果糖检测

安谱实验提供爱尔兰Megazyme公司生产的乳果糖试剂盒，该试剂盒采用ISO方法 11285:2004，其原理与NY/T 939-2016“巴氏杀菌乳和UHT灭菌乳中复原乳的鉴定”标准中乳果糖测定方法原理一致，安谱实验利用快速检测试剂盒方法对乳果糖的检测提供全套解决方案，通过乳果糖含量的测定对您所购买的乳制品是否含复原乳一探究竟！！[align=center][img=,520,300]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/03/201903061051567615_9949_960_3.jpg!w520x300.jpg[/img][/align][align=center][b][/b][/align][align=center][b]产品优势[/b][/align][b]配套产品，一键采购试剂盒，解决繁琐采购[/b][list][*]搭配乳果糖和D- 果糖分析物标准物质；[*]试剂盒满足50次检测，避免拼凑购买造成的浪费；[*]提供试剂盒内试剂的单独购买；[/list][b]方便、快捷、省时[/b][list][*]直接提供预配置的测试液，避免繁琐的配制；[*]试剂盒方法原理同NY/T 939-2016；[*]和NY/T 939-2016方法相比，试剂盒方法节省3h，完成反应仅需2h；[*]Megazyme Mega-CalcTM一键数据处理，准确、方便；[/list][b]安谱实验提供人性化选购、咨询、售后等客户体验服务[/b][list][*]吸光度不稳定、平行性不好、数据准确度不高、实验细节把握不好，通通不是问题，安谱实验资深技术人员手把手指导和解答。[/list][align=center][b]实验过程[/b][/align][b]1.样品前处理[/b] 取某品牌市售纯牛奶（记为原奶），并将其分别稀释2倍，5倍，10倍（记为原奶*2，原奶*5，原奶*10）待取用；分别取原奶、原奶*2，原奶*5，原奶*10、和100 ppm标准品各0.5 mL于1.5 mL离心管中，加入0.2 mL磷酸钠缓冲液、0.7 mL去离子水、0.05 mL硫酸锌溶液、0.05 mL亚铁氰化钾溶液，混合均匀，在13000转速下离心10 min，沉淀牛奶中的蛋白质和脂肪，吸取上清液进行实验。注意事项：离心后溶液应该为澄清的溶液，否则建议稀释样品或者再分别加入0.05 mL沉淀试剂：硫酸锌溶液和亚铁氰化钾溶液（为避免误差，加入沉淀剂的情况也请考虑沉淀剂对样品的稀释影响）； 样品沉淀以后应该为澄清的溶液，取上清液时注意不要将沉淀吸入。检测样品包括：[img=,900,135]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/03/201903061054143733_9398_960_3.png!w900x135.jpg[/img][b]2.酶解实验[/b]分别吸取0.5 mL的上清液于1.5 mL的离心管中（其中编号A-J为样品，加入β-半乳糖苷酶进行酶解；A空白-J空白为空白样，不加β-半乳糖苷酶；空白样的目的是扣除空白）。每个样品分别按照以下步骤进行实验：[img=,739,579]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/03/201903061057103839_3169_960_3.png!w739x579.jpg[/img][b]3.酶测试反应[/b][img=,746,574]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/03/201903061059015750_6717_960_3.png!w746x574.jpg[/img][b]4.数据分析[/b]将测试的数据代入乳果糖试剂盒的Megazyme Mega-CalcTM进行计算（在Megazyme官网下载），得出检测数据：[img=,900,376]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/03/201903061059373796_8526_960_3.png!w900x376.jpg[/img][align=center][b]产品信息[/b][/align][align=center][b][img=,692,914]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/03/201903061059575411_5695_960_3.png!w692x914.jpg[/img][/b][/align]

《GB/T 18932.22-2003》采用液相色谱示差折光检测法对蜂蜜中的果糖、葡萄糖、蔗糖含量进行检测，但是由于示差折光检测器受环境温度的影响很大，检测结果的再现性不稳定，因此笔者采用液相色谱-蒸发光散射检测器进行检测，并对方法进行验证，以证明该方法的可行性。[color=#333333]1、ELSD原理[/color][color=#333333][color=#333333]ELSD，蒸发光散射检测器[color=#333333]（EvaporativeLight-scatteringDetector），是通用型检测器，可以理解为低灵敏度的质谱。它的工作原理是：样液进入检测器后，首先被高压气流雾化，雾化形成的小液滴进入蒸发室(漂移管，drifttube)，流动相及低沸点的组分被蒸发，剩下高沸点组分的小液滴进入散射池，光束穿过散射池时被散射，散射光被光电管接收形成电信号，电信号通过放大电路、模数转换电路、计算机成为色谱工作站的数字信号——色谱图。[/color][/color][/color][color=#333333][color=#333333][color=#333333]2、检测方法[/color][/color][/color][color=#333333][color=#333333][color=#333333]2.1 样品制备[/color][/color][/color][color=#333333][color=#333333][color=#333333] 对无结晶的样品，将其搅拌均匀，对有结晶的样品，在密闭情况下，置于不超过60℃的水浴中温热，振荡，待样品全部溶化后搅匀，冷却至室温，分出0.5kg作为试样，制备好的试样置于样品瓶中，密闭，并做上标记，常温下保存。[/color][/color][/color][color=#333333][color=#333333][color=#333333]2.2 样品处理[/color][/color][/color][color=#333333][color=#333333][color=#333333] 称取1g试样，精确至0.01g，置于50ml离心管中，加入30ml水，使试样完全溶解，等分为100份，取一份置于10ml比色管中，用水定容至刻度，过0.45μm滤膜，供液相色谱检测。