2019-nCov

迎战2019-nCoV，共抗时艰！/// 德国IKA助力病毒检测 自去年 12 月以来，“2019新型冠状病毒（2019-nCoV）”无时不刻牵动着每一个中国人的心。在本应万家同庆的春节，举国执行自觉、科学的居家隔离，通过互联网了解到的每一次疫情数据更新、每一个发生在身边的事件、每一步艰难的科学和临床探索，都在提醒我们——白衣天使们一直无惧生命威胁在一线奋斗，疾控系统一直在高负荷运转进行样品检测，全国人民一直在热切地互相支援。作为一家有120年历史的德国品牌，IKA同样希望能在2019-nCoV病毒检测中贡献一份力量。借用日本HSK事务局为武汉捐赠物资时的一句话：“山川异域，风月同天”。让我们一起迎战2019-nCoV！ （一）病毒检测参考方案目前对于疑似病例，医院首先会采取隔离措施并进行检测。检测项目包括多个维度：- 影像学检测（CT，检测对象为肺部）- 血常规检测（血常规检测仪、临床型流式细胞仪，检测对象为白细胞总数、淋巴细胞计数等）- 血清学检测（ELISA、免疫荧光法，检测对象为血清）- 病原学检测（实时荧光RT-PCR、高通量基因测序，检测对象为呼吸道或血液样本中提纯后的核酸） *对于初筛样本为阳性的情况，核酸层面的病毒检测仍是目前最可靠的病原学证据，是综合诊断中的重要一项，也是治疗过程中的指导性指标。在此，我们分享相关的样品前处理配套方案如下： 操作涉及步骤配套设备操作过程样品研磨液氮处理样品后研磨A 11 basic （可选配剪切刀头）√ 主机标配粉碎刀头和80 ml研磨杯√ 研磨过程高效强劲（15 - 30 sec）√ 刀头可autoclave灭菌，研磨腔体需采用化学湿法擦拭灭菌（参考备选方案）备选方案：适用于无需使用液氮的研磨Tube Mill control + MT 40.10 steril主机+40 ml 一次性无菌研磨杯（每包10个）√ 密闭研磨操作，严格确保操作者安全√ 专利产品，使用一次性透明无菌研磨杯√ 避免样品间的交叉污染风险√ 研磨杯可直接作为样品保存容器√ 主机可灵活编辑并保存研磨程序流体处理样本从采集管转移至离心管IKA Pette vario 0.1 - 2 μlIKA Pette vario 0.5 - 10 μlIKA Pette vario 2 - 20 μlIKA Pette vario 10 - 100 μlIKA Pette vario 20 - 200 μlIKA Pette vario 100- 1000 μl√ 专利可更换把手，操作舒适√ 位于下方的大显示屏，随时观察数值√ 移液精确、安全√ DLC涂层提供优异耐腐蚀性和耐磨蚀性√ 可整支灭菌或半支灭菌，易清洁维护√ 兼容多种RNase Free吸头配置PCR反应体系恒温孵育56℃孵育ICC control eco 18 主机带18L透明浴槽和浴桥√ 极佳的控温精度√ 极佳的温度均一性√ 适合无人值守操作高速离心1.5 ml Eppendorf管离心IKA G-L主机带标配12位转子（可选配八联管金属转子）√ 转速范围宽泛，同时处理12个样品√ 主机可储存9个程序√ 具备配平监测等多项安全功能涡旋振荡1.5 ml Eppendorf管涡旋VXR basic + VX 2E.n主机+夹具√ 高达2200 rpm√ 同时处理64个样品PCR 96孔板混匀MS 3 control + MS 3.5主机带标配底座 + 垫片√ 定时功能√ 同时显示时间和转速的设定值与实际值 （二）病毒灭活参考方案世界卫生组织（WHO）已宣布此次2019-nCoV为PHEIC（国际关注的突发公共卫生事件），这是自2005年《国际卫生条例》实施以来，WHO宣布的第6起PHEIC，足见其事件的重要影响（此前的5次分别是：甲型H1N1流感病毒、野生型脊髓灰质炎病毒、西非埃博拉病、巴西寨卡病毒、刚果（金）埃博拉疫情）。WHO提供了处理埃博拉病毒及其它高致病性病毒的通用病毒失活方案，病毒在失活前需要在BSL-4实验室内处理，灭活后样品即可转移至安全级别较低的BSL-3实验室、甚至是BSL-2实验室，这将极大提升有实验能力的实验室数量。我们也在此分享病毒灭活相关的样品前处理设备参考方案，如下：操作涉及步骤配套设备操作过程 恒温孵育 60℃恒温60分钟 干浴器DB 2 + 1个DB 6.3干浴器DB 4 + 2个DB 6.3 √ 干浴器适合在不方便取水的环境下操作√ 精确控温、升温迅速√ 定时功能√ DB 2可处理1个96孔PCR板 DB 4可同时处理2个96孔PCR板通用操作（请参考上表） 作为一名普通人，我们也同样经历了最初的恐惧甚至慌乱，经历了“离群索居”的煎熬，但这个过程中间的一点一滴都有意义——它试炼了我们独立思考的智慧，以及在重压下保持正念和温暖的能力。因此，“新冠”疫情虽然还没有结束，但我们有信心共抗时艰！让我们共同努力，携手迎接春拂大地的时刻！

