/font][font=宋体]）和血管生成素[/font][font=Calibri]-2[/font][font=宋体]（[/font][font=Calibri]Ang-2[/font][font=宋体]），在临床前研究中显示出强大的抗肿瘤效果。此外，该技术还被用于开发针对眼部疾病的[/font][font=Calibri]VEGF-Ang-2 CrossMAb RG7716[/font][font=宋体]，以及针对实体瘤的[/font][font=Calibri]CEA TCB[/font][font=宋体]（[/font][font=Calibri]RG7802[/font][font=宋体]）等。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]除了在双特异性抗体领域的应用，[/font][font=Calibri]CrossMAb[/font][font=宋体]技术还[/font][/font][font=宋体]可用于生成其他类型的抗体[/font][font=宋体][font=宋体]。例如，通过该技术可以生成功能性的单价抗体（[/font][font=Calibri]MoAb/MonoMAb[/font][font=宋体]）和二聚体[/font][font=Calibri]MoAb[/font][font=宋体]（[/font][font=Calibri]MoAb-dimer, DuoMAb[/font][font=宋体]）。此外，还可以构建三特异性抗体，如针对[/font][font=Calibri]HER[/font][font=宋体]家族受体的[/font][font=Calibri]panHER[/font][font=宋体]家族[/font][font=Calibri]DAF-CrossMAb[/font][font=宋体]抗体，以及四特异性抗体，如针对[/font][font=Calibri]EGFR/HER1[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]HER2[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]HER3[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]VEGF[/font][font=宋体]的[/font][font=Calibri]FL518[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]CRTB6[/font][font=宋体]。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]CrossMAb[/font][font=宋体]技术的成功不仅在于其能够生成具有特定生物学功能的抗体，还在于其能够通过标准化的工作流程和典型的上下游处理产生高质量的[/font][/font][font=宋体]抗体[/font][font=宋体][font=宋体]产品。这些抗体在规模、产量、糖基化、稳定性和质量方面与传统的[/font][font=Calibri]IgG[/font][font=宋体]抗体相当。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]总之，[/font][font=Calibri]CrossMAb[/font][font=宋体]技术为双特异性及多特异性抗体的开发提供了一种强大且灵活的平台。随着该技术的不断发展和优化，将有更多基于[/font][font=Calibri]CrossMAb[/font][font=宋体]技术的抗体进入临床试验阶段，为患者带来[/font][/font][font=宋体]治疗福音[/font][font=宋体][font=宋体]。然而，尽管[/font][font=Calibri]CrossMAb[/font][font=宋体]技术已经取得了显著的进展，但在实际应用中仍可能遇到产量或纯度不足等问题，需要进一步的优化和改进。未来的研究将继续探索[/font][font=Calibri]CrossMAb[/font][font=宋体]技术的潜力，以满足临床治疗的需求。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]本篇文章由[url=https://cn.sinobiological.com/][b]义翘神州[/b][/url]进行整理，同时提供[url=https://cn.sinobiological.com/services/bispecific-antibody-service][b]双特异性抗体生产服务[/b][/url]，详情可点击了解！参考文献：[/font][font=宋体][font=Calibri]Klein C, Schaefer W, Regula JT. The use of CrossMAb technology for the generation of bi- and multispecific antibodies [published correction appears in MAbs. 2018 Nov 13 11(1):217]. MAbs. 2016 8(6):1010-1020. doi:10.1080/19420862.2016.1197457[/font][/font]

[font=宋体][font=宋体]双特异性抗体是含有两种抗原结合位点的抗体，可结合不同表位（通常在两个抗原上）。一般来说，一个抗原结合位点特异性结合靶细胞表面的抗原，而另一个则结合效应细胞表面上的触发分子，例如一种[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]γ[/font][font=Calibri]R[/font][font=宋体]或[/font][font=Calibri]CD3/T[/font][font=宋体]细胞受体复合物。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]双特异性抗体可以改变效应细胞对其自然靶标的特异性，并使其重定向，杀死它原本会忽略的靶标。不同的细胞毒性细胞表达不同的触发分子（受体）。因此，通过改变靶标和效应结合域的特异性，可针对大多数类型的靶细胞产生多种效应应答。或者，通过特异性结合血清免疫球蛋白，可以实现全范围的效应功能（即[/font][font=Calibri]ADCC[/font][font=宋体]、吞噬作用、补体激活和延长血清半衰期）。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]近日，市面上出现了用于治疗用途的两种双特异性抗体。由于其独特的作用机制，双特异性抗体受到了广泛的关注，越来越多的双特异性抗体不仅用于癌症研究，也用于其他疾病的临床试验。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]双特异性抗体的优缺点：[/b][/font][font=宋体]优势：[/font][font=宋体]①双特异性抗体将效应细胞直接靶向肿瘤细胞，增强其细胞毒性。[/font][font=宋体]②双特异性抗体可以同时识别两种分子，提高了抗体的选择性和功能性亲和力，改善了药物的安全性和有效性。[/font][font=宋体]③与两种单克隆抗体药物联合用药治疗相比，双特异性抗体药物减少了开发和临床试验成本。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]与单克隆抗体药物相比，双抗药物也存在不足之处，主要表现在：[/font][font=宋体]①存在重链、轻链错配现象，制备工艺难度高[/font][font=宋体]②双抗并非天然结构，存在使用过程中产生抗药物抗体的可能。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]双特异性抗体的制备方法：[/b][/font][font=宋体][font=宋体]制备[url=https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/bispecific-antibody][b]双特异性抗体[/b][/url]，科学界同仁已开发了诸多解决方案。杂交[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]杂交瘤法（也称为四源杂交瘤）是最早用于制备双特异性抗体的技术。基于两种不同杂交瘤细胞系的体细胞融合，表达所需特异性的鼠[/font][font=Calibri]IgG[/font][font=宋体]。然而，这种方法制备的功能性双特异性抗体占比低，为后续的抗体纯化和质控带来了巨大的挑战。