液质校准规程

目前液质的校准规范国标还没有，福建省有出了一份地方性规范，其校准按如下进行：校准项目和校准方法仪器稳定后，执行自动调谐，直到自动调谐通过后，开始以下校准。7.1 分辨力 按照调谐的条件，注入调谐液，考察附录D中3~5个主要离子峰的分辨力，以半峰宽的最大值为仪器的分辨力W1/2。7.2 质量准确性仪器调谐过后，按照调谐的条件，注入碘化铯钠调谐液，记录附录D中的主要离子的实测质荷比，根据公式（1）计算质量准确性。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/11/201111211512_331968_1604317_3.jpg式中 http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/11/201111211513_331969_1604317_3.jpg——第i个离子三次测量平均值，u；http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/11/201111211513_331970_1604317_3.jpg——第i个离子理论值，u。7.3 质量范围将碘化铯钠调谐溶液由质谱进样口注入，并调入该类型的质量校准文件进行调谐和校准。使用标准荷质比范围（m/z为50-2200）， 选择SCAN模式，以碘化铯钠溶液为调谐液进行全范围扫描，考察分辨力和质量准确性均满足技术指标要求的质荷比范围。7.4 信噪比以自动或手动调谐时确定的最佳值作为校准参数。采用70：30乙腈水溶液为流动相，使用C 或相当者为色谱分离柱。7.4.1 ESI正离子注入10 pg的利血平溶液，选择SIM模式（或MRM模式），提取 特征离子（或m/z609特征离子的m/z195子离子），根据公式（2）计算信噪比。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/11/201111211514_331971_1604317_3.jpg式中： http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/11/201111211515_331972_1604317_3.jpg——提取离子（m/z=609）的峰高； http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/11/201111211515_331973_1604317_3.jpg——基线噪声。7.4.2[size=3

今天我的液质进行两年一次的计量检定，质谱为安捷伦6410A，使用年限四年，以下分享一下检定的大致内容及结果：首先在进行检定本该进行自动调谐，调谐通过后才可进行校准，但因为我的仪器刚调谐没多久所以调谐这一步我就让工程师省了吧，直接进入校准。因为平常只用到ESI源，所以本次只校准ESI源。先是做正离子模式，首先是检查质量准确性，也是注入调谐液碘化铯钠，这里我们偷懒了一下，直接在质谱模块点右键，在Calibrant On前打勾（图1），这样就能实时观察几个特征离子的情况（见图2）http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/12/201112082314_336774_1604317_3.jpg图1　　　　http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/12/201112082314_336775_1604317_3.jpg图2特征离子质量数：118.09、322.05、622.03、922.01都有出现且质量数偏差不超过±0.5u。然后做定量重复性，正离子选择利血平溶液，20pg，MRM模式监测609/195，使用C18柱，流动相用甲醇水，重复进样6针，计算RSDhttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/12/201112082315_336776_1604317_3.jpghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/12/201112082315_336777_1604317_3.jpghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/12/201112082316_336778_1604317_3.jpghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/12/201112082316_336779_1604317_3.jpghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/12/201112082316_336780_1604317_3.jpghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/12/201112082316_336781_1604317_3.jpghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/12/201112082317_336782_1604317_3.jpg计算信噪比：进10pg利血平，采用绝对峰高比峰高计算：http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/12/201112082318_336783_1604317_3.jpghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/12/201112082318_336784_1604317_3.jpg10pg利血平峰高2350，噪音值约6，则信噪比2350/6≈390校准负离子模式：同样先观察112.99、431.98、601.98、1033.99四个特征离子质量数都有出现且质量数偏差不超过±0.5uhttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/12/201112082319_336785_1604317_3.jpghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/12/201112082319_336786_1604317_3.jpg接着做定量重复性，负离子选择氯霉素溶液，100pg，MRM模式监测321/152，使用C18柱，流动相也用甲醇水，重复进样6针，计算RSD：http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/12/201112082319_336787_1604317_3.jpghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/12/201112082319_336788_1604317_3.jpghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/12/201112082320_336789_1604317_3.jpghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/12/201112082320_336790_1604317_3.jpghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/12/201112082320_336791_1604317_3.jpghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/12/201112082320_336792_1604317_3.jpghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/12/201112082321_336793_1604317_3.jpg计算信噪比：采用绝对峰高比峰高计算：http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/12/201112082321_336794_1604317_3.jpg噪音放大图负模式噪音相当小，前面一段基本没有噪音，后面的噪音值约2左右，峰高1000，信噪比S/N=1000/2=500结果信噪比：正离子模式：10pg利血平S/N=390；（标准要求S/N≥50:1）[/font

