核酸光标记系统

细胞外囊泡(extracellular vesicles, EVs)在机体的多种生理病理过程中均发挥着重要作用，良好的结构稳定性、生物相容性及天然的转运能力使其成为理想的药物递送载体和治疗制剂。不管是在工业生产还是科学研究中，EVs的质量控制都至关重要，国际细胞外囊泡协会(international society for extracellular vesicles, ISEV)一直在努力推动和完善相关标准，如MISEV2014、MISEV2018以及即将发布的MISEV2022，同时工业界也试图确立适用于工业产品的质控标准。除了粒径、浓度等常规物理参数的检测，更重要的是对EVs的纯度、蛋白标志物、核酸以及载物等功能性分子进行表征，而内容物的定性定量分析通常需要通过荧光标记来实现。近日Lonza集团的研发团队发表了题为“Opportunities and Pitfalls of Fluorescent Labeling Methodologies for Extracellular Vesicle Profiling on High-Resolution Single-Particle Platforms”的文章，作者分别利用高分辨单颗粒表征平台nFCM(NanoFCM)和F-NTA对EVs进行表征，探讨EVs荧光表征过程中面临的问题与挑战。文章对EVs纯度测定过程中染料的选择、蛋白标志物分析、RNA检测、复杂体系中EVs的表征等方面进行全面研究，指出在EVs综合表征中面临的问题与注意事项，供广大EVs研究者参考。EVs纯度鉴定首先，分别选取两种细胞膜染料和两种细胞质染料对EVs的纯度进行鉴定。nFCM结果显示，无论是细胞膜染料(CMG/CMR)还是细胞质染料(CFSE/CTR)，EVs阳性颗粒的比例均高达90%左右，且EVs尺寸越大，结合的染料越多，荧光强度也越高。由于具备超高的散射和荧光灵敏度，nFCM证实了几种染料标记效率的一致性(图1)。同样的样品和染色方法用F-NTA检测，经CFSE标记的EVs阳性率为88%，与nFCM结果相当，而对于CMG染料标记，F-NTA测得的阳性颗粒比例只有32%左右，粒径分布显示F-NTA检测到的是大的EVs。这个案例提醒研究者对于EVs纯度分析不仅需要关注不同染料间的标记和检测效率问题，还需要关注表征平台的检测能力。图1 不同染料标记EVs纯度的效率EVs抗体选择和标记方法在早期的微信公众号推文中小编介绍过不同公司的抗体特异性存在差异，抗体标签也是影响EVs标记效率的一个因素。该研究对比了PE、AF488、AF647、APC四种标签的CD9抗体，发现PE和AF488的标记比例优于AF647和APC，比例在50%左右；进一步选用PE和AF488两种标签的CD9、CD63和CD81抗体，发现在HT29和HEK293细胞系中不同标签抗体标记的效果没有显著差别(图2)，说明在EVs蛋白标记过程中研究者需要格外关注抗体特异性、标签的选择对标记效率的影响。图2 不同荧光标签对抗体标记效率的影响除了抗体标签，未结合的抗体对EVs的阳性率也存在影响。文章对比了稀释法(Dilution)、超滤(UF)、尺寸排阻(SEC)三种方法对游离抗体去除效果和标记比例的影响。由于不涉及纯化过程，理论上稀释法对EVs的影响是最少的。nFCM结果显示三种方法得到的CD9、CD63、CD81阳性率基本一致，说明稀释法可以用来准确地测定EVs蛋白的比例，同时结果也证明UF和SEC纯化过程对EVs蛋白的阳性率没有影响(图3)。说明nFCM可通过稀释法测定EVs蛋白表达比例，省略超速离心去除游离抗体的操作，极大缩短操作时间，同时真实反映EVs蛋白表达比例和强度。图3 nFCM测定游离抗体去除方法对标记比例的影响细胞上清中EVs的直接检测前面介绍的案例都是基于EVs纯品的分析，杂质颗粒含量非常低，对测定结果的影响相对较小。进一步对较复杂的细胞上清(CCM)进行直接检测，作者指出对于EVs纯品和CCM样品，nFCM的结果令人惊讶的一致，CFSE与CMG阳性率例均在90%左右，与超离纯化的 HT29 EVs样品结果一致，说明nFCM平台既适用于纯的EVs样品，也可用于细胞上清样品中EVs的直接检测，具有广泛的应用场景；而在F-NTA平台，CFSE与CMC对于HT29细胞上清EVs标记阳性率分别为33%和27%，作者解释称可能是由于CCM样品复杂的成分导致F-NTA的检测存在差异；对于蛋白比例检测，3种EVs蛋白marker总比例高达188.5%，远远超过100%，文章指出可能是F-NTA荧光的灵敏度高于散射，大量小颗粒的散射信号未检出，导致比例高于100%。图4 CCM样品EVs纯度和蛋白比例测定与F-NTA相比，nFCM还可以利用多色荧光标记策略对sEV亚群进行表征。为研究EVs的抗体单标和双标之间是否相互影响，作者选取CD9-AF488和CD81-PE分别进行单独标记和双标，对比标记比例的变化。结果表明这两个蛋白之间，不管是单独标记或双标，阳性率差异不显著；另外，用EVs染料CTR和CD81同时标记EVs，发现所有CD81阳性的EVs的CTR均呈现阳性，说明CD81阳性的颗粒，均是EVs！(图5)。nFCM可以准确识别抗体标记的所有EVs，并且确认抗体阳性率的准确性。图5 EVs抗体单标和双标的影响结论综上，Lonza集团的研发团队对EVs荧光标记过程中的各项指标进行综合对比，对EVs纯度测定过程中染料的选择、蛋白标志物分析、复杂体系中EVs的表征等进行研究，对工业生产中EVs的质量控制提供了新思路和新方法。作者肯定了nFCM用于EVs检测的准确性和灵敏度，提出EVs纯度表征方法，初次采用CD9/63/81几种抗体的混合物验证EVs的纯度，并对细胞上清中的EVs进行直接检测，得到了跟EVs纯品相一致的结果。另外作者指出nFCM对于EVs荧光检测具有更高的灵敏度和稳定性(图6)，nFCM可在单颗粒水平对EVs的散射和荧光进行同时检测，单次采样即可实现蛋白与EVs(或蛋白间)的“共定位”分析，是EVs质量控制中不可或缺的工具。图6 文中关于nFCM的评价附录：Lonza Walkersville(龙沙集团)是全球CDMO龙头企业，一家以生命科学为主导，在生物化学、精细化工、功能化学等行业均处于领先地位的全球性跨国公司，具有一百多年历史，总部位于瑞士巴塞尔。Lonza集团EVs工作流程图(图片来源：Lonza官方网站)Lonza目前已采购3台NanoFCM，分别用于EVs研发、生产质控和CRO项目，致力于EVs大规模生产、纯化和表征，后续将应用于EVs载药领域。2021年11月，Lonza收购了Codiak公司位于马萨诸塞州Lexington的外泌体生产基地，正式成为Codiak管线的战略制造合作伙伴。届时Lonza将借助Codiak的高通量外泌体生产技术向第三方提供服务，并开发先进的外泌体产品，助力细胞与基因治疗产业。参考文献：1. Fortunato D, Mladenović D, Criscuoli M, et al. Opportunities and Pitfalls of Fluorescent Labeling Methodologies for Extracellular Vesicle Profiling on High-Resolution Single-Particle Platforms[J]. International Journal of Molecular Sciences, 2021, 22(19): 10510.2. https://www.lonza.com/3. https://www.lonza.com/news/2021-11-02-13-01

荧光定量PCR技术是将常规的PCR和荧光检测技术相结合，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，以此实现对初始模板的定量分析。荧光定量PCR技术作为当今生物学研究的重要手段之一，在基础科学、生物技术、医学研究、法医学、诊断学等多方面具有广泛的应用前景。说到荧光定量PCR技术，我们经常会问类似于“你的实验是染料法还是探针法”，“你用的探针是什么类型”等之类的问题，这其实是对荧光标记的选择。根据荧光标记的不同，可以将荧光定量PCR实验分为探针法和染料法两大类。染料法染料法利用能与DNA双链结合的染料来实现，如SYBR Green I。该染料在游离状态下呈现微弱的荧光，一旦与双链DNA的双螺旋小沟结合，其绿色荧光增强约1000倍。因此其总的荧光强度与双链DNA含量成正比，利用这一关系可以反映生成的PCR产物的量（图 1）。SYBR Green I的最大吸收约在497 nm，发射波长最大约在520 nm，与FAM荧光分子的光谱性质类似，因此在所有的荧光定量PCR设备中都是第一通道检测，即“FAM/SYBR Green I”通道。▲ 图1 染料法原理图理论上，所有能与双链DNA结合的染料都可以用于qPCR检测，如溴化乙锭EtBr，碘化丙啶PI，吖啶橙、Cy3等。而选择用于qPCR反应的染料通常会从信号强度、生物安全性、检测简便性和经济适用性这几个因素考虑。例如EtBr可能存在潜在的致癌性。综合考虑下来，SYBR Green I成了比较理想的选择。目前，使用Evagreen的实验者也越来越多，Evagreen作为一种新型的染料，其光谱性质与SYBR Green I类似，其优势在于：▶ 对PCR反应的抑制程度小。高浓度SYBR Green I会强烈抑制PCR反应，因此要控制其使用浓度，一定程度上降低了DNA检测的灵敏度。▶ 与DNA结合密度高。单位长度的DNA双链上Evagreen的密度更高，为饱和型染料，消除了SYBR Green I存在的“染料重分布”的缺陷，提高检测灵敏度的同时也可用于高分辨率溶解曲线HRM。▶ 化学性质更稳定，适合长期保存。TaqMan 探针TaqMan 探针基本可以满足60%以上的qPCR实验，如常规的基因表达和拷贝数变异CNV实验。TaqMan 荧光探针是一种寡核苷酸探针，荧光基团连接在探针的5' 末端，而淬灭剂则在3' 末端（图2）。PCR扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针，探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收 PCR扩增时, Tag酶的5' -3' 外切酶活性将探针酶切降解，使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离，从而荧光监测系统可接收到荧光信号，每扩增一条DNA链，就有一个荧光分子形成,实现了荧光信号的累积与PCR产物形成完全同步。常用的荧光基团是FAM，TET，VIC，HEX。▲ 图2 Taqman探针MGB探针对于要分辨单碱基差异的SNP实验，采用对碱基错配容忍度更低的MGB探针，在淬灭基团后加入了DPI3基团（图3），从而提高了与靶标结合的亲和力；而且可以对靶点碱基进行化学修饰，如PeptideNucleic Acid和Locked Nucleic Acid。▲ 图3 MGB探针双杂交探针Taqman探针对探针的长度有比较严格的要求，双杂交探针则消除了这一“缺陷”。双杂交探针是由两条寡核苷酸单链组成，一条的3’端带有供体荧光分子，另一条的5’端带有受体荧光分子（图4）。游离状态下荧光供体会发出荧光，但当两条单链都匹配到模板链上时，就会发生荧光共振能量转移FRET，受体荧光分子就可以发出荧光，其荧光强度与生成的产物的量成正比。双杂交探针的优势有两点：摆脱了探针长度的限制，较长的探针可以提高与模板匹配的成功率；只有上下游两条探针都正确匹配后才能检测到受体荧光分子发出的荧光，特异性有所提高。▲ 图4 双杂交探针分子信标探针游离状态下，分子信标探针是一种茎环结构，其环状部分的15-30个碱基可以与靶标区域相结合匹配，下端的配对区域（左右一般各5-6个碱基）则由重复的GC组成，从而将5’的荧光分子和3’的淬灭基团紧紧聚在一起，荧光发生淬灭；当退火时，分子信标探针解开环并与模板靶标杂交，这样荧光分子和淬灭基团的物理距离就变大了，荧光淬灭的前提就打破了（图5）。除了MGB探针，分子信标探针也非常适合用于SNP检测。▲ 图5 分子信标探针除了上述几种类型的探针之外，还有尝试将引物和探针功能相结合的技术，如Amplifluor、LUX等，在设计难度上有所提高，但使用时更简便。各有其应用的侧重点和设计上的利弊，在此不多赘述。那么在荧光定量PCR实验中，我们应该如何进行选择呢？在这里，给大家总结了一些两种方法的区别，供大家参考。表1 染料法和探针法的区别

p style="TEXT-ALIGN: center"img style="WIDTH: 500px HEIGHT: 404px" title="2015812530441140.jpg" border="0" hspace="0" src="http://img1.17img.cn/17img/images/201508/uepic/28a495d3-f847-4968-980e-a818f89bc0ae.jpg" width="500" height="404"//pp style="TEXT-ALIGN: center"strong活细胞中的塑料球能发出激光。图片来源：M. SCHUBERT/strong/pp　　两组研究人员分别将微小激光器放置在了活细胞内。这听上去可能有点像蚂蚁侠的下一代武器，但这个“小玩意”将极大提高生物学家追踪单个细胞活动的能力——这可能惠及从发育生物学到癌症研究的诸多领域。/pp　　“这有可能做一些你利用其他技术做不到的事。”英国敦提大学生物物理学家David McGloin说。例如，该激光器能追踪的细胞比荧光标记能追踪的更多，并且比高频ID等萌芽技术更简单易用。剑桥大学神经生物学家Kristian Franze也赞同这一观点。“如果他们能开发出适用于活细胞的此类技术，那对许多人而言将非常有趣。”他说。/pp　　要制作一个激光器，你需要两件东西：一种能被激发产生光的材料或“媒介”以及一个回荡着特定波长的光的“共振腔”，就像管风琴会同特有频率的声波共鸣一样。与谐振腔共振的光会刺激该材料发出更多光，极大地放大其效果来创造激光，结果将产生一个能放大光量的反馈回路。/pp　　之前，科学家也曾“摆弄”过以细胞为基础的激光器。例如，2011年，美国哈佛大学医学院生物医学家Seok Hyun Yun和现供职于英国圣· 安德鲁大学的物理学家Malte Gather，利用工程改造后包含绿色荧光蛋白的单个细胞作为发光媒介，并将其置于一个共振腔内，从而制造了一个激光器。但没有人制出放置在单个细胞内的激光器。/pp　　研究小组多年来一直在探索以单细胞为基础的激光，希望在活组织内造出会发荧光的细胞，以便在这些细胞工作时跟踪它们，深入揭示身体内部机制，比如癌症是如何开始的。目前，Gather和Yun正在利用类似技术分别进行研究。/pp　　一个困难环节是将腔囊放置在细胞内。Gather和同事将细胞与直径约为5~10微米的塑料球混合，这些小球被掺杂了荧光染料。小珠子充当了空腔，而染料则充当了媒介。细胞经由内吞作用将小球吸入“体内”，这一过程就像免疫细胞吞噬病原体。由于这些球体用荧光染料浸过，所以用一种颜色的光撞击后，它们会发出另一种颜色的光。这种光接着在球体内共振，引发激光作用，并放大自己。重要的是，每一束激光会根据球体的精确尺寸发出12种不同波长的光。相关论文发表在近日出版的《纳米快报》上。这一技术能作用于4类细胞，包括人类巨噬细胞和一种白血细胞。/pp　　研究人员指出，这一技术在细胞传感、医疗成像等领域有着广泛应用。“改写传统激光研究领域的知识并在这个平台上展开研究以便将激光性能最优化，将是一件有趣或者说非常激动人心的事情。”Yun表示。/pp　　之后，研究人员设计出一种5纳秒的光脉冲激活这些染料。它发射的光能沿球体的中间线运行——通过一种名为全内反射的过程进行约束。特定波长的共振和增加会更强烈，直到珠子发出足够的激光。/pp　　Yun和同事Matjaz Humar还设法诱导细胞“吞下”塑料珠子，并且他们制造了两类共振球，相关成果日前在线发表于《自然—光子学》期刊。研究人员利用一个细胞内的脂肪滴或油滴反射和放大光，从而产生激光。Yun和Humar报告说，他们能改变波长，并且利用不同直径的荧光聚苯乙烯微球而不是被注射进去的油滴或脂肪滴标记单个细胞。理论上，利用不同组合的微球和具有不同光谱特性的染料，应当可以使为人体中存在的几乎所有细胞进行单独标记成为可能。/pp　　Yun和Gather表示，这些激光器最显著的应用可能将是追踪单个细胞的行动。每个塑料珠子的直径和光学特性都略有不同，因此它们能有效区分波长，充当细胞条形码。Gather和同事用19小时在细胞培养皿中追踪了少量巨噬细胞，而Yun和Humar也进行了类似验证。/pp　　由于激光器能在明确的波长上照亮细胞，这让它们比荧光蛋白质标记等其他细胞追踪技术更有优势。包含荧光染料和蛋白的传统荧光探针拥有相对较宽的发射光谱——约30～100纳米。这限制了能被同时使用的探针数量，因为通常很难从组织中天然分子广泛的背景发射中区分出这些发光源。但这种激光器的光谱特性使其能同时追踪数千个微小指向标。研究人员通过为每个细胞装载数个小球将这一数字扩展到数百万或数十亿。然后，每个细胞将以不同的波长组合发射激光。/pp　　但这一技术还有很长的路要走。首先，研究人员需要确定不同的细胞类型都能“吞下”小球，尤其是活组织中的细胞。Gather预测，这将不是问题。“我相信该技术是可归纳的。”他说。另外，研发人员必须缩小塑料球的尺寸。Yun承认，现在的小球会将细胞填满。但Yun和Gather已经证实，他们可以用更小的玻璃球代替塑料球。/pp　　由于细胞发光可以持续一个较长的周期，可以在较长时间里识别和跟踪活组织内的细胞，有望为研究人员提供一种很有潜力的手段，执行细胞内传感、自适应成像，还可能真正看到肿瘤细胞的生长过程。但科学家指出，目前这一技术还只用在实验室培养的活细胞中，但他们希望进一步研究能带来用于动物实验的细胞跟踪系统，并最终用于人类。“不管怎样，它非常酷!”McGloin说。/p

宫颈癌是全世界女性第四大常见恶性肿瘤，每年可造成30多万人死亡。宫颈鳞癌（CESC）作为宫颈癌主要病理类型约占75%，通常经历由正常宫颈到宫颈上皮内瘤变再到CESC的发生和进展过程。然而，CESC进展过程中上皮和微环境细胞相互作用关系及其关键分子途径的发展尚不清楚。2023年1月27日，山东省肿瘤医院于金明院士、岳金波教授团队与解放军总医院第五医学中心刘兵研究员团队合作在Science Advances杂志上发表了题为Single-cell dissection of cellular and molecular features underlying human cervical squamous cell carcinoma initiation and progression的研究论文。为宫颈癌的诊疗提供了疾病诊断与预后的生物标志物和潜在的治疗靶点。为了阐明了宫颈上皮细胞的转录致瘤轨迹并揭示了 CESC 启动和进展中涉及的关键因素，文章作者对来自对四组13例不同病变阶段的宫颈组织（包括NC、CIN、早期CESC和晚期CESC）的起始和进展过程中，上皮细胞、巨噬细胞、NK和T细胞、内皮细胞、成纤维细胞的转录组变化及亚群特征进行了深入探索。该研究通过单细胞转录组测序，进行了单细胞RNA测序（scRNA-seq）构建了宫颈鳞癌发生和进展过程中的细胞和分子特征图谱，发现了大量肿瘤发生和进展相关的新的细胞亚群和分子。在此基础上，提出了针对“CESC生态系统“进行分析的必要性，尤其是考虑到免疫系统是作为一个动态的整体，简单对于单个细胞亚型的描述不足以展现更大的”全景“。围绕这个目标，在文章中通过大量的转录组数据，研究者发现几个细胞簇的相对丰度显示与较短的存活期显着相关：CCL20 +Mac、APOE+Mac、epi7、CD56+NK、TH17、耗尽的CD8 +T、PODXL+EC、TNFRSF9高Treg和 mCAF。相反，其他细胞簇的丰度与更长的存活率显着相关：pDC、CD16+NK、GZMK+CD8+T、ZNF683+CD8+T、CLEC9A+DC、epi8和肥大细胞。 实验部分除了转录组测序相关之外，作者使用TissueGnostics公司TissueFAXS Plus全景组织细胞定量分析系统获取图像。在长存活率相关的因素中，作者重点提出了CESC中的epi8的高相对丰度可以促进我们观察到的高水平T细胞浸润从而增强与肿瘤细胞的串扰。文中作者表示，尽管对 CESC 进行了大量的转录组分析，但这些方法无法提供对主要细胞参与者、它们的相互作用伙伴以及驱动疾病发生和发展的关键分子途径的高分辨率洞察，尤其是CAF，作为肿瘤微环境中的关键组成部分，其通过多种机制促进恶性生长和侵袭 ，而且空间 CESC 信息对于理解细胞簇的位置及其相互作用很重要，但在 scRNA-seq 分析的解离过程中存在丢失。多重免疫荧光标记与转录组测序为了揭示了 mCAF 和 vCAF 的两个主要亚群，作者选择使用TissueFAXS Cytometry技术了，通过多重免疫荧光标记验证了它们在人类 CESC 中的存在，发现 mCAF 表达高水平的与促肿瘤途径相关的基因（主要位于富含胶原蛋白的基质条纹内），以及细胞间相互作用分析表明，mCAF 可主要通过 NRG1/ERBB3途径促进 CESC 进展，该途径参与抗雄激素对前列腺癌的抗性，在之前的研究中尚未报道。这部分内容也是TissueGnostics公司的TissueFAXS Cytometry技术在关键领域取得的最新科研进展之一。Fig 1 CESC样本组织切片中的T细胞（PAN-CK(红色)、HLA-DR(蓝色)、IDO1(绿色)和CD3(灰色)）的多重免疫荧光标记图像。在较短存活期显著相关的因素中，作者研究了CESC进展过程中基质癌相关的呈现为细胞（mCAF）的亚群特征，发现mCAF可能促进CESC的进展，并进一步发现其作用机制是通过NRG1/ERBB3 通路来实现的。Fig 2 多重免疫荧光CESC组织样本中mCAF和vCAF上的特异性标记物。Fig 3 mCAF肿瘤特异性配体-受体对的多重免疫荧光标记，包括NRG1-ERBB3和Wnt5A-FZD6。&bull 单细胞测序技术完成了细胞水平的组学研究，但是获取的信息内缺失了细胞的空间分布信息。如果想要补充细胞的空间位置表型，就需要引入多重免疫荧光技术。多色免疫荧光技术通过单细胞分辨率的组织成像，能够多靶点、可视化地描绘细胞的复杂空间位置信息，从而揭示细胞间的相互作用关系，细化微环境的空间结构。&bull 单细胞测序技术与多重免疫荧光技术的结合能够多层次、多角度、多组学地研究肿瘤微环境及免疫微环境，同时获悉胞间联系、基因空间变化等信息，并赋予关键基因的细胞分布信息和组织分布信息，从而更加精准地研究疾病相关分子机制并探索潜在的治疗靶点。同时作者也在讨论部分，使用TissueFAXS Cytometry技术生成的数据，可以针对人体组织进行更详细的研究，以回答 scRNA-seq 无法解决特定问题。

9月27日，广州禾信仪器股份有限公司（股票代码：688622）于北京（BCEIA 2021）以“立足高端质谱，打造质谱实验室综合解决方案”为主题，隆重发布多款新品。来自全国各地累计300+业内专家、客户以线上线下方式参与了发布会，并对禾信此次发布的新品给予了高度的评价与期望！新品发布 开启无限未来健康永远是人们关心的第一话题，体外诊断的发展经历了从细胞形态学诊断、生化诊断、免疫诊断，现在已经进入到分子诊断的时代。核酸质谱技术的出现解决了传统PCR技术灵敏度、准确性、通量低的问题，同时大大降低了高通量测序开展的技术难度和检测时间。但目前核酸质谱市场上，进口仪器占据96%以上。疫情当前，世界形势变幻莫测，与人民健康相关的高端科学技术及核心部件严重依赖进口，随时存在被“卡脖子”风险。禾信仪器全自动核酸质谱检测系统NucMass 2000应运而生。该系统集结多项专利性创新技术，大大提升了核酸检测质谱性能，具备以下特点：1高分辨较市场同类产品提升20%以上，保证最大反应重数2高精度质量精度较市场同类产品提升50%，判型准确率更高3高灵敏可检测到更低拷贝数量的基因片段信息4宽范围超高分辨率使核酸检测质量范围更宽5高稳定连续测量8小时，每次测量结果满足质量精度要求6高重复连续测量10次，质量偏差更小7高通量8小时完成700样本检测8广应用SNP基因分型、indel、拷贝数分析、DNA甲基化分析、多病毒检测等9低成本反应条件均一，试剂通用，无需荧光标记解决方案全自动核酸质谱检测系统+高精度芯片靶板+自动纳升级点样仪产品应用应用场景一：结直肠癌KRAS基因低频突变解密遗传变异与肿瘤发生发展关系的研究，质谱肿瘤基因突变检测分析具有成本低、高通量、高灵敏度和特异性等显著优势。应用场景二：多呼吸道病毒、多亚型同时检测巧妙的整合PCR技术的高灵敏度以及质谱技术的高精确度，开创了检测精确度高、重复性强、具有高度自动化、标准化特征的全新检测时代。可以对微生物、病毒以及其他单倍体生物方便快捷的进行分子分型、物种鉴定、变异物种发现及归类等全面分析。应用场景三：高血压用药指导检测到1%-3%突变等位基因，在个体化用药、耐药及新药筛选等临床项目中，可以尽早检出突变，帮助临床医生改善治疗方案。禾信仪器秉持“锲而不舍，做中国人的质谱仪器”理念，以高端产品与技术创新为立命之本；将持续加大创新投入和精良制造力度，以市场为导向，不断推出符合客户需求的产品，完善医疗诊断产品线，与客户共筑健康未来！