[/color][/color][/color][color=#333333][color=#333333][color=#333333]2.3 仪器条件[/color][/color][/color][color=#333333][color=#333333][color=#333333]a) 色谱柱：Agilent Hi-Plex Ca 300*7.7mm；b）流动相:水；c）流速:0.6ml/min；d）柱温：80℃；e）ELSD参数 Nebulizer Temperature：90℃ Evaporator Temperature：50℃ Gas Flow:1.6 SLM。f）进样量：50ul。[/color][/color][/color][color=#333333][color=#333333][color=#333333]2.4 标准曲线绘制[/color][/color][/color][color=#333333][color=#333333][color=#333333]用配置的果糖、葡萄糖、蔗糖标准工作液（表1）绘制标准工作曲线，保证样品中果糖、葡萄糖、蔗糖的含量均在线性范围内。[/color][/color][/color][color=#333333]表1[/color][color=#333333][color=#333333][color=#333333][/color][/color][/color][table][tr][td][align=center]名称[/align][/td][td][align=center]浓度/(mg/l)[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]果糖[/align][/td][td][align=center]20,50,100,200,500[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]葡萄糖[/align][/td][td][align=center]20,50,100,200,500[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]蔗糖[/align][/td][td][align=center]20,40,50,100,200[/align][/td][/tr][/table]3、检验方法中各参数的评价[color=#333333][color=#333333][color=#333333]3.1 检出限和定量限以信噪比为10:1时对应的浓度确定为方法检出限。以信噪比为3:1时对应的浓度确定为仪器检出限。果糖、葡萄糖、蔗糖的方法检出限和仪器检出限见表2。[/color][/color][/color][color=#333333]表2果糖、葡萄糖、蔗糖的方法检出限和仪器检出限[/color][color=#333333][color=#333333][color=#333333][/color][/color][/color][table][tr][td][align=center][/align][/td][td][align=center]项目[/align][/td][td][align=center]仪器检出限[/align][align=center]/(mg/kg)[/align][/td][td][align=center]方法检出限[/align][align=center]/(mg/kg)[/align][/td][td][align=center]GB/T 18932.22中方法检出限/(mg/kg)[/align][/td][/tr][tr][td][align=center][/align][/td][td][align=center]果糖[/align][/td][td][align=center]10[/align][/td][td][align=center]20[/align][/td][td][align=center]5000[/align][/td][/tr][tr][td][/td][td][align=center]蔗糖[/align][/td][td][align=center]5[/align][/td][td][align=center]10[/align][/td][td][align=center]2000[/align][/td][/tr][tr][td][align=center][/align][/td][td][align=center]葡萄糖[/align][/td][td][align=center]10[/align][/td][td][align=center]15[/align][/td][td][align=center]5000[/align][/td][/tr][/table][img=,690,369]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/08/201708172202_01_2371564_3.png[/img][color=#333333]果糖、葡萄糖、蔗糖标准物质色谱图，果糖浓度为100㎎/kg，葡萄糖浓度为100㎎/kg，蔗糖浓度为40㎎/kg。[/color][color=#333333][color=#333333][color=#333333][/color][/color][/color]3.2标准曲线绘制标准曲线如下图所示，ELSD检测器的标准曲线类型为幂，而不是线性。[img=,690,876]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/08/201708172205_01_2371564_3.png[/img]3.3样品测定结果样品测定结果见表3。表3 样品中果糖、蔗糖、葡萄糖含量测定结果。[table][tr][td]测定次数[/td][td]果糖/(mg/L)[/td][td]蔗糖/(mg/L)[/td][td]葡萄糖/(mg/L)[/td][/tr][tr][td][align=center]1[/align][/td][td][align=center]378.0[/align][/td][td][align=center]37.4[/align][/td][td][align=center]303.2[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]2[/align][/td][td][align=center]377.0[/align][/td][td][align=center]37.7[/align][/td][td][align=center]312.2[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]平均[/align][/td][td][align=center]377.5[/align][/td][td][align=center]38.0[/align][/td][td][align=center]308.3[/align][/td][/tr][/table]3.4回收率试验及精密度测定结果回收率试验及精密度测定在方法检出限、两倍方法检出限和十倍方法检出限进行三水平试验，每个水平平行测定6次，回收率参考范围见GB/T 27404-2008结果见表4。实验室内的变异系数参考范围见GB/T 27404-2008。