Ä KTA&trade pure层析系统Ä KTATM pure 是一个灵活、直观的层析系统 ( 图 1 ),用于从微克到数十克级的蛋白质、多肽和核酸等目标产物的快速纯化。Ä KTATM pure 是一个可靠的系统,它的硬件和 UNICORNTM 软件旨在与层析柱和层析填料配合使用,以应对纯化挑战。Ä KTATM pure 有两种版本:Ä KTATM pure 25,专为多用户环境中的广泛研究应用和纯化任务而设计 Ä KTATM pure 150,则非常适合在常规大规模制备纯化中优化资源利用率和提高生产率。该系统支持多种层析技术,并满足提供高纯度所需的自动化要求。该系统可以自由配置和随时升级,并根据您的纯化需求提供多种选项, 以进一步提高其性能。Ä KTATM pure 是 50 多年蛋白质研究专业知识和 30 年 Ä KTATM 纯化系统开发经验的结晶。Ä KTATM pure 提供以下优势: 模块化系统设计,有多种选择,可灵活应用在蛋白质和多肽等生物分子的纯化中 使用 UNICORNTM 软件可进行直观灵活的方法创建、系统控制和结果分析 尺寸实用,便于放置在实验室工作台上或冷柜中 延续了 Ä KTATM 系统屡经验证的成熟设计,保证蛋白纯化过程值得信赖 适用于所有 CytivaTM 实验室规模层析柱的预定义方法设置图 1. Ä KTATM pure 是一个灵活的层析系统,可在实验室规模上可靠地纯化蛋白质、多肽和核酸系统总览Ä KTATM pure 是一款多用途型的模块化层析系统,具有多种设计优点,便于进行可靠的纯化。该系统由 Ä KTATM pure 主机和 UNICORNTM 软件组成。该系统采用模块化设计,所有的阀门、监测器和层析柱均安装在系统的前向湿侧。该设计方便操作者与仪器模块轻松交互 ( 图 2 )。各种可选模块中的阀门、监测器和传感器等附加组件可轻松添加到可用位置。仪器的前部和侧面有多个用于连接层析柱支架和设备的导轨。仪器顶部的缓冲托盘为容器和瓶子提供了较大的存储区域。仪器控制面板实时显示系统状态,允许通过触摸按钮在实验运行时进行交互 ( 暂停/继续 )。图 2. Ä KTATM pure 的两个系统配置示例显示了前面板上模块的位置以及每个模块的流路。 (A) 方便基本蛋白质纯化的系统配置 (B) 为高度自动化蛋白质纯化的系统配置该系统在基本配置下仅重 48 千克，配齐全部可选组件时重 53 千 克。相对较轻的重量使其更容易放置在实验室中。较小的系统尺 寸使其可方便地安装在标准冷柜中，方便纯化不稳定的样品。无论配置如何，Ä KTA&trade pure 始终标配两个高性能系统泵、用于 层析柱保护的系统压力监测器、混合器、进样阀和紫外监测 器。Ä KTA&trade pure 有多种可选模块，可提供多种可能性。系统流路 的设计旨在最大限度地减少带宽效应，流路中使用的所有润湿材 料具有生物相容性，可以耐受常用溶剂。仪器前部设计有预留模 块位置，可安装选配的阀门和监测器，以实现灵活的流路配置。 两种 Ä KTA&trade pure 系统配置的示例如图 2 所示。UNICORN&trade 软件允许快速简单地开始创建方法、控制运行和分析 结果。UNICORN&trade 软件无需掌握任何编程技能，因为层析方法的 创建是通过简单的拖放操作完成的。此外，该软件采用模块化设 计，允许为方法开发增加诸如层析柱日志和实验设计 (DoE) 等功 能。远程访问系统、创建方法或分析结果的许可证选项提供了更 大的便利。如果需要，可以将系统设置为在方法结束后进入“节能 模式”，这样可以将功耗降低 80% 左右。Ä KTA&trade pure 系统组件和可选组件将在以下章节中详细介绍。Ä KTA&trade pure 标准组件系统泵 这两个系统泵基于专为新一代 Ä KTA&trade 层析系统开发的先进技术打 造。坚固的结构可在低反压和高反压下可提供可重现的流速，从 而缩短分离时间。每个泵由一对泵头组成，向混合器输送低脉冲液流。所 产生的连续且精确的液流能够实现可重现的等度或梯度 洗脱。对于 Ä KTA&trade pure 25 和 Ä KTA&trade pure micro，系统泵 在 200 bar (2900 psi，20 MPa) 的最大工作压力下提供最 高可达 25 mL/min 的流速范围。对于 Ä KTA&trade pure 150， 在 50 bar (725 psi，5 MPa) 的最大工作压力下，流速最高可 达 150 mL/min。