Anti- CD64/IGFR1/FCGR1A/FITC荧光标记抗体From:ABCAM Catalog Number :RS- 3511R-FITCQuantity size : 0.1ml (dilute with pH 7.4 0.01 M PBS or antibody diluent ) Background: The high affinity receptor for immunoglobulin G CD64 is encoded by a family of 3 genes that share over 98% of DNA sequence homology: FCGR1A, FCGR1B and FCGR1C. The FCGR1C gene, like FCGR1A, is located on 1q21. The third gene of this family, FCGR1B, was found at 1p12. CD64 plays a pivotal role in the immune response. It is a glycoprotein (MW 72 kD) that is constitutively expressed on human monocytes and macrophages. Subunit : Interacts with FCERG1 forms a functional signaling complex. Interacts with FLNA prevents FCGR1A degradation. Interacts with EPB41L2, LAT and PPL. Interacts with HCK and LYN.Subcellular Location : Cell membrane Single-pass type I membrane protein. Note=Stabilized at the cell membrane through interaction with FCER1G.Tissue Specificity : Monocyte/macrophage specific.Similarity : Belongs to the immunoglobulin superfamily. FCGR1 family. Contains 3 Ig-like C2-type (immunoglobulin-like) domains.Specificity : Anti- CD64/IGFR1/FCGR1A/FITCis a rabbit polyclonal antibody specific for CD64/IGFR1/FCGR1A/FITC of Human, Mouse, Rat, Pig, Cow,use for western blotting,elisa,immunoprecipitation and immunohistochemistry– Protein G affinity chromatography purification, purity :95%– Isotype: IgG – mol wt: 41kDaApplication : – IF=1:50-200– KLH conjugated synthetic peptide derived from human CD64/IGFR1– not yet tested in other applications.– optimal dilutions/concentrations should be determined by the end user..Storage: Store at -20℃ for one year. Avoid repeated freeze/thaw cycles. The lyophilized antibody is stable at room temperature for at least one month and for greater than a year when kept at -20℃. When reconstituted in sterile pH 7.4 0.01M PBS or diluent of antibody, the antibody is stable for at least six weeks at 2-4 ℃ Important Note: This product as supplied is intended for research use only, not for use in human, therapeutic or diagnostic applications.

p　　新型冠状病毒COVID-2019仍然是公众最关注的的话题，红外热成像仪、核酸检测试剂盒、抗体快速测试卡等一大批仪器在这场抗疫战争起到了至关重要的的作用。例如：/pp　　a href="https://www.instrument.com.cn/news/20200213/521866.shtml" target="_self"红外热成像入校园!体温快速筛查系统在国科大四校区全面启用/a/pp　　a href="https://www.instrument.com.cn/news/20200217/522086.shtml" target="_self"15分钟现场筛查!南开大学7天研制出新冠病毒抗体快速测试卡/a/pp　　12日在瑞士日内瓦闭幕的新型冠状病毒全球研究与创新论坛将研发更加简便的确诊工具定为短期内最迫切的目标。br//pp　　a href="https://www.instrument.com.cn/news/20200214/521891.shtml" target="_self"新冠病毒全球论坛聚焦：研发比PCR检测更简便易行的确诊工具/abr//pp　　那么，目前可能适用于新型冠状病毒的检测手段都有哪些?/pp　　strong一、核酸检测方法/strong/pp　　strong1. 全基因组测序/strong/pp　　全基因组测序可准确鉴定病毒，但是目前的高通量测序平台测序时间较长，灵敏度相对较低。/pp　　特点：可准确鉴定病毒、在病毒溯源和流行病学调查中有重要作用/pp　　问题：测序时间较长、灵敏度相对较低/pp　　strong2. RT-PCR/strong/pp　　基于病毒基因保守序列的RT-PCR检测方法，是呼吸道病毒检测的常用方法，本次新冠病毒检测也同样适用。该方法通过对病毒RNA进行提取、逆转录、PCR扩增病毒保守序列(RdRP基因(特异性靶点)、E蛋白基因、N蛋白基因以及一个鉴定保守基因S区位点 可以只检测RdRP基因或者选择RdRP基因和其他多个基因确认)，扩增体系中的荧光蛋白会结合扩增出的双链DNA序列从而发出荧光，根据检测到的荧光值判断是否有病毒存在并定量。/pp　　该方法的优点是相较于其他抗原抗体法(如胶体金技术)更为灵敏，检测结果更为准确，但是检测需要专业的仪器和分子检测实验室以及专业的操作人员，操作不当或者实验室条件不足可能会因气溶胶污染造成假阳性，且整个流程需要几个小时，相较于胶体金法时间更长。/pp　　strong3. CRISPR/strong/pp　　CRISPR系统由向导RNA(gRNA)和Cas蛋白组成，gRNA能够指导Cas识别并切割带有特异序列的RNA或者DNA分子。其中Cas13a蛋白在特异性切割靶标RNA时，会继续切割非靶标RNA，利用这一特点，在整个体系中加入带有荧光标记的RNA信号分子，一旦带有荧光的RNA被切开，就会发出荧光信号，该技术与等温扩增技术结合，可高特异性高灵敏性低对病毒核酸进行检测。/pp　　该技术检测时间相较于RT-PCR短，但是CRISPR系统研究出现时间较短，该系统存在有脱靶的可能，其灵敏度和特异性还有待考证。/pp　　strong4. 逆转录环介导等温扩增法(RT-LAMP)和实时RT-LAMP/strong/pp　　逆转录环介导等温扩增法(RT-LAMP)对2009年H1N1大流行病毒的敏感性为97.8%，特异性为100%。基于LAMP的检测方法也被用于检测高致病性的H5N1和H7N9禽流感病毒，其敏感性比基于RT-PCR的方法具有可比性或更高的灵敏度。/pp　　二、strong病毒分离鉴定/strong/pp　　病毒培养是诊断流感病毒感染的传统方法之一，但是传统的分离鉴定方法需要连续培养多天，敏感性和特异性都会低于核酸检测方法，虽然在前期确定侵害性病原物起到关键作用，但较为耗时，且不便捷，不能满足大量疑似患者筛查需求。/pp　　strong三、免疫学检测方法/strong/pp　　strong1. 直接免疫荧光技术/strong/pp　　将免疫学方法(抗原抗体特异结合)与荧光标记技术结合起来研究特异蛋白抗原在细胞内分布的方法。由于荧光素所发的荧光可在荧光显微镜下检出，从而可对抗原进行细胞定位，这种检测方法的敏感性低于核酸检测方法。/pp　　strong2. 免疫胶体金层析技术/strong/pp　　胶体金是一种常用的标记技术，是蛋白质等高分子被吸附到胶体金颗粒表面的包被，是以胶体金作为示踪标志物应用于抗原抗体的一种新型的免疫标记技术。用于检测病毒使用的试剂条包被的是人体免疫系统中出现的该病毒特异性抗体或者是检测病毒本身的抗原，检测结果会出现肉眼可见的红色或者粉色条带。/pp　　虽然免疫胶体金层析技术操作简单，出结果快(一般为20分钟)，但是此方法敏感性较差，加入样本后的原理靠的是层析，也就是往外分散，如果材料等质量有误差，会影响检测结果 也会因为病人感染时间较短或者采样部位导致病毒含量较低，导致出现假阴性。另外，该方法由于依赖抗原抗体，对于前期开发时选择包被的抗原/抗体最为关键，短时间内开发出的产品有待确认其特异性和灵敏性。/pp　　strong四、其他方法/strong/pp　　基因芯片技术、酶联免疫吸附测定(ELISA),IgG及IgM免疫荧光检测。/pp　　在本次疫情中，通过临床特征和各项指标的判断，以及核酸检测来最终确诊是否为新冠病毒感染，其中CT影像和核酸检测一直作为诊断标准在疫情诊断中发挥着重要作用。从目前来看，不同检测方法均存在着各自的优势和弊端，只有综合运用各种检测工具，才能实现快速高效的检测，缩短新冠患者的确诊周期。/ppbr//p

p style="line-height: 1.5em text-indent: 2em margin-top: 10px margin-bottom: 10px "标记免疫分析技术已经发展几十年的时间，研究人员仍在不断开发新的思路和方法，关于标记免疫分析技术本身的特点及优势、研究进展以及其与精准医疗交融发展等问题，仪器信息网采访了中国分析测试协会标记免疫分析专委会主任委员颜光涛研究员。script src="https://p.bokecc.com/player?vid=850129F45346B9FD9C33DC5901307461&siteid=D9180EE599D5BD46&autoStart=false&width=600&height=490&playerid=5B1BAFA93D12E3DE&playertype=2" type="text/javascript"/script/pp style="line-height: 1.5em text-indent: 2em margin-top: 10px margin-bottom: 10px "span style="color: rgb(0, 112, 192) "strong颜光涛眼中的精准医疗/strong/span/pp style="line-height: 1.5em text-indent: 2em margin-top: 10px margin-bottom: 10px "精准医疗是由美国人提出的概念，其核心是基于基因测序和生物大数据统计分析，通过对个体基因、生活环境等因素综合分析后制定个体化的医疗方案，目的是提高医疗效率和水平。/pp style="line-height: 1.5em text-indent: 2em margin-top: 10px margin-bottom: 10px "颜光涛认为，虽然基因测序基础很重要，但是真正在临床医学中的精准医疗，并不仅仅是基因测序和大数据分析的概念，还应该包含个体所有的代谢物、病原、抗原等各种途径，以及还包括免疫组织化学分析以及形态学和影像学。因为精准医疗不仅仅是对基因判断，还涉及细胞层面和组织层面的综合判断，所有判断因素相加才能比较全面的反映个体在医疗过程中的整体状态，因此精准医疗应该包含更广阔的概念。/pp style="line-height: 1.5em text-indent: 2em margin-top: 10px margin-bottom: 10px "span style="color: rgb(0, 112, 192) "strong标记免疫分析技术特异性和灵敏度优势明显，满足精准医疗要求/strong/span/pp style="line-height: 1.5em text-indent: 2em margin-top: 10px margin-bottom: 10px "标记免疫分析技术是基于抗体的特异性和灵敏度为核心的检测技术，已经发展将近50年的时间了。该技术最早是同位素标记，后来发展为荧光标记，包括酶标记、镧系元素标记，化学发光标记。标记到抗体上，是为了更容易更方便被检测出来，提高检测的灵敏度。所有检测样本，包括组织样本、血液样本以及细胞表面样本中特定的组分，其特异性是由抗体决定的。抗体，包括单克隆抗体和多克隆抗体，使用范围十分广泛。/pp style="line-height: 1.5em text-indent: 2em margin-top: 10px margin-bottom: 10px "颜光涛表示，从临床检测来说，现在的标记免疫技术具备的优势是灵敏度高，特异性、稳定性、重复性好；在时效性方面也有优势，检测一个样本的时间长则半个小时，短则十几分钟。此外在技术的信息化和自动化方面也进行了改良和优化，因此标记免疫分析，尤其是以化学发光为代表的标记免疫分析技术能够满足临床样本检测需求。/pp style="line-height: 1.5em text-indent: 2em margin-top: 10px margin-bottom: 10px "此外，颜光涛提到，现在标记免疫分析技术的发展非常神速，比如，最近十余年，在POCT（床旁即时检测）方面，该项技术能够为心脑血管、急诊中毒、感染等疾病提供快速检测，并给出明确的报告，对临床医生的指导意义非常大。/pp style="line-height: 1.5em text-indent: 2em margin-top: 10px margin-bottom: 10px "span style="color: rgb(0, 112, 192) "strong标记免疫分析技术仍有很多发展思路和方向/strong/spanstrong /strong/pp style="line-height: 1.5em text-indent: 2em margin-top: 10px margin-bottom: 10px "关于标记免疫分析技术的提升和发展，颜光涛表示，虽然技术已经成熟并广泛应用，但仍有不足的地方。前面提到，相对大家了解的分子诊断和质谱检测等技术，以化学发光为主流代表的标记免疫分析技术，具有成本低、特异性比较好、灵敏度高的特点，所以容易做单向开发或多项同时开发，因此今后需要进一步研究发展的方向还有很多。/pp style="line-height: 1.5em text-indent: 2em margin-top: 10px margin-bottom: 10px "首先是需要确立新的跟疾病相关的蛋白质或病原体以及更具有灵敏性和特异性的抗体（包括单克隆抗体和多克隆抗体），并且寻找新的标记原或标记物质，使检测技术有更强大的生命力，提高灵敏度和检测范围，降低成本，让更多的病人得益于免疫标记分析技术的进展。/pp style="line-height: 1.5em text-indent: 2em margin-top: 10px margin-bottom: 10px "其次，利用标记免疫技术对一些抗原性不足的小分子物质，如短肽尤其是活性肽，以及一些疾病状态下的代谢产物的检测时，由于抗原构建比较困难，所以抗体的筛选和配对也比较困难，因此在这方面还要加强研究。/pp style="line-height: 1.5em text-indent: 2em margin-top: 10px margin-bottom: 10px "再就是POCT方面，寻求一些能够快速确定病原或者特异的疾病相关的多肽类、蛋白质类大分子以及糖基化抗原等，都是非常好的发展思路和方向。/pp style="line-height: 1.5em text-indent: 2em margin-top: 10px margin-bottom: 10px "还有分离技术，分离技术的有效性，决定了标记免疫分析技术能不能更快、更准。因此，抗体同纳米磁珠、同固相分离成分的偶联也是需要继续关注和努力的方向。/pp style="line-height: 1.5em text-indent: 2em margin-top: 10px margin-bottom: 10px "span style="color: rgb(0, 112, 192) "strong免疫技术和分子技术融合值得推广/strong/span/pp style="line-height: 1.5em text-indent: 2em margin-top: 10px margin-bottom: 10px "在被问及“标记免疫分析技术未来在精准医疗中将如何焕发新的活力？”时，颜光涛回答，“标记免疫技术不仅仅是由标记抗体展开的技术，还可以理解为标记技术和免疫技术的混合，现在分子诊断和抗体技术混合交叉，把核酸的特异性和抗体的的特异性叠加，能够合成新的检测技术，明显提高检测灵敏度。当然，这也不算是一项很新的技术，因为现在很多试剂盒都在这样生产了，就是把免疫技术和分子技术融合到一个流程里来操作。因此，今后标记免疫技术跟其他技术交叉融合方面是值得推广的，希望大家能更多的探讨。”/pp style="line-height: 1.5em text-indent: 2em margin-top: 10px margin-bottom: 10px "“另外，选择更多的特异性分子，以及新的跟抗体有类似作用的、固定的蛋白分子，都可以作为标记的载体。另外还可以发展一些更好的标记物，如多重荧光标记以及当下炙手可热的量子点标记技术。再就是同免疫分离，这是很重要的，跟纳米技术很好的互相交融，创造出一些更实用的方法。”/pp /p

《自然—方法学》特写：无需标记的激光特技 　　非线性光学显微术帮助科学家看到活体细胞和组织中化学组成　　 　　哈佛大学的Brian Saar，Gary Holtom和谢晓亮教授(从左至右)发展了非线性显微成像技术和应用。　　 　　一个富含蛋白质的毛发及其周围的富含脂肪的皮脂腺。该图像是通过受激拉曼散射方法采集的，绿色为脂肪，蓝色为蛋白质。　　最近出版的《自然—方法学》刊登特写文章——《无需标记的激光特技》(Laser tricks without labels)，称非线性光学显微术可帮助科学家看到活体细胞和组织中的化学组成。文章内容如下：　　两年前，Annika Enejder在她关于线虫的脂肪贮存研究中，遇到一个令人困惑的结果。荧光显微图像非常清晰地表明，在用他汀类药物处理这些蛔虫时，来自脂肪粒的信号将降低。他汀类药物是一类被广泛用于降低胆固醇的药物。然而，在同时进行的另一种显微实验中，直接观察脂肪颗粒却看不到这样的变化。实际上，相干反斯托克斯拉曼散射(CARS)显微技术能够识别出脂肪颗粒，而荧光显微技术做不到。　　其实是这么回事，用常用的Nile red荧光染料饲喂的线虫把这种染料当作毒物处理了：染料被隔离到脂肪粒周围的肠类溶酶体颗粒中，而不是脂肪粒中。实际上，这种染料还在别的方面具有误导性：他汀类本身似乎会影响它的染色或者荧光。“在使用荧光基团的时候，有很多假象要考虑到。” 来自位于瑞典查尔姆斯理工大学的Enejder说。　　没人能够否定荧光探针和分子染色在细胞内行为探测上的实力，但是这种标记办法仍然有诸多问题。如何标记是一个问题，尤其是对整个有机体而言。有些标记只能在已死亡的细胞内有作用 其他的标记标记方法则会损伤细胞，或者干扰所研究的生物过程。非标记的显微技术提供了一种能够大幅度降低人为干扰的活体观察技术。虽然有些技术仍然依赖内源性荧光基团，不过它们基本上可以摒弃荧光技术，也就避免遇到光漂白这个常见问题。这些新技术探测的是光在通过生物样品时被吸收或者改变时发生的微小变化，而不是探测被激发荧光基团的光子。这种办法依赖在高光功率密度下观察到的非线性光学过程。一言以蔽之，激光脉冲可以被用来“看”化学组成：脂质里面的C-H键，蛋白质里的酰胺键，还原态或者氧化态的生物分子，胶凝蛋白或者微管里面有规律地重复的单元。　　当然，这样的技术也自有其局限性：与荧光标记能够识别单分子相比，非标记技术的灵敏度和特异性都要弱一些。只有特别常见的基团才不会淹没在一些丰富样品产生的信号当中。“这种技术的好处是，你不需要任何标记，你只需要去成像就行了”，荷兰癌症研究所(Netherlands Cancer Institute)的生物物理学家Kees Jalink解释道，“但是不好的地方是，信号太弱了，你需要大量能量来照射一个细胞，而可能仅仅得到一些粗枝大叶的细节。　　非线性的众多模式　　除CARS以外，其他可用的非标记手段包括双光子吸收，二次谐波产生(SHG)以及受激拉曼散射，每一种都有自己的配置需求和优势。然而，这些手段并没有在生物学家中间闪电般地传播开。昂贵的激光需要被耦合进显微镜 光的短脉冲需要精确的瞄准、调整和整形 探测器必须被优化，从而能够拾取信号，舍去背景。“组装这些仪器需要丰富的专业经验 这些仪器都要求苛刻”，供职于加拿大不列颠哥伦• 比亚大学化学与工程系的Robin F.B. Turner这样评价。而仅仅搭建仪器是不够的。“你得根据每天的情况重新校准”，Turner补充道。　　Turner说，他有充分的理由跟踪这些技术：他想知道干细胞在分化成其它细胞的时候，其中的组分如何变化，而且再也没有比这个更好的办法能够研究这个问题了。“我们之所以选择拉曼和CARS，是因为它们能够做这种研究而不损伤细胞”，他说。其它研究手段都会毁损细胞，得到的仅仅是在某个时间点上的一个瞬间状况 这样的数据对于包含自发分裂细胞的异质性细胞培养并不是十分有用，Turner补充道，“我们想追踪细胞的生长”。　　同样的优势在组织层次的研究上也很突出。比如，哈佛大学的Gary Ruvkun通过对线虫诱导RNA干扰筛选来研究上千个基因在脂质生成中的角色，同时通过一种叫做受激拉曼散射(SRS)的技术来监视这些结果。　　Ruvkun的合作者谢晓亮教授也来自哈佛大学。大约十年前，谢晓亮因为发布了CARS显微术而引发了巨大轰动。这种技术通过一种叫做自发拉曼散射的现象来增强信号。在自发拉曼散射中，样品内的化学键能够改变通过其中的光的波长。更早使用的拉曼散射显微术要求的激光功率很高，而且有时候需要曝光时间长达一天。谢晓亮和他的同事证明，CARS可以用于活细胞研究。通过使用两束激光，它们的频率差等于需要成像化学键的振动频率，细胞产生的微弱的拉曼信号能够被不断放大。“它的灵敏度比自发拉曼散射的灵敏度高了好几个数量级”，谢晓亮说。但是CARS也有缺陷。在同一时间里，它只集中在很宽的拉曼谱中很短的一段，限制了所能采集的信号的数量 同时还带来了很高的背景信号。从实用的角度讲，这些限制意味着如果要应用CARS技术，大部分时间要基于对脂质的探测，因为碳氢键的大量富集能够产生很强的特征信号。　　谢晓亮的兴趣已经转移到了SRS，这是他和他的组员闵玮、Christian Freudiger共同发展出来的技术，相关论文于2008年发表。“在CARS里面，信号峰位发生了移动，”谢晓亮解释道，“这意味这我们不能使用现有的、数量巨大的拉曼谱数据进行化学鉴定。”他还讲到，与此相比，SRS能够通过对激光异常迅速和精确地调制来去除背景噪音。这样一来，不仅能够得到与传统拉曼光谱一样的谱图，而且信号强度高了几个数量级，采集时间也远低于未经放大的拉曼信号。谢晓亮说，更妙的是，SRS产生的信号与振动化学键的数量是线性关系，这使得SRS能够进行定量分析。SRS技术可以应用于实时观测：比如在在药物和化妆品研究领域，观察维生素A酸是如何被皮肤吸收的。SRS技术还可以用于观测酸或者酶是如何从植物细胞壁表面去除木质素，从而提高生物燃料的生产效率。　　谢晓亮最早是通过与Pfizer以及哈佛研究者的合作研究获得对该技术的原理的证据的。谢晓亮甚至预言，SRS技术有一天会取代CARS技术，然而其他研究人员对此有所保留。SRS需要对多个光源的信号进行混合和解读，而谱的叠加也会使去卷积变得困难。Turner说，他曾经尝试用SRS观察溶液中的核酸，最后还是决定继续使用原来的老技术。利用那些老技术，就可以从细胞的DNA里分辨出RNA。他说，尽管拉曼显微镜可能慢一些，“但是应用SRS技术来扩展我们的知识也挺费劲的，跟使用传统拉曼技术差不多。”　　采购与分享　　谢晓亮预计，一旦SRS被植入商用系统，很快就会传播开来，他认为早在今年底之前就会取得这样的进展 据报道，蔡司和徕卡已经于去年获得这项技术的授权。然而，就像荧光显微镜的前车之鉴，技术的传播可能相当缓慢。第一台商用多光子显微镜于1996年发布 而2003年的一项调查发现，66%使用多光子显微镜的生物学研究仍然使用定制系统。现在，商用多光子显微镜则相当普遍。　　2009年10月，适逢谢晓亮的文章发表十年，奥林巴斯宣布要提供可以安装在多光子显微镜系统上的femtoCARS模块。2010年1月，Newport公司展示了可以附接到激光和多光子显微镜上的波长扩展单元，用以支持CARS、SHG以及其他成像方式。据悉，徕卡也将于下半年推出自己的产品。奥林巴斯的产品经理YiWei(Kevin)Jia宣称，早在飞秒femtoCARS模块发布之前，他已经在帮助各个研究组着手搭建CARS系统 而这个用来探测脂肪的模块能够让起步更加容易。他说，如果CARS的商业化产品推广像多光子显微镜一样，那么销售则能在数年之内有一个大的飞跃。不过目前大多数应用CARS显微技术的主要还是物理实验室，而且使用的是自己搭建的系统。　　不过，这些研究人员已经开始和生物学家们合作。在普渡大学，生物医学工程教授程继新利用CARS在细胞中迅速地寻找脂肪体，然后使用同样的光源，切换到共聚焦拉曼来做同一个区域更详细的化学成分分析。新近关于人类前列腺肿瘤细胞的研究发现，先前被认为由脂肪组成的区域，实际上是被氧化的脂肪酸。下一步是考察这种脂肪酸会否可以用于标记前列腺癌的严重性。在别的项目中，程继新已经发展了一个平台，可自动收集CARS信号的来观测脂肪，还利用一种叫做和频产生的技术看到特定的蛋白纤维。有了这种技术，程继新及其合作者们可以研究富脂免疫细胞如何将自己嵌入到血管壁的胶原蛋白基质中去的——这类观测可以揭示动脉粥样硬化中的血块是如何形成的。程继新和他的同事还独立监测了多发性硬化症的老鼠模型中的神经元髓鞘，并且精确地指出是轴突的某个地方出现了损伤。他说，“以前在活体组织中对髓鞘的监测是没有办法达到单细胞水平的。”　　Jalink说，髓鞘因为紧密堆积了大量脂质，特别适合用CARS成像。非标记显微技术在其他方面的应用则可能没那么容易。他说经常使用激光器的研究人员很可能会想办法采用这样的技术，他补充道，“技术上讲，这是完全可行的，但是如果我能用另一种方式来获得同样的信息，我为什么要采用这个多少有些复杂而且昂贵的技术呢?”　　技术一旦发展起来，研究人员就能把它们应用到新的方面。哥伦比亚大学的Rafael Yuste利用光学手段来测量神经电位。二次谐波发生(SHG)成像技术依赖于排列非常规则的分子产生的超散射光。这些分子具有极强的诱导偶极矩，或者特定的电荷分布。Yuste对位于神经元细胞膜这类分子非常感兴趣——因为电场贯穿其中。由于二次谐波信号和电场强度直接成比例，因而可以自动获得电压信号。　　问题在于，能够很好地实现这一目标的分子非常少。为了达到好的效果，Yuste说，“你需要非常仔细地去扫描全谱，来寻找潜在的内源性二次谐波发色基团。”他说，发展这种技术需要依赖学科交叉，需要研究人员在他们研究领域的边缘工作。但是在现实中，这种工作往往在研究者们自己的系里得不到足够的资金和支持，这也是为什么能够实现这一目标的分子资源较少的原因。　　Enejder等人相信，学科交叉能够帮助人们解决大量只能由非标记的非线性显微技术来观测的问题。虽然Enejder的背景的是物理学，她还是转到了生物系。因为在那里可以更容易的了解生物学家们在成像上到底遇到了什么问题，非线性光学如何才能帮得上忙。她说，那些把自己的眼光牢牢地局限在物理系内部的人可以继续优化技术，但是他们或许不了解生物学家到底希望看到什么：“我就完全没有这个问题。在我眼里，应用随处可见。”　　当这样的交流变得日益重要的时候，对新实验的大胆尝试也变得重要起来——而这些实验与物理学家们以往的经验可能截然不同。在一项旨在制造弹性血管的生物工程项目中，Enejder和同事们想要监测植入纤维素基质的肌肉细胞的生长。与CARS一起，Enedjer和同事们利用SHG观察了植入的细胞。他们很高兴地发现，自己可以监测到被植入细胞是如何与纤维素网进行接触，开始生成胶原蛋白纤维的。在组织工程研究中，这种方法可以大大帮助确定最优参数。尽管纸张中的植物纤维素SHG成像看不到，但是细菌分泌的植物纤维素确实拥有一种有规律的模式，能够产生SHG信号，Enejder解释说，“仅仅依赖别人文章里说的哪些可以观测是不行的，你得自己去试才行。”