表4 回收率试验及精密度试验结果[table][tr][td][align=center]检测项目[/align][/td][td][align=center]添加水平[/align][/td][td][align=center]回收率范围%[/align][/td][td][align=center]GB/T 27404参考回收率范围%[/align][/td][td][align=center]变异系数RSD%[/align][/td][td][align=center]GB/T 27404参考RSD%[/align][/td][/tr][tr][td=1,3][align=center]果[/align][align=center]糖[/align][/td][td][align=center]1[/align][/td][td][align=center]78.7-88.8[/align][/td][td][align=center]95-105[/align][/td][td][align=center]4.9[/align][/td][td][align=center]3.8-5.3[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]2[/align][/td][td][align=center]93.3-106.8[/align][/td][td][align=center]95-105[/align][/td][td][align=center]5.1[/align][/td][td][align=center]3.8-5.3[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]3[/align][/td][td][align=center]75.4-84.5[/align][/td][td][align=center]95-105[/align][/td][td][align=center]4.0[/align][/td][td][align=center]3.8-5.3[/align][/td][/tr][tr][td=1,3][align=center]蔗[/align][align=center]糖[/align][/td][td][align=center]1[/align][/td][td][align=center]93.0-103.9[/align][/td][td][align=center]90-110[/align][/td][td][align=center]4.5[/align][/td][td][align=center]5.3-7.5[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]2[/align][/td][td][align=center]106.6-114.8[/align][/td][td][align=center]90-110[/align][/td][td][align=center]2.6[/align][/td][td][align=center]5.3-7.5[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]3[/align][/td][td][align=center]109.3-116.4[/align][/td][td][align=center]95-105[/align][/td][td][align=center]2.2[/align][/td][td][align=center]3.8-5.3[/align][/td][/tr][tr][td=1,3][align=center]葡[/align][align=center]萄[/align][align=center]糖[/align][/td][td][align=center]1[/align][/td][td][align=center]72.5-82.2[/align][/td][td][align=center]95-105[/align][/td][td][align=center]4.2[/align][/td][td][align=center]3.8-5.3[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]2[/align][/td][td][align=center]103.4-110.4[/align][/td][td][align=center]95-105[/align][/td][td][align=center]2.6[/align][/td][td][align=center]3.8-5.3[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]3[/align][/td][td][align=center]83.8-93.2[/align][/td][td][align=center]95-105[/align][/td][td][align=center]3.6[/align][/td][td][align=center]3.8-5.3[/align][/td][/tr][/table] 4、总结 经证实，使用ELSD检测器能够快速准确的检测蜂蜜中的果糖、葡萄糖、蔗糖，与示差折光检测器相比，受环境温度影响小，灵敏度高，分析速度快，重现性好。

周一刚出差回来就有任务，这可是件好事情。又有的东西可写了。刚好有新型号产品推出，检测完毕后，实验室的友琴姐为用户检测罗汉果糖粉中的砷元素，分享给大家。欢迎交流讨论。厂家实验室的好处就是，总可以拿新款仪器试试手，比用户更早使用。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/12/201412021413_525538_2661131_3.jpg需要调教的就是这款仪器了，SK-乐析。今天用它检测的是罗汉果糖粉中的砷，具体操作详见下文。一、所需设备，试剂及试剂相应的配制方法1：所需设备北京金索坤SK-乐析原子荧光光谱仪，砷空心阴极灯，电热板2：所需试剂硝酸（优级纯），高氯酸（优级纯），盐酸（优级纯），抗坏血酸（优级纯），硫脲（分析纯），氢氧化钾（优级纯），硼氢化钾（优级纯），砷标准溶液，去离子水。3：试剂配制方法酸空白介质：5%盐酸-1%抗坏血酸-1%硫脲。1000mL酸空白配制方法：取去离子水950mL，加入50mL盐酸，10g抗坏血酸，10g硫脲，搅拌至完全溶解。还原剂的配制：0.5%的氢氧化钾-2%的硼氢化钾。取500mL的去离子水，加入2.5g氢氧化钾，10g硼氢化钾后搅拌均匀。二、样品制备准确称取0.2000g样品放入100mL烧杯中，加入15mL混酸（硝酸：高氯酸=8:2），盖上表面皿，放在电热板上加热消解。待红颜冒尽之后可以取下表面皿，待烧杯内白烟冒尽溶液蒸至尽干之后，取下，稍微冷却。向烧杯中准确加入25mL酸空白，待测。同时做样品空白，平行操作。三、标准曲线的配制吸取1ug/mL砷标准储备溶液0.00mL、0.10mL、0.30mL、0.50mL、0.70mL、1.00mL于六个100mL容量瓶中，用酸空白介质定容到刻度，摇匀。此标准系列的浓度分别为0.00ng/mL、1.00ng/mL、3.00ng/mL、5.00ng/mL、7.00ng/mL、10.00ng/mL。