荧光定量原理

荧光定量原理荧光定量原理荧光定量原理

荧光定量PCR简介荧光定量PCR检测技术诞生至今已10多年的时间，而其应用一直都没广泛展开，究其原因，无外乎受制于相关仪器、试剂和技术的发展。近期，尤其是08年以来，仪器和试剂是遍地开花，这也使科研人员均跃跃欲试，都想借此技术使自己的研究能突飞猛进，发展势头通过查找每年所发表的文章数可一目了然。据有关统计，在 Medline 数据库中，用“Taqman” 或 ”real time PCR” 作为关键词检索，1996 年是19 篇，1999 年157 篇，到2003 年就高达2984 篇，2009年会是多少呢？我们不得而知。但其迅猛的发展势头却是不可更改的，本公司真诚希望能和众多研究人员共同努力，抓住这一大好时机，为科研事业的发展贡献自身的力量。基于这一目标，本公司长期以来对荧光定量PCR，无论是技术还是多年来的产品，均进行了深入地研究，并及时推出更加优异的荧光定量 PCR技术服务。荧光定量PCR原理荧光定量PCR最早称TaqMan PCR，后来也叫Real-Time PCR，是美国PE（Perkin Elmer）公司1995年研制出来的一种新的核酸定量技术。该技术是在常规PCR基础上加入荧光标记探针或相应的荧光染料来实现其定量功能的。其原理：随着PCR反应的进行，PCR反应产物不断累计，荧光信号强度也等比例增加。每经过一个循环，收集一个荧光强度信号，这样我们就可以通过荧光强度变化监测产物量的变化，从而得到一条荧光扩增曲线图。一般而言，荧光扩增曲线可以分成三个阶段：荧光背景信号阶段，荧光信号指数扩增阶段和平台期。在荧光背景信号阶段，扩增的荧光信号被荧光背景信号所掩盖，无法判断产物量的变化。而在平台期，扩增产物已不再呈指数级的增加，PCR 的终产物量与起始模板量之间没有线性关系，根据最终的 PCR 产物量也不能计算出起始 DNA 拷贝数。只有在荧光信号指数扩增阶段， PCR产物量的对数值与起始模板量之间存在线性关系，我们可以选择在这个阶段进行定量分析。为了定量和比较的方便，在实时荧光定量 PCR 技术中引入了两个非常重要的概念：荧光阈值和 CT值（如下图所示）。荧光域值（threshold）是在荧光扩增曲线上人为设定的一个值，它可以设定在荧光信号指数扩增阶段任意位置上，但一般荧光域值的缺省设置是PCR反应前3-15个循环荧光信号标准偏差的10倍，即：threshold。http://www.biomart.cn/upload/asset/2011/01/25/1295364674.jpgCt 值：是指每个反应管内的荧光信号到达设定域值时所经历的循环数。Ct值与起始模板的关系：研究表明，每个模板的Ct值与该模板的起始拷贝数的对数存在线性关系，起始拷贝数越多，Ct值越小。利用已知起始拷贝数的标准品可作出标准曲线，其中横坐标代表起始拷贝数的对数，纵坐标代表Ct值如下图所示。因此，只要获得未知样品的Ct值，即可从标准曲线上计算出该样品的起始拷贝数。http://www.biomart.cn/upload/asset/2011/01/25/1295364675.jpg荧光定量检测荧光定量检测根据所使用的标记物不同可分为荧光探针和荧光染料。荧光探针又包括Beacon技术（分子信标技术，以美国人Tagyi为代表）、 TaqMan探针（以美国ABI公司为代表）和FRET技术（以罗氏公司为代表）等；荧光染料包括饱和荧光染料和非饱和荧光染料，非饱和荧光染料的典型代表就是现在最常用的SYBR GreenⅠ；饱和荧光染料有EvaGreen、LC Green等。嵌合荧光染料法（SYBR GreenⅠ）SYBR Green I是荧光定量PCR最常用的DNA结合染料，与双链DNA非特异性结合。在游离状态下，SYBR Green I发出微弱的荧光，但一旦与双链DNA结合，其荧光增加1000倍。所以，一个反应发出的全部荧光信号与出线的双链DNA量呈比列，且会随扩增产物的增加而增加。http://www.biomart.cn/upload/asset/2011/01/25/1295364672.gifSYBR Green I荧光染料与DNA双链的结合双链DNA结合染料的优点：实验设计简单，仅需要2个引物，不需要设计探针，无需设计多个探针即可以快速检验多个基因，且能够进行熔点曲线分析，检验扩增反应的特异性，低的初始成本，通用性好，因此国内外在科研中使用比较普遍。荧光探针法（Taqman 技术）：PCR扩增时，加入一对引物的同时再加入一个特异性的荧光探针。该探针为一直线型的寡核苷酸，两端分别标记一个荧光报告基团和一个荧光淬灭基团，探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收，PCR 仪检测不到荧光信号； PCR扩增时（在延伸阶段），Taq 酶的 5' － 3' 切酶活性将探针酶切降解，使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离，从而荧光监测系统可接收到荧光信号，即每扩增一条 DNA 链，就有一个荧光分子形成，实现了荧光信号的累积与 PCR 产物形成完全同步，这也是定量的基础所在。其过程如下图所示http://www.biomart.cn/upload/asset/2011/01/25/1295364673.gif荧光定量PCR的应用分子生物学研究1、核酸定量分析。 对传染性疾病进行定量定性分析，病原微生物或病毒含量的检测 , 比如近期流行的甲型H1N1流感， 转基因动植物基因拷贝数的检测，RNAi 基因失活率的检测等。2 、基因表达差异分析。 比较经过不同处理样本之间特定基因的表达差异 ( 如药物处理、物理处理、化学处理等 ) ，特定基因在不同时相的表达差异以及cDNA芯片或差显结果的确证3 、SNP 检测。检测单核苷酸多态性对于研究个体对不同疾病的易感性或者个体对特定药物的不同反应有着重要的意义，因分子信标结构的巧妙性，一旦SNP 的序列信息是已知的，采用这种技术进行高通量的 SNP 检测将会变得简单而准确。4、 甲基化检测。甲基化同人类的许多疾病有关，特别是癌症， Laird 报道了一种称作 Methylight的技术，在扩增之前先处理 DNA ，使得未甲基化的胞嘧啶变成尿嘧啶，而甲基化的胞嘧啶不受影响，用特异性的引物和 Taqman探针来区分甲基化和非甲基化的 DNA ，这种方法不仅方便而且灵敏度更高。医学研究1、 产前诊断：人们对遗传性物质改变引起的遗传性疾病还无法治疗，到目前为止，还只能只能通过产前监测，减少病婴出生，以防止各类遗传性疾病的发生，如为减少X连锁遗传病患儿的出生，从孕妇的外周血中分离胎儿DNA，用实时荧光定量PCR检测其Y性别决定区基因是一种无创伤性的方法，易为孕妇所接受。2、 病原体检测：采用荧光定量PCR检测技术可以对淋球菌、沙眼衣原体、解脲支原体、人类乳头瘤病毒、单纯疱疹病毒、人类免疫缺陷病毒、肝炎病毒、流感病毒、结核分枝杆菌、EB病毒和巨细胞病毒等病原体进行定量测定。与传统的检测方法相比具有灵敏度高、取样少、快速简便等优点。3、 药物疗效考核：对乙型肝炎病毒 (HBV)、丙型肝炎病毒 (HCV) 定量分析显示：病毒量与某些药物的疗效关系。HCV高水平表达，干扰素治疗作用不敏感，而HCV低滴度，干扰素作用敏感；在拉米夫定治疗过程中，HBV- DNA的血清含量曾有下降，随后若再度上升或超出以前水平，则提示病毒发生变异。4、 肿瘤基因检测：尽管肿瘤发病的机理尚未清楚，但相关基因发生突变是致癌性转变的根本原因已被广泛接受。癌基因的表达增加和突变，在许多肿瘤早期就可以出现。实时荧光定量 PCR不但能有效地检测到基因的突变，而且可以准确检测癌基因的表达量。目前用此方法进行过端粒酶hTERT基因、慢性粒细胞性白血病WT1基因、肿瘤 ER基因、前列腺癌PSM基因、肿瘤相关的病毒基因等多种基因的表达检测。