p style=" text-align: justify text-indent: 2em " 肺炎疫情蔓延，国内外科研机构对于新型冠状病毒本身的研究也在持续深入。近日，顶级医学杂志《柳叶刀》(The Lancet)就公布了新型冠状病毒(2019-nCoV/novel coronavirus)的彩色照片： /p p style=" text-align: center" img style=" max-width: 100% max-height: 100% width: 428px height: 428px " src=" https://img1.17img.cn/17img/images/202002/uepic/2fbfe23e-4ed7-40e2-8be7-4bf437fc927b.jpg" title=" s_aa1674f103f5439391797ebc63efb175.jpg" alt=" s_aa1674f103f5439391797ebc63efb175.jpg" width=" 428" height=" 428" / /p p style=" text-align: center " 图源于网络 /p p style=" text-align: justify text-indent: 2em " 这是一张经过渲染的伪彩色照片，看起来很严厉，但更展现了新型冠状病毒的狰狞面貌，表面布满了冠状物，仿佛恶魔的嘴一样。 /p p style=" text-align: justify text-indent: 2em " 同时，《柳叶刀》也公布了一份对于新型冠状病毒的初步研究报告，任何人均可自由查看，但是《柳叶刀》也强调，目前对于新型冠状病毒的研究还很初步，信息严重不完整，未知之处太多。 /p p style=" text-align: center" img style=" max-width: 100% max-height: 100% width: 459px height: 627px " src=" https://img1.17img.cn/17img/images/202002/uepic/9a4f55fe-4043-49b4-aa40-1aad95b0c30e.jpg" title=" 柳叶刀封面.jpg" alt=" 柳叶刀封面.jpg" width=" 459" height=" 627" / /p p style=" text-align: justify text-indent: 2em " 另外，中国疾病预防控制中心、国家微生物科学数据中心、国家病原微生物资源库近日联合发布了成功分离的我国第一株新型冠状病毒毒种信息，及其电镜照片、核酸检测引物、探针序列等信息，是国内首次发布的相关重要权威信息。 /p p style=" text-align: justify text-indent: 2em " 目前公布的毒种信息共有两则，一是“新型冠状病毒武汉株01”，采自武汉临床患者，1月6日分离： /p p style=" text-align: center" img style=" max-width: 100% max-height: 100% width: 441px height: 378px " src=" https://img1.17img.cn/17img/images/202002/uepic/5c8c191a-d2e8-4113-985c-3ba87f436f16.jpg" title=" tem1.jpg" alt=" tem1.jpg" width=" 441" height=" 378" / /p p style=" text-align: center" img style=" max-width: 100% max-height: 100% width: 445px height: 445px " src=" https://img1.17img.cn/17img/images/202002/uepic/4be0b549-2f14-433b-9f26-ccbacb0de234.jpg" title=" tem2.jpg" alt=" tem2.jpg" width=" 445" height=" 445" / /p p style=" text-align: justify text-indent: 2em " 二是“新型冠状病毒武汉株02”，采自武汉环境样本，分离时间1月22日： /p p style=" text-align: center" img style=" max-width: 100% max-height: 100% width: 445px height: 395px " src=" https://img1.17img.cn/17img/images/202002/uepic/399bfadc-1a24-4bee-9e21-ac0c131487c1.jpg" title=" tem3.jpg" alt=" tem3.jpg" width=" 445" height=" 395" / /p p style=" text-align: justify text-indent: 2em " 据介绍，冠状病毒是一大类病毒，已知会引起疾病，患者表现为从普通感冒到重症肺部感染等不同临床症状，例如中东呼吸综合征(MERS)、严重急性呼吸综合征(SARS)，后者就是17年前肆虐的“非典”。 /p p style=" text-align: justify text-indent: 2em " 此次武汉发现的新型冠状病毒2019-nCov，是一种以前尚未在人类中发现的新型冠状病毒。 /p p br/ /p

