病毒核酸检测

目前，临床上针对新型冠状病毒的实验室检测主要是SARS-CoV-2病毒核酸和血清特异性抗体检测。核酸检测，是指通过特殊的技术手段检测临床样本中是否存在特定的病原体核酸，从而诊断患者的感染原因。此次新冠病毒是单链RNA病毒，根据《新冠病毒感染的肺炎诊疗方案（试行第七版）》（下文简称诊疗方案）建议，针对疑似病例的确诊，需要具备以下病原学证据之一者，即为确诊病例：1. 实时荧光RT-PCR检测新型冠状病毒核酸阳性；2. 病毒基因测序，与已知的新型冠状病毒高度同源；3. 血清新型冠状病毒特异性IgM抗体和IgG抗体阳性；血 清新型冠状毒特异性IgG抗体由阴性转为阳性或恢复期较急性期4倍及以上升高。诊疗方案中提到了三种检测方式，其中实时荧光RT-PCR和基因测序都属于核酸检测，需要进行核酸提取。新冠病毒核酸检测是临床诊断的“金标准”， 患者鼻咽拭子、痰、纤维支气管镜灌洗液、血液、肛门拭子、粪便等标本核酸检测阳性，说明其感染了新冠病毒，而且具有传染性。目前新冠病毒检测中核酸提取一般通常使用两种方式：手工提取和仪器提取。病毒核酸提取试剂盒采用具有独特分离作用的磁珠和缓冲液系统，专为快速、高度敏感,有效的从血清、鼻咽拭子样本中提取病毒DNA、RNA而研制，磁珠在一定条件下对核酸具有很强的亲和力，并且在条件改变时，磁珠与其吸附的核酸分离，能够达到快速分离纯化核酸的目的，产品提取出的核酸能够满足下游各种分子生物学实验检测，例如PCR扩增等。荧光定量PCR是临床分子检测中常用的检测方法，病毒核酸提取方法的选择对于最终的检测结果的影响非常重要。在以往采用RT-PCR对病毒核酸进行的检测中，磁珠法是较为常用的核酸提取方法，普遍认为其对病原体的核酸提取具有简便、高效、提取浓度及纯度较高等优势。此外因各实验室条件不同及针对的病毒的试剂盒不同，离心柱法、煮沸裂解法等也在临床大量应用。不同的病毒核酸提取方法因其提取产物浓度、纯度的差别以及对RNA的保护程度不同，将在一定程度上影响病毒核酸尤其是临界阳性样本的核酸检出。磁珠法手工提取病毒核酸主要设备有：冰箱、超低温冰箱、高速冷冻离心机、混匀器、微量加样器(0.2-1000ul)、磁力架、无菌无酶吸头、移动紫外灯、水浴锅或金属浴、生物安全柜等。无菌无酶吸头系列磁力架（货号DTCLJ-20）核酸提取仪病毒核酸医院检验科在进行新冠病毒检测时通常面临着大量的待检测样本需要短时间出来完成报告结果，因此自动化、高通量的核酸提取仪已经变得极为迫切。LunAmple全自动核酸提取纯化仪高通量提取 ---- 每次提取可根据需要选择1-72个样本人性化界面 ---- 触屏加按键式直接操作，无需连接电脑简单易用自由编辑 ---- 可自行编辑所需程序或预设保存，快速便捷结果稳定 ---- 提取灵敏度高，重复性好，核酸质量高安全可靠 ---- 配备紫外灭菌功能，减少与有害试剂的接触防止污染 ----内置独家去除核酸气溶胶装置，保护样本不被污染核酸提取制备的整体步骤

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据了解，之所以出现这些说法，是因为有人在家用橘子汁做抗原检测，结果显示“两道杠”。视频中，操作人员直接把橘子汁液挤在新冠抗原试剂检测盒上，随后T区和C区均出现紫红色的横线。这些内容，导致不少人产生恐慌，纷纷询问是真是假，甚至表示不敢吃橘子了。目前正是橘子、橙子等水果大量上市的季节，也有网友表示，最近家里常吃这些水果，自己和家人的核酸检测均无异常。网友在家用橘子汁做抗原检测，结果呈阳性（网络截图）为验证传言的真实性，11月27日晚，央广网记者随机找到一处核酸检测便民服务点，在食用了橘子约2分钟后，且在没有饮水及食用其他食物的情况下，参与了核酸采样。