[font=宋体][font=Calibri]qRT-[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url][/font][font=宋体]常常被用来对[/font][font=Calibri]RNA-seq[/font][font=宋体]或芯片测序得到的有意义的基因表达情况进行准确的定量分析，本文主要从[/font][font=Calibri]qRT-[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url][/font][font=宋体]的原理、定量方法等方面进行讲解。[/font][/font][font=宋体] [/font][table][tr][td][align=center][b][font=微软雅黑]区别[/font][/b][/align][/td][td][align=center][b][font=微软雅黑][font=微软雅黑]荧光定量[/font][font=微软雅黑][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url][/font][/font][/b][/align][/td][td][align=center][b][font=微软雅黑][font=微软雅黑]常规[/font][font=微软雅黑][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url][/font][/font][/b][/align][/td][/tr][tr][td][align=center][b][font=微软雅黑]检测时间[/font][/b][/align][/td][td][align=center][font=微软雅黑][font=微软雅黑]实时[/font][font=微软雅黑]+终点[/font][/font][/align][/td][td][align=center][font=微软雅黑]终点[/font][/align][/td][/tr][tr][td][align=center][b][font=微软雅黑]检测信号[/font][/b][/align][/td][td][align=center][font=微软雅黑]荧光染料或者探针[/font][/align][/td][td][align=center][font=微软雅黑]核酸染料[/font][/align][/td][/tr][tr][td][align=center][b][font=微软雅黑]准确度[/font][/b][/align][/td][td][align=center][font=微软雅黑]定量[/font][/align][/td][td][align=center][font=微软雅黑]半定量[/font][/align][/td][/tr][tr][td][align=center][b][font=微软雅黑]是否能检测终点产物[/font][/b][/align][/td][td][align=center][font=微软雅黑]能[/font][/align][/td][td][align=center][font=微软雅黑]能[/font][/align][/td][/tr][tr][td][align=center][b][font=微软雅黑]是否能计算起始浓度[/font][/b][/align][/td][td][align=center][font=微软雅黑]能[/font][/align][/td][td][align=center][font=微软雅黑]否[/font][/align][/td][/tr][tr][td][align=center][b][font=微软雅黑]仪器要求[/font][/b][/align][/td][td][align=center][font=微软雅黑][font=微软雅黑]荧光定量[/font][font=微软雅黑][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]仪[/font][/font][/align][/td][td][align=center][font=微软雅黑][font=微软雅黑]常规[/font][font=微软雅黑][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]仪[/font][/font][/align][/td][/tr][/table][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=宋体]一、[/font][font=Calibri]qRT-[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url][/font][font=宋体]定量原理[/font][/font][/b][font=宋体][font=Calibri]qRT-[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url][/font][font=宋体]，即实时荧光定量[/font][font=Calibri][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url][/font][font=宋体]，就是通过对[/font][font=Calibri][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url][/font][font=宋体]扩增反应每一个循环产物荧光信号的实时检测从而实现对起始模板的定量分析。因为在[/font][font=Calibri][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url][/font][font=宋体]扩增的指数时期，模板的[/font][font=Calibri]Ct [/font][font=宋体]值和该模板的起始拷贝数存在线性关系，所以可以定量。（[/font][font=Calibri]Ct [/font][font=宋体]值：每个反应管内的荧光信号达到设定的域值时所经历的循环数 [/font][font=Calibri](cycle)[/font][font=宋体]，[/font][font=Calibri]Ct [/font][font=宋体]值越小，反应扩增到达平台期所需循环数越少，目的基因起始含量越高）。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]q[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url][/font][font=宋体]的荧光标记方法分为以[/font][font=Calibri]SYBR Green I[/font][font=宋体]染料法为主的荧光染料嵌合法，以[/font][font=Calibri]Taqman[/font][font=宋体]探针法为主的荧光探针法（[/font][font=Calibri]Cycling Probe[/font][font=宋体]，[/font][font=Calibri]Molecular Bracon[/font][font=宋体]等），淬灭染料引物法。[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=宋体]①[/font][font=Calibri]SYBR Green I[/font][font=宋体]染料法[/font][/font][/b][font=宋体][font=Calibri]SYBR Green I [/font][font=宋体]是高灵敏度的非特异性双链[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]荧光染料，具有绿色激发波长。它以非特异性方式结合在[/font][font=Calibri]dsDNA[/font][font=宋体]双螺旋小沟区域。游离的[/font][font=Calibri]SYBR Green I [/font][font=宋体]只发出微弱的荧光信号，[/font][font=Calibri][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url][/font][font=宋体]过程中，当扩增生成[/font][font=Calibri]dsDNA[/font][font=宋体]时，[/font][font=Calibri]SYBR Green I [/font][font=宋体]逐渐与[/font][font=Calibri]dsDNA[/font][font=宋体]结合，荧光信号被千倍放大，荧光信号的强度与扩增得到的[/font][font=Calibri]dsDNA[/font][font=宋体]的浓度成正比。荧光信号被仪器检测并采集得到“扩增曲线”，通过荧光信号的强度反映出体系中[/font][font=Calibri]dsDNA[/font][font=宋体]的浓度。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]但[/font][font=Calibri]SYBR Green I [/font][font=宋体]与特异性扩增产物结合时还可以同引物二聚体、非特异性扩增的[/font][font=Calibri]dsDNA[/font][font=宋体]结合，影响结果判断。所以扩增反应结束后，还必须对生成的[/font][font=Calibri]dsDNA[/font][font=宋体]进行分析：即通过升温，[/font][font=Calibri]dsDNA[/font][font=宋体]双链解开，[/font][font=Calibri]SYBR Green I [/font][font=宋体]染料脱落，荧光值逐渐下降，形成温度和荧光强度的曲线即“熔解曲线（[/font][font=Calibri]Melting curve[/font][font=宋体]）”，由此判断体系中是否存在引物二聚体、非特异性扩增。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]SYBR Green I [/font][font=宋体]染料法操作简单、灵敏度高、成本较低，被广泛地应用于[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]及[/font][font=Calibri]RNA[/font][font=宋体]定量、 基因表达量的研究、转基因重组动植物的研究等。[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=宋体]②[/font][font=Calibri]Taqman[/font][font=宋体]探针法[/font][/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]Taqman[/font][font=宋体]探针是由[/font][font=Calibri]5[/font][font=宋体]’端标记有荧光报告基团和[/font][font=Calibri]3[/font][font=宋体]’端标记有淬灭基团以及与目标基因特异性结合的寡核苷酸序列组成。探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收，此时仪器不会检测到荧光信号。在[/font][font=Calibri][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url][/font][font=宋体]扩增时，模板[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]变性解链，[/font][font=Calibri]Taqman[/font][font=宋体]探针特异性结合到目标基因处，而[/font][font=Calibri]Taq[/font][font=宋体]酶具有[/font][font=Calibri]5[/font][font=宋体]’[/font][font=Calibri]-3[/font][font=宋体]’核酸外切酶活性，延伸至探针结合处，可将探针水解，使荧光报告基团和淬灭基团分离，从而检测到荧光信号，荧光信号的强度与扩增得到的[/font][font=Calibri]dsDNA[/font][font=宋体]的浓度成正比。荧光信号被仪器检测并采集得到“扩增曲线”，通过荧光信号的强度反映出体系中[/font][font=Calibri]dsDNA[/font][font=宋体]的浓度。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]Taqman[/font][font=宋体]探针法因其特异性高，被广泛地应用于等位基因鉴别、[/font][font=Calibri]SNP[/font][font=宋体]分型、病原体和病毒检测、疾病耐药基因研究、多重定量等。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]详情可以关注[font=宋体]义翘神州[/font]qPCR定量分析服务：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/services/real-time-[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]-service[/font][/font][font=Calibri] [/font]