p　　strong仪器信息网讯/strong 2018年9月27日，LGC宣布收购位于美国密歇根州的Berry & Associates，以加强其核酸化学组合。该交易的财务条款尚未披露。/pp　　Berry & Associate向制药、临床诊断和学术研究领域的客户销售低聚试剂，其客户还包括寡核苷酸合成公司和合同制造组织。该公司成立于1989年，拥有14名员工。/pp　　LGC Genomics总裁兼董事总经理Brian Kim在一份声明中说：“Berry & Associate将成为LGC在北美的重要业务中心，它将通过多站点制造以及美国市场的本地服务与技术支持，为我们的客户提高供应链的弹性。”/pp　　Berry的所有者Lana Berry也指出，该公司目前拥有400多种亚磷酰胺和用于寡核苷酸合成的固相连接单体，以及数百种核苷、间隔基、荧光标记、猝灭剂和杂环化合物，将作为LGC的一部分，扩大产品组合。/pp　　近年来，总部位于伦敦的LGC通过大量收购，包括2015年收购Biosearch Technologies，2016年收购Prime Synthesis，2017年收购Link Technologies，以及今年早些时候的BioAutomation，一直在增加其在核酸化学市场的份额。/pp　　LGC还在2月收购了Lucigen，扩大了其在新一代测序中的商业足迹。/p

核酸纯化新技术研讨会Solutions on NA extraction by AJ to state-of-the-art researchers 下面这些核酸纯化问题，您也碰到过吗？由于高盐或乙醇残留，导致DNA样品不够纯，抑制后续的酶切、PCR反应和测序等整个提取过程步骤太多，过程太长，导致核酸有降解复杂样品、痕量样品、细胞外循环DNA等核酸很难获得样品量大，核酸提取工作占用太多的时间，而且每次的提取效果不一致 您想改善这些情况吗？德国耶拿的DC双缓冲液新技术和PMI聚合物介导分离新技术及革命性的全自动平台可以帮您找到解决办法！ 3min完成PCR产物纯化，6min完成质粒抽提，1h完成小鼠尾巴核酸纯化轻松获得高质量的细胞外循环DNA（circulating cell-free DNA）、石蜡包埋组织的高纯度DNA，在毛发、烟蒂、指纹等痕量检材上能获得足够量的DNA用于检测快速的DNA甲基化修饰试剂盒 ，3h完成转换，高效的转换效率为下游的分析提供可靠和可重复的保障采用自动化的核酸纯化系统，可明显节省在核酸提取方面的时间，更重要的是标准化的过程，能确保每批样品提取结果的稳定性第一场：时间：2013年11月26日下午14:00-16:30地点：北京-中国科学院动物研究所B105室 （朝阳区北辰西路1号院5号） 第二场：时间：2013年11月27日下午14:00-16:30地点：北京-中国农业大学西校区图书馆报告厅 所有参会者，可获赠精美礼品，以及德国耶拿核酸纯化试剂&ldquo 买一送一&rdquo 优惠券（试剂盒介绍详见下面）报名联系方式：电话：010-65543849短信：13764007224 Email：info@analytik-jena.com.cn此外，活动现场还有精彩的抽奖活动，众多奖品等您来拿！(提前报名且实际到场的人员可参加抽奖，电话和邮件均可报名)自动核酸纯化系统InnuPure C16/C96 高效的全自动核酸纯化，16个或96个样品同时处理核酸产物洁净，无磁珠残留专业的设计确保产物无污染优化好的程序和试剂直接调用，实现标准化操作满足各种样品类型的核酸纯化 德国耶拿核酸抽提纯化试剂盒基因组DNA 抽提试剂盒RNA抽提试剂盒innuPREP DNA Micro Kit（5mg样品）innuPREP RNA Mini Kit（总RNA）innuPREP DNA Mini Kit（50mg样品）innuPREP RNA MIDI Direct Kit（总RNA）innuPREP Forensic Kit（痕量法医样品）innuPREP Micro RNA Kit（小RNA）innuPREP Blood DNA Mini Kit（300µ l全血）innuPREP Blood RNA Kit（1ml全血）innuPREP Blood DNA Midi Kit（2ml全血）innuPREP Blood RNA MIDI Direct Kit（10ml全血）innuPREP Blood DNA MIDI Direct Kit（1ml全血）innuPREP Plant RNA Kit（100mg植物样品）innuPREP Blood DNA Master Kit（5ml全血）innuPREP Virus RNA Kit（150µ l或20mg）innuPREP Plant DNA Kit（100mg植物样品）总核酸抽提试剂盒innuPREP Swab DNA Kit（拭子样品）innuPREP DNA/RNA Mini KitinnuPREP Bacteria DNA Kit（109细菌）innuPREP Virus DNA/RNA KitinnuPREP Mycobacteria DNA Kit（唾液、痰液等）innuPREP MP Basic Kit A（细菌和病毒）innuPREP Stool DNA Kit（400µ g粪便）胞外循环DNA抽提试剂盒innuPREP Virus DNA Kit（200µ l或20mg）PME circulating cell-free DNA kit blackPREP试剂盒&mdash &mdash 专门针对复杂的初始样品 blackPREP Tick DNA Kit 蜱虫blackPREP Tick DNA/RNA Kit 蜱虫blackPREP Powder DNA/RNA Kit 奶粉、茶、土壤等 blackPREP Rodent Tail DNA Kit 小鼠尾巴blackPREP FFPE DNA Kit 石蜡包埋组织blackPREP Food DNA Kit I 食品blackPREP Swab DNA Kit 擦拭子 质粒提取试剂盒 innuPREP Plasmid Mini Kit 5ml菌液约得20µ g质粒DNAinnuPREP Plasmid Mini Kit Plus 15ml菌液约得70µ g质粒DNAinnuPREP Plasmid MIDI Direct Kit 25ml菌液约得80ug质粒DNAinnuPREP Plasmid Rapid Kit 快速，可在6min完成innuPREP Plasmid Small Kit 250µ l菌液约得3µ g质粒 PCR或凝胶产物纯化试剂盒 innuPREP PCRpure Kit PCR产物纯化innuPREP Gel Extraction Kit 凝胶电泳产物回收innuPREP DOUBLEpure Kit PCR产物或凝胶产物纯化innuPREP DYEpure Kit 测序反应中去除荧光标记的ddNTPs 甲甲基化修饰试剂盒 innuCONVERT Bisulfite Conversion Kit 主办方：德国耶拿分析仪器股份公司 北京元业伯乐科技发展有限公司 北京竹远科创科技有限公司 邀请函（点击查看详情）

核酸纯化新技术研讨会Solutions on NA extraction by AJ to state-of-the-art researchers 下面这些核酸纯化问题，您也碰到过吗？由于高盐或乙醇残留，导致DNA样品不够纯，抑制后续的酶切、PCR反应和测序等整个提取过程步骤太多，过程太长，导致核酸有降解复杂样品、痕量样品、细胞外循环DNA等核酸很难获得样品量大，核酸提取工作占用太多的时间，而且每次的提取效果不一致 您想改善这些情况吗？德国耶拿的DC双缓冲液新技术和PMI聚合物介导分离新技术及革命性的全自动平台可以帮您找到解决办法！ 3min完成PCR产物纯化，6min完成质粒抽提，1h完成小鼠尾巴核酸纯化轻松获得高质量的细胞外循环DNA（circulating cell-free DNA）、石蜡包埋组织的高纯度DNA，在毛发、烟蒂、指纹等痕量检材上能获得足够量的DNA用于检测快速的DNA甲基化修饰试剂盒 ，3h完成转换，高效的转换效率为下游的分析提供可靠和可重复的保障采用自动化的核酸纯化系统，可明显节省在核酸提取方面的时间，更重要的是标准化的过程，能确保每批样品提取结果的稳定性第一场：时间：2013年11月26日下午14:00-16:30地点：北京-中国科学院动物研究所B105室 （朝阳区北辰西路1号院5号） 第二场：时间：2013年11月27日下午14:00-16:30地点：北京-中国农业大学西校区图书馆报告厅 所有参会者，可获赠精美礼品，以及德国耶拿核酸纯化试剂&ldquo 买一送一&rdquo 优惠券（试剂盒介绍详见下面）报名联系方式：电话：010-65543849短信：13764007224 Email：info@analytik-jena.com.cn此外，活动现场还有精彩的抽奖活动，众多奖品等您来拿！(提前报名且实际到场的人员可参加抽奖，电话和邮件均可报名)自动核酸纯化系统InnuPure C16/C96 高效的全自动核酸纯化，16个或96个样品同时处理核酸产物洁净，无磁珠残留专业的设计确保产物无污染优化好的程序和试剂直接调用，实现标准化操作满足各种样品类型的核酸纯化 德国耶拿核酸抽提纯化试剂盒基因组DNA 抽提试剂盒RNA抽提试剂盒innuPREP DNA Micro Kit（5mg样品）innuPREP RNA Mini Kit（总RNA）innuPREP DNA Mini Kit（50mg样品）innuPREP RNA MIDI Direct Kit（总RNA）innuPREP Forensic Kit（痕量法医样品）innuPREP Micro RNA Kit（小RNA）innuPREP Blood DNA Mini Kit（300µ l全血）innuPREP Blood RNA Kit（1ml全血）innuPREP Blood DNA Midi Kit（2ml全血）innuPREP Blood RNA MIDI Direct Kit（10ml全血）innuPREP Blood DNA MIDI Direct Kit（1ml全血）innuPREP Plant RNA Kit（100mg植物样品）innuPREP Blood DNA Master Kit（5ml全血）innuPREP Virus RNA Kit（150µ l或20mg）innuPREP Plant DNA Kit（100mg植物样品）总核酸抽提试剂盒innuPREP Swab DNA Kit（拭子样品）innuPREP DNA/RNA Mini KitinnuPREP Bacteria DNA Kit（109细菌）innuPREP Virus DNA/RNA KitinnuPREP Mycobacteria DNA Kit（唾液、痰液等）innuPREP MP Basic Kit A（细菌和病毒）innuPREP Stool DNA Kit（400µ g粪便）胞外循环DNA抽提试剂盒innuPREP Virus DNA Kit（200µ l或20mg）PME circulating cell-free DNA kit blackPREP试剂盒&mdash &mdash 专门针对复杂的初始样品 blackPREP Tick DNA Kit 蜱虫blackPREP Tick DNA/RNA Kit 蜱虫blackPREP Powder DNA/RNA Kit 奶粉、茶、土壤等 blackPREP Rodent Tail DNA Kit 小鼠尾巴blackPREP FFPE DNA Kit 石蜡包埋组织blackPREP Food DNA Kit I 食品blackPREP Swab DNA Kit 擦拭子 质粒提取试剂盒 innuPREP Plasmid Mini Kit 5ml菌液约得20µ g质粒DNAinnuPREP Plasmid Mini Kit Plus 15ml菌液约得70µ g质粒DNAinnuPREP Plasmid MIDI Direct Kit 25ml菌液约得80ug质粒DNAinnuPREP Plasmid Rapid Kit 快速，可在6min完成innuPREP Plasmid Small Kit 250µ l菌液约得3µ g质粒 PCR或凝胶产物纯化试剂盒 innuPREP PCRpure Kit PCR产物纯化innuPREP Gel Extraction Kit 凝胶电泳产物回收innuPREP DOUBLEpure Kit PCR产物或凝胶产物纯化innuPREP DYEpure Kit 测序反应中去除荧光标记的ddNTPs 甲甲基化修饰试剂盒 innuCONVERT Bisulfite Conversion Kit 主办方：德国耶拿分析仪器股份公司 北京元业伯乐科技发展有限公司 北京竹远科创科技有限公司

欧洲分子生物学实验室研究人员Moritz Kueblbeck, Andrea Callegari等在bioRxiv分享了一项基于CRISPR方法优化的技术文章，目的在于提升从基因编辑产生的细胞中筛选纯合子的效率。众所周知，使用CRISPR精确敲入 (knock-in) 外源性DNA后，产生的基因编辑克隆需要严格的筛选才能得到目的克隆（纯合子）。基于常规PCR和Southern Blot检测目的克隆的方法耗时长、需要大量劳动力。因此研究人员对传统方法进行了优化，采用荧光标记蛋白和naica数字PCR联合的方法，精准快速的实现了基因编辑后目的克隆的筛选，大大降低了检测的人力、物力、时间成本。亮点：☑ 采用数字PCR和荧光标记的方法，可以在基因组编辑的早期阶段进行检测，整个流程只需要大约3-4小时即可获得结果，能够及时停止“不理想”的编辑克隆的培养，节省人力物力成本。☑ 数字PCR方法只需要检测少量的细胞，相较于Southern Blot大大减少样本制备时间。☑ 基于naica微滴芯片数字PCR系统的多重检测能力和Crystal Miner软件的荧光补偿校正功能，能够快速、可靠的对CRISPR编辑细胞进行定量筛选检测。文章内容分享背景原理介绍：CRISPR（Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats），规律间隔成簇短回文重复序列，是一种RNA引导的基因组编辑技术,能对基因进行精确性敲除,敲入,替换等,从而实现探究基因功能,修复致病基因等目的。但是，CRISPR技术也会导致有潜在危险的“脱靶”问题，带来不可预测的基因变化，因此对于CRISPR基因编辑的脱靶情况需要灵敏且精准的验证及检测。▲CRISPR结构示意图研究目的：提升从基因编辑产生的细胞中筛选纯合子的效率。传统方法筛选目的克隆的局限性：基因编辑后，筛选纯合子的方法是生成杂合克隆后，通过轮次迭代产生纯合子，整个过程耗时甚至能长达一年，且容易发生脱靶修饰。使用常规PCR区分纯合克隆和杂合克隆的方法只能检测到目的基因，还需要金标准Southern Blot检测脱靶整合的情况，然而，Southern Blot是一种耗时且低通量的技术，需要相对大量的基因组DNA和细胞材料，这些材料的制备会浪费大量的时间和人力成本。优化后的新方法：针对上述问题，Moritz Kueblbeck等人优化了CRISPR的实验流程，改进了CRISPR的转染效率，通过添加荧光标签蛋白实现CRISPR编辑的克隆菌落中相关标记蛋白的正确亚细胞定位，并通过dPCR 来定量目的基因和脱靶基因组编辑事件。通过该方法，快速、可靠的对荧光标记CRISPR编辑细胞进行了定量筛选。【见下图】▲Moritz Kueblbeck等人优化的CRISPR纯合子筛选实验流程▲PCR进行两种细胞系中的标签基因检测。U2OS- TPR-SNAP标签基因整合总数检测 （左）；HK- Nup93-mEGFP标签基因整合总数及目的标签基因检测（右）。矩形图代表克隆，每个红点代表一次测量结果。对于多重荧光检测实验，进行荧光溢出的补偿校正是十分必要的。本研究使用naica微滴芯片数字PCR系统进行多重检测，并使用Crystal Miner软件进行荧光补偿校正分析，确保每一个荧光基团被单一检测通道捕获，得到的结果精准可靠。如想对荧光补偿校正有更多了解，请复制下方链接地址到浏览器进行查看：http://dx.doi.org/10.1016/j.bdq.2016.10.002原文链接如下：https://doi.org/10.1101/2021.06.23.449557CRISPR WEBIANR相关视频链接：▲点击上方图片观看相关视频naica微滴芯片数字PCR系统法国Stilla Technologies公司的naica微滴芯片数字PCR技术在进行核酸检测时具有独特的优势。系统利用cutting-edge微流体创新型芯片—Sapphire芯片（或高通量Opal芯片）作为数字PCR过程的唯一耗材。样品通过毛细通道网格以30,000个微滴的形式进入2D芯片中。3色荧光检测仪器，整个流程只需要两个半小时，并可进行数据的质控和结果追溯分析，获得的数据真实可靠。

活体光学成像(Optical in vivo Imaging)主要采用生物发光（bioluminescence）技术与荧光（fluorescence）技术。生物发光是用荧光素酶(Luciferase)基因标记细胞或DNA，今天，生物发光标记物可以标记到任何一种基因上，使对基因功能的全面细致研究成为现实。而荧光技术则采用荧光报告基团（GFP、RFP, Cyt及dyes等）进行标记，利用荧光蛋白在外源光源或是内源发光照射下被激发产生的荧光作为检测信号。研究人员能够利用一套非常灵敏的光学检测仪器直接监控活体生物体内的细胞活动和基因行为。 该技术可被广泛应用于标记细胞或基因的示踪及检测；基因治疗在活体动物体内直接的观察和检测；基因组、蛋白组学、药学及生物技术在活体动物内的研究；药物及化学合成药物的药物代谢及毒理学监测；食品菌落生长成像；皮肤医学中皮肤疾病的体内成像；法医鉴定；微孔板成像，例如：免疫分析、报告基因、基因探针和嗜菌作用分析等；荧光团的体内成像，例如：Alzheimer疾病研究中结合嗪的β-淀粉沉淀物分析；转基因植物中通过报告基因对生理周期节奏的研究；凝胶成像分析等等。 但在研究过程中，研究者们必须事先用基因技术进行荧光素酶基因标记，或者某种荧光报告基团标记。目前活体光学成像系统的知名制造商，如Berthold、GE、Xenogen、Photometrics、Carestream Health等，不仅为客户提供先进的仪器，也提供具体实验所需的整套解决方案，包括试剂、实验手册、特殊用途的质粒、细胞株、转基因动物、细胞处理和动物处理设施等配套技术支持。出色的多任务处理能力，人性化的整体设计，便捷精确的操作系统，使实验室影像分析领域进入了一个全新的时代。 下面以研究干细胞活体移植后的存活率为例，简介一两种内源性荧光色素标记的实验方法，供专业人士参考。 用荧光色素DiD标记 间充质干细胞 1. 先用胰蛋白酶消化待标记材料，使之成为一定密度的悬浮液； 2. 从细胞培养箱中取出间充质干细胞，吸取含原有培养基的细胞悬浮液进行标记； 3. 用10 ml Mg/Ca-free PBS （不含钙镁离子的磷酸缓冲液）清洗细胞，吸去PBS， 钙镁离子会影响胰蛋白酶的活性，必须小心； 4. 加入预热的0.05% 胰蛋白酶液，加液量以T75型瓶为例，每瓶加5ml， 确保瓶的表面被完全覆盖； 5. 在细胞培养箱中37° C 孵育约 5 分钟； 6. 然后在显微镜下确认细胞已经完全分散，如果有细胞贴壁情况，轻拍若干次或延长孵育时间直至酶解消化完全成功； 7. 加入等量含 10% FCS的培养基中和胰蛋白酶； 8. 用移液器反复吸取几次确保细胞均匀分散； 9. 然后移取细胞悬浮液至15ml 已灭菌的有盖聚丙烯离心管中； 10. 400 RCF离心5 分钟； 11. 小心移去上清液，不要扰动细胞； 12. 将细胞重新悬浮于DMEM 并进行计数； 13. 需要待标记细胞在无血清DMEM溶液中的密度应为1x106 /ml ； 14. 每ml细胞悬浮液加入5 ?L DiD 染色液； 15. 用移液器将染色液与细胞悬浮液混合均匀； 16. 在6孔低附着性细胞板上37 °C 孵育20分钟； 17. 孵育完全后移取细胞悬浮液至15ml 已灭菌的有盖聚丙烯离心管中； 18. 400 RCF离心5 分钟； 19. 小心移去染色液，不要扰动细胞； 20. 用PBS清洗细胞，用移液器反复吸取几次确保细胞均匀分散； 21. 重复洗三次； 22. 细胞重新计数并用台盼蓝染色法检测细胞活性； 23. 可以进行活细胞成像了！ 用荧光色素ICG标记 人胚胎干细胞 1. 必须先准备好吲哚菁绿溶液（血容量、心输出量、肝功能测定剂）作为对照品 ，然后使之与转染试剂鱼精蛋白（抗凝血作用）混合； 2. 测出1ml吲哚菁绿溶液的活力，然后在100 ?L DMSO中溶解ICG； 3. 向混合物中加入 400 ?L Dulbecco的改良Eagles 培养基 (DMEM + 10% 胎牛血清)， 震荡均匀，吲哚菁绿溶液终浓度为2mg/ml； 4. 加入转染试剂鱼精蛋白，鱼精蛋白作为对照品的载体，使之能够有效进入细胞； 5. 在300 ?L ICG 和 300 ?L 无血清Dulbecco改良 Eagles 培养基中混入 5 ?L 硫酸鱼精蛋白溶液, 使之终浓度为 10mg/ml,； 6. 震荡5分钟使之形成复合物，标记溶液制备完毕； 7. 从 hESC 10mm Petri 培养皿中移去原有培养基； 8. 加入5ml预热的 DMEM； 9. 加入制备好的鱼精蛋白/ICG 溶液， 37 °C下孵育1h； 10. 孵育完全后移去染色液； 11. 用5 ml PBS漂洗培养皿以清除染色液； 12. 移去 PBS 再加入 5ml 0.25 % 胰蛋白酶液，37 °C下孵育5分钟使之酶解，适当震摇培养皿效果会更好； 13. 用移液器反复吸取几次确保细胞均匀分散； 14. 加入等量含 10% KSR的培养基中和胰蛋白酶； 15. 然后移取细胞悬浮液至15ml 已灭菌的有盖聚丙烯离心管中，400 RCF离心5 分钟； 16. 在全培养基中悬浮细胞； 17. 如果还有细胞团块，可以移去原有培养基用10ml预热的全ESC培养基重新悬浮细胞，重复酶解再离心； 18. 在这一点上，鼠源饲喂细胞需从hESCs中分离； 19. 然后将细胞悬浮液移至涂布琼脂的10 cm 培养皿中； 20. 37 °C 孵育 45 分钟，注意不要晃动培养皿，如此鼠源饲喂细胞会贴壁而干细胞保持悬浮； 21. 从Petri 培养皿中移出已标记的单细胞人胚胎干细胞悬浮液； 22. 细胞重新计数并用台盼蓝染色法检测细胞活性； 23. 可进行活细胞成像了！