p style=" text-indent: 2em margin-top: 10px margin-bottom: 10px line-height: 1.5em " span style=" text-indent: 2em " 截止2020年1月28日20时05分，新型冠状病毒肺炎国内确诊病例为4629例，疑似6973例，治愈71例，死亡106例，死亡率低于SARS，但传播能力可能更强，导致疫情传播速度较快，给疾病防控工作带来极大的挑战。新型冠状病毒疫情日益严峻，此刻的棘手问题之一就是检测新型冠状病毒的试剂稀缺，使得很多患者不能被第一时间确诊和收治，导致后续治疗工作推进缓慢。 /span br/ /p p style=" text-indent: 2em margin-top: 10px margin-bottom: 10px line-height: 1.5em " 1月28日晚，六家公司的新型冠状病毒荧光PCR检测试剂盒或基因测序系统获国家药品监督管理局应急审批通过，这也意味着针对本次疫情在病原检测和确认方面取得了重大突破，可以有力推动对疑似疫情感染患者的甄别工作。 /p p style=" text-indent: 2em margin-top: 10px margin-bottom: 10px line-height: 1.5em " 在新型冠状病毒肺炎诊断过程中，需要进一步解决的问题： /p p style=" text-indent: 2em margin-top: 10px margin-bottom: 10px line-height: 1.5em " 1、有接触史尚无症状者，需要排查是否被感染； /p p style=" text-indent: 2em margin-top: 10px margin-bottom: 10px line-height: 1.5em " 2、荧光PCR的Ct值在37-40之间的可疑样本，如何判定阴性还是阳性； /p p style=" text-indent: 2em margin-top: 10px margin-bottom: 10px line-height: 1.5em " 3、患者治疗过程中监测病毒载量的变化，用于指导治疗； /p p style=" text-indent: 2em margin-top: 10px margin-bottom: 10px line-height: 1.5em " 4、病人体内病毒转阴的复核，用于指导出院。 /p p style=" text-indent: 2em margin-top: 10px margin-bottom: 10px line-height: 1.5em " 同时，对于荧光PCR检测试剂盒开发来说，提供准确定量的参考品可以为试剂盒质量保驾护航。 /p p style=" text-indent: 2em margin-top: 10px margin-bottom: 10px line-height: 1.5em " 数字PCR的潜在作用 /p p style=" text-indent: 2em margin-top: 10px margin-bottom: 10px line-height: 1.5em " 1、用于有接触史尚无症状者排查：基于数字PCR的高灵敏度，检测病毒携带状况； /p p style=" text-indent: 2em margin-top: 10px margin-bottom: 10px line-height: 1.5em " 2、用于新型冠状病毒疑似患者诊断复核：基于数字PCR的高灵敏度和高准确性，可用于荧光PCR的Ct值在37-40之间的可疑样本判定。 /p p style=" text-indent: 2em margin-top: 10px margin-bottom: 10px line-height: 1.5em " 3、用于新型冠状病毒感染患者病毒载量动态观察：基于数字PCR的绝对定量能力，可为临床医生提供更为准确的病原体载量信息，协助判断病情并及时调整治疗策略。 /p p style=" text-indent: 2em margin-top: 10px margin-bottom: 10px line-height: 1.5em " 4、可用于治疗后患者体内病毒转阴的复核，用于指导出院。 /p p style=" text-indent: 2em margin-top: 10px margin-bottom: 10px line-height: 1.5em " 5、标准参考物质的制备：数字PCR是制备标准参考物质定量的重要方法，为荧光PCR试剂盒提供可靠的标准物质。 /p p style=" text-indent: 2em margin-top: 10px margin-bottom: 10px line-height: 1.5em " 新羿生物数字PCR试剂盒设计 /p p style=" text-indent: 2em margin-top: 10px margin-bottom: 10px line-height: 1.5em " 新羿生物在国家CDC的指导下与清华大学生物医学工程系等单位协力合作，针对公布的新型冠状病毒序列，正在开发数字PCR法2019-nCoV核酸检测试剂盒，该试剂盒采用创新的RNA一步法逆转录数字PCR技术，可对样本中的2019-nCoV进行高灵敏与准确定量检测。