荧光定量PCR原理荧光定量PCR最早称TaqMan PCR，后来也叫Real-Time PCR，是美国PE（Perkin Elmer）公司1995年研制出来的一种新的核酸定量技术。该技术是在常规PCR基础上加入荧光标记探针或相应的荧光染料来实现其定量功能的。其原理：随着PCR反应的进行，PCR反应产物不断累计，荧光信号强度也等比例增加。每经过一个循环，收集一个荧光强度信号，这样我们就可以通过荧光强度变化监测产物量的变化，从而得到一条荧光扩增曲线图。一般而言，荧光扩增曲线可以分成三个阶段：荧光背景信号阶段，荧光信号指数扩增阶段和平台期。在荧光背景信号阶段，扩增的荧光信号被荧光背景信号所掩盖，无法判断产物量的变化。而在平台期，扩增产物已不再呈指数级的增加，PCR 的终产物量与起始模板量之间没有线性关系，根据最终的 PCR 产物量也不能计算出起始 DNA 拷贝数。只有在荧光信号指数扩增阶段， PCR产物量的对数值与起始模板量之间存在线性关系，我们可以选择在这个阶段进行定量分析。为了定量和比较的方便，在实时荧光定量 PCR 技术中引入了两个非常重要的概念：荧光阈值和 CT值（如下图所示）。

多标样回归分析定量：X射线荧光分析方法中有“多标样回归分析定量”这一说法，请问这一方法的原理。

[url=https://www.instrument.com.cn/netshow/SH116147/C541443.htm][b][color=#000000]粮食真菌毒素检测仪[/color][/b][/url][color=#000000]采用荧光定量快速检测原理，主要应用于粮油、谷物、饲料等多种领域，对多种真菌毒素进行准确检测，为确保食品安全贡献力量。[/color][color=#000000]荧光定量快速检测原理即粮食真菌毒素检测仪通过特定的荧光信号，准确、快速地识别和测量样品中的真菌毒素含量。这项技术具有高效、灵敏度高、操作简便等特点，使得检测过程更加迅速和可靠。[/color][align=center][color=#000000][img=10.jpg,450,450]https://img1.17img.cn/17img/images/202401/uepic/67aa6330-9564-4eb4-9bbb-e6f3071189ee.jpg[/img][/color][/align][b][color=#000000]核心特性及优势[/color][/b][color=#000000]全方位检测：涵盖多种真菌毒素，包括黄曲霉毒素B1、黄曲霉毒素M1、玉米赤霉烯酮等，实现全面监测。[/color][color=#000000]任意样品数量：粮食真菌毒素检测仪允许用户既可单个或少量样本随到随检，也可大量样本同时检测。[/color][color=#000000]内置定量标准曲线：在检测过程中无需使用外部标准品进行校准，避免了操作人员与呕吐毒素直接接触的可能，从而提高了操作的安全性。[/color][color=#000000]随到随检：检测仪器的便携性使其适用于现场检测，无论是在生产线上、仓库中，还是在野外环境中，都能轻松进行检测操作。[/color][color=#000000]多领域应用：适用于粮库、谷物生产企业、饲料厂、畜牧养殖企业、食品加工厂、第三方检测机构等多个行业。[/color][b][color=#000000]应用场景[/color][/b][color=#000000]保障粮库质量：对存储的粮食进行定期检测，预防真菌毒素污染。[/color][color=#000000]提升饲料质量：对饲料原料进行检测，确保畜牧养殖健康生长。[/color][color=#000000]食品生产控制：在食品生产过程中对油脂、面粉等原材料进行检测，确保成品质量。[/color][color=#000000]第三方检测服务：为各行业提供真菌毒素检测服务，为食品安全保驾护航。[/color][color=#000000]通过使用粮食真菌毒素检测仪，我们能够更全面地了解食品和饲料的安全状况，从而更好地保障我们的健康。[/color][来源：山东优云谱光电科技有限公司][align=right][/align]