在刚刚过去的苏州标记免疫分析专业委员会2019学术峰会上，浙江清华长三角研究院分析测试中心蔡强主任详细讲述了分子诊断IVD设备的发展史。蔡强研究员浙江清华长三角研究院分析测试中心主任国家食品安全风险评估中心应用技术合作中心副主任分子诊断在体外诊断中的位置分子诊断在临床诊断中的技术主要包括PCR技术、芯片技术和测序技术。临床检测中，分子诊断越来越受到重视，但市场占比与生化诊断、免疫诊断相比，还存在一定的差距。目前分子诊断在体外诊断中的主要的应用领域，包括对病毒、细菌等微生物的筛查及定性定量检测，药物筛选及用药分析以及基因早期的分析。在微生物检验检测方面，分子诊断相对于免疫诊断具有一定的优势；基因图谱分析方面，虽然目前相关研究很多，但在该领域应用的临床价值还有待发掘。分子诊断在体外诊断中的位置分子诊断和微生物诊断存在一定的关联性，微生物诊断是外部特性分析，而分子诊断则是对内部分子的检测。表1分子诊断在体外诊断中的位置种类细分检测原理应用领域优点缺点分子诊断PCRDNA高温变成单链，低温互补配对链合成病毒、细菌特异性强、灵敏度高检测通量较小原位杂交定标记的一致顺序核酸为探针与细胞或组织切片中核酸进行杂交，从而对特定核酸顺序进行精确定量定位的过程基因图谱、病毒检测成本较低精度相对低、检测通量较小基因芯片测序原理是杂交测序方法，在一块基片表面固定了序列一直的把核苷酸的探针，互补匹配确定序列药物筛选、新药开发、疾病诊断简单、便捷、准确检测通量较小基因测序从血液或唾液中分析测定基因全序列，预测罹患多种疾病的可能性基因图谱、糖筛等信息量大、通量高、准确成本高、耗时较长微生物诊断药敏试验体外测定药物抑菌或杀菌能力的试验实验室检验准确操作要求高培养+形态观察对细菌培养观察菌落细菌、真菌简单、成本低耗时全自动微生物分析系统细菌鉴定的生化反应细菌、真菌简单、快速成本高血液物诊断涂片+镜检异型血溶血现象血型检验等方便快捷检测范围有限血细胞分析通过一些仪器的检测对红细胞、白细胞等进行分析红细胞、白细胞、血小板等检测定量，准确检测范围有限流式细胞术以高速分析上万个细胞，滨能同时从一个细胞中测得多个参数红细胞、白细胞、血小板等检测速度快、精度高、准确性好成本较高其他POCT即时检测原理依不同设备不同心脏标记物肝素抗凝等快速简单、综合成本低精度相对较低分子诊断主要技术发展的时间轴早期的分子诊断设备，多为大型集成化设备，包含很多的操作模块。在原理上，早期的设备并无很多创新，主要是将多种手工操作内容自动化和集成化，发展到基因芯片，才有了原理性的突破。1990年提出的人类基因组计划、后来的蛋白组学以及从近期开始的微生物组计划，极大的推动了分子诊断设备的发展。产品方面，较早期时有Affymetrix公司推出的第一块商业化基因芯片。接下来是PCR仪器的发展。早期的PCR仪器，是简单的DNA解链、复制、复性等过程，除了水浴锅自动化，并没有太多技术含量。数字PCR技术出现后，与生物信息学和微型加工技术关联起来，发展速度很快。再后来出现了微流控技术和基因测序技术。基因测序技术经历了一代、二代、三代，目前测序技术，仍然是重要的发展方向。分子诊断主要技术发展的时间轴前处理复杂导致分子诊断的现场应用成为瓶颈分子诊断和免疫诊断、生化诊断设备不同的地方，很大程度在于样品前处理。免疫检测对象主要是一些游离的大分子，处理相对容易，但分子诊断样本处在细胞当中，处理过程容易被污染，因此前处理系统相对复杂。分子诊断系统的组成包括样本前处理系统、检测处理系统和分析处理系统。样本前处理系统依据其功能的丰富程度又包括移液操作和核酸提取两个平台，依据使用场所不同分为实验室自动化平台和现场前处理平台。目前前处理设备中，全自动的移液工作站是比较成功的设备。它是一种全自动、高精度移液系统，专门用于小体积的PCR、qPCR体系配置，能够完全替代手工，保证了配置实验扩增体系的正确性、精密度及重复性。缺点是功能单一，临床及科研应用尚有一定局限性。贝克曼自动化工作站Biomeki7核酸提取设备，主要是自动核酸提取仪，该仪器集成了自动移液工作站和标准耗材，在以其预设程序控制下进行核算分离的仪器，这一类自动化系统在科研和临床中应用最为广泛。提取方法的核心是免疫磁珠，包括磁珠吸附和磁珠分离等。除磁珠提取纯化方法外，还有其他纯化方法，如柱层析法。托摩根核酸提取仪MM96目前，现场分子诊断还存在诸多问题。免疫检测中可用试纸条等材料，检测方便，但是分子诊断没有这类材料可用，主要原因是样品前处理无法达到这种检测目的。当现场检测时，在很开放的环境下，如何提取纯化DNA，目前仍没有简易方法。现场检测的需求，目前在医院的临检中心还不大，对于基层的卫生所，或许会存在这样的需求，从这个问题也引发出医疗模式应该往什么方向发展的思考。分子诊断的三大检测平台分子诊断主要的检测平台为PCR仪、芯片系统以及基因测序平台。PCR仪——数字PCR是未来发展趋势分子诊断设备另一个重要的组成内容是PCR仪器。常规的PCR目前技术上可提升的空间很有限，但很多部件只有少数几家厂家做的不错。荧光定量PCR，国内有很多厂家生产，技术、元器件等各方面正在迅速赶超国外仪器厂商水平，但这未必是国内厂商最终的发展方向。得益于光源及检测器件小型化趋势，现在的荧光PCR仪越来越小型化。数字PCR是PCR领域未来发展的趋势，目前有一些厂商在研究生产，比如锐讯生物、新羿生物、领航基因等。现在数字PCR的售价很高，主要原因是后端检测器件灵敏度要求高，成像器件技术先进，造成成本偏高。当然，因为数字PCR有绝对定量的功能，对于分子检测意义重大。建议国内PCR仪器厂商，不要只关注荧光定量PCR，可向数字PCR发展。点此进入数字PCR专场查看更多微滴式数字PCR的检测流程表23种PCR的比较RoutinePCRReal-timePCRDigitalPCR是否定量否，但是比较凝胶上的扩增条带的强度与一直浓度的标准品可提供“半定量”的结果是，因为在PCR的指数（对数）期内采集数据，在此期间PCR产物的数量与核酸模板的量成正比是，阴性，PCR反应的比例适合泊松统计法应用测序基因分型分子克隆基因表达定量芯片验证质量控制与检测验证病原体检测SNP基因分型病毒定量microRNA分析siRNA/RNAi实验病毒载荷绝对定量下一代测序文库绝对定量稀有等位基因检测基因表达绝对定量混合物富集和分离核酸标准品绝对定量总结传统PCR的缺点：精确度差灵敏度低动态范围小, 2logs分辨率低非自动化仅限基于规格的区别分析结果未表示为数字使用溴化乙锭染色不足一定量PCR后需处理实时荧光定量PCR的优点：1.提高检测的动态范围2.无需PCR后处理3.检测能够覆盖低至2倍的变化4.在PCR的煮熟器内采集数据5.报告基团荧光信号的增加与生产的扩增子数量成正比6.裂解探针提供扩增子的永久裂解记录数字PCR的优点：1.无需以来参考物或标准品2.通过增加PCR平行样的综述可实现所需要的精度3.高度耐受抑制剂3.能够分析复杂混合物5.与传统的qPCR不同，数字PCR对出现的拷贝数呈线性反应，可以检测到较小倍数变化的差异。DNA微阵列——基因芯片荧光原位杂交（FISH），是一种传统方法，对于原位切片的分析有一定的意义。仪器本身比较简单，就是荧光显微镜，外加一个壳构成的一个图像分析仪。检测过程是在一定的温度下将切片加入设备中，成像。杂交的另一种方式是利用芯片进行，主要是DNA微阵列芯片。芯片技术从上世纪90初期开始研究到现在，已经有近三十年时间，目前已经应用到诊断当中，用做疾病筛查。荧光原位杂交最核心的地方在于诊断试剂而非设备。目前的检测方式主要采用荧光标记的方式，在灵敏度方面，已经能够满足检测要求，因此化学发光、电化学发光标记方式相对较少。美谷分子GenePix4300A&4400A微阵列基因芯片扫描仪第四代基因测序成为资本追逐热点基因测序的发展，从最早获得诺贝尔奖的一代，到现在已经发展到第四代。原理上，第一代测序仪可认为是人工操作方法的仪器实现，相对比较简单。现在的第三代测序和第四代测序的原理已有一定区别。目前，高通量测序的需求很大，发展很迅速，国内在基因测序仪器的发展也将会越来越快。第三代和四代测序仪的价值在于直接读取功能大，但成本很高，测序时间长。把测序降到10美元以下是全球相关企业追求的目标，如果实现，测序在诊断中的应用将会更多的取代其他技术。基因测序技术进展四代测序，即纳米孔技术测序，目前已经成为资本市场追逐的热点，容量约为几十亿美元。原理很简单，就是DNA链打开后穿过一个很细的孔，单个碱基对通过纳米尺寸的通道时，会引起通道点穴性能的变化。四代测序具有高读长、易集成、小型化、高速度、大通量等优势。纳米孔所通电流很小，为10-18-10-15A，远低于荧光检测电流，所以目前检测时间大约需要几个小时到十几个小时，随着技术的不断进步，后期有望将测序时间缩短到半小时。纳米孔主要包括两大类生物纳米孔和固态纳米孔。生物大分子纳米孔发展较早，已经有了相应的设备，体积很小，准确率较低。固态纳米孔，目前还是实验室水平，有少数四代测序公司已经开始做固态纳米孔测序仪。固态纳米孔的检测方式很多，在基底上做一些材料掺杂，具有半导体特性，可替代光学器件，精确度也等性能指标更好。因为固态纳米孔使用的是标准的微电子工艺，如果可以规模化生产，可以降低测序仪生产成本，值得推广。测序结束后，数据处理比其他诊断方法更为复杂。免疫检测的IVD设备后期用到的主要是数据库管理，无需数据处理，但是分子诊断数据需要用算法进行处理，这些算法也就是生物信息学的发展源头。目前来讲，做算法的人才和做软件的人才都并不缺乏，缺乏的是能够将算法做成软件的人才，这是基本事实。目前很多高校已经发表了很多算法相关的论文，但是软件依旧很少。目前很多检测机构所用的数据分析软件多是英文软件，很多还是开源软件，这种软件不适合医院检验使用。因此，数据处理软件不足，对测序设备在临床的应用是个非常棘手的问题。除了上述测序技术，DNA条形码与测序结合起来，未来在临床上或可发挥一定的作用。DNA条形码是利用标准的、有足够变异的、易扩增、较短的DNA片段在物种内的的特异性和种间的多样性而创建的一种新的生物身份识别系统。目前主要用于物种鉴定。小结主要观点1.四代测序、DNA条形码、全基因组测序等技术高速发展，临床价值需要拓展，国产设备仍然聚焦于早期技术，新技术设备十分缺乏。2.样品前处理设备普遍缺乏，尤其是在现场应用的环节3.无论是PCR、前处理还是测序，精细加工与芯片系统已经走到历史舞台，国产设备需造作准备。整理自蔡强在标记免疫分析专业委员会2019学术峰会IVD设备论坛上所作报告

近日，华东理工大学光遗传学与合成生物学交叉学科研究中心杨弋、朱麟勇、陈显军团队在活细胞蛋白质标记与成像研究中取得重要进展，相关研究在《细胞发现》发表。 人造荧光蛋白及荧光探针。华东理工供图生物过程可视化一直吸引着科学家的好奇心。不同类型的荧光成像工具可以帮助科学家观察生命体中多种生物事件的发生过程，其中最著名的是荧光蛋白标记技术。荧光蛋白及其衍生技术经历了近30年的飞速发展，为生物学各个领域的研究作出了极大贡献，但伴随着显微镜技术的飞速发展，现有荧光蛋白的性质已经难以适应新型仪器的成像要求。相比之下，基于蛋白质标签和激活型荧光团的荧光标记工具凭借其理化性质成为新的研究热点。该团队针对自催化蛋白质标签SNAP-tag，设计开发了高信噪比的青色人造荧光蛋白SmFP485。SmFP485的荧光产生十分迅速，避免了荧光蛋白生色团成熟导致的延迟，因此可以用于实时监测蛋白质的合成过程。研究团队随后对SmFP485的结构进行了解析，探究了人造荧光蛋白的荧光激活原理。在此基础上，研究团队通过化学进化方法设计出一系列光谱覆盖绿色到近红外波段的人造荧光蛋白，它们均具有高亮度和高信噪比特点，特别是其在近红外波段的亮度已远超现有成像工具，能够对活细胞以及活体动物中的蛋白质表达、蛋白质降解、蛋白质组装、蛋白质相互作用以及蛋白质运输进行原位实时标记与成像。最后，研究团队在多色人造荧光蛋白的基础上，采用蛋白质与荧光团共进化的方法设计开发出一系列光谱涵盖青色到近红外波段的钙离子遗传编码荧光探针，实现了对哺乳动物细胞中钙离子震荡的实时监测，为荧光探针的构建提供了新的荧光载体。综上，研究团队开发了一系列高性能人造荧光蛋白，它们具有荧光产生迅速、亮度高、信噪比高、光谱范围广等优点，为活细胞以及活体动物中蛋白质的可视化提供了有力工具，同时也为荧光探针的构建提供了新的思路和策略。

王家海教授在过去十多年，对核酸探针进行了系统的探索，开发了一系列基于核酸纳米结构或者G-quadruplex为主题的核酸传感器，开发了生物芯片新的修饰方法，设计了一种的Insertion Approach，极大地提高了传感器电信号重现性，2021年王家海团队构建了以三维核酸纳米结构为信号传导载体的纳米孔传感器。团队另外一个方向纳米孔单分子计数器和整流器平台的发展，也充分得益于我们在功能核酸探针上所开展的系统性工作。体外诊断，尤其是分子诊断离不开对探针的设计。在功能化核酸探针的优化和设计上，我们做出了一系列有特色的工作。运用核酸四链体（G-quadruplex）构建了探测各种离子，小分子的高灵敏，高选择性的生物化学传感器，并被国际刊物邀请撰写综述。为纳米孔的可控功能化，选择性识别打下了坚实的基础。最终优化设计的核酸探针需要参考如下标准：更好的检测限，选择性，更高的稳定性，更稳更强的信号放大系统和更好的实验信号重现性。我们设计的能结合荧光分子的G-quadruplex能对铜离子，钾离子和毒素小分子灵敏探测（G-quadruplex facilitated turn off fluorescent chemosensor for selective detection of copper ion. Chem. Commun., 2010, 46, 7385-7387. Qin Haixia，Ren Jiangtao，Wang Jiahai*，Wang Erkang*；G-quadruplex-modulated fluorescence detection of potassium ion in the presence of 3500-fold excess of sodium ion , Anal. Chem., 2010, 82 (19), pp 8356–8360. Qin Haixia，Ren Jiangtao，Wang Jiahai*，Wang Erkang*.；图 1.四链体核酸高灵敏检测K离子图 2.四链体核酸高灵敏检测Cu离子PVP-coated Graphene oxide for Selective Determination of Ochratoxin A via Quenching Fluorescence of Free Aptamer，Biosensor and Bioelectronics, 2011, 26, 3494-3499. Sheng LinFeng, Ren Jiangtao, Miao Yuqing, JiaHai Wang* Erkang Wang*.）。其中对真菌毒素小分子OTA的检测，他引已经超过100多次，对钾离子的探测选择性达到3500倍，他引超过50多次。后续的工作中，可以探索用纳米孔结合这些探针进行检测。图 3. 对真菌毒素小分子OTA的检测可以预期的是修饰适配体的纳米孔可以结合离子整流区分手型多肽（Enantioselective and label-free detection of oligopeptide via fluorescent indicator displacement” Biosensor and Bioelectronics, 2012, 35, 401-406. Ren Jiangtao, Jiahai Wang*, Jin Wang*, Nathan W. Luedtke, Erkang Wang*.）图 4. 手性多肽的检测设计了劈开的G-quadruplex探针对病毒核酸小片段进行了探测，并对其机理做了详细的阐述（Label-Free Detection of Nucleic Acids by Turn-ON and Turn-OFF G-Quadruplex Mediated Fluorescence. Analytical and Bioanalytical Chemistry, 2011, 399:2763-2770. Ren Jiangtao, Qin Haixia, Wang Jiahai*， Luedtke, Nathan W, Wang ErKang*, Wang Jin*；Contribution of potassium ion and split modes of G-qaudruplex to the sensitivity and selectivity of label-free sensor toward DNA detection using fluorescence Biosensor and Bioelectronics, 2012, 31, 316-322. Ren Jiangtao, Jiahai Wang*, Jin Wang*, Nathan W. Luedtke, Erkang Wang*.）。有理由相信，对这类探针了解的越多，将其应用在纳米孔上的机会越多：譬如G-quadruplex的重新组装引起局部体积和局部电荷的变化，这都是纳米孔传感器很重要的特征。图 5.分裂式探针有三种，在乙肝病毒基因存在下，四链体核酸可以被激活根据多年的经验和大胆展望，体外诊断（分析化学）的进一步发展还离不开探针体系本身的优化和信号放大。2011年我们建立了两种核酸马达，运用A方案组建了一个免标记的核酸传感器，该方法可以扩展到探测其他一些小分子，譬如毒素。运用B方案建立的另一个马达可以把四极子（G-quadruplex）加入到核酸纳米结构中，应用前景广泛；可以进一步把核酸纳米结构组装成三维结构用于药物释放（Kinetically grafting G-qaudruplex onto DNA nanostructure as structure and function encoding via DNA machine，Chem. Commun., 2011, 47, 10563–10565. Jiangtao Ren, Jiahai Wang* , Lei Han, Erkang Wang*, Jin Wang* .）。图6. 这个体系中A途径可以用于生物分子的探测的信号放大，这个体系中B途径有很强的扩展性，可以用于制备其他一些智能化材料或者信号放大免标记，免修饰方法并不能覆盖全部探测对象，其他绝大多数探测系统都需要表面探针修饰。2014年我们发展了一种新的表面修饰方法，极大地提高了分子表面组装和信号放大的重现性（Insertion Approach：Bolstering the Reproducibility of Electrochemical Signal Amplified via DNA Superstructure Analytical Chemistry 2014, 86, 4657-4662. Yang, Li, Zhang, Caihua, Hong, Jiang, Li, Guijuan*, Jiahai Wang*, Wang, Erkang*.）。通常在金电极上修饰核酸探针，都是先修饰巯基核酸，然后修饰小分子覆盖的空白区域。但这种方法重现性并不高。我们设计了一种新方法，先修饰小分子，后修饰核酸探针是通过插入小分子空白区域。发现核酸超级结构在电极表面的组装就有非常好的重现性。期待这种方法能在将来运用到纳米孔表面的内部修饰。图 7.核酸修饰新方法（Insertion Approach）2021年，构建了以三维核酸纳米结构为信号传导载体的纳米孔传感器。（Insertion Approach：Bolstering the Reproducibility of Electrochemical Signal Amplified via DNA Superstructure Analytical Chemistry 2014, 86, 4657-4662.）。小尺寸分析物的检测仍然是限制固态纳米孔应用的主要挑战之一。要实现具有良好抗干扰能力、高信噪比和可重复使用的固态纳米孔传感器，一种潜在的策略是使用大孔径纳米孔（直径大于10 nm）。孔径远大于靶标和干扰物的尺寸，可以满足干扰物通过纳米孔无电阻脉冲的要求，解决了孔堵塞问题。DNA纳米结构具有精确形状和可调节大小等优点，有潜力成为最通用的一种。可以根据特定的孔径组装出尺寸均匀的DNA纳米结构。另外，CRISPR-Cas12a已被证明是一种优秀的信号放大策略，Cas12a通过将序列特异性靶标转化为其他可检测信号，如荧光、生物发光或比色信号，被广泛应用于生物传感器的设计中。图8 基于CRISPR-cas12a转换机制，使用DNA四面体作为信号传导载体的固态纳米孔传感器示意图。对于目标分子，Cas12a的反分裂活性导致连接器ssDNA的降解，导致DNA四面体信号传导载体通过纳米孔的易位率增加；如果没有目标分子，Cas12a就不会被激活，因此DNA四面体信号传导载体被磁铁拉下，不能观察到任何易位事件