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]通过使用分子克隆技术，双特异性[/font][font=Calibri]IgG[/font][font=宋体]抗体由同一细胞系表达的两条不同重链和轻链组成。双特异性抗体的制备需要至少两个用于异二聚化重链的质粒和一个用于公共轻链的质粒。如果使用两个不同的轻链，则需要两个轻链质粒。一般建议[/font][font=Calibri]2[/font][font=宋体]个单独的质粒上表达[/font][font=Calibri]HC[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]LC[/font][font=宋体]，因为调整质粒比率是一种简单有效的方法。随后，通常要经历复杂的过程从异质稳定转染池中选择最理想的克隆细胞系，以用于大规模抗体生产。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]与稳定转染相比，瞬时转染无需将重组[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]整合至宿主基因组中，可以在数天内快速得到结果。人胚肾细胞（[/font][font=Calibri]HEK293[/font][font=宋体]）可用于双抗的瞬时表达，适合应用于双抗药物开发的早期阶段。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]更多详情可以查看：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/bispecific-antibody[/font][/font]

[font=宋体][font=宋体]双特异性抗体是含有[/font][font=Calibri]2[/font][font=宋体]种特异性抗原结合位点的人工抗体，能在靶细胞和功能分子[/font][font=Calibri]([/font][font=宋体]细胞[/font][font=Calibri])[/font][font=宋体]之间架起桥梁应，激发具有导向性的免疫反应，是基因工程抗体的一种，现已成为抗体工程领域的热点，在肿瘤的免疫治疗中具有广阔的应用前景。[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]双特异性抗体类型：[/font][/b][font=宋体][font=宋体]由于抗体的模块化结构，目前已经产生了[/font][font=Calibri]100[/font][font=宋体]多种不同的双特异性抗体形式。这些形式在许多方面均有不同，包括它们的分子量、抗原结合位点的数量、不同结合位点之间的空间关系和药代动力学半衰期等。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]重组双特异性抗体可分为两种类型：具有[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]区的双特异性抗体和无[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]区的双特异性抗体。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]具有[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]区的双特异性抗体保留[/font][font=Calibri]Fc-[/font][font=宋体]介导的效应功能，例如[/font][font=Calibri]CDC[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]ADCC[/font][font=宋体]。此类抗体包括[/font][font=Calibri]"knob into hole" IgG[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]crossMab[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]ortho-Fab IgG[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]DVD IgG[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]two in one IgG[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]IgG-scFv[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]scFv2-Fc[/font][font=宋体]等。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]无[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]区的双特异性抗体缺乏[/font][font=Calibri]Fc-[/font][font=宋体]介导的效应功能。然而，相较于类[/font][font=Calibri]IgG[/font][font=宋体]抗体，较小尺寸的抗体具有更好的肿瘤组织渗透性。在这种形式中，每个亲本单克隆抗体的可变区和多肽（[/font][font=Calibri]linker[/font][font=宋体]）均被克隆，并形成单链双特异性抗体。这些双特异性抗体有多种形式，包括[/font][font=Calibri]tandem scFvs[/font][font=宋体]、单链双抗体、[/font][font=Calibri]TandAbs[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]DART[/font][font=宋体]、 [/font][font=Calibri]dock-and-lock[/font][font=宋体]（[/font][font=Calibri]DNL[/font][font=宋体]）以及纳米抗体等。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]双特异性抗体（双抗）相对于单克隆抗体具有以下优势：[/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体]①特异性增强：双抗具有两个抗原结合位点，可以同时结合两种不同的特异性表位或目的蛋白，因此其特异性更强。[/font][font=宋体]②杀伤肿瘤细胞效率提高：双抗可以将免疫细胞募集至肿瘤细胞周围，通过重新定向免疫细胞，增强对肿瘤的杀伤力。同时，双抗可以阻断两种不同的信号通路，从而增强细胞杀伤毒性。[/font][font=宋体]③降低副作用：双抗与两种不同的细胞表面抗原结合后，潜在增加结合特异性，降低脱靶等引起的副作用。[/font][font=宋体][font=宋体]④提高药物经济学效益：双抗的治疗效果可以达到普通抗体的[/font][font=Calibri]100-1000[/font][font=宋体]倍，使用剂量最低可降为原来的[/font][font=Calibri]1/2000[/font][font=宋体]，显著降低药物治疗成本，提高了市场空间。[/font][/font][font=宋体]⑤适应症更广泛：双抗在组织渗透率、杀伤肿瘤细胞效率、脱靶率和临床适应症等指标方面也具有较强的竞争力，临床应用优势显著。[/font][font=宋体]综上所述，双特异性抗体具有更强的特异性、靶向性，可以提高杀伤肿瘤细胞效率并降低副作用，同时还能降低治疗成本，提高药物的市场空间。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州提供[url=https://cn.sinobiological.com/services/bispecific-antibody-service][b]双特异性抗体制备服务[/b][/url]，服务内容包含：基因合成及密码子优化[/font][font=宋体]→载体构建→表达与纯化→[/font][font=Calibri]QC[/font][font=宋体]分析→交付内容[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]文章来源：双特异性抗体[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/bispecific-antibody[/font][/font]