荧光定量PCR（也称TaqMan PCR,以下简称FQ-PCR）是美国PE（Perkin Elmer）公司1995年研制出来的一种新的核酸定量技术，该技术是在常规PCR基础上加入荧光标记探针来实现其定量功能的，与变通PCR相比，FQ-PCR具有许多优点。本文拟就该技术的特点、原理和方法以及应用作一简要叙述。一、特点FQ-PCR不仅具有普通PCR的高灵敏性，而且由于荧光探针的应用，可以通过光电传导系统直接探测PCR扩增过程中荧光信号的变化以获得定量结果，所以还具有DNA杂交的高特异性和光谱技术的高精确性，克服了常规PCR的许多缺点。如一般PCR产物都需通过琼脂糖凝胶电泳和溴化乙锭染色紫外光观察结果或通过聚丙烯酰胺凝胶电泳和银染检测，不仅需要多种仪器，而且费时费力，所使用的染色剂溴化乙锭对人体又有害，这些繁杂的实验过程又给污染和假阳性提供了机会。而FQ-PCR只须在加样时打开一次盖子，其后的过程完全是闭管操作，不需要PCR后处理，避免了常规PCR操作中的诸多弊端。实验一般使用PE公司研制的ABI7100型PCR扩增仪。该仪器具有以下特点：①应用广泛：可用于DNA和RNA的PCR产物定量、基因表达研究、病原体检测及PCR条件的优化等。②独特的定量原理：采用荧光标记探针，经激光激发后荧光量随PCR循环而累积，从而达到定量目的。③工作效率高：内置9600型PCR扩增仪，电脑控制1～2小时全自动同步完成96个样品的扩增及定量。④无须凝胶电泳：无须对样品进行稀释和电泳，只须通过特殊探头在反应管内直接检测。⑤无管道内污染：采用独特全封闭反应管及光电传导系统，无须顾及污染。⑥结果重现性好：定量动态范围高达五个数量级。所以自从此项技术研制成功以来，受到许多科研工作者的重视并在多个领域得到应用。二、原理和方法FQ-PCR的工作原理是利用Taq酶的5’→3’外切酶活性，在PCR反应系统中加入一个荧光标记探针。该探针可与引物包含序列内的DNA模板发生特异性杂交，探针的5’端标以荧光发射基因FAM（6-羧基荧光素，荧光发射峰值在518nm处），靠近3’端标以荧光淬灭基团TAMRA（6-羧基四甲基若丹明，荧光发射峰值在582nm处），探针的3’开端被磷酸化以防止探针在PCR扩增过程中被延伸。当探针保持完整时，淬灭基团抑制发射基团的荧光发射。发射基团一旦与淬灭基团发生分离，抑制作用被解除，518nm处的光密度增加而被荧光探测系统检测到。复性期探针与模板DNA发生杂交，延伸期Taq酶随引物延伸沿DNA模板移动，当移动到探针切断，淬灭作用被解除，荧光信号释放出来（见图）。模板每复制一次，就有一个探针被切断，伴随一个荧光信号的释放。由于被释放的荧光基团数目和PCR产物数量是一对一的关系，因此用该技术可对模板进行准确定量。实验仪器一般使用PE公司研制的ABI7100型 PCR扩增仪，也可用其它PCR仪。如果用ABI7700型反应型反应系统进行实验，反应结束后，通过电脑分析，可直接给出定量结果。如果用其他PCR仪，则需要同时使用荧光探测仪测量反应管中的荧光信号，计算出RQ+、RQ-、△RQ。RQ+代表样品管荧光发射基团发光强度与淬灭基团发光强度的比率，RQ-代表空白管中二者的比率，△RQ（△RQ=RQ+-RQ-）代表PCR过程中荧光信号变化量，经过数据处理，即可得出定量结果。由于荧光探针的引入，显著提高了实验的特异性。探针设计一般应符合以下条件：①探针长度应在20～40个碱基左右，以保证结合的特异性。②GC碱基含量在40%～60%，避免单核苷酸序列的重复。③避免与引物发生杂交或重叠。④探针与模板结合的稳定程度要大于引物与模板结合的稳定程度，因此探针的Tm值要比引物的Tm值至少高出5℃。另外，探针的浓度、探针与模板序列的同源性，探针与引物的距离都对实验结果有影响。 http://www.biomart.cn/upload/asset/2008/07/21/1216476450.gif图.TaqMan PCR反应模式 （A）聚合反应；（B）链置换；（C）裂解； （D）聚合完成（R：FAM；Q：TAMRA，FP：上游引物；RP：下游引物）