距离新冠疫情首次大规模爆发已经过去一年的时间，全球仍未走出疫情危机。寒冬来临，抗疫首战大胜的中国也不时受到疫情的袭扰。近日，河北石家庄出现疫情严重反弹，短短几天时间，增长至数百例。而在短时间内，石家庄市就组织了两次全员核酸检测。正是在过去一年的抗疫战斗经验，促成了如此快速大规模核酸检测能力。新冠疫情让核酸检测登上了分子诊断临床应用实践的舞台，核酸检测也被认为是新型冠状病毒检测的“金标准”，一时间涌现出大量的新技术通过产品应用被市场发现。除了实验室检测所使用的传统荧光定量PCR，为了应用到更多的场景中，研究人员也在积极寻找新的方法，推出相应检测工具。本文对分子诊断市场上针对新冠病毒新推出的核酸检测仪器进行梳理盘点。POCT和实验室检测的具体操作对比（来源：万孚生物招股书）国内圣湘生物圣湘生物核酸检测POCT产品创新领域已经取得突破，其快速核酸检测系统iPonatic核酸检测分析仪在此次抗疫战中大放异彩，于2020年4月通过国家药监局注册认证和欧盟CE认证。iPonatic核酸检测分析仪打破核酸检测应用场景限制瓶颈，无需专业实验室，样本进、结果出，推动核酸检测由以往的“小时级”提升到“分钟级”，新冠核酸检测15-45分钟出结果，且灵敏度达到200copies/mL；也可延展应用到其他疾病的核酸检测。产品在医疗机构发热门诊和急诊检验实验室得到广泛应用。尤思达3月份，优思达创新性地将全套PCR标准分子检测实验室简化为一台便携式仪器，全自动POCT新型冠状病毒核酸检测全程只需80分钟，包括样品裂解、RNA提取、目标扩增和实时荧光检测。据其官网介绍，该产品具有独立全密闭式检测管，全自动检测，安全等特点，阳性符合率为98.0%，阴性符合率为95.4%，总符合率为96.3%，临床检测结果准确、稳定可靠。对实验室环境要求低，广泛适用于发热门诊、检验科、移动式检测车等各种检测环境，可应对急诊、夜诊、紧急手术术前检查等突发应急情况下的新冠核酸检测。尤思达核酸扩增检测分析仪于2019年12月31日获批上市。优思达UC0102核酸扩增检测分析仪仁度 AutoSAT仁度最新研发的仁度于2020年4月取得国家医疗器械注册证。该产品系仁度生物首款引入全自动核酸检测流水线概念的设备，颠覆了传统分批模式，实现流水线式检测，样本随到随检，将分子诊断的临床应用拓展至门急诊，大幅降低了对应用场景的要求。仁度 AutoSAT全自动核酸检测分析系统万孚生物8月22日，万孚生物正式发布了boxarray全自动多重核酸检测分析系统。该系统将PCR检测从专业实验室中解放出来，样本进结果出，一次检测可提供10-30个检测结果，精准检测病原微生物感染。中科院苏州医工所2020年4月，中科院苏州医工所汪大明研究员领衔的团队开发出一套便携式新冠病毒核酸快速检测系统。该系统可对新冠病毒核酸进行现场即时检测，45分钟左右就能得出定性结果。据了解，该核酸检测系统在检测的过程中，无需核酸提取纯化、无需PCR扩增，通过处理液直接裂解病原体并释放靶核酸，实现对样本中目标核酸的定性判断。此外，该检测系统仪器体积小，便于携带，其试剂盒可以常温下储存和运输，可以大大减少对冷链物流的依赖，从而节约物流成本。该产品已通过国家药监局审批，取得三类医疗器械产品注册证。科研人员进行仪器芯片测试常州博闻迪中国常州博闻迪医药股份有限公司,开发了一款体积不到70立方厘米，重量不到50克的家用核酸检测仪，博闻迪这款家用核酸检测仪是以核酸环介导等温扩增技术为基础，采用基因工程和免疫检测技术研制而成，主要用于多种病毒核酸检测，特别是当前新冠病毒核酸检测。由于这款检测仪具有体积小、使用方便、价格低廉、可以自我采样、检测灵敏度高、检测时间短等特点，适合在家自我采样、自我检测，也可作为大样本集中检测的筛查工具。国外罗氏2020年3月，美国食品药品管理局(FDA)批准了瑞士制药巨擘罗氏(Roche)旗下“cobas SARS-CoV-2”全自动新冠病毒检测仪“紧急使用授权”(EUA)，该产品是针对新冠病毒的首个商业化检测工具。有了指定EUA以及在欧洲范围内适用于体外诊断产品的CE认证，该产品得以部署和运用到美国和欧洲的医院及实验室中，为各家医疗机构和实验室提供了大规模扩大新冠病毒诊断检测的潜力。据罗氏集团首席执行官Severin Schwan介绍，与现有的多种新冠病毒检测法形成鲜明对比的是，这套系统实现了高度自动化，能有效减轻医疗系统所面临的检测负担。“cobas SARS-CoV-2”全自动新冠病毒检测仪赛默飞第二个被授予EUA的商业化检测是来自赛默飞的TaqPath COVID-19组合检测试剂盒。该试剂盒用于定性检测COVID-19疑似患者鼻咽拭子、鼻咽抽吸物和支气管肺泡灌洗样本中的SARS-CoV-2核酸。该试剂盒还具有RNA阳性对照，其中包含试剂盒靶向的SARS-CoV-2基因组区域。根据授权文件，TaqPath COVID-19可以在Applied Biosystems 7500 Fast Dx实时PCR仪器或其他授权仪器上运行。在每款核酸检测试剂盒获批后，通常使用自己生态圈的PCR仪器，而国在说明书中更多提到的国外荧光PCR仪正是ABI7500。Applied Biosystems 7500 Fast Dx实时PCR仪雅培2020年3月，雅培（Abbott）推出ID NOW™ COVID-19恒温核酸扩增检测仪，该仪器使用Abbott ID NOW诊断平台，本质上是一个盒装实验室，大约相当于小型厨房电器的大小。ID NOW™ 是一种快速、基于仪器的恒温扩增检测系统，用于感染性疾病的定性检测，新冠阳性结果最快可在5分钟内获得，阴性结果可在13分钟内确认。ID NOW™ 应用的恒温扩增 - 切口延伸扩增技术，短时间内，只要原料和能量充足，由于不需要经过升温和降温的过程，相比传统的 PCR 过程，速度上的优势非常明显。美国总统特朗普曾亲自“带货”，但也有研究标明使用雅培 ID NOW™ 检测诊断 COVID-19 可能存在假阴性的结果。ID NOW™ COVID-19恒温核酸扩增检测仪赛沛2020年3月21日，赛沛（Cepheid）宣布Xpert Xpress SARS-CoV-2 核酸检测试剂获得美国食品药品监督管理局的紧急使用授权（FDA EUA），用于进行SARS-CoV-2病毒核酸的定性检测（SARS-CoV-2即导致新型冠状病毒肺炎COVID-19的病毒）。该检测试剂将适用于全球范围现有的23,000台全自动GeneXpert系统，约45分钟报告检测结果。GeneXpert Infinity博世集团2020年3月27日博世集团官方消息，博世研发出一款新型冠状病毒快速检测仪，可以在2.5小时内出诊断结果，且不需要送到实验室，将于4月率先在德国投入使用。日本政府投入（具体品牌未知）2月，日本政府推出新型检测仪器。新型仪器使用了日本产业技术综合研究所开发的DNA快速扩增技术，包含处理样本在内30分钟即可完成检测。仪器可手持移动，最多能同时检测四个人的样本。据称，每台仪器的价格约为数百万日元。杏林制药日本国立研究开发法人产业技术综合研究所早在2001年美国发生炭疽杆菌事件后，以“快速检测”和“小型化”为目标，开发成功了名为“微流路式热循环”的新型PCR技术。利用基于微流路的新型PCR技术快速实现热循环的是“GeneSoC”测量仪，以微流路式热循环技术为基础，利用荧光标记探针实时检测核酸扩增的基因，整个装置由主机和检测单元构成。利用微流路式热循环技术，根据样本浓度的不同，可在5-15分钟内快速完成核酸定量。每个样本能以3个波长进行荧光检测。GeneSoC及专用测量芯片已由杏林制药公司于2019年11月11日上市。目前，在日本全国的主要研究设施里有数十台产品，被用于新冠病毒的检测中。佳能医疗2020年3月，宣布开始推进“新冠病毒快速检测系统”的研发与应用研究。佳能医疗系统株式会社与长崎大学联合研发新型冠状病毒（SARS-CoV-2）核酸检测系统，并已经开始着手进行该检测系统的落地应用研究。目前的实时PCR技术的核酸检测时间约为4小时，佳能本次研发的检测系统有相同程度的灵敏度，而且包括核酸提取等预处理在内，总检测时间可以控制在40分钟以内，实现了更加快速的核酸检测。此外，该系统中使用的设备重量轻、结构紧凑、可操作性强，适合在医疗场所和偏远岛屿使用。一套检测系统每天（按8小时计算）可以检测224例样本以上。Spindiag除大型诊断公司外，初创公司也活跃于测试开发领域。弗莱堡诊断初创公司Spindiag生产一种小型测试设备，带有集成的试剂盒，该试剂盒被批准用于检测抗药性病原体。公司在此基础上开发Sars-CoV-2快速测试，该测试预计将在30分钟内产生结果。该测试系统还分析病原体的遗传物质。Digital Diagnostics美因茨的Digital Diagnostics公司目前正在设计一个全新的系统，该系统由前赛诺菲高层领导开发。公司与病毒学家和研究实验室合作，开发了一种数字生物传感器，其上带有抗体的捕获层与新型冠状病毒结合，从而触发电信号。注：文中数据来源于网络，如有错误请联系修改。如有不全，欢迎推荐补充。

p　　继1月Cell、Cell Reports先后推出“Best of 2015”合集后，近日Molecular Cell杂志也推出了年度最佳合集，回顾了去年的一些突出技术进展。该合集包括了4篇Review & Perspectivey，以及6篇技术论文。/pp　　strongReview & Perspectivey/strong/pp　　strongCryo-EM: A Unique Tool For The Visualization Of Macromolecular Complexity/strong/pp　　strong3D低温电子显微镜/strong(cryo-electron microscopy ，cryo-EM)是一种结构生物学技术，近期取得了飞跃的发展。由于所需样品量少，不需要结晶，且可在电脑中成像分类，该技术在分析混合物的组成和构象方面有很大的潜能。这一综述主要介绍了cryo-EM的发展历史、Single-Particle EM Reconstruction原则以及近期技术突破等内容。/pp　　High-Throughput Sequencing Technologies/pp　　人类基因组测序已经深刻地改变了我们对生物学、人类多样性和疾病的理解。过去的十年里，DNA测序技术取得了非凡的进展，基因组医学时代也逐渐成为可能。/pp　　这一综述盘点了可选择的商业化strong高通量测序/strong(HTS)平台，来源公司包括Illumina、Life Technologies/ThermoFisher/Ion Torrent、Pacific Biosciences以及Oxford Nanopore Technologies 总结了HTS的用途，包括绘制基因组的3D结构、表征转录组、微生物测序、罕见病测序和癌症基因组测序等 此外，文章还分析了HTS技术目前的限制性以及在个体化a title="" style="color: rgb(255, 0, 0) text-decoration: underline " href="http://www.instrument.com.cn/application/SampleFilter-S01-T000-1-1-1.html" target="_self"strongspan style="color: rgb(255, 0, 0) "医学/span/strong/a时代中的角色。/pp　　strongImaging Live-Cell Dynamics and Structure at the Single-Molecule Level/strong/pp　　过去十年里，荧光显微镜、荧光关联谱和荧光标记技术的快速发展使得我们能够在高分辨率下观察活细胞中不同分子的Robustness和Stochasticity。这篇综述介绍了strong光学显微镜/strong观察分子结构细节的困难之处(衍射极限)、单分子的定位和追踪、荧光关联谱、Noninvasive单细胞成像原则、单分子成像方式、标记和染色的发展，以及相关技术未来发展的方向和挑战等内容。/pp　　strongExpanding the Biologist’s Toolkit with CRISPR-Cas9/strong/pp　　关于strongCRISPR/strong技术已经不用做太多的背景介绍，这篇Perspective的作者之一是加州大学伯克利分校的Jennifer A. Doudna，文章介绍了CRISPR/Cas9的发现过程、基因编辑机制、高通量筛选功能、脱靶效应以及未来发展方向等内容。/pp　　strongTechnology Articles/strong/pp　　strongMonitoring Mitochondrial Pyruvate Carrier Activity in Real Time Using a BRET-Based Biosensor: Investigation of the Warburg Effect/strong/pp　　将丙酮酸运送到线粒体中需要一种特定的载体，即线粒体丙酮酸载体(mitochondrial pyruvate carrier，MPC)。MPC代表了碳代谢的中心节点，它的活性在生物能学中可能发挥着关键的作用。为了确定MPC在恶性细胞中是否仍起作用，领导该研究的科学家小组开发出了一种生物传感器来测量它的实时活性。结果表明，癌细胞中的MPC活性较低 当增加细胞溶质中丙酮酸的浓度时，这种低活性状态可以被逆转。这一生物传感器有望成为研究多种类型细胞中碳代谢和生物能学的独特工具。/pp　strong　Tracking Distinct RNA Populations Using Efficient and Reversible Covalent Chemistry/strong/pp　　这篇文章描述了一种标记和纯化4-thiouridine(s4U)-containing RNA的化学方法。研究证明，与常用的HPDP-biotin相比，methanethiosulfonate试剂与s4U形成二硫键更有效。这一改进有望用于基于追踪不同的RNA的研究方法，如标记4-thiouridine研究组织特异性转录。/pp　　strongSpDamID: Marking DNA Bound by Protein Complexes Identifies Notch-Dimer Responsive Enhancers/strong/pp　　这项研究中，科学家们开发出一种Split DamID(SpDamID)技术，能够精确地标记“称为转录因子的调控蛋白”是在活细胞细胞核中的哪个部位与DNA相互作用。作者报道称，SpDamID可标记活细胞中的DNA，并且仅在两个标记的蛋白在相同的DNA链上彼此接近相互作用的情况下。/pp　　strongA Regression-Based Analysis of Ribosome-Profiling Data Reveals a Conserved Complexity to Mammalian Translation/strong/pp　　基因组学的一个基本目标是鉴定表达蛋白的完整集合。在这项研究中，科学家们展示了一个基于核糖体分析和线性回归的实验和分析框架，用于翻译过程的系统识别和量化。在lipopolysaccharide刺激的小鼠树突状细胞和HCMV感染的人成纤维细胞中使用这一方法鉴定出了许多新型蛋白质编码序列，包括micropeptides和已知蛋白的突变体。这一研究揭示了哺乳动物翻译过程意想不到的复杂性。/pp　　strongMeasuring In Vivo Mitophagy/strong/pp　　线粒体自噬(mitophagy)的变化与衰老及其相关a title="" style="color: rgb(255, 0, 0) text-decoration: underline " href="http://www.instrument.com.cn/application/SampleFilter-S01-T000-1-1-1.html" target="_self"strongspan style="color: rgb(255, 0, 0) "疾病/span/strong/a的关系越来越紧密。然而，现在依然没有一种很便捷的方法可用于分析体内的mitophagy过程。在这项研究中，科学家们描述了一种转基因小鼠模型，这一模型表达了荧光标记Keima的线粒体靶向形式(mitochondrial-targeted form of the fluorescent reporter Keima，mt-Keima)。广泛比较mt-Keima小鼠的原代细胞和组织揭示了mitophagy过程中的许多重要差异。此外，研究人员还通过mt-Keima小鼠分析了mitophagy如何随条件变化。/pp　strong　Massively Systematic Transcript End Readout, ‘‘MASTER’’: Transcription Start Site Selection, Transcriptional Slippage, and Transcript Yields/strong/pp　　这项研究中，科学家们开发了一种strong基于下一代测序的技术，称作MASTER/strong。利用这一技术，研究人员确定了大肠杆菌RNA聚合酶在体外和体内的共同核心启动子全部转录起始位点 定义了决定TSS选择、反复启动和转录量的TSS区域的DNA序列 明确了DNA拓扑学和三磷酸核苷(NTP)浓度的影响。这种快速的测序方法，结合先进的生物化学及化学方法有望帮助揭示转录过程中DNA解链的关键机制。/p

王 芸沃特世科技（上海）有限公司蛋白质糖基化是生命系统非常重要的翻译后修饰之一，在免疫识别，蛋白分泌，信号转导等生命过程中发挥了重要作用。与蛋白相连的多聚糖是这些功能的重要载体，特别是对于单克隆抗体药物，多聚糖部分对药物的生物活性有着重要的影响。因此，发展分离效率高，检测灵敏度好的糖基化分析方法对单克隆抗体药物分析具有十分重要的意义。 针对糖基化分析中的种种困难，沃特世公司开发了亲水作用色谱法，以及荧光-质谱结合检测的分析方法。ACQUITY UPLC系统配合荧光检测器(FLR)以及多聚糖分析专用(GST )色谱柱，比HPLC方法有更高的分离度。多聚糖分析专用色谱柱装填了1.7&mu m的酰胺吸附剂，可在HILIC模式下有效分离荧光标记的多聚糖。UPLC配合荧光检测器分析多聚糖可以获得很高的分离度和定量准确性，特别是对于位置异构体以及有共流出的小峰分析；而质谱检测为糖链鉴定提供了更多的结构信息。通过与标准糖链保留时间的比较，该流程能实现高通量的多聚糖定性定量，满足药物分析的多种需求。一、色谱条件与标记后的多聚糖样品的分离可通过HILIC方法，有效分离2-AB标记的多聚糖混合物。对于方法优化，使用更缓的窄梯度，可有效提高保留时间上相临近的多聚糖峰之间的分离度；对于其它的参数，如流速、缓冲液浓度、流动相pH及柱温等，一般也需要进行优化。图1示例使用优化后的HILIC色谱条件后，复杂的2-AB标记的IgG多聚糖混合物得到了很好的分离，包括E1/ E2与F1/ F2。实验所用梯度洗脱时间为45分钟，包括色谱柱清洗和再平衡步骤。一般来说，一个样品的总分析时间在1小时内。因此，与使用3.0-&mu m填料的HPLC方法相比，使用1.7-&mu m填料的UPLC色谱方法，不但分离效果更好，而且运行时间更短。实验中使用2.1 x150 mm色谱柱。图1(B)中甘露糖5(峰C)与甘露糖6(峰H)可与邻近多聚糖峰成功分离，解决了共流出的问题。二、2-AB标记的多聚糖定量及结构鉴定由于多聚糖在HILIC 模式下能实现基线分离，各种异构体，例如末端唾液酸的位置异构，都能得到很好的分离。因此，在荧光检测器下的峰面积积分能对各种糖链进行定量分析。而从MS谱图来看，多聚糖样品中高甘露糖糖型所占比例较高，而复合型及杂合型糖链也都能够得到鉴定。各种带有神经氨酸的糖链也都能得到鉴定，表明该方法能够适合各种多聚糖复合物的分析。除了分子量，我们还能通过MS/MS谱图进一步确认多聚糖的结构。2-AB标记的IgG多聚糖混合物的分析结果充分说明沃特世提供了成熟的聚糖分析方案，且相应色谱柱的质量控制采用了2-AB标记的IgG多聚糖混合物进行。ACQUITYUPLC系统显著缩短了分析时间，将常规HPLC上需要2个小时甚至3个小时的分离梯度缩短到1小时。 此外沃特世提供UPLC-FLR-MS的整体解决方案可以十分有效的对多聚糖进行分析，除提供分子量信息外，还可以进行糖结构推导，大大降低了生物药物研发工作中糖基化分析的难度。实验流程：一、2-AB 标记糖链使用GlycoPro le试剂盒，Prozyme公司使用试剂盒进行2-AB 标记糖链时，除以下步骤，按照该公司的说明操作即可。1.使用50&mu l的标记反应液2. 65度反应4-5小时3.将样品按步骤4处理除掉过量的标记试剂 使用Sigma公司试剂1. 配制3 0% 的醋酸D M S O 溶液（ 3 0 &mu l 冰醋酸，700ulDMSO）2.按照20：1（v/w）的比例配制2-AB 溶液 （如需要20mg 2-AB，则用400&mu l 30% 的醋酸DMSO溶液配制）3.以16.7：1（v/w）的比例将2-AB溶液与氰基硼氢化钠混合配制标记反应液4.将所得糖链用50&mu l标记反应液溶解，65度震荡反映4-5小时5 .将反应液按步骤4处理除去过量的标记试剂二、使用MassPrep亲水作用样品处理板除去过量的标记试剂所需溶液: MiniQ 纯水，90% 乙腈 ACN，10 mM 醋酸铵Tris，20% ACN1.样品处理板活化，向样品处理板加入200&mu l MiniQ纯水，再加入 200&mu l 90% ACN，重复 90% ACN2.吸取 50&mu l 标记溶液，加入 450&mu l ACN（ 如有沉淀，请勿离心，以免降低糖链回收率），由于板上每孔体积为200&mu l，可以将样品分为四份加入3.将样品加入处理板，设定真空度为低（压力 250-500 mmHg），以保证样品与HILIC基质有充分时间相互作用；如果溶液在板上没有移动，可适当增加真空度4.用 90% ACN清洗处理板两次5.换用样品收集板，用200&mu l 10 mM 醋酸铵Tris， 20%ACN洗脱，洗脱液转移至1ml 离心管6.冷冻干燥标记后糖链溶液冻干后的样品复溶于20&mu l50% ACN中，超声5 min 后转入UPLC采样瓶，进样5&mu l。 参考文献(1) Martin Gilar, Ying-Qing Yu, Joomi Ahn, and Hongwei Xie.Analysis of Glycopeptide Glycoforms in Monoclonal Antibody TrypticDigest using a UPLC HILIC Column(2) Hongwei Xie, Weibin Chen, Martin Gilar, St John Skiltonand Jeffery R. Mazzeo. Separation and Characterization of N-linkedGlycopeptides on Hemagglutinins In A Recombinant Influenza Vaccine(3) Joomi Ahn，Ying Qing Yu and Martin Gila.r UPLC亲水相互作用色谱(HILIC)-荧光检测法分析2-AB标记的多聚糖

近日，上海交通大学王鹏飞教授和团队，设计一种无需预扩增的新型 DNAzyme 传感器，并将其并命名为 SPOT。图 | 王鹏飞（来源：王鹏飞）对于以 miRNA 和病毒 RNA 为代表的多种临床意义核酸标记物，本次传感器均具备检测能力，并能实现快速、便捷的临床分子诊断应用。通过针对血清 miRNA 进行敏感和特异的检测，进而可以用于乳腺癌、胃癌和前列腺癌等多种癌症的分子诊断。此外，SPOT 能从临床拭子中灵敏准确地检测 SARS-CoV-2 RNA。同时，SPOT 可以与侧流层析技术联合，实现对于核酸靶标的即时（POCT，point-of-care testing）检测。（来源：Angewandte Chemie International Edition）鉴于 SPOT 完全由合成 DNA 分子构建，避免了对于昂贵蛋白质酶的需求，具备较好的成本优势。实验显示，一次 SPOT 测定的材料成本，大约低至 0.02 美元，明显低于已有的检测体系。与现有基于 DNA 酶、或基于 CRISPR 的核酸靶标测定相比，这种灵敏且特异的分析性能、一步法的操作方案、低成本的优势、以及和 POCT 能力的结合，让 SPOT 能够成为一种更好的测定方法。未来在检验医学领域，该团队希望利用 SPOT 体系针对循环体内核酸进行检测，实现多类型疾病的灵敏特异分子诊断，从而为疾病的早期诊断和精准治疗提供新的可能。进一步地，他们也希望基于核酸适体的结合，能够进行小分子与蛋白的检测，扩展 SPOT 系统在多方面的临床诊断应用。此前，在体内递送治疗方面，传统的 DNAzyme 不具备可编程的靶向性。而该团队设计的新型 DNAzyme 体系可以快速设计和实现可编程的靶向目标链，并通过切割来达到治疗目标。总的来说，这一创新有望为疾病治疗提供更精准、更有效的手段，为基因治疗和精准医学的发展带来重要推动。（来源：Angewandte Chemie International Edition）那么，本次成果的研发必要性是什么？它弥补了已有测量工具的哪些不足？据介绍，生物体液（血液、尿液、汗液等）中存在的核酸分子，是对包括癌症和病毒感染等重大疾病进行分子诊断的一类关键生物标志物。然而，核酸标志物存在低丰度、高度动态、高异质性、背景干扰大等特点，其临床检测面临着测不出、测不准、测不全、测不了、测不起等挑战。因此，迫切需要开发超灵敏、高特异、通量高、便捷经济的核酸生物标志物检测分析方法。DNAzymes 是一类体外筛选的合成 DNA 分子，具有类似酶的催化活性，例如裂解核酸磷酸二酯键。典型的裂解核酸 DNAzyme，由具有催化能力的催化核心、以及用于通过序列互补性识别底物的两条臂组成。因此，当前许多 DNAzyme 已经广泛用于体外和体内的金属离子检测，因为它们的催化活性高度依赖于金属离子。然而，具有小分子、蛋白质或核酸检测能力的 DNAzyme 鲜有报道，导致这些目标很难被检测到。受自然酶和核酸酶的启发，通过实施异构模块（如 aptamer、toehold）来设计异构的 DNAzyme 生物传感器，可以通过小分子、蛋白质、核酸或细菌等，调节因子介导其催化活性。传统的异构 DNAzyme 生物传感器通常被设计成多组分分子复合体，通过具有 toehold 的抑制链，来抑制并释放 DNAzyme。以及通过在靶结合后分裂并恢复催化核心，或通过靶诱导的 DNAzyme-底物-靶标复合物的稳定，来实现对于核酸靶的直接检测。然而，这些生物传感系统对于定向核酸的直接检测，通常表现出皮摩尔至纳摩尔的敏感性，因此无法探测临床样本中的 miRNA 或病毒 RNA 标志物。而许多 miRNA 被视为是多种癌症的潜在生物标志物，然而由于缺乏癌症诊断的敏感性和特异性，很少有 miRNA 被证明在临床上有用。王鹏飞认为，这种多组分设计可能会对其检测能力产生负面影响。由于一些原因比如化学计量的不完善、动力学分子陷阱、催化活性受损、以及信号泄漏的风险增加，会导致低丰度目标更加难以被测量。而该课题组的主要研究兴趣是：开发简单、快捷、灵敏的新型疾病分子诊断方法。通过调研，该团队发现体液中的循环核酸已经成为多种疾病的重要液体活检生物标志物。由于这些核酸生物标志物在生物标本中的高度动态、异质性和低丰度，导致其临床检测面临着巨大挑战。传统的聚合酶链式反应（PCR，Polymerase Chain Reaction）技术需要严格的样品处理、昂贵仪器和专业操作。而新型等温扩增方法，比如重组酶聚合酶扩增（RPA，Recombinase Polymerase Amplification）、环介导等温扩增（LAMP，Loop-mediated isothermal amplification）等则能简化操作过程。而尽管 CRISPR 结合等温扩增技术，能够显示出较高的灵敏度和便捷性，但是存在非特异性扩增、连续操作步骤和对昂贵易损酶的需求等缺陷，限制了临床上的应用。通过对以上这些因素的思考、并结合课题组自身优势，他们定下了本次课题。（来源：Angewandte Chemie International Edition）通过理论模拟与设计，他们设计出了这种新型 DNAzyme 传感器 SPOT。为了明确 SPOT 的机制并优化实验参数，课题组研究了具体的激活方式、以及可应用的核酸靶标长度。由于 DNAzyme 传感器的自身特性，最初他们设计的 DNAzyme 传感器信号泄漏非常严重，无论如何优化实验条件，都无法达到稳定、高灵敏的检测目的。通过大量的文献调研，以及学习和理解此前 DNAzyme 传感器的设计原理，再结合组内讨论他们认为：自封锁核酸链的设计，或许可以解决信号泄漏的问题。后来，通过一系列的实验，信号泄漏问题已经被解决。但是，DNA 酶传感器却无法被激活。于是，他们进一步优化参数，通过缩短结合臂的长度，最后成功构建了 DNAzyme 传感器。通过此，他们构造了一个单链、自锁定的单分子系统，并将这种传感系统命名为 SPOT（用于核酸检测的灵敏的环启动 DNAzyme 生物传感器）。同时，他们进一步将 SPOT 与试纸条结合，为 SPOT 实现 POCT 检测奠定了基础。经过全面优化和 SPOT 检测，在单管、一步、无预扩增和等温检测的前提下，实现了对 miR-21 的 15fM、对病毒 RNA 的 1.9aM 的强大检测灵敏度，以及对于核酸靶标的检测特异性（区分变异体）。最终，相关论文以《一种用于核酸敏感检测的可编程 DNAzyme》（A Programmable DNAzyme for the Sensitive Detection of Nucleic Acids）为题发在 Angewandte Chemie International Edition[1]。史辰致是第一作者，王鹏飞担任通讯作者。图 | 相关论文（来源：Angewandte Chemie International Edition）不过，目前只有少量临床样本在 SPOT 上进行测试。未来，课题组将对更多患者进行临床研究，以便全面评估 SPOT 测定的可靠性。同时，由于本次研究采用了无前置放大器的方案，因此 SPOT 还不够灵敏，无法在肉眼可见的测试条上，产生明显可区分的读数。因此，该团队打算进一步提高 SPOT 的灵敏度，或与基于等离子体/荧光的便携式可视化设备结合，以便让 SPOT 的 POCT 能力能被用于实际应用。未来，在临床应用层面，他们希望能够建立多中心、大规模临床队列，对 SPOT 体系的疾病诊断效能进行更大范围的论证。在技术改进层面，该团队计划拓展 SPOT 的应用范围。除了核酸检测外，他们也希望通过引入核酸适体，来实现对于小分子和蛋白标志物的检测。