装柱模式下，Ä KTA&trade pure 25 和 150 可以分别 以高达 50 mL/min 和 300 mL/min 的流速运行。连接到泵上的 系统压力监测器，可连续测量系统压力，并自动调节流速，以 避免达到任何设定的压力极限。混合器 混合器能够在梯度运行期间实现均匀的缓冲液混合。混合池容积 的选择取决于流速和所用的缓冲液类型。对于较高的流速或难以 混合的缓冲液，需要较大的混合池容积。表 1 显示了每种主机可 用的混合池容积。在线滤膜安装在混合器内部。通过将混合器卡入或卡出混合器支 架，可以更换滤膜和混合池。用于任何给定运行的混合器尺寸始 终记录在结果文件中。表 1. 可用的混合池容积。 进样阀 Ä KTA&trade pure 25 和 Ä KTA&trade pure 150 的进样阀 V9-lnj 兼容多种进样方 式： &bull 用注射器将样品手动装载至样品环或者 Superloop &bull 用选配的样品泵将样品装载至样品环和 Superloop &bull 用选配的样品泵将样品直接上样至层析柱中新型的阀门设计无需更改管路连接，即可在各种进样方式之间进 行转换。Ä KTA&trade pure 系统标配了一个容积为 500 μL 的样品环。Ä KTA&trade pure micro 配备优化的微量体积进样阀 V9M-J，适用于微升级 样品的纯化，能够使用注射器将样品手动装载至样品环中。Ä KTA&trade pure micro 系统标配了容积为 10 μL 和 50 μL样品环。紫外监测 Ä KTA&trade pure 配备了固定波长紫外监测器或可变多波长紫外与可见 光监测器。固定波长 (280 nm) 紫外监测器 U9-L 采用 LED 技术，耐用、可靠， 开机即用。紫外监测器 U9-L 的设计可防止样品受热。该监测器提 供标准的 2 mm 流通池 ( 标配 ) ，当需要更高灵敏度的测量时，还 提供选配的 5 mm 流通池。对于 U9-L 监测器，灯的工作时间至少 为 10000 小时。紫外监测器 U9-M 被用于在 190 至 700 nm 的紫外与可见光中 进行多波长检测。紫外监测器 U9-M 可同时监测多达三种波 长 ( 图 3 和 6 )。为了在纯化不同蛋白质浓度的样品时优化性能， 有三种流通池光径长度可供选择：0.5、2 ( 标配 ) 和 10 mm。Ä KTA&trade pure micro 安装了 U9-M 紫外监测器并且标配了内部体积更小的 2 mm 光径流通池。流通池设计，加上光纤技术，提供了高信噪 比，不会引起紫外流通池的任何局部加热。该监测器包含一个高 光强氙灯，工作时间至少为 5000 小时，开机即用。每次打开仪 器，监测器都会自动校准。所有 U9-M 紫外流通池在出厂时都经 过校准。紫外信号被自动标准化，从而可以比较不同系统的紫外 数据。多波长监测可用于检测污染物，特别是标记的蛋白质，或在 280 nm 下没有吸收值的目标分子。图 3 显示了用多种波长进行监测的可能 性。在 214、280 和 340 nm 波长下监测分子量标准。在 214 nm 处的 检测揭示了所有蛋白质的肽键，并且如果目标蛋白质在 280 nm 处的 浓度和消光系数低，该检测会很有用。铁蛋白是一种多聚铁储存蛋 白，由于分子中心有大量的铁离子，因此在 340 nm 处显示出比其他 蛋白更高的吸光度图 3. 使用带紫外监测器 U9-M 的 Ä KTA&trade pure 进行蛋白质多波长 (214、280 和 340 nm) 检测的尺寸排阻层析 (SEC，也称为凝胶过滤 GF)。所用的层析柱为 Superdex&trade 200 10/300 GL。层析图谱上观察到的峰值是 (1) 铁蛋白 (Mr 440 000) ，(2) 醛缩酶 (Mr 158 000)，(3) 伴清蛋白 (Mr 75 000)，(4) 卵清蛋白 (Mr 44 000)，(5) 碳酸酐酶 (Mr 29 000)，(6) 核糖核酸酶 A (Mr 13 700) 和 (7) 抑肽酶 (Mr 6500)紫外监测器 U9-L 和紫外监测器 U9-M 都可以与第二个紫外监测器 U9-L 组合使用，以提供更广的应用范围，例如多步骤层析，或者 同时使用不同大小的流通池来监测具有不同蛋白质浓度的样品。电导率监测 电导率监测器测量缓冲液和样品的电导率，以便在线监测真实梯 度。集成的温度传感器可校正由温度引起的电导率变化。电导率 监测器具有广泛的读值范围，因此能够在不同的层析技术中监测 电导率。参数信息
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