四、测试1：测试参数负高压：-260v灯电流：80mA采样延时：8S辅气：600载气:8002：测试步骤打开氩气，打开仪器主机与软件，预热30分钟后测试并建立标准曲线，然后测试稀释后的样品空白以及样品，结果计算（也可以在软件中设置样品信息由软件自动计算得出结果）五、打印报告六、附件（包括标准曲线、测试结果）http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/12/201412021415_525539_2661131_3.jpghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/12/201412021415_525540_2661131_3.jpghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/12/201412021415_525541_2661131_3.jpg欢迎给位多交流，多探讨。AFS版块太冷清了！

GB 5009.8-2016 食品安全国家标准 食品中果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、乳糖的测定 ——第一法 示差折光检测器　　本实验依据2017年6月23日起实施的《GB5009.8-2016 食品安全国家标准 食品中果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、乳糖的测定》的第一法——示差折光检测器法，对果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖和乳糖标准品进行分析，并对标准曲线进行考察。　　使用资生堂CAPCELL PAK NH2 UG80 S5; 4.6mm i.d ×250mm色谱柱，通过对标准方法进行微调（将乙腈比例提高至85%，柱温提高至45°C），可实现五种单糖和二糖的良好分离（见图1）。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/04/201704171413_01_2222981_3.pnghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/04/201704171413_02_2222981_3.pnghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/04/201704171413_03_2222981_3.png　　进一步，依据标准，配制2mg/mL, 4mg/mL, 6mg/mL, 10mg/mL系列标准工作液，以峰面积为纵坐标，标准工作液浓度为横坐标，绘制标准曲线。由图2~6所示，果糖、葡萄糖、蔗糖、乳糖和麦芽糖在2mg/mL~10mg/mL浓度范围内线性良好，R2均在0.999以上。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/04/201704171413_04_2222981_3.pnghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/04/201704171413_05_2222981_3.pnghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/04/201704171413_06_2222981_3.png注： 图中色谱峰线条不平滑是由于图像在复制过程中解像度问题引起的。

GB 5009.8-2016 食品安全国家标准 食品中果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、乳糖的测定 ——第一法 NQAD检测器数据　　GB 5009.8-2016第一法中推荐使用蒸发光散射检测器对五种单糖和二糖进行检测。本实验室使用资生堂新型高灵敏度气溶胶型NQAD检测器进行检测。　　（关于NQAD检测器的介绍，详见http://bbs.instrument.com.cn/topic/6377766）　　使用资生堂 CAPCELL PAK NH2 UG80 S5; 4.6mm i.d ×250mm色谱柱，通过将乙腈比例提高至85%，柱温提高至45°C，最终可以实现五种单糖和二糖的良好分离（见图1）。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/04/201704171434_01_2222981_3.pnghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/04/201704171434_02_2222981_3.pnghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/04/201704171434_03_2222981_3.png　　进一步对标准曲线进行绘制，国家标准中使用2mg/mL, 4mg/mL, 6mg/mL, 10mg/mL系列糖标准工作液进行标准曲线的制作，因NQAD检测器灵敏度较高，对于响应较强的果糖、葡萄糖和蔗糖易发生过载，故将原标准工作液均稀释十倍。以峰面积为纵坐标，标准工作液浓度为横坐标，用0.2mg/mL,0. 4mg/mL, 0.6mg/mL, 1.0mg/mL系列工作液进行标准曲线绘制。由图2~6所示， 果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖和乳糖在0.2mg/mL~1.0mg/mL浓度范围内线性良好，相关系数R2均在0.99以上。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/04/201704171434_04_2222981_3.pnghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/04/201704171434_05_2222981_3.pnghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/04/201704171434_06_2222981_3.png注： 图中色谱峰线条不平滑是由于图像在复制过程中解像度问题引起的。

GB 5009.255 测定低聚果糖，标准曲线各点保留时间和样品1保留时间一直是下降的趋势，样品2和3保留时间又恢复到标曲第一针的时间。请教是什么原因可能造成这种情况发生？（1、每针压力变化不大 2、柱温箱一直开着 3、用的是万通930[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/3p][color=#3333ff]离子色谱仪[/color][/url]安培检测器 4、几次做样都是同样的规律）[img=,690,920]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2023/12/202312190959204225_9730_2021640_3.jpg!w690x920.jpg[/img]