全国光辐射安全和激光设备标准化技术委员会2010年度年会定于7月24日至28日在上海举行。会议主要进行年度总结、研究委员增补变更、建立第二届标委会筹备组等事宜，并进行一个强制标准项目的会审。　　全国光辐射安全和激光设备标准化技术委员会(简称:国家激光标委会, 代号:SAC/TC284)于2006年5月16日在北京成立。　　全国光辐射安全和激光设备标准化技术委员会是由中国国家标准化管理委员会批准成立, 负责激光基础技术、激光器件和材料、激光设备(不含文物保护激光设备)、光辐射安全及相关领域的标准化工作,并对口国际电工委员会光辐射安全和激光设备技术委员会(IEC/TC76)的激光标准化管理机构。中国电子科技集团公司第十一研究所为秘书长单位。　　第一届全国光辐射安全和激光设备标准化技术委员会委员现由34名，均是来自激光行业的企事业专家，其中工程院院士2位，教授4位，研究员及研究员级高工 15位，高工9位，企业高级行政管理人员4位。主任委员由中国电子科技集团公司第十一研究所韩建忠所长担任,副主任委员四人,分别由中国电子科技集团公司第十一研究所周寿桓院士、北京光电技术研究所陆耀东副所长、北京工业大学激光工程研究院左铁钏院长、武汉楚天激光集团股份有限公司孙文董事长担任,秘书长由中国电子科技集团公司第十一研究所薛峰所长助理担任,副秘书长由机械工业仪器仪表综合技术经济研究所欧阳劲松副总工担任。

项目编号：SDJDHF20220589-Z355项目名称：山东大学质量标记单细胞多维分析系统采购项目预算金额：650.0000000 万元（人民币）最高限价（如有）：650.0000000 万元（人民币）采购需求：标包货物名称数量简要技术要求1质量标记单细胞多维分析系统 1台详见公告附件合同履行期限：详见招标文件要求。本项目( 不接受 )联合体投标。对本次招标提出询问，请按以下方式联系。1.采购人信息名称：山东大学地址：山东大学中心校区明德楼联系方式：王老师 0531-883697972.采购代理机构信息名称：海逸恒安项目管理有限公司地址：山东省济南市历下区华润置地广场A5-6号楼27层联系方式：李雨莹 0531-82661997；139641595153.项目联系方式项目联系人：李雨莹电话：053182661997山东大学质量标记单细胞多维分析系统采购项目公开招标公告(1).pdf

项目编号：SDJDHF20220589-Z355项目名称：山东大学质量标记单细胞多维分析系统采购项目预算金额：650.0000000 万元（人民币）最高限价（如有）：650.0000000 万元（人民币）采购需求：标包货物名称数量简要技术要求1质量标记单细胞多维分析系统 1台详见公告附件合同履行期限：详见招标文件要求。本项目( 不接受 )联合体投标。公开招标.jpg

p style="text-align: justify text-indent: 2em "近日，中国科学院深圳先进技术研究院研究员郑炜团队、北京大学教授施可彬团队合作，研制出首台短波长（520纳米）激发的双光子显微系统。该系统可用于毛细血管的高分辨率、无标记、无创活体成像，相关成果论文In vivo label-free two-photon excitation autofluorescence microscopy of microvasculature using a 520 nm femtosecond fiber laser发表在Optics Letters上。/pp style="text-align: justify text-indent: 2em "对微血管网络在其自然环境中进行形态评估，为理解感染、高血压、糖尿病、缺血、癌症等各种疾病的发生和发展提供了独特视角。目前，无需标记物的高分辨率三维成像技术的缺乏，限制了对微血管的体内研究。以往采用蓝宝石激光器（波长范围：700-1000纳米）作为光源的普通双光子显微系统给血管成像时，由于血管自身几乎不发荧光，需要提前在血管中注射荧光染料。近年来，科研人员发现红细胞在可见光飞秒激光激发下可发出微弱的自发荧光信号。但以往研究只能依赖蓝宝石激光器和光参量振荡及放大技术或光子晶体光纤（PCF）产生超连续谱这两种方法来获得可见光波段（400-700纳米）的飞秒光。这些方法存在激光器体积大，价格昂贵，结构复杂，易受环境影响等问题。/pp style="text-align: justify text-indent: 2em "该研究借助施可彬团队自行研制的520纳米高功率飞秒光纤激光器，采用短波长激发和荧光寿命成像相结合的技术，实现了毛细血管的无标记、活体、高分辨成像。整个双光子显微系统横向分辨率达到260纳米，纵向分辨率为1.3微米，在体成像深度可达200微米。该设备的研发将为后续血管相关的疾病机理研究与治疗策略探索提供重要工具。/pp style="text-align: justify text-indent: 2em "span style="text-indent: 2em "该研究得到国家自然科学基金、广东省自然科学基金等项目支持。/span/pp style="text-align: justify text-indent: 2em "a href="https://www.osapublishing.org/ol/abstract.cfm?uri=ol-45-10-2704" target="_self"span style="color: rgb(0, 176, 240) "strongspan style="text-indent: 2em "论文链接 /span/strong/span/a/pp style="text-align: center text-indent: 0em "span style="text-indent: 2em "img style="max-width:100% max-height:100% " src="https://img1.17img.cn/17img/images/202005/uepic/aa10e0df-e883-46ef-ad83-b8c46ccd44d1.jpg" title="1.PNG" alt="1.PNG"//span/pp style="text-align: center text-indent: 0em "strongspan style="text-indent: 2em "（a）血红细胞和（b）毛细血管的无标记、高分辨成像结果/span/strong/p

p style="text-indent: 2em margin-top: 10px margin-bottom: 10px line-height: 1.5em "span style="text-indent: 2em "4月1日，由中国科学技术大学罗昭锋发起，仪器信息网联合主办的strong“核酸适配体在新冠疫情中的应用”专题网络研讨会/strong成功举办。本次会议报名人数高达1707人，出席1380人，出席率达80.8%，会议取得圆满成功。/spanbr//pp style="text-indent: 2em margin-top: 10px margin-bottom: 10px line-height: 1.5em "核酸适配体因其“可以做抗体不能做的事”，而受到广大研究人员的关注。如今，核酸适配体在分析化学、蛋白质组学、临床医学、药物研发及基因调控等领域已经成为重要的研究工具。/pp style="text-indent: 2em margin-top: 10px margin-bottom: 10px line-height: 1.5em "面对新型冠状病毒疫情，strong如何充分发挥核酸适配体的作用？如何通过各方通力协作，加快产品开发速度？如何完善核酸适配体产业链？核酸适配体产业如何布局和发展？/strong24位来自全球核酸适配体领域的顶尖科学家针对上述问题作了精彩报告。/pp style="text-align: center"img style="max-width: 100% max-height: 100% width: 600px height: 167px " src="https://img1.17img.cn/17img/images/202004/uepic/03845238-73cb-4814-a39a-74113182d001.jpg" title="核酸适配体.png" alt="核酸适配体.png" width="600" height="167" border="0" vspace="0"//pp style="text-align: center "span style="text-indent: 2em "报告专家/span/pp style="text-indent: 2em margin-top: 10px margin-bottom: 10px line-height: 1.5em "span style="color: rgb(255, 0, 0) "strong以下是部分回放视频：/strong/span/pp style="text-indent: 2em margin-top: 10px margin-bottom: 10px line-height: 1.5em "strong报告一、会议介绍及新冠蛋白核酸适配体的筛选 罗昭锋(中国科学技术大学)/strong/pp style="text-indent: 2em margin-top: 10px margin-bottom: 10px line-height: 1.5em "a href="https://www.instrument.com.cn/webinar/video_112188.html" target="_self" style="text-decoration: underline color: rgb(0, 112, 192) "span style="color: rgb(0, 112, 192) "strong回放链接/strong/span/a/pp style="text-indent: 2em margin-top: 10px margin-bottom: 10px line-height: 1.5em "介绍了核酸适配目前在全球的发展状况，与抗体比较的优缺点。在新冠肺炎疫情下，团队在最短时间内获得了N蛋白与S蛋白的适配体。分析核酸适配体目前遇到的瓶颈，推荐大家在筛选的时候需要考虑应用的条件，尽可能在复杂体系中进行筛选，并具体以N蛋白和S蛋白适配体筛选为例，分析了遇到的问题以及具体的解决方法。最后深入分析了目前适配体产业链发展遇到的问题。当下需要在获得优质适配体的基础上，开发出能真正走向实用的产品。最后，提出了在整个产业链上不同环节开发者之间的合作框架，希望借此机会推进不同团队之间的合作。/pp style="text-indent: 2em margin-top: 10px margin-bottom: 10px line-height: 1.5em "strong报告二、Functional nucleicacids as biosensors towards better human health:accomplishments andchallenges 李应福(McMasterUniversity（加拿大）) /strong/pp style="text-indent: 2em margin-top: 10px margin-bottom: 10px line-height: 1.5em "介绍了如何进行COVID-19蛋白的检测，通过control line、IgG和IgM三条检测线的变化进行结果判断，具有操作简单，快速以及灵敏度高等特点，并阐明了核酸适配体领域的现状以及本身对于功能性核酸生物传感器的成就，并且对于核酸适配体的应用发展提出了一些针对性意见，提出未来核酸适配体的重心应当集中到适配体的实际应用上，我们不仅要得到了好的核酸适配体，更需要好用的核酸适配体，同时提出我们在进行核酸适配体的医学应用研究时，我们应当与医生和临床密切的联系，让医生参与到我们的研究当中来。/pp style="text-indent: 2em margin-top: 10px margin-bottom: 10px line-height: 1.5em "strong 报告三、Rapid directdetection at single virion level and differentiation of infectious fromnoninfectious virus using DNA aptamer-nanopore 陆艺(Universityof Illinois at Urbana-Champaign) /strong/pp style="text-indent: 2em margin-top: 10px margin-bottom: 10px line-height: 1.5em "span style="color: rgb(255, 0, 0) "stronga href="https://www.instrument.com.cn/webinar/video_112189.html" target="_self"回放链接/a/strong/span/pp style="text-indent: 2em margin-top: 10px margin-bottom: 10px line-height: 1.5em "介绍了DNA酶的产品开发和DNA纳米孔传感器，在point-of-care检测中，在不需要预处理情况下提高选择性和灵敏度，快速检测传染性病毒和非传染性病毒。介绍了团队从基础研究到实际应用中发展，例如将POC用于用药监测，选择合适有疗效的窗口，改进药物疗效；缩短研发时间，应用到现有的仪器中，比如血糖仪中试纸条的钠离子和锂离子检测，实现产品化；细胞内和体内成像剂，将此应用近红外光热激发DNA酶-金纳米在活细胞里金属离子的成像，目前已经通过光调节适配体传感器时空控制活细胞线粒体中的ATP成像以及活细胞里面看到钠离子成像。将DNA酶和荧光蛋白结合从而看到一些小分子。报告了一种简单的方法，无需任何预处理即可在单个病毒颗粒水平上快速（ 30min）检测和区分环境或生物样本中的传染性和非传染性人类腺病毒。/pp style="text-indent: 2em margin-top: 10px margin-bottom: 10px line-height: 1.5em "strong报告四、核酸适配体体外诊断中的应用与挑战 林振宇(福州大学) /strong/pp style="text-indent: 2em margin-top: 10px margin-bottom: 10px line-height: 1.5em "span style="color: rgb(0, 112, 192) "stronga href="https://www.instrument.com.cn/webinar/video_112190.html" target="_self"回放链接/a/strong/span/pp style="text-indent: 2em margin-top: 10px margin-bottom: 10px line-height: 1.5em "介绍了体外诊断的三种方法，基于抗原抗体的免疫诊断，基于酶的生化诊断，基于核酸的分子诊断。结合实验室基础，重点介绍了免疫诊断和基于核酸适配体分子诊断，并比较了两者的优缺点，进一步分析了核酸适配体在体外诊断中的机遇与挑战，及免疫分析检测的优点。就目前新冠病毒疫情而言，免疫体外诊断存在严重的假阴性及假阳性问题，如何在病毒含量低的时候，实现快速检测。这对于核酸适配体而言，既是机遇，也是挑战。/pp style="text-indent: 2em margin-top: 10px margin-bottom: 10px line-height: 1.5em "strong报告五、核酸适配体自动化筛选方案解决方案 孙梅（赛默飞世尔科技（中国）有限公司） /strong/pp style="text-indent: 2em margin-top: 10px margin-bottom: 10px line-height: 1.5em "span style="color: rgb(0, 112, 192) "stronga href="https://www.instrument.com.cn//webinar/video_112202.html" target="_self"回放链接/a/strong/span/pp style="text-indent: 2em margin-top: 10px margin-bottom: 10px line-height: 1.5em "介绍了核酸适配体的背景、自动化selex筛选的步骤原理，磁珠法自动化加速selex的筛选，磁珠法的工作流程及方案，进一步介绍了kingfisher转移磁珠等，kingfisher flex，kingfisher presto，dynabeads磁珠，筛选所要用的试剂等产品。/pp style="text-indent: 2em margin-top: 10px margin-bottom: 10px line-height: 1.5em "strong报告六、基于核酸适配体的生物医学信息获取 羊小海(湖南大学) a href="https://www.instrument.com.cn//webinar/video_112191.html" target="_self" /a/strong/pp style="text-indent: 2em margin-top: 10px margin-bottom: 10px line-height: 1.5em "span style="color: rgb(0, 112, 192) "stronga href="https://www.instrument.com.cn//webinar/video_112191.html" target="_self"回放链接/a/strong/span/pp style="text-indent: 2em margin-top: 10px margin-bottom: 10px line-height: 1.5em "介绍了基于核酸适配体的生物医学信息获取，从纳米材料、信号转换、靶标识别构建生物功能化纳米探针，开展细胞与活体层面信息获取的系列研究工作。重点阐述了通过aptamer筛选获取探针，检测模式和探针设计(夹心、竞争、激活、裂开型、多价结合及药物）对探针的影响。/pp style="text-indent: 2em margin-top: 10px margin-bottom: 10px line-height: 1.5em "strong报告七、新冠肺炎临床诊疗的困境与挑战 王晶、段静思(安徽医科大学) /strong/pp style="text-indent: 2em margin-top: 10px margin-bottom: 10px line-height: 1.5em "介绍了新冠在临床的病程进程，临床症状、病理改变等。主要阐述了实验室的诊断方法、重症及危重症预警两方面。各种不同体外诊断检测的解析，不同检测方法与临床症状的矛盾，分析了核酸检出率低的原因可能在于人为因素，主要为采样位置、时间、连续性、样本保存、运输、技术问题、病毒变异、PCR技术等。此外，在诊断过程中还存在着各种问题，如病毒载量，病毒分型，只有更好解决这些问题，才能为临床提供一个更好的诊断依据。当前的治疗，缺乏有效治疗药物，只能提供支持性辅助治疗。最后，从临床的角度对科研提出一些研究方向。 /pp style="text-indent: 2em margin-top: 10px margin-bottom: 10px line-height: 1.5em "strong报告八、Detectionof target byARP-PCR 林俊生(国立华侨大学) a href="https://www.instrument.com.cn//webinar/video_112192.html" target="_self" /a/strong/pp style="text-indent: 2em margin-top: 10px margin-bottom: 10px line-height: 1.5em "span style="color: rgb(0, 112, 192) "stronga href="https://www.instrument.com.cn//webinar/video_112192.html" target="_self"回放链接/a/strong/span/pp style="text-indent: 2em margin-top: 10px margin-bottom: 10px line-height: 1.5em "介绍了ARP-PCR用于检测的方法（aptamer-based regionally protected PCR)，此方法结合了PCR的信号放大和aptamer的特异性。报告以结合FSHa的适配体A6为原型介绍了结合位点的判断，用干实验（电脑软件预测）和湿实验（分子生物学试验方法，例如斑点杂交，pull-down等），找到结合位置，用酶降解不结合分子以及分子的不结合区域，进行PCR扩增放大特异性的位点。使用恒温扩增代替RT-qPCR，可以on-site检测待测物。/pp style="text-indent: 2em margin-top: 10px margin-bottom: 10px line-height: 1.5em "strong报告九、基于机器学习的新冠病毒核酸适体筛选 宋彦龄(厦门大学) /strong/pp style="text-indent: 2em margin-top: 10px margin-bottom: 10px line-height: 1.5em "stronga href="https://www.instrument.com.cn//webinar/video_112193.html" target="_self"回放链接/a/strong/pp style="text-indent: 2em margin-top: 10px margin-bottom: 10px line-height: 1.5em "介绍了基于机器鉴定的适配体筛选新方法。针对新冠病毒，选择靶标：S蛋白的RBD结构域，筛选过程加入ACE2竞争辅助筛选，期望获得的适配体与RBD的结合区域与ACE2的结合区域相同。提出基于结构域、家族大小、结构稳定性的多维度综合分析策略，实验对高通量测序大数据中核酸适配体的快速、准确甄定。获得了系列针对SARS-CoV-2的受体结合域（RBD）的高亲和适配体并进行了截短优化，获得的CoV2-RBD-1C和CoV2-RBD-4C适体对RBD的Kd值分别为5.8 nM和19.9 nM。使用分子动力学模拟的相互作用模型及ACE1的竞争实验表明，两条适体可能在SARS-CoV-2 RBD对ACE2的结合上具有部分相同的结合位点。其筛选的适配体为SARS-CoV-2提供了新型识别探针，并且有可能将助力SARS-CoV-2的防控及治疗，同时为深入研究新冠病毒感染机制提供了一个新的分子识别工具。目前文章已经发表。/pp style="text-indent: 2em margin-top: 10px margin-bottom: 10px line-height: 1.5em "strong报告十、适配体相关探针研制及其在病毒检测中的应用 何治柯(武汉大学) /strong/pp style="text-indent: 2em margin-top: 10px margin-bottom: 10px line-height: 1.5em "span style="color: rgb(0, 112, 192) "stronga href="https://www.instrument.com.cn//webinar/video_112194.html" target="_self"回放链接/a/strong/span/pp style="text-indent: 2em margin-top: 10px margin-bottom: 10px line-height: 1.5em "介绍了配合探针与量子点探针两个方面的研究，分享了配合物探针中的核酸分子‘光开关’相关应用：可以替代EB用于核酸检测。核酸分子‘光开关’与量子点结合可用于核酸和蛋白的检测，实现传感与诊断，也用于药物筛选。核酸分子‘光开光’对活病毒双荧光标记用于胞内核酸示踪研究，实现多重荧光标记，10-15min可检测到病毒。其单个艾滋病病毒脱壳过程示踪研究，在科技日报上被称为2016年中国病毒学界重大发现。在量子点探针研制及其病毒检测中的应用：主要讲了实现合成低毒CdTe量子点，一步合成DNA-CdTe：Zn2+量子点；Mucin 1适配体功能量子点成功实现靶向肿瘤。量子点用于病毒的检测实现可视化、多病毒同时检测，也朝着双色一体化发展。目前适配体功能化探针已用于癌症标志物检测与成像，量子点信标已成功应用于单个艾滋病毒RNA的标记与成像。 /pp style="text-indent: 2em margin-top: 10px margin-bottom: 10px line-height: 1.5em "strong报告十一、超灵敏单分子微阵列技术(SiMoA)在COVID-19研究中的应用潜能 李朝辉(郑州大学) a href="https://www.instrument.com.cn//webinar/video_112195.html" target="_self" /a/strong/pp style="text-indent: 2em margin-top: 10px margin-bottom: 10px line-height: 1.5em "span style="color: rgb(0, 112, 192) "stronga href="https://www.instrument.com.cn//webinar/video_112195.html" target="_self"回放链接/a/strong/span/pp style="text-indent: 2em margin-top: 10px margin-bottom: 10px line-height: 1.5em "介绍了超灵敏单分子微阵列技术（SiMoA）原理，开发出基于微珠的数字式ELISA。新的ELISA相对于传统ELISA，检测的灵敏度提高了1000倍、需要样本变得极低（10-50微升），且可应用与抗原抗体 MiRNA 、外泌体、 CTC与生物小分子的检测，具有极其广阔的应用前景。基于SiMoA已发展了针对近40种肿瘤标志物的超灵敏检测，针对已开发的20余种标志物测定方法的临床样品测定正在进行中，SiMoA平台用于检测新冠病毒蛋白具有巨大优势。/pp style="text-indent: 2em margin-top: 10px margin-bottom: 10px line-height: 1.5em "strong报告十二、适配体在新冠中潜在的应用 廖世奇(甘肃省医学科学研究院) /strong/pp style="text-indent: 2em margin-top: 10px margin-bottom: 10px line-height: 1.5em "span style="color: rgb(0, 112, 192) "stronga href="https://www.instrument.com.cn//webinar/video_112196.html" target="_self"回放链接/a/strong/span/pp style="text-indent: 2em margin-top: 10px margin-bottom: 10px line-height: 1.5em "介绍了适配体在新冠中的潜在应用，从五个方面着手：1、新冠的已有检测技术2、新冠需要的检测技术3、适配体的优势方面；4、新冠问题和拟解决的思路：问题主要是快速准确的确定和检测传染源以及病人病程检测监控。针对这个问题，思考利用分子信标、电化学检测和信标配基等方法快速检测和将蛋白信号转化为核酸，通过适配体形成检测信号的转换和统一监测，形成完整检测。5、目前面临的困难和机会。/pp style="text-indent: 2em margin-top: 10px margin-bottom: 10px line-height: 1.5em "strong报告十三、框架核酸拓扑适配体增强膜蛋白识别 左小磊(上海交通大学)/strong /pp style="text-indent: 2em margin-top: 10px margin-bottom: 10px line-height: 1.5em "span style="text-indent: 2em "介绍了框架核酸拓扑适配体的构成，框架核酸是一类人工设计的结构核酸；尺寸、形貌和力学特性可程序性调控；为分子识别提供结构支撑和微环境调控。且显著增强核酸适配体的分子识别结合强度。已经成功将拓扑适配体成功用于捕获循环肿瘤细胞；目前的结果显示，拓扑适配体，可用于多种细胞的捕获，随着适配体数量的增强，结构的复杂程度越高，分子的结合强度越高，捕获效率也会显著提高，且捕获效率高于常规核酸适配体。/span/pp style="text-indent: 2em margin-top: 10px margin-bottom: 10px line-height: 1.5em "strong报告十四、基于功能(寡)核苷酸的治疗药物与检测试剂研发 杨振军(北京大学) /strong/pp style="text-indent: 2em margin-top: 10px margin-bottom: 10px line-height: 1.5em "span style="color: rgb(0, 112, 192) "stronga href="https://www.instrument.com.cn//webinar/video_112199.html" target="_self"回放链接/a/strong/span/pp style="text-indent: 2em margin-top: 10px margin-bottom: 10px line-height: 1.5em "介绍了主要的研究方向：1.化学修饰的小核酸药物研究；2.基于核酸适配体的疾病检测新技术研究；3.环核苷酸类信使分子化学生物学研究；4.核苷类抗病毒药物研究。利用基于氢键/π-π作用的中性胞苷脂材DNCA包载G-4核酸适配体有效转染入胞，在给药剂量大大降低的情况下表现出明显的抗肿瘤作用；在DNCA包载下，发现G-4核酸适配体AS1411和TBA的选择性抗耐药肿瘤细胞作用，并初步探究了作用机制；AS1411和TBA磷硫代、loop拓展，获得了高效抗肿瘤且主要靶标蛋白不同的修饰物；初步构建了基于cRGD的G-4核酸适配（修饰物）靶向递送系统，考察其在动物体内的实体瘤靶向性。基于课题组的突破性核酸递送系统和修饰策略，研发功能寡核苷酸(核酸适配体、反义核酸、siRNA)及环二核苷酸)类精准治疗药物，可能为新冠肺炎病毒感染患者的治疗提供新的选择，也可能会开发出更高效、更精确的临床所亟需的核酸适配体类病毒检测试剂盒，早日实现此类药物和诊断制剂的临床广泛应用，助力未来各类疫情的防控。 /pp style="text-indent: 2em margin-top: 10px margin-bottom: 10px line-height: 1.5em "strong报告十五、核酸适配体在生物传感及POCT诊断中的应用 杜衍(中国科学院长春应用化学研究所) /strong/pp style="text-indent: 2em margin-top: 10px margin-bottom: 10px line-height: 1.5em "span style="color: rgb(0, 112, 192) "stronga href="https://www.instrument.com.cn//webinar/video_112200.html" target="_self"回放链接/a/strong/span/pp style="text-indent: 2em margin-top: 10px margin-bottom: 10px line-height: 1.5em "介绍了COVID-19新冠病毒的检测手段、在新冠肺炎攻关项目相关的阶段性进展以及适配体对于靶细胞的识别和检测，同时提出未来适配体检测方面的应用需要把目光投向病毒、细胞、细菌等具有重要检测意义的物质这一观点。阐述动力学竞争的适配体传感器，通过在平衡竞争状态下的互补链替换法和非状态下的动力学竞争法来进行检测，另外基于动力学竞争的适配体比率传感器和无需构型转变的适配体传感器进行了简单的说明。认为POCT检测除了利用电化学的电化学信号和血糖仪的电子信号等分析手段，还需要寻求更有效的信号传导探针和实现基因和血清学检测一体化。/pp style="text-indent: 2em margin-top: 10px margin-bottom: 10px line-height: 1.5em "strong报告十六、如何应对aptamer亲和力测定中的挑战 张玺（应用专家） a href="https://www.instrument.com.cn//webinar/video_112203.html" target="_self" /a/strong/pp style="text-indent: 2em margin-top: 10px margin-bottom: 10px line-height: 1.5em "span style="color: rgb(0, 112, 192) "stronga href="https://www.instrument.com.cn//webinar/video_112203.html" target="_self"回放链接/a/strong/span/pp style="text-indent: 2em margin-top: 10px margin-bottom: 10px line-height: 1.5em "介绍了关于aptamer全球课题组的研究情况：中国拥有全球研究适配体最大规模的团队。分析适配体应用情况：目前可应用到临床的aptamer药物比较少，FDA批准的aptamer的药物仅有一个，很多处于临床阶段，但目前核酸适配体处于快速发展阶段。介绍一些适配体亲和力检测过程中的一些挑战：如何在复杂液体中检测、通量需求等。介绍aptamer用于检测时的优势，与SERS纳米探针亲和力测定检测原理；介绍CRISPR-Cpf RNA识别机制研究的基本情况与实验原理；介绍aptamer在复杂液体中检测靶分子的实验与对比情况。/pp style="text-indent: 2em margin-top: 10px margin-bottom: 10px line-height: 1.5em "strong报告十七、核酸适配体在临床中的应用 罗阳(重庆大学) /strong/pp style="text-indent: 2em margin-top: 10px margin-bottom: 10px line-height: 1.5em "span style="color: rgb(0, 112, 192) "stronga href="https://www.instrument.com.cn//webinar/video_112201.html" target="_self"回放链接/a/strong/span/pp style="text-indent: 2em margin-top: 10px margin-bottom: 10px line-height: 1.5em "介绍了基于适配体检测论文的概况(以荧光检测为主)，适配体与抗体的优缺点以及适配体的应用范围。以及从多篇文献角度讲述现关于适配体的应用：核酸、小分子、蛋白、微生物、细胞、外泌体的检测，并分析了适配体检测的问题、意义、不足，同时阐述了适配体临床应用的局限性、运用前景、和实验室的优势。建立简单、易普及的筛查和检测手段是减少新冠病毒疫情传播的重要手段。然而，目前研发的基于核酸检测产品均受到检测时间的限制，而基于抗原抗体免疫反应的快速检测试剂盒需要制备高特异性的抗体，为突发疫情的及时监测和隔离带来困难。核酸适配体的临床应用能够在时间、成本及特异性上均能够避免上诉缺陷，为疫情的应急检测发挥巨大作用。/pp style="text-indent: 2em margin-top: 10px margin-bottom: 10px line-height: 1.5em "strong报告十八、内置样品处理器件的光谱快检技术 杜一平(华东理工大学) a href="https://www.instrument.com.cn//webinar/video_112198.html" target="_self" /a/strong/pp style="text-indent: 2em margin-top: 10px margin-bottom: 10px line-height: 1.5em "span style="color: rgb(0, 112, 192) "stronga href="https://www.instrument.com.cn//webinar/video_112198.html" target="_self"回放链接/a/strong/span/pp style="text-indent: 2em margin-top: 10px margin-bottom: 10px line-height: 1.5em "碱基胸腺嘧啶(T)与汞离子形成T-Hg2+-T结构，可使标记四甲基罗丹明的SERS探针适配体的拉曼信号显著降低，利用这一特点制备了一种高灵敏、高选择性的汞离子检测探针。主要的研究方向是实用化，将技术投向应用，以光谱快检仪器为例，样品处理装置，光谱分析软件为主。分析了检测容易出现的问题，如何提高灵敏度，选择性。针对低含量样品检测，提出固相萃取光谱分析及其具体做法，和使用的主要仪器：膜固相萃取装置，光纤光谱仪等。用三个例子讲述了这项技术:SPES 光气的检测，膜固相萃取荧光检测苯并比，SPES检测伏马毒素。分析了SPES的优缺点，思考了新冠肺炎检测及合作思路。/pp style="text-indent: 2em margin-top: 10px margin-bottom: 10px line-height: 1.5em "strong报告十九、细胞与分子传感器及其在生物医学中的应用 吴春生(西安交通大学) /strong/pp style="text-indent: 2em margin-top: 10px margin-bottom: 10px line-height: 1.5em "介绍了生物传感系统及其发展，讲解嗅觉味觉等基本原理，以及其转到途径；再介绍LAPS单细胞传感器，原理和仪器系统的构架，并结合适配体开发新的传感器，包括分子传感器和DNA传感器。最后希望开发出能检测多种海洋生物毒素的仪器，运用到适配体，达到现场快检的目的。/pp style="text-indent: 2em margin-top: 10px margin-bottom: 10px line-height: 1.5em "strong报告二十、 适配体-有机电化学晶体管（Apatmer-OECT）传感器 冀健龙(太原理工大学) /strong/pp style="text-indent: 2em margin-top: 10px margin-bottom: 10px line-height: 1.5em "介绍了适配体-有机电化学晶体管（Apatmer-OECT）传感器，报告详细介绍了OECT与适配体生物传感器，OETC高灵敏度生物传感，OECT器件制备关键问题三个方面；Aptamer常规的传感方法有FRET，CV or EIS，Goldnanoparticles，OECT；介绍了Aptamer常规的传感方法，主要是电化学方法；介绍了电化学方法的基本原理以及一般进行信号放大的方法。/pp style="text-indent: 2em margin-top: 10px margin-bottom: 10px line-height: 1.5em "strong报告二十一、化学修饰核酸适配体用于肿瘤识别和治疗 谈洁（湖南大学）a href="https://www.instrument.com.cn//webinar/video_112197.html" target="_self" /a/strong/pp style="text-indent: 2em margin-top: 10px margin-bottom: 10px line-height: 1.5em "span style="color: rgb(255, 0, 0) "stronga href="https://www.instrument.com.cn//webinar/video_112197.html" target="_self"回放链接/a/strong/span/pp style="text-indent: 2em margin-top: 10px margin-bottom: 10px line-height: 1.5em "介绍了化学修饰核酸适配体用于肿瘤分子识别，实验引入化学修饰丰富核酸适配体的空间构象，核酸适配体设计二茂铁基和三氟甲基修饰核苷酸，硝基修饰人工碱基对化学修饰。研究了化学修饰核酸适配体调控蛋白活性：识别三阴性乳腺癌细胞膜上的整合素α3β1，从而抑制整合素α3β1介导的细胞迁移；自组装化学修饰核酸胶束，核酸二茂铁部分发生芬顿反应改变核酸从疏水变为亲水同时导致胶束尺寸变化，构建尺寸可变的胶束体系同时满足药物在肿瘤边缘的富集和肿瘤中心的渗透，研究了体内评估，表明胶束体系在活体中具有EPR效应，同时具有良好的肿瘤治疗能力。/pp style="text-indent: 2em margin-top: 10px margin-bottom: 10px line-height: 1.5em "strong报告二十二、新冠病毒的检测现状与核酸适传感器产品化机遇 代昭（天津工业大学） /strong/pp style="text-indent: 2em margin-top: 10px margin-bottom: 10px line-height: 1.5em "介绍了目前新冠病毒的现状，阐述了核酸检测、抗体检测和抗原检测的各个特点。若能以新冠病毒作为靶标，使用核酸适体开发出荧光生物传感器，则可以极大的简化检测步奏，提高检测准确性。未来的功能化产品方向（1.快筛试剂盒 2.无采样或被动采样可视化检测产品 3.智能警示与防护设备）。/pp style="text-indent: 2em margin-top: 10px margin-bottom: 10px line-height: 1.5em "a href="https://www.instrument.com.cn/webinar/Video/Video/Collection/10509" target="_self" style="color: rgb(255, 0, 0) text-decoration: underline "strongspan style="color: rgb(255, 0, 0) "“核酸适配体在新冠疫情中的应用”网络研讨会精彩视频回放合集。/span/strong/a/p