【仪器心得】实时荧光定量PCR仪使用心得 在生物科学研究领域，实时荧光定量PCR（Quantitative Real-Time PCR，简称qPCR）技术已经成为不可或缺的一部分。这一技术不仅具备高灵敏度、高特异性和高精度的特点，还能够对DNA或RNA进行定量分析，为基因表达分析、病原体检测、遗传病诊断以及药物研发等领域提供了强大的支持。作为一名分子生物学研究者，我对于实时荧光定量PCR仪的使用有着深刻的心得体会，以下将结合技术原理、特点、应用场景以及个人见解，为大家详细介绍这一强大的科研工具。 https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2024/10/202410121429543053_6906_6748942_3.jpeg实时荧光定量PCR仪技术详解原理 实时荧光定量PCR技术基于PCR（聚合酶链式反应）的基本原理，通过不断循环的变性、退火和延伸步骤，实现DNA或RNA的指数级扩增。与常规PCR不同的是，实时荧光定量PCR在反应体系中加入了荧光染料或荧光探针，这些荧光物质能够与扩增产物特异性结合，并在特定波长光的激发下发出荧光。随着PCR反应的进行，荧光信号逐渐增强，仪器通过实时监测荧光信号的变化，可以绘制出扩增曲线，进而对样本中的目标核酸进行定量分析。 特点 1. 高灵敏度：实时荧光定量PCR技术能够检测到极微量的目标核酸，使得其在低丰度基因表达分析、病原体微量检测等方面具有显著优势。 2. 高特异性：通过设计特异性的引物和探针，实时荧光定量PCR可以实现对目标基因的精确识别，避免了非特异性扩增的干扰。 3. 高精度：结合先进的荧光信号检测技术和数据分析算法，实时荧光定量PCR能够提供准确的定量结果，有助于科研工作者进行精确的数据分析和比较。 4. 快速便捷：现代实时荧光定量PCR仪通常配备有高效的热循环系统和自动化的样品处理功能，大大缩短了实验时间，提高了工作效率。 应用场景 实时荧光定量PCR技术在生命科学领域的应用广泛而深入。在基因表达分析中，它可以用于检测不同组织、不同发育阶段或不同处理条件下基因的表达水平变化；在病原体检测中，它能够快速准确地识别并定量病原体核酸，为疾病诊断和治疗提供重要依据；在遗传病诊断中，实时荧光定量PCR可以检测基因突变、基因缺失或基因重复等异常情况；此外，在药物研发、环境监测和食品安全等领域，实时荧光定量PCR技术也发挥着重要作用。 个人使用心得与推荐 作为一名长期使用实时荧光定量PCR仪的科研人员，我深刻体会到了这一技术带来的便利和优势。在使用过程中，我注意到以下几点对于获得准确可靠的实验结果至关重要： 1. 样本处理：样本的纯净度和完整性对于实验结果至关重要。因此，在进行实验前，需要对样本进行严格的预处理和质量控制，以确保样本中的目标核酸不受污染和降解。 2. 引物和探针设计[size=14px]：引物和探针的特异性是实时荧光定量PCR技术成功的关键。在设计引物和探针时，需要充分考虑目标基因的序列特征、潜在的二级结构以及可能的非特异性扩增等因素，以确保实验的准确性和可靠性。 3. 仪器选择和校准：不同品牌和型号的实时荧光定量PCR仪在性能上可能存在差异。因此，在选择仪器时，需要根据实验需求和预算进行综合考虑。同时，定期对仪器进行校准和维护也是确保实验结果准确性的重要措施。 4. 在我个人的使用体验中，某品牌的实时荧光定量PCR仪给我留下了深刻印象。该仪器不仅具备高效的热循环系统和精准的荧光信号检测系统，还配备了智能化的操作界面和数据分析软件，使得实验操作更加便捷、数据分析更加准确。此外，该仪器还支持多种荧光通道和反应体系的选择，能够满足不同实验需求。 https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2024/10/202410121429546220_2116_6748942_3.jpeg结语 实时荧光定量PCR技术作为生命科学领域的重要工具之一，其高精度、高灵敏度和高特异性的特点使得它在众多研究领域都发挥着不可替代的作用。通过深入了解实时荧光定量PCR仪的原理、特点和应用场景，并结合个人使用心得和推荐，相信广大科研工作者能够更好地利用这一技术，探索生命科学的奥秘，推动科研事业的进步和发展。

各位老师，大家好，我需要 X-射线荧光光谱对一个样品中的二氧化硅进行测定，供应商给了个方法，采用压片法进行测定，没看的太懂。我想请教大家，定量样品中的二氧化硅需要采用对照品么，对照品怎么制备，厂家给的方法说采用商业化定制的对照品。

请问不同点在哪里？高通量实时荧光定量PCR系统：瑞士，Roche，型号是Ligtcler 480全自动荧光法微生物鉴定药敏分析系统：英国，SENSITITRE，型号是ARIS是不是前者可用于致病菌，微生物的定性定量检测，而后者只能是定性的筛选快速检测啊？并且想具体问下PCR如何用于致病菌、转基因食品的检测？大概原理，因为我本身不是读这个专业的，单位决定买这两台仪器，但是单位派我去开个什么购买仪器专家听证会之类的，所以想问问，因为资料上我看得不是很明白

能量色散X荧光光谱仪原理 当能量高于原子内层电子结合能的高能X射线与原子发生碰撞时，驱逐一个内层电子而出现一个空穴，使整个原子体系处于不稳定的激发态，激发态原子寿命约为 (10)-12-(10)-14s，然后自发地由能量高的状态跃迁到能量低的状态。这个过程称为驰过程。驰豫过程既可以是非辐射跃迁，也可以是辐射跃迁。当较外层的电子跃迁到空穴时，所释放的能量随即在原子内部被吸收而逐出较外层的另一个次级光电子，此称为俄歇效应，亦称次级光电效应或无辐射效应，所逐出的次级光电子称为俄歇电子。 它的能量是特征的，与入射辐射的能量无关。当较外层的电子跃入内层空穴所释放的能量不在原子内被吸收，而是以辐射形式放出，便产生X 射线荧光，其能量等于两能级之间的能量差。因此，X射线荧光的能量或波长是特征性的，与元素有一一对应的关系。 K层电子被逐出后,其空穴可以被外层中 任一电子所填充，从而可产生一系列的谱线，称为K系谱线：由L层跃迁到K层辐射的X射线叫Kα射线,由M层跃迁到K层辐射的X射线叫Kβ射线……。 同样,L层电子被逐出可以产生L系辐射。如果入射的X 射线使某元素的K层电子激发成光电子后L层电子跃迁到K层，此时就有能量ΔE释放出来，且ΔE=EK-EL，这个能量是以X射线形式释放，产生的就是Kα 射线，同样还可以产生Kβ射线 ，L系射线等。莫斯莱(H.G.Moseley) 发现，荧光X射线的波长λ与元素的原子 序数Z有关，其数学关系如下： λ=K(Z-s)-2 　　这就是莫斯莱定律，式中K和S是常数，因此,只要测出荧光X射线的波长,就可以知道元素的种类,这就是荧光X射线定性分析的基础。此外,荧光X射线的强度与相应元素的含量有一定的关系，据此，可以 进行元素定量分析。 X射线的产生 利用X射线管（图2），施加高电压以加速电子，使其冲撞金属阳极（对阴极）从而产生X射线。从设计上分为横窗型（side window type）和纵窗型（end window type）两种X射线管，都是设计成能够把X射线均匀得照射在样品表面的结构。 X射线窗口，一般使用的是铍箔。阴极（也叫做：靶材）则多使用是钨(W)、铑(Rh)、钼（Mo）、铬（Cr）等材料。这些靶材的使用是依据分析元素的不同而使用不同材质。原则上分析目标元素与靶材的材质不同。 如何利用荧光X射线进行定量分析 在包含某种元素1的样品中，照射一次X射线，就会产生元素1的荧光X射线，不过这个时候的荧光X射线的强度会随着样品中元素A的含量的变化而改变。元素1的含量多，荧光X射线的强度就会变强。注意到这一点，如果预先知道已知浓度样品的荧光X射线强度，就可以推算出样品中元素A的含量。 利用荧光X射线进行定量分析的时候，大致分为3个方法。一个是制作测量线的方法（经验系数法）。这个方法是测定几点实际的已知浓度样品，寻求想测定元素的荧光X射线强度和浓度之间的关系，以其结果为基础测定未知样品取得荧光X射线，从而得到浓度值。 另一个方法是理论演算的基础参数法（FP法）。这个方法在完全了解样品的构成和元素种类前提，利用计算的各个荧光X射线强度的理论值，推测测定得到未知样品各个元素的荧光X射线强度的组成一致。 NBS-GSC法也称作理论Alpha系数法。它是基于荧光X射线激发的基本原理，从理论上使用基本物理参数计算出样品中每个元素的一次和二次特征X射线荧光强度的。基于此再计算Lachance综合校正系数，然后使用这些理论α系数去校正元素间的吸收增强效应。它与经验系数法不同，这些校正系数是从“理论”上取得的，而非建立在“经验”上。因而它也不需要那么多的标样，只要少数标样来校准仪器因子。