参考国家CDC和WHO的指南，针对2019-nCoV的多个区域进行检测，增加检测的特异性并减少漏检错检。试剂盒内设有内参基因，可对采样、提取和PCR扩增等步骤进行质控，确保检测过程的精准可靠。 /p p style=" text-indent: 2em margin-top: 10px margin-bottom: 10px line-height: 1.5em " 新羿生物TD-1数字PCR平台特点 /p p style=" text-indent: 2em margin-top: 10px margin-bottom: 10px line-height: 1.5em " 1、合规性：TD-1系统已取得国家医疗器械上市许可； /p p style=" text-indent: 2em margin-top: 10px margin-bottom: 10px line-height: 1.5em " 2、通量高：一次PCR可以完成96样本； /p p style=" text-indent: 2em margin-top: 10px margin-bottom: 10px line-height: 1.5em " 3、方便性：液滴直接于8联排管中生成，生成之后无须手工移液；PCR扩增完成后，直接放入生物芯片分析仪中，即可进行信号读取与分析； /p p style=" text-indent: 2em margin-top: 10px margin-bottom: 10px line-height: 1.5em " 4、安全性：液滴扩增与检测流程无开盖操作，且检测后液滴储存于芯片内置废液槽中，不流经仪器内部，完全避免气溶胶污染导致的假阳性结果，符合临床对检测安全性的要求。 /p p style=" text-indent: 2em margin-top: 10px margin-bottom: 10px line-height: 1.5em " 新型冠状病毒简介 /p p style=" text-indent: 2em margin-top: 10px margin-bottom: 10px line-height: 1.5em " 2019新型冠状病毒，即“2019-nCoV”，因2019年武汉病毒性肺炎病例而被发现，2020年1月12日被世界卫生组织命名，其中2019代表最早出现的年份，n代表Novel(新的)，Cov代表Coronavirus(冠状病毒)。新型冠状病毒是以前从未在人体中发现的冠状病毒新毒株。冠状病毒是一个大型病毒家族，部分冠状病毒以鼻塞、流涕、打喷嚏等“普通感冒”症状为主，但是SARS-CoV、MERS-CoV和2019-nCoV三种冠状病毒具有较高的致病性。 /p p style=" text-indent: 2em margin-top: 10px margin-bottom: 10px line-height: 1.5em " 数字PCR /p p style=" text-indent: 2em margin-top: 10px margin-bottom: 10px line-height: 1.5em " 数字PCR技术是第三代PCR技术，是一种新的核酸检测与定量方法，其将模板分子稀释并平均分配到数万个独立反应腔室后进行PCR扩增，通过PCR终点信号的“有或无”来实现检测与绝对定量。 /p p style=" text-indent: 2em margin-top: 10px margin-bottom: 10px line-height: 1.5em " 具有如下特性： /p p style=" text-indent: 2em margin-top: 10px margin-bottom: 10px line-height: 1.5em " 1、高灵敏度，可实现单分子级检测； /p p style=" text-indent: 2em margin-top: 10px margin-bottom: 10px line-height: 1.5em " 2、定量准确，不依赖标准物质与标准曲线； /p p style=" text-indent: 2em margin-top: 10px margin-bottom: 10px line-height: 1.5em " 3、高稳定性，善于在复杂背景模板的干扰下对罕见的靶标进行检测，且对扩增抑制剂的耐受性好。 /p p style=" text-indent: 2em margin-top: 10px margin-bottom: 10px line-height: 1.5em " 数字PCR的特性还体现在：数字PCR的检测与定量过程受扩增效率的影响较小，因此对于新型病毒在靶标位置可能出现的变异有一定耐受性，可确保检出的稳定性与定量的精准性。同时，通过数字PCR检测图像的变化，提示引物探针靶标区域可能出现的变异并保留样本，会有助于后续的病毒变异研究。 /p