基本信息 关键内容： 核酸提取仪 开标时间： 2021-08-09 09:00 采购金额： 100.00万元 采购单位： 牡丹江市公安局 采购联系人： 陈先生 采购联系方式： 立即查看 招标代理机构： 北京中天致远项目管理集团有限公司 代理联系人： 白女士 代理联系方式： 立即查看 详细信息 牡丹江市公安局？_男士家族排查系统建设竞争性磋商公告 黑龙江省-牡丹江市 状态：公告 更新时间： 2021-07-25 牡丹江市公安局？_男士家族排查系统建设竞争性磋商公告 发布时间：2021-07-25 14:07 牡丹江市公安局_男士家族排查系统建设竞争性磋商公告 北京中天致远项目管理集团有限公司受采购人牡丹江市公安局委托，根据《中华人民共和国政府采购法》等有关规定，现对牡丹江市公安局_男士家族排查系统建设进行竞争性磋商采购，项目已具备采购条件，欢迎合格供应商前来参加磋商。 项目名称：牡丹江市公安局_男士家族排查系统建设 项目编号：MC[2021]0637 采购内容：男士家族排查系统，具体内容详见附件 服务期限：一年5、资金来源：财政资金6、预算资金：100万元7、供应商应具备的条件及资格（1）拟参加本项目潜在供应商应符合《中华人民共和国政府采购法》及相关法律规定。（2）拟参加本项目的潜在供应商须在黑龙江省政府采购网上注册登记并备案合格。（3）在国内注册具有生产或经营销售的供应商、并持有效营业执照（营业执照需包含本次采购相关范围）、税务登记证、组织机构代码证（三证合一可提供营业执照），开户许可证。（4）供应商信用良好，存在异常记录和严重违法失信行为的禁止参加。供应商没有被相关部门列入企业经营异常名录、失信被执行人名单和重大税收违法案件当事人名单（以信用中国网站查询为准）及没有被列入政府采购严重违法失信行为信息记录（以中国政府采购网查询为准）。（5）集团公司与下属具有独立法人的子公司或分公司不得同时取得同一单项项目的潜在供应商资格；同一公司具有独立法人的子公司不得同时参加本项目的投标。（6）与采购人存在厉害关系可能影响采购公正性的法人、其他组织或者个人，不得参加投标。（7）本项目不接受联合体投标。（8）资格审查方式：本项目采用资格后审方式,主要资格审查标准、内容等详见采购文件，只有资格审查合格的供应商才有可能被授予合同。8、采购文件的获取（1）潜在供应商请于2021年7月26日至2021年7月30日（法定节假日除外），每日上午9时00分至11时00分，下午14时00分至16时00分（北京时间），携带“本人身份证原件及复印件、法定代表人身份证明书或法定代表人签署的授权委托书原件、营业执照复印件”到北京中天致远项目管理集团有限公司购买竞争性磋商文件，以上资料复印件须加盖公章，逾期不予受理。（2）采购文件每套售价300元，售后不退。9、发布公告的媒介本次采购公告在黑龙江省政府采购网牡丹江市分网(http://www.hljcg.gov.cn/index.jsp)发布，其他网站转载无效。10、响应文件的递交及相关事宜（1）提交响应文件截止时间及开标时间：2021年8月9日9时00分，所有响应文件应在截止时间前密封送达北京中天致远项目管理集团有限公司二楼开标室（牡丹江市江南星河传说1号楼门市1—2号）。（2）逾期送达的或者未送达指定地点的响应文件，采购人不予受理。11、联系方式采购人：牡丹江市公安局地址：牡丹江市乌苏里路联系人：陈先生联系电话：15504535695采购代理机构：北京中天致远项目管理集团有限公司地址：牡丹江市江南星河传说1号楼门市1—2号项目联系人：白女士联系电话：0453-6433668 2021年7月25日 附件： 技术条款 序号 名称 技术参数 是否核心产品 1 Y-STR荧光检测试剂盒（一）（200人份） ★1、所投试剂盒可单管同时检测不少于41个Y-STR基因座。 ★2、所投试剂盒必须包含公安部要求的下列核心基因座、优选基因座和备选基因座：DYS19、DYS385a/b、DYS389Ⅰ、DYS389Ⅱ、DYS390、DYS391、DYS392、DYS393、DYS437、DYS438、DYS439、DYS448、DYS456、DYS458、DYS635、Y GATA H4、DYS481、DYS533、DYS576，DYS643、DYS460、DYS549、DYF387S1a/b、DYS449、DYS518、DYS627、DYS570、DYS527a/b、DYS447、DYS444、DYS557、DYS596，DYS522。 ★3、所投试剂盒名称及其基因座参数信息均已经收录国家DNA数据库，并能提供全国公安机关男性排查系统及家族金盾二期全国公安机关DNA数据库中扩增试剂盒下拉菜单截图。 ★4、所投试剂盒必须符合《黑龙江省公安机关男士家族排查系统采用检测试剂盒规范》要求并提供相关证明材料。5、所投扩增试剂灵敏度至少达到25pg，便于极少量的疑难样品一次性得到完整 DNA 分型信息，提供公安部出具的检验报告证明。 6、试剂盒针对不同基因座均设置真实客观的Stutter峰阈值,便于混合样品、污染样品的区分。 7、检测结果分型均衡，检测样本峰高（检测仪器3730XL)不低于800RFU，低于800RFU的检测峰视为检测不成功，在检测范围内，没有非特异性扩增产物。 8、试剂盒组分完整、包括扩增检测所需全部试剂（热启动酶、引物、内标、ladder等），直接扩增滤纸上的血斑、唾液卡，无需提取或纯化。 9、所投扩增试剂最大扩增片段小于500bp，扩增均衡性好，成功率高。 10、试剂盒应用快速扩增和高效缓冲体系，扩增时间不超过90分钟。 11、所投试剂盒规格，200人份（标准25ul体系），包含扩增及扩增后所需全部试剂； 是 2 Y-STR荧光检测试剂盒二（200人份） ★1、试剂盒采用六色荧光标记，可单管同时扩增检测不少于35个Y-STR基因座，须包含公安部20个核心基因座（DYS19、DYS385a/b、DYS389 I、DYS389 II、DYS390、DYS391、DYS392、DYS393、DYS437、DYS438、DYS439、DYS448、DYS456、DYS458、DYS635、Y_GATA_H4、DYS481、DYS533、DYS576）和15个优选基因座（DYS643、DYS460、DYS549、DYF387S1、DYS449、DYS518、DYS627、DYS570、DYS527a/b、DYS447、DYS444、DYS557、DYS596）；（提供所投产品技术资料） 2、★试剂盒型号和基因座信息已录入全国公安机关DNA数据库，检测结果可以直接导入数据库（须提供数据库试剂盒名称及其基因座信息界面截图进行佐证）；★3、试剂盒包含至少3个Y-indel遗传标记位点：rs771783753、rs759551978、rs199815934；★4、试剂盒最大扩增片段长度不大于480bp。 是 3 磁珠法DNA提取试剂盒 ★1.DNA提取试剂盒为一体式封装试剂，用于DNA提取的磁珠和各种试剂通过塑料膜密封在可与高通量DNA纯化工作站配套使用的塑料反应板内，使用时撕开密封用塑料膜置于高通量DNA纯化工作站中即可直接用于高通量DNA的自动化提取；封装有试剂的塑料反应板有96个孔，每个反应孔分别封装有磁珠等试剂，含有封装试剂的反应板共有5块且均为深孔板，另配有1块96孔磁套及1块96孔空白浅孔板，浅孔板可以实现20ul小体积洗脱。★2.样本适用性：配有在KingFisher Flex DNA纯化仪上使用的浓缩、纯化及提取程序'★3该试剂盒须能够与本实验室现有DNA提取纯化工作站（KingFisher Flex）配套使用； 是 4 唾液DNA样本采集盒 ★1、可直接采集唾液（非口腔上皮细胞）DNA，无需其它器具介入口腔内；2、产品为100套/盒，每套产品包含唾液采集盒1个和采集卡1张，采集盒与采集卡一体式组装；★3、采集盒采用漏斗式采集设计，PP材质，漏斗内有刻度线标记唾液采集量，上盖的海绵块装置可以有效的吸取多余唾液。采集盒尺寸不小于65*45*12.5mm，上下开盖设计实现上开盖直接采集唾液，采样完成后下开盖直接取卡； 4、采集卡由包装卡和采样纸组成，采样区上采样环直径不小于1.5cm，采样区有效面积不小于30*30mm2；★5、包装卡内含有速干层可以使唾液样本快速干燥；采样纸上采样区为单采样环，采样纸上含指示性试剂具有永久指示功能，当遇到无色的唾液样本时，采样纸由紫红色变为白色，变色后可长期保存不退色； 6、包装卡封皮上可填写待录自然信息，待录信息包括：姓名、性别、证件号码、采样单位、采样人、联系电话、采样时间等；★7、包装卡三折后一端粘附采样纸，包装卡附有防水条码，打孔同时扫描条码。条码号符合省库统一制式，不得有重码；★8、采集的唾液样本无需水洗等前处理步骤可直接用于免提取直接扩增试剂且对扩增无抑制；唾液样本法庭科学DNA数据库检出率应不低于95%；9、投标商应提供采样规范以及培训视频，并需派专门技术人员协助用户单位进行全省信息采集室采样培训. 是 5 加强型血样采集卡 ★1、常温、干燥条件下，血样保存17年以上仍可有效用于复合STR检验； ★2、采集的血样可直接用于免提取扩增试剂，无需水洗或其他前处理； 3、采血纸有效面积不小于4.5*2.5平方厘米；； 4、采血纸上设有双采样环，采样环直径不小于1.2厘米； 5、采血纸粘附于包装卡上，包装卡尺寸规格：长18.0厘米，宽5.0厘米，包装卡三折后一端粘附采血纸； ★6、一份采血卡配备一套一次性采样工具和一份防水条码。一次性采样工具为塑料袋密封包装，每个采样工具内含2支酒精消毒棉签，1个自毁式采血针；防水条码号符合省库统一制式，不得有重码； 7、包装卡封皮上可填写待录自然信息，待录信息包括：（1）被采样人信息：姓名、性别、出生日期、人员编号、证件号码、户籍地址、涉案名称等；（2）采样单位信息：采样单位名称、通讯地址、采样人、联系电话、采样时间等；8、该产品需通过公安部刑事技术产品质量监督检验中心的检验，投标文件的附件中须提供证明材料的复印件或扫描件。 是 服务要求 一、1★、中标单位必须免费为采购人提供20000份人员样本的Y-STR数据检测服务，采购人提供扩增试剂盒，中标单位须免费提供检测所需的所有仪器设备（至少包含一台3730XL测序仪）和除扩增试剂盒以外的其他所有配套试剂耗材，检测采用10微升扩增体系，单次检测获得有效数据的成功率不低于95%，累计检测获得有效数据的成功率不低于99%。2★、检测获得的所有有效数据必须全部满足以下条件：对照试剂盒的等位基因座不得缺少等位基因、分析图谱的所有等位基因座的检测峰高不得低于300RFU、无拔起峰和影子峰、无平头峰和双肩峰，峰高比较均衡、最高峰和最低峰的峰高比不得大于3:2。3★、数据检测服务必须在牡丹江市公安局DNA实验室进行。未经许可，测序仪的原始数据、分析图谱、样本和CODIS文件不得以任何方式带出牡丹江市公安局DNA实验室4★、中标单位接到采购人的检测需求通知后，应在2日内派人携带检测所需仪器设备和耗材到达采购人的实验室开始检测工作，平均每日检测获得有效数据不得少于1000份，直至完成所需的检测任务。5★、中标单位在检测服务开始后要派至少2名技术人员进行此项任务，至少1名人员辅助建库样品受理、整理、存储登记等样品管理、建库资料管理和数据入库工作；至少1名人员辅助建库样品的DNA提取、扩增和电泳检测、检验结果的分析、处理、备份和归档等工作。技术人员的工资、奖金、加班费、五险一金、住宿、交通等费用由中标单位承担，技术人员工作期间因自身疾病、意外事故、自然灾害，或其他不可抗外力导致的人身伤害、伤亡，采购人一概不负责任。6★、检测完成后，采购人按照3%的比例对获得有效数据的样本随机抽样进行复检，抽样复检合格后，将有效数据录入到全国公安机关DNA数据库中，甲乙双方对有效数据的数量确认后在交接单上签字，交接单做为最终验收有效数据数量的依据。抽样复检不合格的数据，中标单位应查明出错原因，对相关批次的样本重新检验，相关试剂耗材和人力由中标单位承担。若出现3次抽样不合格或错误DNA数据造成严重后果的情况，采购人可终止合同，中标单位应承担相应的法律责任和相关赔偿义务二、1★、中标单位必须免费提供所有中标扩增试剂盒对应的光谱校正服务，并免费提供光谱校正所需的试剂。2★、中标单位必须免费对中标的扩增试剂盒使用方法进行培训。3、中标单位免费提供提取试剂盒的提取程序升级服务。4、免费提供协助案件排查大批量样本快速检验、疑难案件非常规技术手段（如Y-SNP、Y-indel、二代测序等）支持服务。5★、终身质保，试剂盒过保质期和质量问题免费更换服务。6★、提供试剂盒及配套的消耗品和技术支持等在内的一体化的解决方案，根据DNA数据库建设需要可无条件等价值更换不同规格试剂、耗材。7★、中标方及派驻的技术员须严格遵守公安机关保密规定，不得获取公安机关机密信息，或将公安内网信息转发到其他社会新闻媒体或互联网络。否则，将视情节追究其法律责任。 标注星号（★）条款为必须满足项，不符合任何一项条款，投标无效。（只适用于货物类公开招标项目） × 扫码打开掌上仪信通App 查看联系方式 基本信息 关键内容：核酸提取仪 开标时间：2021-08-09 09:00 预算金额：100.00万元 采购单位：牡丹江市公安局 采购联系人：点击查看 采购联系方式：点击查看 招标代理机构：北京中天致远项目管理集团有限公司 代理联系人：点击查看 代理联系方式：点击查看 详细信息 牡丹江市公安局？_男士家族排查系统建设竞争性磋商公告 黑龙江省-牡丹江市 状态：公告 更新时间： 2021-07-25 牡丹江市公安局？_男士家族排查系统建设竞争性磋商公告 发布时间：2021-07-25 14:07 牡丹江市公安局_男士家族排查系统建设竞争性磋商公告 北京中天致远项目管理集团有限公司受采购人牡丹江市公安局委托，根据《中华人民共和国政府采购法》等有关规定，现对牡丹江市公安局_男士家族排查系统建设进行竞争性磋商采购，项目已具备采购条件，欢迎合格供应商前来参加磋商。 项目名称：牡丹江市公安局_男士家族排查系统建设 项目编号：MC[2021]0637 采购内容：男士家族排查系统，具体内容详见附件 服务期限：一年5、资金来源：财政资金6、预算资金：100万元7、供应商应具备的条件及资格（1）拟参加本项目潜在供应商应符合《中华人民共和国政府采购法》及相关法律规定。（2）拟参加本项目的潜在供应商须在黑龙江省政府采购网上注册登记并备案合格。（3）在国内注册具有生产或经营销售的供应商、并持有效营业执照（营业执照需包含本次采购相关范围）、税务登记证、组织机构代码证（三证合一可提供营业执照），开户许可证。（4）供应商信用良好，存在异常记录和严重违法失信行为的禁止参加。供应商没有被相关部门列入企业经营异常名录、失信被执行人名单和重大税收违法案件当事人名单（以信用中国网站查询为准）及没有被列入政府采购严重违法失信行为信息记录（以中国政府采购网查询为准）。（5）集团公司与下属具有独立法人的子公司或分公司不得同时取得同一单项项目的潜在供应商资格；同一公司具有独立法人的子公司不得同时参加本项目的投标。（6）与采购人存在厉害关系可能影响采购公正性的法人、其他组织或者个人，不得参加投标。（7）本项目不接受联合体投标。（8）资格审查方式：本项目采用资格后审方式,主要资格审查标准、内容等详见采购文件，只有资格审查合格的供应商才有可能被授予合同。8、采购文件的获取（1）潜在供应商请于2021年7月26日至2021年7月30日（法定节假日除外），每日上午9时00分至11时00分，下午14时00分至16时00分（北京时间），携带“本人身份证原件及复印件、法定代表人身份证明书或法定代表人签署的授权委托书原件、营业执照复印件”到北京中天致远项目管理集团有限公司购买竞争性磋商文件，以上资料复印件须加盖公章，逾期不予受理。（2）采购文件每套售价300元，售后不退。9、发布公告的媒介本次采购公告在黑龙江省政府采购网牡丹江市分网(http://www.hljcg.gov.cn/index.jsp)发布，其他网站转载无效。10、响应文件的递交及相关事宜（1）提交响应文件截止时间及开标时间：2021年8月9日9时00分，所有响应文件应在截止时间前密封送达北京中天致远项目管理集团有限公司二楼开标室（牡丹江市江南星河传说1号楼门市1—2号）。（2）逾期送达的或者未送达指定地点的响应文件，采购人不予受理。11、联系方式采购人：牡丹江市公安局地址：牡丹江市乌苏里路联系人：陈先生联系电话：15504535695采购代理机构：北京中天致远项目管理集团有限公司地址：牡丹江市江南星河传说1号楼门市1—2号项目联系人：白女士联系电话：0453-6433668 2021年7月25日 附件： 技术条款 序号 名称 技术参数 是否核心产品 1 Y-STR荧光检测试剂盒（一）（200人份） ★1、所投试剂盒可单管同时检测不少于41个Y-STR基因座。 ★2、所投试剂盒必须包含公安部要求的下列核心基因座、优选基因座和备选基因座：DYS19、DYS385a/b、DYS389Ⅰ、DYS389Ⅱ、DYS390、DYS391、DYS392、DYS393、DYS437、DYS438、DYS439、DYS448、DYS456、DYS458、DYS635、Y GATA H4、DYS481、DYS533、DYS576，DYS643、DYS460、DYS549、DYF387S1a/b、DYS449、DYS518、DYS627、DYS570、DYS527a/b、DYS447、DYS444、DYS557、DYS596，DYS522。 ★3、所投试剂盒名称及其基因座参数信息均已经收录国家DNA数据库，并能提供全国公安机关男性排查系统及家族金盾二期全国公安机关DNA数据库中扩增试剂盒下拉菜单截图。 ★4、所投试剂盒必须符合《黑龙江省公安机关男士家族排查系统采用检测试剂盒规范》要求并提供相关证明材料。5、所投扩增试剂灵敏度至少达到25pg，便于极少量的疑难样品一次性得到完整 DNA 分型信息，提供公安部出具的检验报告证明。 6、试剂盒针对不同基因座均设置真实客观的Stutter峰阈值,便于混合样品、污染样品的区分。 7、检测结果分型均衡，检测样本峰高（检测仪器3730XL)不低于800RFU，低于800RFU的检测峰视为检测不成功，在检测范围内，没有非特异性扩增产物。 8、试剂盒组分完整、包括扩增检测所需全部试剂（热启动酶、引物、内标、ladder等），直接扩增滤纸上的血斑、唾液卡，无需提取或纯化。 9、所投扩增试剂最大扩增片段小于500bp，扩增均衡性好，成功率高。 10、试剂盒应用快速扩增和高效缓冲体系，扩增时间不超过90分钟。 11、所投试剂盒规格，200人份（标准25ul体系），包含扩增及扩增后所需全部试剂； 是 2 Y-STR荧光检测试剂盒二（200人份） ★1、试剂盒采用六色荧光标记，可单管同时扩增检测不少于35个Y-STR基因座，须包含公安部20个核心基因座（DYS19、DYS385a/b、DYS389 I、DYS389 II、DYS390、DYS391、DYS392、DYS393、DYS437、DYS438、DYS439、DYS448、DYS456、DYS458、DYS635、Y_GATA_H4、DYS481、DYS533、DYS576）和15个优选基因座（DYS643、DYS460、DYS549、DYF387S1、DYS449、DYS518、DYS627、DYS570、DYS527a/b、DYS447、DYS444、DYS557、DYS596）；（提供所投产品技术资料） 2、★试剂盒型号和基因座信息已录入全国公安机关DNA数据库，检测结果可以直接导入数据库（须提供数据库试剂盒名称及其基因座信息界面截图进行佐证）；★3、试剂盒包含至少3个Y-indel遗传标记位点：rs771783753、rs759551978、rs199815934；★4、试剂盒最大扩增片段长度不大于480bp。 是 3 磁珠法DNA提取试剂盒 ★1.DNA提取试剂盒为一体式封装试剂，用于DNA提取的磁珠和各种试剂通过塑料膜密封在可与高通量DNA纯化工作站配套使用的塑料反应板内，使用时撕开密封用塑料膜置于高通量DNA纯化工作站中即可直接用于高通量DNA的自动化提取；封装有试剂的塑料反应板有96个孔，每个反应孔分别封装有磁珠等试剂，含有封装试剂的反应板共有5块且均为深孔板，另配有1块96孔磁套及1块96孔空白浅孔板，浅孔板可以实现20ul小体积洗脱。★2.样本适用性：配有在KingFisher Flex DNA纯化仪上使用的浓缩、纯化及提取程序'★3该试剂盒须能够与本实验室现有DNA提取纯化工作站（KingFisher Flex）配套使用； 是 4 唾液DNA样本采集盒 ★1、可直接采集唾液（非口腔上皮细胞）DNA，无需其它器具介入口腔内；2、产品为100套/盒，每套产品包含唾液采集盒1个和采集卡1张，采集盒与采集卡一体式组装；★3、采集盒采用漏斗式采集设计，PP材质，漏斗内有刻度线标记唾液采集量，上盖的海绵块装置可以有效的吸取多余唾液。采集盒尺寸不小于65*45*12.5mm，上下开盖设计实现上开盖直接采集唾液，采样完成后下开盖直接取卡； 4、采集卡由包装卡和采样纸组成，采样区上采样环直径不小于1.5cm，采样区有效面积不小于30*30mm2；★5、包装卡内含有速干层可以使唾液样本快速干燥；采样纸上采样区为单采样环，采样纸上含指示性试剂具有永久指示功能，当遇到无色的唾液样本时，采样纸由紫红色变为白色，变色后可长期保存不退色； 6、包装卡封皮上可填写待录自然信息，待录信息包括：姓名、性别、证件号码、采样单位、采样人、联系电话、采样时间等；★7、包装卡三折后一端粘附采样纸，包装卡附有防水条码，打孔同时扫描条码。条码号符合省库统一制式，不得有重码；★8、采集的唾液样本无需水洗等前处理步骤可直接用于免提取直接扩增试剂且对扩增无抑制；唾液样本法庭科学DNA数据库检出率应不低于95%；9、投标商应提供采样规范以及培训视频，并需派专门技术人员协助用户单位进行全省信息采集室采样培训. 是 5 加强型血样采集卡 ★1、常温、干燥条件下，血样保存17年以上仍可有效用于复合STR检验； ★2、采集的血样可直接用于免提取扩增试剂，无需水洗或其他前处理； 3、采血纸有效面积不小于4.5*2.5平方厘米；； 4、采血纸上设有双采样环，采样环直径不小于1.2厘米； 5、采血纸粘附于包装卡上，包装卡尺寸规格：长18.0厘米，宽5.0厘米，包装卡三折后一端粘附采血纸； ★6、一份采血卡配备一套一次性采样工具和一份防水条码。一次性采样工具为塑料袋密封包装，每个采样工具内含2支酒精消毒棉签，1个自毁式采血针；防水条码号符合省库统一制式，不得有重码； 7、包装卡封皮上可填写待录自然信息，待录信息包括：（1）被采样人信息：姓名、性别、出生日期、人员编号、证件号码、户籍地址、涉案名称等；（2）采样单位信息：采样单位名称、通讯地址、采样人、联系电话、采样时间等；8、该产品需通过公安部刑事技术产品质量监督检验中心的检验，投标文件的附件中须提供证明材料的复印件或扫描件。 是 服务要求 一、1★、中标单位必须免费为采购人提供20000份人员样本的Y-STR数据检测服务，采购人提供扩增试剂盒，中标单位须免费提供检测所需的所有仪器设备（至少包含一台3730XL测序仪）和除扩增试剂盒以外的其他所有配套试剂耗材，检测采用10微升扩增体系，单次检测获得有效数据的成功率不低于95%，累计检测获得有效数据的成功率不低于99%。2★、检测获得的所有有效数据必须全部满足以下条件：对照试剂盒的等位基因座不得缺少等位基因、分析图谱的所有等位基因座的检测峰高不得低于300RFU、无拔起峰和影子峰、无平头峰和双肩峰，峰高比较均衡、最高峰和最低峰的峰高比不得大于3:2。3★、数据检测服务必须在牡丹江市公安局DNA实验室进行。未经许可，测序仪的原始数据、分析图谱、样本和CODIS文件不得以任何方式带出牡丹江市公安局DNA实验室4★、中标单位接到采购人的检测需求通知后，应在2日内派人携带检测所需仪器设备和耗材到达采购人的实验室开始检测工作，平均每日检测获得有效数据不得少于1000份，直至完成所需的检测任务。5★、中标单位在检测服务开始后要派至少2名技术人员进行此项任务，至少1名人员辅助建库样品受理、整理、存储登记等样品管理、建库资料管理和数据入库工作；至少1名人员辅助建库样品的DNA提取、扩增和电泳检测、检验结果的分析、处理、备份和归档等工作。技术人员的工资、奖金、加班费、五险一金、住宿、交通等费用由中标单位承担，技术人员工作期间因自身疾病、意外事故、自然灾害，或其他不可抗外力导致的人身伤害、伤亡，采购人一概不负责任。6★、检测完成后，采购人按照3%的比例对获得有效数据的样本随机抽样进行复检，抽样复检合格后，将有效数据录入到全国公安机关DNA数据库中，甲乙双方对有效数据的数量确认后在交接单上签字，交接单做为最终验收有效数据数量的依据。抽样复检不合格的数据，中标单位应查明出错原因，对相关批次的样本重新检验，相关试剂耗材和人力由中标单位承担。若出现3次抽样不合格或错误DNA数据造成严重后果的情况，采购人可终止合同，中标单位应承担相应的法律责任和相关赔偿义务二、1★、中标单位必须免费提供所有中标扩增试剂盒对应的光谱校正服务，并免费提供光谱校正所需的试剂。2★、中标单位必须免费对中标的扩增试剂盒使用方法进行培训。3、中标单位免费提供提取试剂盒的提取程序升级服务。4、免费提供协助案件排查大批量样本快速检验、疑难案件非常规技术手段（如Y-SNP、Y-indel、二代测序等）支持服务。5★、终身质保，试剂盒过保质期和质量问题免费更换服务。6★、提供试剂盒及配套的消耗品和技术支持等在内的一体化的解决方案，根据DNA数据库建设需要可无条件等价值更换不同规格试剂、耗材。7★、中标方及派驻的技术员须严格遵守公安机关保密规定，不得获取公安机关机密信息，或将公安内网信息转发到其他社会新闻媒体或互联网络。否则，将视情节追究其法律责任。 标注星号（★）条款为必须满足项，不符合任何一项条款，投标无效。（只适用于货物类公开招标项目）