X射线荧光光谱分析的基本原理 X射线荧光光谱分析的基本原理 当能量高于原子内层电子结合能的高能X射线与原子发生碰撞时，驱逐一个内层电子而出现一个空穴，使整个原子体系处于不稳定的激发态，激发态原子寿命约为 10-12-10-14s，然后自发地由能量高的状态跃迁到能量低的状态。这个过程称为驰豫过程。驰豫过程既可以是非辐射跃迁，也可以是辐射跃迁。当较外层的电子跃迁到空穴时，所释放的能量随即在原子内部被吸收而逐出较外层的另一个次级光电子，此称为俄歇效应，亦称次级光电效应或无辐射效应，所逐出的次级光电子称为俄歇电子。它的能量是特征的，与入射辐射的能量无关。当较外层的电子跃入内层空穴所释放的能量不在原子内被吸收，而是以辐射形式放出，便产生X 射线荧光，其能量等于两能级之间的能量差。因此，X射线荧光的能量或波长是特征性的，与元素有一一对应的关系。图10.1给出了X射线荧光和俄歇电子产生过程示意图。 　　K层电子被逐出后,其空穴可以被外层中任一电子所填充，从而可产生一系列的谱线，称为K系谱线：由L层跃迁到K层辐射的X射线叫Kα射线,由M层跃迁到K层辐射的X射线叫Kβ射线……。同样,L层电子被逐出可以产生L系辐射(见图10.2)。如果入射的X 射线使某元素的K层电子激发成光电子后L层电子跃迁到K层，此时就有能量ΔE释放出来，且ΔE=EK-EL，这个能量是以X射线形式释放，产生的就是Kα 射线，同样还可以产生Kβ射线 ，L系射线等。莫斯莱(H.G.Moseley) 发现，荧光X射线的波长λ与元素的原子序数Z有关，其数学关系如下： λ=K(Z-s)-2 　　这就是莫斯莱定律，式中K和S是常数，因此,只要测出荧光X射线的波长,就可以知道元素的种类,这就是荧光X射线定性分析的基础。此外,荧光X射线的强度与相应元素的含量有一定的关系，据此，可以进行元素定量分析。

原子荧光光谱法（AFS）的基本原理是通过激发原子使其处于激发态，当这些原子返回基态时，会以发射特定波长的荧光形式释放能量。在AFS中，样品首先被引入到一个原子化器中，使之变成原子蒸气；然后，用适当波长的光源（通常是锐线光源如空心阴极灯）照射这些原子，使其吸收能量并跃迁至激发态；当这些激发态原子不稳定地返回到基态或其他较低能态时，会发出荧光。通过检测这些荧光的强度，并根据特定元素的特征荧光波长，可以定性或定量地分析样品中目标元素的含量。这种方法常用于痕量元素的测定，因其具有高灵敏度和选择性。

紫外荧光测硫仪采用紫外荧光法测定总硫的含量，适用于测定石腊油、柴油、汽油、润滑油、燃料油、液化气及天然气，以及其它油品、化工原料及成品的总硫含量。　　紫外荧光测硫仪常规配置包括燃烧配件：石英管；燃烧或高温熔炉；燃烧炉；气体控制部分：2个气路循环，可通入指定气体和氧气，带气压和流量调节器，带压力控制器和流量表；SO2测量部分：UV荧光检测器可检测SO2含量；信号采集、计算、保存部分：电脑和软件可控制：SO2峰值记录；校正相关系数；数据保存在硬盘上；自动化操作和警报；附件包括注射器可以恒定速度自动注射液体样品及彩色打印机可打印分析结果。　　紫外荧光测硫仪工作原理要了解：　　仪器采用紫外荧光法测定原理，样品经高温氧化反应，其中的硫化物宣地转化为SO2，样品气经过膜式干燥器脱去其中的水份，进入反应室。SO2经紫外线照射，产生特定波长的光谱，由光电倍增管检测接收。发射的荧光强度和原样品中硫的含量成正比，再经微电流放大、计算机数据处理，即可转换为与光强度成正比的电信号，通过测量其大小即可计算出相应样品的含硫量。　　当样品被引入高温裂解炉后，经氧化裂解，其中的硫定量地转化为二氧化硫(SO2)，反应气经干燥脱水后进入反应室。在反应室中，部分二氧化硫受紫外光照射后转化为激发态的二氧化硫(S02*),当S02*跃迁到基态时发射出光子，光电子信号由光电倍增管接收放大。再经放大器放大，计算机数据处理，即可以转换为与光强度成正比的电信号

紫外荧光测硫仪采用紫外荧光法测定总硫的含量，适用于测定石腊油、柴油、汽油、润滑油、燃料油、液化气及天然气，以及其它油品、化工原料及成品的总硫含量。　　紫外荧光测硫仪常规配置包括燃烧配件：石英管；燃烧或高温熔炉；燃烧炉；气体控制部分：2个气路循环，可通入指定气体和氧气，带气压和流量调节器，带压力控制器和流量表；SO2测量部分：UV荧光检测器可检测SO2含量；信号采集、计算、保存部分：电脑和软件可控制：SO2峰值记录；校正相关系数；数据保存在硬盘上；自动化操作和警报；附件包括注射器可以恒定速度自动注射液体样品及彩色打印机可打印分析结果。　　紫外荧光测硫仪工作原理要了解：　　仪器采用紫外荧光法测定原理，样品经高温氧化反应，其中的硫化物宣地转化为SO2，样品气经过膜式干燥器脱去其中的水份，进入反应室。SO2经紫外线照射，产生特定波长的光谱，由光电倍增管检测接收。发射的荧光强度和原样品中硫的含量成正比，再经微电流放大、计算机数据处理，即可转换为与光强度成正比的电信号，通过测量其大小即可计算出相应样品的含硫量。　　当样品被引入高温裂解炉后，经氧化裂解，其中的硫定量地转化为二氧化硫(SO2)，反应气经干燥脱水后进入反应室。在反应室中，部分二氧化硫受紫外光照射后转化为激发态的二氧化硫(S02*),当S02*跃迁到基态时发射出光子，光电子信号由光电倍增管接收放大。再经放大器放大，计算机数据处理，即可以转换为与光强度成正比的电信号。