[align=center][b][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]液质[/color][/url]API3000负离子模式下的校准[/b][/align][align=left]2017.12.02做氯霉素方法时，发现找不到母离子，偏差很大，母离子是320，扫描出的是325。过了周末，2017.12.04用校准液进行校准，校准液信息[img=,589,578]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/12/201712071116_01_2634356_3.png!w589x578.jpg[/img][/align][align=left]校准步骤：打开软件，连机[/align][align=left]1. 在Hardware Configure菜单下，激活Mass Only[/align][align=left][img=,690,308]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/12/201712071131_01_2634356_3.jpg!w690x308.jpg[/img][/align][align=left]2. 点击左边工具菜单Navigation Bar的Tune进入调谐模式：[/align][align=left][img=,563,250]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/12/201712071135_01_2634356_3.png!w563x250.jpg[/img][/align][align=left][/align][align=left]3. 按上方工具条的T钮，使仪器进入Tuning状态，此时应听到“扑”的一声，Exhaust及Gas1/2已打开，仪器处于Ready状态,软件右下角硬件图标为绿色。[/align][align=left][img=,400,84]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/12/201712071136_01_2634356_3.png!w400x84.jpg[/img][/align][align=left]4. 双击左边工具菜单Navigation Bar中的Manual Tuning，打开一个空白质谱参数设置及运行窗口，进入手动调谐模式。[/align][align=left]5. 进入手动调谐模式后，调出已有的质量校准方法，其路径是API Instrument→Acquisition Methods→API3000→Q1NEG[/align][align=left][img=,690,100]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/12/201712071139_01_2634356_3.png!w690x100.jpg[/img][/align][align=left][img=,690,386]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/12/201712071138_01_2634356_3.jpg!w690x386.jpg[/img][img=,690,235]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/12/201712071138_02_2634356_3.jpg!w690x235.jpg[/img][/align][align=left]6. 该方法会出现在Tune Method Editor下替换现有的质谱参数设置运行窗口内容：[img=,690,360]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/12/201712071145_01_2634356_3.jpg!w690x360.jpg[/img][/align][align=left]7.在质谱参数设置及运行窗口中回到MS method。点击start，用MCA ON方式采集10Cycles（只需10张就可以满足要求了）。数据采集时在窗口下部会出现两个实时数据图：左边是总离子流图，右边是质谱图。[/align][align=left][img=,690,497]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/12/201712071148_01_2634356_3.jpg!w690x497.jpg[/img][/align][align=left]8.扫描结束后，在右边质谱图中按鼠标右键出现一菜单，选菜单中Open file,得到几张不同扫描区的独立质谱图。点亮其中一个PPG质谱峰的图（此图边上会加蓝框）。[img=,690,479]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/12/201712071150_01_2634356_3.jpg!w690x479.jpg[/img][/align][align=left]9.然后再Tool菜单中选Calibrate From Spectrum钮（或在工具条下点击Calibrate From Spectrum）。[/align][align=left][img=,690,398]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/12/201712071154_01_2634356_3.jpg!w690x398.jpg[/img][/align][align=left]10. 出现Mass Calibration Options窗口，选择负离子模式，点击Start键：[/align][align=left][img=,690,450]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/12/201712071156_01_2634356_3.jpg!w690x450.jpg[/img][/align][align=left]11.查看校准结果：[/align][align=left][img=,690,516]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/12/201712071118_01_2634356_3.jpg!w690x516.jpg[/img][img=,690,336]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/12/201712071202_01_2634356_3.jpg!w690x336.jpg[/img][/align][align=left]12，如果得到的数据校准不理想,某些PPG峰超出分辨率范围，应进行手动调整。关闭质量校准窗口，回到质谱参数设置窗口，点击Resoultion,标签，找到Advanced按钮，出现Offset表，调整Offset值会影响分辨率，峰宽大增大，峰宽小减小，当Offset值改变后，按Apply钮，并在开始采集前按Yes确认保存这些修改。在采集数据，然后校准，确认分辨率是否有所改善，重复此步骤，直到所有离子合乎分辨率范围。每次调整Offset值，要微调。这个步骤说起来简单，操作起来非常费时。[/align][align=left][img=,690,704]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/12/201712071318_02_2634356_3.jpg!w690x704.jpg[/img][/align][align=left]13.质量校准：当Offset值设定合适，所有PPG离子的分辨率在范围后，进行最后的质量校准。再采集一次PPG校准数据，并计算分辨率及质量偏差。如果质量偏差在±0.1amu范围内，新的校准视为通过，不用重新校准，如果有离子质量偏差超出±0.1amu，在Mass Calibration Report按Replace(替换）或Update钮进行修改。在下面红色圆圈处找向右的箭头。软件系统会提示是否用新的校准曲线替换已存在的校准曲线，回答Yes。或点击下图的Editor,进行更改。[/align][align=left][img=,690,270]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/12/201712071352_01_2634356_3.jpg!w690x270.jpg[/img][/align][align=left][img=,690,506]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/12/201712071344_01_2634356_3.jpg!w690x506.jpg[/img][/align][align=left]在校准过程中，还出现了一个很诡异的现象，刚才时上次校准时间显示是2017.8.26，改变几次Offset值后，Mass Calibration Report窗口的校准时间显示为1899年。校准过程对于有经验的人来说可能是轻而易举的事。但对于一个初学者，还是把步骤详细记录下来，一方面整理一下思路。另一方面，方便同事学习，少走弯路。总结的可能有不足之处，希望有经验的版友多多指教！[/align][align=left][img=,647,326]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/12/201712071402_01_2634356_3.jpg!w647x326.jpg[/img][/align]