近日，由上海交通大学朱卫仁教授与重庆西南医院神经外科冯华教授/陈图南副教授团队、爱德万测试（中国）管理有限公司三方合作在国际高水平期刊《Biosensors and Bioelectronics》上发表题为“Highly sensitive detection of malignant glioma cells using metamaterial-inspired THz biosensor based on electromagnetically induced transparency”的研究结果，首次展示了一种针对不同胶质瘤分子分型细胞进行无标记识别的太赫兹超材料检测方法，该研究也得到了天津大学姚建铨院士团队的指导和支持。胶质瘤是颅内最常见的、造成最多死残病例的中枢神经系统肿瘤，目前临床主张进行整合诊断，将胶质瘤分为多个特定的分子亚类，其中IDH是与肿瘤进展、治疗反应和预后密切相关的经典分子分型标记。快速早期无标记区分IDH1野生/突变两种胶质瘤对于术中和术后早期精准诊疗具有重要价值。研究团队提出了一种无标记的脑胶质瘤细胞“分子分型（IDH1野生/突变）”生物传感超材料，通过在生物传感器表面加载人原代胶质瘤细胞进行太赫兹波谱探测，其频率偏移和峰幅变化与不同类型细胞及其浓度呈现相关性；通过观察超材料传感器共振频率的变化，可以区分不同分子分型的胶质瘤细胞，这种识别是在没有引入抗体等生化标记方法的情况下，在多个不同细胞浓度下实现的。基于该项研究结果，太赫兹超材料生物传感器在识别胶质瘤细胞类型中显示出了巨大的潜力，基于肿瘤分子分型的太赫兹波谱识别策略也拓展了新的太赫兹波生物传感技术发展方向。太赫兹技术在生命科学领域有广阔的应用前景，第十届光谱网络会议（iCS2021）邀请了四位来自国内外高校的专家学者们，届时，专家将介绍太赫兹技术的更多应用，点击下方链接立即报名哦。5月25-28日 光谱网络会议相约十年（iCS2021）专家报告推荐之光谱在生命科学领域的应用1、《太赫兹生物医学与生物物理发展概况》(中国生物物理学会-太赫兹生物物理分会 何明霞副会长/秘书长)2、《纳米-生物界面作用的定量分析》（中国科学院高能物理研究所 王黎明研究员）3、《面向生物医学检测的LIBS/Raman联用装置与方法研发》（四川大学 林庆宇副教授）4、《新型冠状病毒核酸检测技术研究进展》（阿尔伯塔大学 庞博博士）立即报名（免费哦）：https://www.instrument.com.cn/webinar/meetings/iCS2021/

导读韩牛（Bos taurus coreanae）是一种驯化的哺乳动物，在韩国消费市场作为食物资源，其牛肉消费量远超其他品种，这种消费模式导致了区分韩牛和其他牛品种的分子研究的出现。不仅是牛，其他经济动物的不同品种在市场中的经济价值也存在较大的差异，所以准确进行种质鉴定势在必行。在之前的一项研究中，使用传统的PCR方法和Sanger测序验证确定了由TE关联缺失事件产生的韩牛特异性SV。它可以用作区分不同牛品种的分子标记（即韩牛与荷斯坦牛）。然而，PCR存在缺陷，每个样品都有各种最终拷贝定量。为了克服传统PCR的局限性，并准确评估先前研究中确定的韩牛特异性SV位点，檀国大学生物医学科学系联合畜牧研究所和檀国大学医学院，使用naica️ 微滴芯片数字PCR系统对韩牛特异性SV位点进行了更为精确的检测，并将成果《Quantitative evaluation of the molecular marker using droplet digital PCR》发表在Genomics & Informatics杂志上。转座元件（TEs）约占牛基因组的一半。它们可以是一个强大的物种特异性标记，在基因组进化时没有结构变异（SV）的回归突变。因此，作者应用naica️ 微滴芯片数字PCR系统对韩牛特异性SV进行准确的定量检测。虽然样品在韩牛群体中的等位基因频率变化较低，但naica️ 微滴芯片数字PCR系统可以通过绝对定量进行高灵敏度检测，可以做到比PCR更准确的定量。所以naica️ 微滴芯片数字PCR系统平台相比于传统PCR更适用于分子标志物的定量评价。应用亮点：▶ 使用naica微滴芯片数字PCR系统对韩牛特异性SV进行准确的定量检测。▶ dPCR测定在计数单分子和分析特定群体的少量拷贝时可以高精度地定量，与qPCR相比，具有更高的准确性。▶ 经过sanger测序，确定了naica️ 微滴芯片数字PCR系统检测准确无误，且操作和成本均低于测序。▶ naica️ 微滴芯片数字PCR系统适用于分子标志物的定量评价。实验方法：检测样本信息：共提取了五个棕色韩牛DNA和五个荷斯坦DNA作为实验样本。检测方法：为了更准确地检测韩牛特异性SV，将“Del_96”位点应用于naica️ 微滴芯片数字PCR系统（Stilla Technologies）。进行naica️ 微滴芯片数字PCR系统前确认韩牛和荷斯坦牛的DNA的浓度定量。FAM引物组和FAM探针用于检测韩牛和荷斯坦牛基因组。VIC引物组和VIC探针设计在韩牛特异性缺失（图 1B)。因此，FAM引物组和FAM探针（阳性对照）设计在所有牛DNA中检测。VIC引物组和VIC探针设计用于仅检测韩牛的荧光。▲图 1B实验结果：FAM染料在所有牛基因组中均被检测到，VIC染料仅在韩牛样品中显示出显著的检测。这表明所有韩牛基因组都包含特定的缺失序列（Del_96区域）。在韩牛样品中检测到VIC染料的信号平均浓度为243（copies/ μL）。虽然在荷斯坦样品中也检测到平均浓度0.12（copies/μL）的VIC染料信号，但这些信号相比韩牛可忽略不计。▲naica微滴芯片数字PCR系统检测韩Del_96和荷斯坦样品之间区域的绝对拷贝数比较。浓度图在 X 轴上指示样品数，在 Y 轴上指示对数刻度条（拷贝/μL）。（A）在所有样品中检测到FAM荧光。韩牛样品的绝对拷贝数大约是荷斯坦样品的两倍。（B）仅在韩牛样品中强烈检测到VIC荧光。最后，文章Results and Discussion给出-数字PCR适合作为验证物种特异性标记的平台。综上，对于naica️ 微滴芯片数字PCR技术，准确定量绝对拷贝数是一个关键特征，相比qPCR准确性更高，naica微滴芯片数字PCR为本文的检测提供了有利的支持，也验证了这一特征。在不久的将来，通过将物种识别工具应用于naica️ 微滴芯片数字PCR系统，它作为大样本量物种鉴定平台具有巨大潜力。所以naica️ 微滴芯片数字PCR系统适合作为验证物种特异性标记的平台。期刊介绍：Genomics & Informatics是由韩国基因组组织发行的涉及农业和生物科学、生物化学、遗传学、分子生物学、健康信息学等领域的期刊。

病毒性疾病严重威胁着人类健康，深刻认识和理解病毒感染过程及致病机制是病毒性疾病防治的重要基础。研究病毒感染过程通常基于荧光标记技术，但是常用的荧光蛋白及传统荧光染料往往容易发生光漂白，难以长时间动态跟踪整个感染过程。　　在&ldquo 纳米研究&rdquo 国家重大科学研究计划的支持下，围绕&ldquo 量子点标记技术研究病毒侵染过程及宿主应答&rdquo 项目，来自武汉大学，中国科学院武汉病毒研究所、长春应化所、深圳先进技术研究院，以及北京理工大学等单位的专家，自2011年1月开始开展了有益的探索，并取得了重要进展。　　据该项目首席科学家、武汉大学化学与分子科学学院教授庞代文介绍，以半导体荧光量子点为代表的性能优异的纳米标记材料，可望克服现有荧光标记材料的不足，为实时动态跟踪病毒感染宿主细胞这一复杂的动态生物学过程提供新途径。　　新型纳米标签　　为了研究病毒感染过程，就需要荧光标记。一般来说，活细胞或活体示踪要求所用的荧光标记材料在复杂的生物环境中具有良好的稳定性，能产生稳定、可靠的检测信号，才不会&ldquo 走丢&rdquo 或&ldquo 隐身&rdquo 。并且，还要求在最大程度上降低对所标记对象的影响，以获取生命过程的真实信息。　　&ldquo 也就是说，虽然身上贴了标签，但其本人并无察觉，心情依旧，行为如常。既然如此，就要求所选用的标记材料具有尽可能小的尺寸、良好的生物相容性及稳定性，能发出足够强的示踪信号。&rdquo 在庞代文看来，量子点就算得上这一类令人满意的&ldquo 标签&rdquo ，具有粒径小(通常可小至几纳米)、亮度高、光稳定性好等独特性能，且能实现多色同时标记，同时跟踪多个对象。　　采用纳米标记技术，特别是量子点标记技术对病毒感染宿主过程进行诠释，将有望克服现有技术的不足，科学诠释病毒致病机制。但是，如何精确控制材料的性质，制备出尺寸小且性质稳定的量子点，依然是该领域的一大难题。　　此外，为了降低生物成像中背景信号的干扰、激发光对生物体的光毒性以及增加荧光的穿透深度，理想的标记材料应具有较长的激发波长，荧光发射波长也最好在近红外区且具有高的荧光强度。　　基于此，武汉大学研究团队提出了&ldquo 在时间和空间上耦合活细胞内并无关联的生物化学反应途径&rdquo 合成纳米材料的&ldquo 时&mdash &mdash 空耦合&rdquo 调控合成新策略，利用活酵母细胞成功可控地合成出多色荧光量子点纳米标记材料，让细胞为科学家们做了一件几乎不可能做到的事。　　他们将烦琐危险的化学操作演变为仅仅培养细胞，将通常在约300℃进行的合成演变为在30℃下的活细胞内完成，且不需要任何易燃、易爆、有毒溶剂。进而，他们又提出了&ldquo 准生物合成&rdquo 策略，利用细胞外的模拟体系成功合成出多种小粒径的近红外量子点，成功地化解了难题。　　让病毒亮起来　　庞代文告诉记者，病毒很小，若要监视其一举一动非常困难，如果是在复杂的生物背景之下，那更是一片漆黑。而荧光标记能让病毒亮起来，方便地实现跟踪。　　中国科学院武汉病毒研究所研究员肖庚富的团队制备出均一稳定的发光病毒样颗粒，并跟踪了其&ldquo 感染&rdquo 细胞的过程。他们还实现了量子点对艾滋病慢病毒(hiv)的标记，也能用量子点定点标记昆虫病毒内部的结构。　　由于包膜病毒广泛存在于自然界且与人类健康密切相关，这一研究受到了很大的关注。而包膜病毒结构较为复杂，通常由包膜、衣壳及核酸等构成。由武汉大学和中国科学院武汉病毒研究所的研究者们进行合作，利用绿色荧光蛋白标记杆状病毒包膜，核酸分子光开关钌的含氮杂环配合物在病毒复制过程中自然嵌入核酸中标记病毒核酸，成功实现了对病毒包膜和核酸的双重标记。　　此外，北京理工大学和中国科学院武汉病毒研究所的专家团队合作提出顺应自然的病毒的温和标记策略。他们利用细胞中胆碱磷脂自然的生物合成和代谢嵌入机制、病毒从宿主细胞膜获取磷脂成分形成包膜的生物学特点以及病毒核酸的&ldquo 复制嵌合&rdquo ，在病毒自然复制过程中实现了病毒核酸和包膜的双重标记(双重标记效率高达85%)。　　&ldquo 这将有助于研究人员看到病毒感染过程中更多的行为细节。&rdquo 庞代文表示，量子点标记技术能让病毒持续变亮，为监测单个病毒侵染宿主细胞的一举一动创造了条件。　　看到病毒感染过程　　病毒是严格寄生的微生物，寄生于宿主并借助宿主细胞完成自身&ldquo 繁衍&rdquo 。病毒在细胞中的感染由三个基本过程构成循环，即进入宿主细胞(侵染)、基因组复制/组装和出胞，并进一步感染其他细胞。　　该循环是病毒维持繁衍生息的关键，而侵染是其中的首要步骤。基于量子点标记，武汉大学团队获取了病毒感染过程的实时动态信息，如病毒运动方向、路径、速率、&ldquo 扩散&rdquo 系数等，以及各种运动模式 研究了禽流感病毒在活细胞内的动态行为及机制，并对流感病毒侵染宿主细胞典型运动轨迹进行分析，发现病毒侵染过程错综复杂。　　中国科学院长春应用化学研究所团队发现乙肝病毒表面抗原(hbsag)通过小窝蛋白介导的内吞途径跨膜，实现了病毒感染活细胞过程的高分辨、高灵敏、多维动态示踪，展示出纳米生物技术良好的应用前景。　　最近，中国科学院深圳先进技术研究院团队研究出近红外量子点标记病毒感染活体动物的非侵入示踪技术 成功地长时间跟踪了禽流感h5n1假病毒对小鼠的感染过程。