荧光激发原理是什么？荧光补偿原理是什么？为什么530/30就是FITC？

当能量高于原子内层电子结合能的高能X射线与原子发生碰撞时，驱逐一个内层电子而出现一个空穴，使整个原子体系处于不稳定的激发态，激发态原子寿命约为 (10)-12-(10)-14s，然后自发地由能量高的状态跃迁到能量低的状态。这个过程称为驰过程。驰豫过程既可以是非辐射跃迁，也可以是辐射跃迁。当较外层的电子跃迁到空穴时，所释放的能量随即在原子内部被吸收而逐出较外层的另一个次级光电子，此称为俄歇效应，亦称次级光电效应或无辐射效应，所逐出的次级光电子称为俄歇电子。 它的能量是特征的，与入射辐射的能量无关。当较外层的电子跃入内层空穴所释放的能量不在原子内被吸收，而是以辐射形式放出，便产生X 射线荧光，其能量等于两能级之间的能量差。因此，X射线荧光的能量或波长是特征性的，与元素有一一对应的关系。 K层电子被逐出后,其空穴可以被外层中 任一电子所填充，从而可产生一系列的谱线，称为K系谱线：由L层跃迁到K层辐射的X射线叫Kα射线,由M层跃迁到K层辐射的X射线叫Kβ射线……。 同样,L层电子被逐出可以产生L系辐射。如果入射的X 射线使某元素的K层电子激发成光电子后L层电子跃迁到K层，此时就有能量ΔE释放出来，且ΔE=EK-EL，这个能量是以X射线形式释放，产生的就是Kα 射线，同样还可以产生Kβ射线 ，L系射线等。莫斯莱(H.G.Moseley) 发现，荧光X射线的波长λ与元素的原子 序数Z有关，其数学关系如下： λ=K(Z-s)-2 　　这就是莫斯莱定律，式中K和S是常数，因此,只要测出荧光X射线的波长,就可以知道元素的种类,这就是荧光X射线定性分析的基础。此外,荧光X射线的强度与相应元素的含量有一定的关系，据此，可以 进行元素定量分析。 X射线的产生 利用X射线管（图2），施加高电压以加速电子，使其冲撞金属阳极（对阴极）从而产生X射线。从设计上分为横窗型（side window type）和纵窗型（end window type）两种X射线管，都是设计成能够把X射线均匀得照射在样品表面的结构。 X射线窗口，一般使用的是铍箔。阴极（也叫做：靶材）则多使用是钨(W)、铑(Rh)、钼（Mo）、铬（Cr）等材料。这些靶材的使用是依据分析元素的不同而使用不同材质。原则上分析目标元素与靶材的材质不同。 如何利用荧光X射线进行定量分析 在包含某种元素1的样品中，照射一次X射线，就会产生元素1的荧光X射线，不过这个时候的荧光X射线的强度会随着样品中元素A的含量的变化而改变。元素1的含量多，荧光X射线的强度就会变强。注意到这一点，如果预先知道已知浓度样品的荧光X射线强度，就可以推算出样品中元素A的含量。 利用荧光X射线进行定量分析的时候，大致分为3个方法。一个是制作测量线的方法（经验系数法）。这个方法是测定几点实际的已知浓度样品，寻求想测定元素的荧光X射线强度和浓度之间的关系，以其结果为基础测定未知样品取得荧光X射线，从而得到浓度值。 另一个方法是理论演算的基础参数法（FP法）。这个方法在完全了解样品的构成和元素种类前提，利用计算的各个荧光X射线强度的理论值，推测测定得到未知样品各个元素的荧光X射线强度的组成一致。 NBS-GSC法也称作理论Alpha系数法。它是基于荧光X射线激发的基本原理，从理论上使用基本物理参数计算出样品中每个元素的一次和二次特征X射线荧光强度的。基于此再计算Lachance综合校正系数，然后使用这些理论α系数去校正元素间的吸收增强效应。它与经验系数法不同，这些校正系数是从“理论”上取得的，而非建立在“经验”上。因而它也不需要那么多的标样，只要少数标样来校准仪器因子。

质谱定量原理

请问大家固体的荧光样品，能不能用测试固体样品的样品架来进行定量测量呢？或是大家知道哪款荧光分光光度计可以进行固体荧光样品的定量测定呢？希望大家积极回答！谢谢！

讨论范围荧光物质,包括自发荧光和激发荧光.这些荧光发出来,有时是一个峰,有时会是几个不同波长的峰.个人感觉,采用峰值定量,即峰高定量. 和峰面积定量 都可以.请各位发表高见.

粮食的质量对于食品安全至关重要，然而，在粮食的生产供应链中，储存与运输环节如果处理不当，容易导致粮食质量问题，尤其是真菌毒素的污染。真菌毒素对人体健康的危害不可低估，因此我们迫切需要可靠的粮食真菌毒素检测仪，以快速获取相关数据，更好地管理粮食的贮存与销售。[align=center][img=1.jpg,500,500]https://img1.17img.cn/17img/images/202311/uepic/ceeefdda-1af1-47a1-9755-b12da24f5544.jpg[/img][/align]粮食真菌毒素检测仪采用荧光定量快速检测原理，是一种先进的仪器设备，主要应用于粮油谷物、饲料等样品中真菌毒素的有效、准确检测。以下是该检测仪的两个重要特点：一、荧光定量原理：粮食真菌毒素检测仪采用荧光定量技术，通过读取荧光定量检测卡，对比检测区（T线）、质控区（C线）与背景区的荧光信号强度。根据检测卡内置的标准曲线，计算出样品中真菌毒素的含量。这一原理保证了检测的准确性和可靠性，为粮食安全提供了可靠的数据支持。该仪器可检测粮油、谷物、饲料等中的真菌毒素，如黄曲霉毒素B1、黄曲霉毒素M1、玉米赤霉烯酮、呕吐毒素、伏马毒素等。二、随到随检：粮食真菌毒素检测仪具有随到随检的特点，不受检测样本量的限制。它可以灵活地单个或少量样本进行即时检测，也能够高效地处理大量样本，实现现场检测。这一特性使其在粮食生产、仓储、销售等各个环节都能够迅速投入使用，提高了检测的效率与便捷性。1、可应用于粮库、谷物生产企业等粮食行业，确保存储和销售的粮食产品安全。2、在养殖业中，对饲料原料进行检测，预防真菌毒素对畜禽的危害。3、在食品生产和加工行业，保障食品制品质量。4、用于政府监管、第三方检测机构等，加强对真菌毒素的监测和管理。在确保粮食质量安全的同时，粮食真菌毒素检测仪的应用为粮食行业提供了强有力的技术支持，为保障食品安全做出了重要贡献。[来源：山东优云谱光电科技有限公司][align=right][/align]