记者吃下橘子后，立刻参与了核酸采样。11月28日早上7点，记者打开北京健康宝进行核酸自查，结果显示：阴性记者本人11月28日的健康码自查询结果吃橘子到底会不会影响抗原检测和核酸检测结果？橘子汁让抗原检测呈现阳性结果是为什么？带着这些问题，央广网记者采访了应急总医院检验科主任许慧。用橘子汁做抗原检测或者核酸检测，结果无意义许慧主任表示，样本检测是个“精细活”，需要进行全流程的质量控制，即在采样前、采样中、采样后确保操作准确，才能确保结果的准确性。首先要明确抗原检测和核酸检测是不一样的。抗原检测病毒的衣壳上的蛋白质，使用的胶体金方法的快速测试卡；而核酸检测病毒衣壳内部的核酸，方法通常为实时荧光定量扩增检测（RT-PCR）。网友用橘子汁作试验检测的是病毒抗原。抗原检测或核酸检测要获得准确的检测结果，规范取样是最关键的一环。新冠病毒抗原试剂盒的适用样本为“人鼻黏膜上皮细胞”，将橘子汁作为样本滴入试剂盒，本身就不符合取样标准。因此，无论呈现出何种结果，都是无意义的。用橘子汁做抗原检测，为什么会出现假阳性？其实2021年就有德国研究人员做过类似的实验，不只是橙子的汁液，研究人员将可口可乐、零度可乐、芬达、红牛、伏特加、威士忌、白兰地、苏打水等多种饮料分别直接滴加在新冠抗原检测孔中，过一段时间，都会出现提示阳性的T线。但对这些饮料进行核酸检测，并没有检测到新冠病毒。“这是因为，抗原检测试剂盒只有在正确的使用方式下，检测结果才有效力。做抗原检测时，需要将拭子取样后放入含有样本处理液的采样管中，洗脱后滴入试剂板条。同样，研究人员把这些饮料与样本处理液混合后再滴加到样本孔中做检测，抗原检测并不会出现T区红线的结果。”秘密就在样本处理液中。新冠抗原检测试剂盒的原理简单来说，就是通过特异抗体捕获特定抗原，但抗原抗体的结合需要维持适当的PH值（酸碱度），样本处理液里含有缓冲体系，可以保证抗原抗体在合适的PH值下结合。”橙汁或者各类饮品直接加到试剂板条上，破坏了适宜的PH环境，造成抗原抗体的非特异性结果，这才产生了假阳性。吃橘子是否会影响抗原检测结果？多虑了据了解，检测过程中，确实会有一些干扰因素影响最终检测结果，出现假阳性等情况。但使用抗原检测试剂无需担心吃橘子这一问题，因为新冠抗原检测试剂盒一般使用取样位置相对较浅、更便于大众操作的鼻拭子作为标本。做抗原检测时，鼻拭子的采样部位位于鼻腔内，吃了哪些食物并不会对检测结果造成影响。专家提示，抗原检测时，应严格按照说明操作。要注意，取样部位为鼻腔黏膜上皮细胞。因此，最好在取样前先擤个鼻涕，清除鼻腔内的“多余”物质。吃橘子是否影响核酸检测结果？不必担心目前，大多数核酸检测点提取的样本都是口咽拭子，许慧主任介绍，核酸检测主要是通过测定致病微生物病毒的核酸来判定结果。提取核酸的过程中要经过洗脱、纯化。因此，其他物质对核酸检测结果的影响微乎其微。专家建议，检测前30分钟受检者最好不要喝水、饮酒或嚼口香糖，采样前2小时应避免进食，以防止咽拭刺激反射性呕吐。核酸检测结果与抗原检测结果不一致怎么办？2022年3月10日印发的《关于印发新冠病毒抗原检测应用方案（试行）的通知》第五部分“核酸检测的确认”中明确指出，核酸检测是新冠病毒感染的确诊依据。在进行核酸检测确认的过程中，如核酸检测阳性，不论抗原检测结果是阳性还是阴性，均按照新冠病毒感染者或新冠肺炎确诊患者采取相应措施；如核酸检测阴性但抗原检测阳性，则视同新冠病毒感染者采取集中隔离等措施，密切观察，连续进行核酸检测。因此，抗原检测可以作为判断是否感染病毒的一个补充手段，不建议作为日常筛查的主要方式。