qubit定量原理

请问各位前辈，分子荧光的作用原理是由于电子的能级跃迁还是由于分子的能级跃迁，在返回基态的时候产生的荧光和磷光呢？

荧光定量引物和探针设计荧光定量引物和探针设计荧光定量引物和探针设计荧光定量引物和探针设计

定量PCR的原理

X射线荧光光谱分析的基本原理 　　当能量高于原子内层电子结合能的高能X射线与原子发生碰撞时，驱逐一个内层电子而出现一个空穴，使整个原子体系处于不稳定的激发态，激发态原子寿命约为10-12-10-14s，然后自发地由能量高的状态跃迁到能量低的状态。这个过程称为驰豫过程。驰豫过程既可以是非辐射跃迁，也可以是辐射跃迁。当较外层的电子跃迁到空穴时，所释放的能量随即在原子内部被吸收而逐出较外层的另一个次级光电子，此称为俄歇效应，亦称次级光电效应或无辐射效应，所逐出的次级光电子称为俄歇电子。它的能量是特征的，与入射辐射的能量无关。当较外层的电子跃入内层空穴所释放的能量不在原子内被吸收，而是以辐射形式放出，便产生X射线荧光，其能量等于两能级之间的能量差。因此，X射线荧光的能量或波长是特征性的，与元素有一一对应的关系。图10.1给出了X射线荧光和俄歇电子产生过程示意图。 　　K层电子被逐出后,其空穴可以被外层中任一电子所填充，从而可产生一系列的谱线，称为K系谱线：由L层跃迁到K层辐射的X射线叫Kα射线,由M层跃迁到K层辐射的X射线叫Kβ射线……。同样,L层电子被逐出可以产生L系辐射(见图10.2)。如果入射的X射线使某元素的K层电子激发成光电子后L层电子跃迁到K层，此时就有能量ΔE释放出来，且ΔE=EK-EL，这个能量是以X射线形式释放，产生的就是Kα射线，同样还可以产生Kβ射线 ，L系射线等。莫斯莱(H.G.Moseley) 发现，荧光X射线的波长λ与元素的原子序数Z有关，其数学关系如下： λ=K(Z-s)-2 　　这就是莫斯莱定律，式中K和S是常数，因此,只要测出荧光X射线的波长,就可以知道元素的种类,这就是荧光X射线定性分析的基础。此外,荧光X射线的强度与相应元素的含量有一定的关系，据此，可以进行元素定量分析。

在基因扩增仪的几种类型中，荧光定量PCR 因操作方便、运行速度快、实验结果准确，受到越来越多的分子生物学研究者青睐。 　　实验者要购买一款合适的荧光定量PCR，需要考虑各方面的因素，首先要分析实验室目前乃至将来的需求、平衡实验室的预算，更要详细研究各种各样的宣传资料。 　　面对各种不同性能的产品，我们该如何选择呢? 　　首先建议大家走出认识荧光定量PCR的两个误区： 　　误区一：荧光定量PCR仪无需梯度功能 　　对于使用染料法的定量PCR反应，虽然有各种各样的PCR引物设计软件或者经验公式计算熔解温度(Tm值)，但运用的公式不同、引物序列不同，Tm值的差异会很大。 　　引物的熔解温度决定了退火温度。而且模版中碱基的组合千变万化，对于特殊片断，经验公式得到的数据不一定能得出准确的结果，退火温度细微的差异对结果都可能产生决定性的影响，因而“摸条件”一度是让人很头疼的问题。 　　梯度PCR的出现部分解决了一些问题——在反应过程中每个孔的温度控制条件可以在指定范围内按照梯度变化，根据结果，一步就可以摸索出最适合的反应条件。 　　不单是退火温度，连变性温度和延伸温度都可以优化——对于多种聚合酶混合酶扩增如Invitrogen、Clontech、Promega的多数高保真Taq酶来说这个非常重要，因为Taq和校正酶的最佳反应温度可能有显著差异，优化延伸温度就显得很重要。 　　使用有梯度功能的荧光定量PCR可以一次完成以往多次实验才能完成的优化过程，简化了摸索 PCR反应条件的繁琐实验，既节省实验时间提高效率，又节省实验成本。 　　误区二：仪器通道越多越好 　　随着PCR技术的成熟运用，多重扩增越来越热闹，荧光定量PCR仪也不能幸免。 　　从最初ABI公司推出的单通道荧光定量PCR仪发展到如今各个厂家都推出4通道、5通道甚至6通道荧光定量PCR仪，眼花缭乱的选择让人无所适从，就有人一不小心走进了“通道越多越好”的误区。 　　在使用有些厂家5通道的荧光定量仪时，为了确保实验结果的精确性和准确性都要在实验中使用ROX(一种荧光染料)或专用的Reference dye ，这些荧光染料都必须单独使用一个检测通道。 　　所以，真正能检测多重PCR荧光信号的有效通道只有4个，而且使用校正染料可能会增加后期的使用成本。 　　有的荧光定量PCR的检测通道是只为自已厂家的专用的荧光染料或试剂开放的，有效检测通道也绝非像宣传资料中宣称的那么多。 　　在购买前确认荧光定量PCR仪器的有效检测通道尤为重要，不能单单只听宣传。 　　考虑多重荧光定量PCR的通道数的时候也应该从实验室实际情况出发，多重PCR并非人人适用、人人可用，因为它使实验复杂化了。 　　当我们看清误区，在选择一款最适合自己需求的荧光定量PCR仪时，我们又该关注些什么呢?